專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法及其在禽畜飼養(yǎng)上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及酪酸梭菌的培養(yǎng)方法，具體涉及一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法及在預(yù)防禽畜腹瀉上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)即丁酸梭菌，存在于土壤、人和動(dòng)物腸道、干酪及自然酸奶中，為革蘭氏陽(yáng)性厭氧芽孢桿菌，培養(yǎng)后期可變?yōu)殛幮跃毡咀畛鯇⑵鋺?yīng)用于臨床作為整腸劑，開(kāi)發(fā)了酪酸菌液劑、粉末劑、膠囊劑等保健食品。后來(lái)將其作為獸醫(yī)藥品，用來(lái)治療畜禽腸道菌群紊亂。酪酸菌為梭狀芽孢桿菌，菌體為直或微彎，孢子圓形或橢圓形，為內(nèi)生芽孢，對(duì)外界環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，經(jīng)80°C、30min和90°C、10min熱處理后全部存活；耐熱、耐酸，PH值為1.05.0時(shí)仍能存活。因此，酪酸梭菌能夠在復(fù)雜的環(huán)境中維持較強(qiáng)的活力，與目前廣泛應(yīng)用的非芽孢類(lèi)活菌制劑相比，更具廣闊的市場(chǎng)前景。由于酪酸梭菌在禽畜飼養(yǎng)及飼料行業(yè)上廣闊的應(yīng)用性，目前以有較多的相關(guān)研究及專(zhuān)利申請(qǐng)。在酪酸梭菌的生產(chǎn)方面，如何獲得酪酸菌最大菌體得率的同時(shí)提高芽孢轉(zhuǎn)化率，以提高其對(duì)各種惡劣的環(huán)境因素的抗性，延長(zhǎng)制劑保存期和活性，是這一領(lǐng)域最重要的技術(shù)問(wèn)題之一。除此，如何降低生產(chǎn)的周期和成本，也是酪酸梭菌得以在禽畜飼養(yǎng)上廣泛應(yīng)用的重要條件。盡管目前以公開(kāi)了多種酪酸梭菌的培養(yǎng)方法，但是，這些方法存在或者生產(chǎn)成本高、設(shè)備要求高，或者生產(chǎn)周期長(zhǎng)，孢子轉(zhuǎn)化率低下的問(wèn)題。首先，由于酪酸梭菌是一種厭氧菌，多數(shù)生產(chǎn)方法均需要在石蠟油、氮?dú)饣蚨趸季S持的厭氧環(huán)境中進(jìn)行，儀器設(shè)備復(fù)雜昂貴，專(zhuān)利200610125586.X公開(kāi)了一種酪酸梭菌活菌制劑的生產(chǎn)方法，培養(yǎng)基需經(jīng)過(guò)高壓滅菌后經(jīng)石蠟油維持厭氧環(huán)境45-60小時(shí)。專(zhuān)利200410068185.6公開(kāi)了運(yùn)用PYG培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、酪酸梭菌，經(jīng)混合后制成飼料添加劑用于禽畜養(yǎng)殖，其培養(yǎng)基消耗量大，成本昂貴。匡群等對(duì)酪酸梭菌的培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，采用葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、胰蛋白胨、酵母膏、牛肉浸膏、NaCl、(NH4)2S04、K2HP04、MgS04、MnS04、NaHC03、CaC03作為培養(yǎng)基，同樣存在價(jià)格昂貴的問(wèn)題，同時(shí)培養(yǎng)時(shí)間需長(zhǎng)達(dá)36h。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種生產(chǎn)設(shè)備、工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低廉，同時(shí)能在短周期內(nèi)生產(chǎn)出產(chǎn)量大、孢子轉(zhuǎn)化率高的酪酸梭菌生產(chǎn)方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該種酪酸梭菌生產(chǎn)方法在禽畜飼養(yǎng)領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的—種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1)酪酸梭菌經(jīng)活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后2538。C下靜置1824h。(2)將培養(yǎng)液用自來(lái)水或飼料稀釋到1X1055X105cfu/g。所述的活化過(guò)程是在強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基(RCM)中進(jìn)行。3所述的培養(yǎng)劑含有以下重量份數(shù)的原料大豆餅粉10-30份，玉米淀粉10-30份，玉米漿5-25份，碳酸鈣0.5-1份，蘇打粉0.06-0.6份，硫酸錳0.006-0.06份，自來(lái)水1000份。所述的培養(yǎng)基經(jīng)煮沸1030min后，冷卻到常溫備用。所述接種的接種量為O.001-0.01%。