專利名稱：一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑，屬于微生物發(fā)酵領域。
背景技術：
酪酸梭菌又名丁酸梭菌，是一種革蘭氏陽性厭氧內生芽胞桿菌。芽抱巨大，生成芽袍后或一端膨大成鼓錘狀，或中部膨脹成紡錘狀或梭狀。對禽畜無毒害作用；通過動物消化道中的生物競爭排斥作用，可抑制腸道有害菌，促進有益菌生長；能減少腸內氨、胺含量，減少肝臟負擔；產生多種維生素和微量元素；產生多種酶類，提高飼料利用率，促進動物生長。作為微生態(tài)制劑功效顯著，并能與抗生素配伍使用。酪酸梭菌現(xiàn)主要利用液體深層靜置培養(yǎng)技術，此方法產品率高但生產成本高昂，對設備環(huán)境的要求高，其固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)方法稀見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術成本高昂，生產條件苛刻的劣勢，提供一種工業(yè)化生產低廉、對生產條件不苛刻，且具有促生長功能的酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑。為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種酪酸梭菌及酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，采用酪酸梭菌(菌種保藏在中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，編號為 CICC20036，種名butyricum，屬名Clostridium，歷史來源于四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設計院(1.265))，具體步驟如下
第一步將胰蛋白胨2-2. 5g，牛肉浸膏1-1. 5g，酵母膏0.6-1. 0g，葡萄糖0.4-0. 5g， 磷酸氫二鉀0. 2-0. 3g，磷酸二氫鉀0. 1-0. 3g，硫酸鎂0. 04-0. 06g，氯化鈣0. 02-0. 05g， 硫酸亞鐵0.01-0.05g，半胱氨酸鹽酸鹽0.05-0. lg，蒸餾水100ml，配制成液體種子專用培養(yǎng)基，將PH值調節(jié)至7. 2-7. 4 ；將凍藏的酪酸梭菌菌種接入培養(yǎng)基，37-40°C靜置厭氧培養(yǎng)18-2 ，進行種子活化；
第二步將以質量百分比計的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸鈣0. 05-0. 1%、硫酸鎂 0. 05-0. 1%、氯化鈣0. 1-0. 2%及剩余的水配制成固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基；
第三步將第一步得到的種子液接入第二步得到的固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)
酵；
第四步將第三步得到的產品進行低溫烘干，粉碎，過蹄，計量，包裝，制得成品。優(yōu)選地，所述的第二步中的氮源為菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一種或兩種以上的混合物。進一步地，所述的第二步中的氮源，在作為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基前，先滅菌，并用中性蛋白酶進行前處理；氮源與水重量比為1:1. 5-2，中性蛋白酶以1000-1500 μ g/g加入到氮源與水的混合物中，酶解處理3-證。優(yōu)選地，所述的第二步中的碳源為麩皮、米糠及玉米粉中的任意一種或兩種以上的混合物與質量百分比為10%的糖蜜的混合物。
優(yōu)選地，所述的第三步中的種子液的接種量的質量百分比為5_15%，培養(yǎng)溫度為 36-40°C，靜置固態(tài)厭氧發(fā)酵時間為45-55h。優(yōu)選地，所述的第四步中的低溫烘干的溫度為38-42°C，烘干至水分的質量百分比低于8%，所述過篩的孔目為1.0目篩網。本發(fā)明利用低廉的碳氮源基質，提供一種新型的酪酸梭菌大規(guī)模工業(yè)化生產方法，有效降低成本，增加工廠效益。


圖1為本發(fā)明固體厭氧發(fā)酵接種量對酪酸梭菌活菌數(shù)及芽孢濃度的影響的數(shù)據圖2為本發(fā)明固體厭氧發(fā)酵時間對酪酸梭菌活菌數(shù)及芽孢濃度的影響的數(shù)據圖； 圖3為本發(fā)明固體厭氧發(fā)酵溫度對酪酸梭菌活菌數(shù)及芽孢濃度的影響的數(shù)據圖。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1
選用豆粕作為氮源；90wt%麩皮與10wt%糖蜜的混合物作為碳源。步驟一，發(fā)酵菌體種子制備及種子活化
1、配制液體種子專用培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨2.5g，牛肉浸膏1.58，酵母膏0.68，葡萄糖0.4g，磷酸氫二鉀0. 2g，磷酸二氫鉀0. lg，硫酸鎂0.04g，氯化鈣0.02g，硫酸亞鐵 O.Olg，半胱氨酸鹽酸鹽0.05g，蒸餾水IOOmldjlfpH 7.2。2、將凍藏的酪酸梭菌菌種接入培養(yǎng)基，37°C靜置厭氧培養(yǎng)18h。步驟二，固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基制備
3、先將氮源滅菌，利用中性蛋白酶進行前處理；氮源加水重量比為1:2，中性蛋白酶以 1000 μ g/g加入氮源與水的混合物中，酶解處理汕。4、配置固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基，其中質量百分比的配比為，氮源25%、碳源15%、碳酸鈣0. 05%、硫酸鎂0. 05%、氯化鈣0. 1%、加水至100%。步驟三，固態(tài)厭氧發(fā)酵
5、將步驟一中已活化完畢的種子液接入步驟二固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵。 種子液接種量為10%，培養(yǎng)溫度為37°C，靜置固態(tài)厭氧發(fā)酵時間為50h。步驟四，成品加工
6、將發(fā)酵產品在40°C低溫烘至水分低于8wt%，然后粉碎，用篩孔目為1.0目的篩網過篩，計量，包裝制得成品。
實施例2
選用豆粕和花生粕重量比為1:1的混合物作為氮源；90wt%麩皮/米糠重量比為1:1的混合物與10wt%糖蜜的混合物作為碳源。
