專利名稱：雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒及使用方法，屬于分子生物學技
術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
優(yōu)質(zhì)肉雞業(yè)是我國的特色產(chǎn)業(yè)，越來越多的消費者開始追求雞肉的風味，2008 年生產(chǎn)量超過42億只，市場份額已占到肉雞總產(chǎn)量55%以上，并呈逐年上升趨勢。以往 只針對肉雞生長性能和體組成的傳統(tǒng)選育，降低了雞肉風味物質(zhì)下降，而僅憑傳統(tǒng)選育 手段，很難達到肉雞產(chǎn)量、生長性能與雞肉風味物質(zhì)同時提高的目標。目前，隨著分子 生物學技術(shù)的發(fā)展，利用分子遺傳標記來輔助選育既具有良好肉品質(zhì)風味，又不影響肉 雞生長速度和體重的優(yōu)質(zhì)肉雞品種已成為現(xiàn)代家禽育種的發(fā)展方向。 優(yōu)質(zhì)肉雞育種中肉質(zhì)性狀的選育是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而肉質(zhì)的風味是肉質(zhì)性狀的一個 非常重要的指標。肌肉肌苷酸(IMP)含量是影響肉質(zhì)風味的重要因素，而腺苷琥珀酸裂 解酶(ADSL)是IMP合成過程中的關(guān)鍵酶之一，對于最終肌肉肌苷酸含量具有重要的影 響。肌內(nèi)脂肪(IMF)與肉質(zhì)和口感呈正相關(guān)，影響肉質(zhì)的嫩度、剪切力、風味和多汁性， 而脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白基因(A-FABP)的遺傳變異對肌內(nèi)脂肪(IMF)的含量有顯著 影響。近幾年的研究表明，ADSL基因(季從亮等，2004;束婧婷等，2007)和A-FABP 基因(Gerbens等，1998;葉滿紅，2003等；羅桂芬等，2006)，是影響肉品質(zhì)風味的主效 基因或與主效基因相連鎖的基因，可作為雞肉風味物質(zhì)選擇的分子遺傳標記。
連接酶檢測反應(yīng)(ligase detection reaction, LDR)LDR是利用高溫連接酶實現(xiàn)對基 因多態(tài)性位點的識別。通過多重PCR(Multiplex PCR)獲得含有待檢測突變位點的基因片 段，高溫連接酶一旦檢測到DNA與互補的兩條寡聚核苷酸接頭對應(yīng)處存在著基因點突變 類型的堿基錯配，則連接反應(yīng)就不能進行，最后通過測序儀電泳讀取檢測結(jié)果。該技術(shù) 具有特異性高、檢測快速、通用性強、適用范圍廣、成本低廉等特點，目前已成功應(yīng)用 于人類疾病相關(guān)基因分子標記的SNP檢測和基因診斷試劑盒的研發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒及使用方法，在于為雞 肉風味物質(zhì)相關(guān)基因的檢測提供一種快速、簡便、價格低廉的基因診斷方法，有利于篩 選出風味物質(zhì)含量最高的肉雞個體，指導雞肌肉風味物質(zhì)的分子標記選育。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的， 一種雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑 盒，其特征是，所述的試劑盒包括ADSL基因PCR擴增的上下游引物混合物P1、 ADSL 基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L1、 A-FABP基因PCR擴增上下游引物混合物P2、 A-FABP基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L2及Tag酶和DNA連接酶。
ADSL基因PCR擴增的上下游引物混合物Pl表示的信息為
上游引物序列5' -CACTGCTGTCCCAAAGCTG-3'，ADSL下游引物序列5' -GCAGGCAGGAAAATGAAAGT-3'。 ADSL基因LDR反應(yīng)的探針的混合物LI表示三根探針，三根探針表示的信息
A探針ADSL_MODIFY序列 5， P-
B探針ADSL_C序列 5，
C探針ADSL_T序列 5，
A-FABP基因PCR擴增上下游引物混合物P2表示的信息為 A-FABP上游引物序列5' -GACCAGTTTGTGGGCACCT-3'， A-FABP下游弓l物序歹lJ 5' -TTTCTCACCCAGCTCTTTCA-3'。 A-FABP基因LDR反應(yīng)的探針的混合物LI表示三根探針，三根探針表示的信息
D探針A-FABP_MODIFY序列 5， P-
E探針A-FABP_C序列 5，
F探針A-FABP_T序列 5，
所述方法包括下列步驟
1) 、 PCR擴增SNP位點所在片段；
2) 、 PCR產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng)。 所述的PCR擴增SNP位點所在片段有以下步驟