接種量的大小決定了發(fā)酵的增殖效果及發(fā)酵效果，本發(fā)明經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)證明，該范圍的接種量便可實(shí)現(xiàn)較高的發(fā)酵數(shù)量，發(fā)酵周期短，且方便操作。培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生大量氣泡，并有剌鼻性氣體產(chǎn)生。—種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法在禽畜飼養(yǎng)上的應(yīng)用，其特征是將稀釋后的酪酸梭菌孢子液直接飼養(yǎng)禽畜。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果1.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產(chǎn)方法所需設(shè)備簡(jiǎn)單，工藝簡(jiǎn)便，無(wú)需經(jīng)過(guò)高壓滅菌，無(wú)需通過(guò)石蠟油、氮?dú)狻⒍趸嫉染S持厭氧環(huán)境，不需要大型設(shè)備，同時(shí)節(jié)省了水電資源，適合在各種養(yǎng)殖場(chǎng)推廣應(yīng)用。2.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產(chǎn)方法成本低廉，取材方便，一噸的培養(yǎng)基質(zhì)的成本僅為100元左右。3.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產(chǎn)方法產(chǎn)率高，雹子轉(zhuǎn)化率高，接近95%，活性強(qiáng)，同時(shí)菌株同步性較好，可以實(shí)現(xiàn)同步成孢，提高了孢子的利用率。4.本發(fā)明所提供的酪酸梭菌孢子生產(chǎn)方法培養(yǎng)周期短，培養(yǎng)時(shí)間僅21h左右，菌落數(shù)即達(dá)到8X108cfu/ml。5.本發(fā)明的方法所產(chǎn)生的孢子菌液中含有大量具有活性的孢子，同時(shí)發(fā)酵菌液直接配置為飼養(yǎng)液，可有效保留發(fā)酵液中的多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如酪酸、乳酸和醋酸等有機(jī)酸，可有效抑制常見(jiàn)致病菌的生長(zhǎng)，應(yīng)用于禽畜的飼養(yǎng)中，有效降低了禽畜的腹瀉率及初生禽畜的死亡率，有效地提高了產(chǎn)能并節(jié)約用藥成本。此法在禽畜飼養(yǎng)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體的實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。通過(guò)以禽畜作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)，并將本發(fā)明的飼養(yǎng)效果以及抗生素、維生素及中草藥的治療效果相對(duì)比，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明所提供的方法在預(yù)防禽畜腹瀉上的效果。實(shí)施例11.菌種的活化配置如下的RCM培養(yǎng)基酵母膏3g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，可溶性淀粉lg，葡萄糖5g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，NaC13g，NaAc3g，水1000mL，刃天青3mg/L，瓊脂15g，調(diào)節(jié)pH8.5，121。C下濕熱滅菌30min。在37。C下靜置培養(yǎng)20h。2.菌株的發(fā)酵培養(yǎng)配置如下的培養(yǎng)基(g/L):大豆餅粉25，碳酸鈣0.8，蘇打粉0.48kg，玉米淀粉20，玉米漿20，硫酸錳0.008，自來(lái)水1000ml，自然pH，煮沸10-30分鐘。菌株在37°C下靜置培養(yǎng)2lh。3.飼養(yǎng)液的配制及在預(yù)防初生仔豬腹瀉上的應(yīng)用將上述經(jīng)過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵菌液用自來(lái)水或飼料稀釋到5X10Scfu/g，直接進(jìn)行仔豬拌料或飲水，不能自主進(jìn)食的仔豬進(jìn)行灌服。4.試驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)對(duì)象為溫氏商品豬的初生仔豬。實(shí)驗(yàn)組初生仔豬出生后，按每頭仔豬lOmL/天的劑量灌服本發(fā)明所提供的發(fā)酵菌液，不進(jìn)行抗生素注射及用藥等方法的防控，其他的飼養(yǎng)管理按豬場(chǎng)的常規(guī)方法進(jìn)行。對(duì)照組仔豬發(fā)生腹瀉后注射抗生素及其他藥物，并結(jié)合豬場(chǎng)的治療管理給予一定的其他藥物如維生素及中草藥的治療，日糧、營(yíng)養(yǎng)成分及飼養(yǎng)管理等完全與實(shí)驗(yàn)組相同。試驗(yàn)結(jié)果如表1:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>試驗(yàn)結(jié)果表明研究院研發(fā)的微生態(tài)制劑可以有效預(yù)防初生仔豬的腹瀉，可以有效的降低用藥成本。