步驟一，發(fā)酵菌體種子制備及種子活化
1、配制液體種子專用培養(yǎng)基，其中胰蛋白胨2.0g，牛肉浸膏1.(^，酵母膏1.(^，葡萄糖0. 5g，磷酸氫二鉀0. 2g，磷酸二氫鉀0. lg，硫酸鎂0.04g，氯化鈣0.02g，硫酸亞鐵 0.02g，半胱氨酸鹽酸鹽0.05g，蒸餾水IOOmldjlfpH 7.4。2、將凍藏菌種接入培養(yǎng)基，38°C靜置厭氧培養(yǎng)19h。步驟二，固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基制備
3、先將氮源滅菌，利用中性蛋白酶進行前處理；氮源加水重量比為1:2，中性蛋白酶以 1200 μ g/g加入氮源與水的混合物中，酶解處理3.釙。4、配置固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基，其中質量百分比的配比為氮源30%、碳源15%、碳酸鈣0. 1%、硫酸鎂0. 1%、氯化鈣0. 1%、加水至100%。步驟三，固態(tài)厭氧發(fā)酵
5、將步驟一中已活化完畢的種子液接入步驟二固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵。 種子液接種量為15%，培養(yǎng)溫度為37°C，靜置固態(tài)厭氧發(fā)酵時間為55h。步驟四，成品加工
6、將發(fā)酵產品在40°C低溫烘至水分低于8wt%，然后粉碎，用篩孔目為1.0目的篩網過篩，計量，包裝制得成品。
實施例3
選用70日齡左右、體重30kg左右的長大二元雜交公豬60頭，隨機分為2組進行對比實驗。對照組公豬不添加本添加劑，試驗組以重量百分比為5%的比例添加入普通日糧中。 使用時本添加劑與普通全價飼料充分攪拌，均勻后即可飼喂。本品需存放于密封干燥處，避免與農藥、強刺激物品等混合堆放。試驗結果記錄如下_
權利要求
1.一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，采用酪酸梭菌(菌種保藏在中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，編號為CICC20036，種名butyricum，屬名Clostridium，歷史來源于四川省食品發(fā)酵工業(yè)研究設計院(1. 265))，具體步驟如下第一步將胰蛋白胨2-2. 5g，牛肉浸膏1-1. 5g，酵母膏0.6-1. 0g，葡萄糖0.4-0. 5g， 磷酸氫二鉀0. 2-0. 3g，磷酸二氫鉀0. 1-0. 3g，硫酸鎂0. 04-0. 06g,氯化鈣0. 02-0. 05g, 硫酸亞鐵0.01-0.05g，半胱氨酸鹽酸鹽0.05-0. lg，蒸餾水100ml，配制成液體種子專用培養(yǎng)基，將PH值調節(jié)至7. 2-7. 4 ；將凍藏的酪酸梭菌菌種接入培養(yǎng)基，37-40°C靜置厭氧培養(yǎng)18-2 ，進行種子活化；第二步將以質量百分比計的氮源20-30%、碳源10-15%、碳酸鈣0. 05-0. 1%、硫酸鎂 0. 05-0. 1%、氯化鈣0. 1-0. 2%及剩余的水配制成固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基；第三步將第一步得到的種子液接入第二步得到的固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵；第四步將第三步得到的產品進行低溫烘干，粉碎，過蹄，計量，包裝，制得成品。
2.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的第二步中的氮源為菜籽粕、豆粕、花生粕、玉米胚芽粕及棉籽粕中的任意一種或兩種以上的混合物。
3.如權利要求2所述的一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的第二步中的氮源，在作為固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基前，先滅菌，并用中性蛋白酶進行前處理；氮源與水重量比為1:1. 5-2，中性蛋白酶以1000-1500 μ g/g加入到氮源與水的混合物中，酶解處理 3-5h0
4.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的第二步中的碳源為麩皮、米糠及玉米粉中的任意一種或兩種以上的混合物與質量百分比為 10%的糖蜜的混合物。
5.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的第三步中的種子液的接種量的質量百分比為5-15%，培養(yǎng)溫度為36-40°C，靜置固態(tài)厭氧發(fā)酵時間為45-5 。
6.如權利要求1所述的一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的第四步中的低溫烘干的溫度為38-42°C，烘干至水分的質量百分比低于8%，所述過篩的孔目為1.0目篩網。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法以及采用該方法制備的酪酸梭菌飼料添加劑。所述的酪酸梭菌飼料添加劑的制備方法其特征在于，采用酪酸梭菌(該酪酸梭菌保藏在中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，編號為CICC20036)，具體步驟為將胰蛋白胨，牛肉浸膏，酵母膏，葡萄糖，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，氯化鈣，硫酸亞鐵，半胱氨酸鹽酸鹽等配制成液體種子專用培養(yǎng)基；將菌種接入培養(yǎng)基，進行種子活化；將氮源、碳源等配制成固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基；將種子液接入固態(tài)厭氧發(fā)酵培養(yǎng)基中進行固態(tài)發(fā)酵，烘干，過篩。本發(fā)明利用低廉的碳氮源基質，提供一種新型的酪酸梭菌大規(guī)模工業(yè)化生產方法，有效降低成本，增加工廠效益。
文檔編號A23K1/16GK102550818SQ201210001838
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月16日 優(yōu)先權日2012年2月16日
發(fā)明者江瀚, 馬正馳 申請人:上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司