1)、 PCR擴增反應(yīng)體系準備，在200iU的PCR薄壁管中，加入20iiLPCR反應(yīng) 體系，充分混勻后短暫離心，最后加入20 ii 1石蠟油；20 ii L PCR反應(yīng)體系由1 y 1 50ng/ iUDNA模板、2ii 1 IOXPCR反應(yīng)緩沖液、0.6 ii 1 lOOmM Mg2+、 2 ii 1 20mM dNTP、 4 ii 1 5XQ-solution、 0.2 y 1 5U/y 1 Tag酶、9.8ul ddH20、 0.4 y 1 5pM/y 1上下游引物混合物P1或 P2組成； 2)、在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下PCR擴增反應(yīng)程 序先95t:變性15分鐘；再經(jīng)過35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94°C 30秒、56。C復(fù)性1分鐘 30秒、72t:i分鐘；然后72t:延伸5分鐘、最后4t:保存；程序設(shè)置完畢后，將PCR反 應(yīng)管放入PCR儀進行反應(yīng)擴增； 3)、反應(yīng)結(jié)束后，取2iU反應(yīng)產(chǎn)物點樣在3.0X瓊脂糖膠中，然后在0.5XTBE緩
沖液中電泳40分鐘，檢測PCR產(chǎn)物擴增片段大小，以ADSL基因擴增產(chǎn)物片段為99bp，
A-FABP基因擴增產(chǎn)物片段為75bp，判定PCR擴增片段是否正確； 4)、剩余反應(yīng)產(chǎn)物保存于-20°C 。 所述的PCR產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng)有以下步驟 1)在PCR擴增產(chǎn)物中加入等體積ddH20稀釋，作為連接反應(yīng)的模板；
2)在200iU的PCR薄壁管中，加入10 y L連接酶檢測反應(yīng)體系，充分混勻后 短暫離心，最后加入10iU石蠟油；lOiiL連接酶檢測反應(yīng)體系由liUPCR產(chǎn)物、liU 10 X PCR反應(yīng)緩沖液、1 y 1 0.5pM/each探針混合物(LI或L2)、 0.05 y 1 40U/ P 1 DNA連接 酶、6.95 ii 1 ddH20組成； 3)在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下程序先94°C 2分 鐘，然后30個循環(huán)反應(yīng)，每個循環(huán)包括94t:30秒、55"C2分鐘，最后4"C保存，程序設(shè) 置完畢后，將PCR反應(yīng)管放入PCR儀進行連接反應(yīng)； 4)在每個上樣孑L中加入10 ii 1 Loading Buffer, 0.25 y 1內(nèi)參標記1 y 1 ABI GS-500ROX熒光標記分子量標準，最后加入0.5iU的LDR產(chǎn)物，充分混勻后上樣，運用 ABI377測序儀進行測序膠毛細管電泳； 5)應(yīng)用GENESCAN 672軟件進行數(shù)據(jù)收集、泳道線校正、遷移片段大小測 量和校正內(nèi)在分子量標準；應(yīng)用Genemapper軟件進行數(shù)據(jù)分析和基因分型，基因分 型標準為ADSL基因連接產(chǎn)物檢測出雙峰86bp ± 0.5bp/88bp ± 0.5bp為CT基因型，單 峰86bp士0.5bp為CC基因型，單峰88bp士0.5bp為TT基因型；A-FABP基因連接產(chǎn)物 檢測出雙峰82士0.5bp/84士0.5bp為CT基因型，單峰82bp士0.5bp為CC基因型，單峰 84bp士0.5bp為TT基因型。 本發(fā)明依據(jù)國內(nèi)外和本人對雞肉風味物質(zhì)和分子遺傳學研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)ADSL 基因第二外顯子C3484T突變對IMP有顯著影響，TT基因型個體的IMP含量最高且顯著 高于CC和CT; A-FABP基因第一外顯子C51T突變對IMF有顯著影響，TT基因型個體 的IMP含量最高顯著高于CC和CT，這兩個基因均在雞肉風味物質(zhì)形成過程中起調(diào)控作 用。以LDR方法檢測這兩個基因的基因型，TTTT基因型組合為雞肉風味物質(zhì)含量最高 的肉雞個體。


圖1為本發(fā)明試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2為ADSL基因PCR產(chǎn)物擴增結(jié)果圖片； 圖3為A-FABP基因PCR產(chǎn)物擴增結(jié)果圖片 圖4為本發(fā)明分型截圖，注雙峰表示雜合基因型，單峰表示純合基因型；各 個峰下面的矩形中的數(shù)值表示片段大小，如sz 85.80表示85.80bp。
具體實施例方式