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的仔豬不僅腹瀉情況明顯降低，仔豬的毛發(fā)也較為光亮蓬松，精神狀態(tài)明顯提高，部分仔豬甚至是不經(jīng)保育舍飼養(yǎng)，直接售出。實(shí)施例21.菌種的活化如實(shí)施例l。2.菌株的發(fā)酵培養(yǎng)如實(shí)施例l。3.飼養(yǎng)液的配制及在預(yù)防肉雞腹瀉上的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)對(duì)象為溫氏養(yǎng)戶(hù)的全部1日齡肉雞，飼喂酪酸梭菌。實(shí)驗(yàn)組1:在飲水中加入研究院研發(fā)的酪酸梭菌，添加量為5ml/kg飲水(即每公斤飲水添加5ml酪酸梭菌)，每天兩次，每次飲水四小時(shí)。實(shí)驗(yàn)組2:采用拌料飼喂的方法，每次給肉雞飼喂飼料時(shí)添加酪酸梭菌3ml/kg飼料(即每公斤飼料添加酪酸梭菌3ml)，全程飼喂酪酸梭菌至肉雞出欄。對(duì)照組使用溫氏肉雞的常規(guī)飼料滿(mǎn)足其日糧及養(yǎng)成分要求。飼養(yǎng)管理、免疫程序、投藥程序都按溫氏常規(guī)肉雞飼養(yǎng)辦法和免疫程序進(jìn)行。試驗(yàn)結(jié)果如表2:表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2的肉雞，與對(duì)照組肉雞比較，腹瀉率、死亡率大幅度降低，均約為對(duì)照組肉雞的三分之一，并且用藥大幅降低。權(quán)利要求一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于包括如下步驟(1)酪酸梭菌經(jīng)活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后發(fā)酵培養(yǎng)。(2)將發(fā)酵培養(yǎng)液用自來(lái)水或飼料稀釋到1×105～5×105cfu/g。2.如權(quán)利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)所述的活化過(guò)程是在強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基中進(jìn)行。3.如權(quán)利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)所述的發(fā)酵培養(yǎng)是在253『C下進(jìn)行。4.如權(quán)利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)所述的發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為1824h。5.如權(quán)利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)所述的培養(yǎng)基含有以下重量份數(shù)的原料大豆餅粉10-30份，玉米淀粉10-30份，玉米漿5-25份，碳酸鈣0.5-1份，蘇打粉0.06-0.6份，硫酸錳0.006-0.06份，自來(lái)水1000份。6.如權(quán)利要求5所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基經(jīng)煮沸1030min后，冷卻到常溫備用。7.如權(quán)利要求1所述的一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法，其特征在于步驟(1)所述的接種的接種量為0.01-0.1%。8.如權(quán)利要求1所述的酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法在禽畜飼養(yǎng)上的應(yīng)用，其特征是將稀釋后的酪酸梭菌孢子液直接飼養(yǎng)禽畜。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種酪酸梭菌的孢子生產(chǎn)方法及其在在禽畜飼養(yǎng)上的應(yīng)用，目的是為了解決目前酪酸梭菌培養(yǎng)方法成本高、設(shè)備要求高，或者生產(chǎn)周期長(zhǎng)，孢子轉(zhuǎn)化率低下，提供一種簡(jiǎn)便地培養(yǎng)出具有大量穩(wěn)定活性的酪酸梭菌孢子的方法，并將發(fā)酵培養(yǎng)液應(yīng)用于禽畜飼養(yǎng)過(guò)程，以降低禽畜的腹瀉率，提高產(chǎn)能。其方法是將酪酸梭菌經(jīng)活化后，接種到以大豆餅粉或玉米淀粉或玉米漿為主要原料的培養(yǎng)基上，密封后發(fā)酵培養(yǎng)；將所得的發(fā)酵菌液用自來(lái)水或飼料稀釋到1×105～5×105cfu/g，直接飼養(yǎng)禽畜。該法工藝簡(jiǎn)便、成本低廉、孢子的利用率、菌液營(yíng)養(yǎng)豐富，有效降低了禽畜的腹瀉率及初生禽畜的死亡率，提高了產(chǎn)能并節(jié)約用藥成本。文檔編號(hào)C12N3/00GK101717746SQ20091019328公開(kāi)日2010年6月2日申請(qǐng)日期2009年10月26日優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日發(fā)明者周慶豐,杜云平申請(qǐng)人:廣東溫氏食品集團(tuán)有限公司