結(jié)合附圖和實施例進一步說明本發(fā)明，如圖1所示，本發(fā)明試劑盒包括ADSL基 因PCR擴增的上下游引物混合物Pl， ADSL基因LDR反應(yīng)的探針的混合物Ll， A-FABP 基因PCR擴增上下游引物混合物P2， A-FABP基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L2及Tag 酶和DNA連接酶。 本發(fā)明提供的雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，是直接以受測雞種的血液提取的 DNA基因組為模板，利用LDR技術(shù)檢測出ADSL和A-FABP的基因型，基因型組合共有
9禾中-CCCC、 CCCT、 CCTT、 CTCC、 CTCT、 CTTT、 TTCC、 TTCT、 TTTT，其中
TTTT基因組合型個體風味物質(zhì)最豐富。該試劑盒包括表1所述成分。
表1試劑盒組成







下
下
引麴探針酶
ADSL基因診斷試劍20 n 1 PI20 u 1 L〗.20pi Jk,鷗 20 n 1 ,連接,
A-P懇P基因診斷試 劑20 p 1 P220 u 1 1.2PI表示用于ADSL基因PCR擴增的上下游引物混合物，具體引物信息如下 ADSL上游引物序列5' -CACTGCTGTCCCAAAGCTG-3'， ADSL下游引物序列5， -GCAGGCAGGAAAATGAAAGT-3'， 擴增產(chǎn)物片段為99bp。
P2表示用于A-FABP基因PCR擴增上下游引物混合物，具體引物信息如下 A-FABP上游引物序列5' -GACCAGTTTGTGGGCACCT-3'， A-FABP下游弓l物序歹lJ 5' -TTTCTCACCCAGCTCTTTCA-3'，
擴增產(chǎn)物片段75bp。
LI表示用于ADSL基因LDR反應(yīng)的三根探針的混合物，三根探針具體信息如
A探針ADSL_MODIFY序列 5， P-
B探針ADSL_C序列 5，
C探針ADSL_T序列
若檢測位點位點是C，則A， B探針經(jīng)過LDR連接反應(yīng)產(chǎn)物為86bp ; 若檢測位點位點是T，則A， C探針經(jīng)過LDR連接反應(yīng)產(chǎn)物為88bp。 L2表示用于ADSL基因LDR反應(yīng)的三根探針的混合物，三根探針具體信息如
D探針A-FABP_MODIFY序列 5， P-
E探針A-FABP_C序列 5，
F探針A-FABP_T序列
若檢測位點位點是C，則D， E探針經(jīng)過LDR連接反應(yīng)產(chǎn)物為82bp ; 若檢測位點位點是T，則D， F探針經(jīng)過LDR連接反應(yīng)產(chǎn)物為84bp。 雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒的方法，其操作步驟如下 1PCR擴增SNP位點所在片段
7
l)PCR擴增反應(yīng)體系準備 在200iU的PCR薄壁管中，加入20iiLPCR反應(yīng)體系，充分混勻后短暫離心， 最后加入20iU石蠟油。 雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒的方法，其操作步驟如下
1PCR擴增SNP位點所在片段 l)PCR擴增反應(yīng)體系準備，在200iU的PCR薄壁管中，加入20iiLPCR反應(yīng) 體系，充分混勻后短暫離心，最后加入20 ii 1石蠟油；20 ii L PCR反應(yīng)體系由1 y 1 50ng/ iUDNA模板、2ii 1 IOXPCR反應(yīng)緩沖液、0.6 ii 1 100mM Mg2+、 2 ii 1 20mM dNTP、 4 ii 1 5XQ-solution、 0.2 y 1 5U/P 1 Taq酶、9.8ul ddH20、 0.4 y 1 5pM/y 1上下游引物混合物P1或 P2組成； 2)在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下PCR擴增反應(yīng)程序 先95。C變性15分鐘；再經(jīng)過35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94°C 30秒、56。C復(fù)性1分鐘30 秒、72t:i分鐘；然后72t:延伸5分鐘、最后4t:保存；程序設(shè)置完畢后，將PCR反應(yīng) 管放入PCR儀進行反應(yīng)擴增； 3)反應(yīng)結(jié)束后，取2iU反應(yīng)產(chǎn)物點樣在3.0X瓊脂糖膠中，然后在0.5XTBE緩 沖液中電泳40分鐘，檢測PCR產(chǎn)物擴增片段大小，以ADSL基因擴增產(chǎn)物片段為99bp， A-FABP基因擴增產(chǎn)物片段為75bp，判定PCR擴增片段是否正確；
4)剩余反應(yīng)產(chǎn)物保存于-20°C 。
2PCR產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng) l)在PCR擴增產(chǎn)物中加入等體積ddHW稀釋，作為連接反應(yīng)的模板；
2)在200iU的PCR薄壁管中，加入10 y L連接酶檢測反應(yīng)體系，充分混勻后 短暫離心，最后加入10iU石蠟油；10iiL連接酶檢測反應(yīng)體系由liU PCR產(chǎn)物、liU 10 X PCR反應(yīng)緩沖液、1 y 1 0.5pM/each探針混合物(Ll或L2)、 0.05 y 1 40U/ P 1 DNA連接 酶、6.95 ii 1 ddH20組成; 3)在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下程序先94°C 2分 鐘，然后30個循環(huán)反應(yīng)，每個循環(huán)包括94t:30秒、55"C2分鐘，最后4"C保存，程序設(shè) 置完畢后，將PCR反應(yīng)管放入PCR儀進行連接反應(yīng)； 4)在每個上樣孔中加入10 ii 1 Loading Buffer, 0.25 y 1ABI GS-500ROX熒光標記 分子量標準，最后加入0.5iU的LDR產(chǎn)物，充分混勻后上樣，運用ABI377測序儀進行測 序膠毛細管電泳； 5)應(yīng)用GENESCAN 672軟件進行數(shù)據(jù)收集、泳道線校正、遷移片段大小測 量和校正內(nèi)在分子量標準；應(yīng)用Genemapper軟件進行數(shù)據(jù)分析和基因分型，基因分 型標準為ADSL基因連接產(chǎn)物檢測出雙峰86bp ± 0.5bp/88bp ± 0.5bp為CT基因型，單 峰86bp士0.5bp為CC基因型，單峰88bp士0.5bp為TT基因型；A-FABP基因連接產(chǎn)物 檢測出雙峰82士0.5bp/84士0.5bp為CT基因型，單峰82bp士0.5bp為CC基因型，單峰 84bp士0.5bp為TT基因型。
例證結(jié)果說明 按照本試劑盒的操作步驟，檢測91日齡300只文昌雞的ADSL和A-FABP的基
因型，篩選出雞肉風味物質(zhì)最豐富的基因型組合TTTT個體。
1 、 ADSL和A-FABP基因PCR擴增檢測結(jié)果如圖2、 3所示；
2、 ADSL基因和A-FABP基因分型結(jié)果如圖4所示； PCR產(chǎn)物連接酶反應(yīng)檢測后，經(jīng)Genemapper數(shù)據(jù)分析的結(jié)果，ADSL基因和A-FABP基因兩個SNP位點的分型截圖見圖4，結(jié)合ADSL和A-FABP基因分型結(jié)果，篩選出代表風味物質(zhì)最豐富的文昌雞個體——TTTT基因型組合個體。
權(quán)利要求
一種雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，其特征是，所述的試劑盒包括ADSL基因PCR擴增的上下游引物混合物P1、ADSL基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L1、A-FABP基因PCR擴增上下游引物混合物P2、A-FABP基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L2及Tag酶和DNA連接酶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，其特征是，ADSL基因PCR 擴增的上下游引物混合物Pl表示的信息為ADSL上游引物序列5' -CACTGCTGTCCCAAAGCTG-3'， ADSL下游引物序列5' -GCAGGCAGGAAAATGAAAGT-3'。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，其特征是，ADSL基因LDR 反應(yīng)的探針的混合物L1表示三根探針，三根探針表示的信息為A探針ADSL_MODIFY序列B探針ADSL_C序列 C探針ADSL_T序列5' -TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACCGTGTTATCCCCTACGTAACA^
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，其特征是， PCR擴增上下游引物混合物P2表示的信息為A-FABP上游引物序列 5' -GACCAGTTTGTGGGCACCT-3'， A-FABP下游弓I物序歹lj 5' -TTTCTCACCCAGCTCTTTCA-3'。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒，其特征是，A-FABP基因 LDR反應(yīng)的探針的混合物L2表示三根探針，三根探針表示的信息為D探針A-FABP_MODIFY序列E探針A-FABP_C序列 F探針A-FABP_T序列
6. —種使用權(quán)利要求1所述診斷試劑盒的方法，其特征是，所述方法包括下列步驟1) 、 PCR擴增SNP位點所在片段；2) 、 PCR產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用權(quán)利要求1診斷試劑盒的方法，其特征是，所述的PCR 擴增SNP位點所在片段有以下步驟1)、 PCR擴增反應(yīng)體系準備，在200iU的PCR薄壁管中，加入20iiL PCR反應(yīng)體 系，充分混勻后短暫離心，最后加入20iU石蠟油；20iiL PCR反應(yīng)體系由liU 50ng/ iUDNA模板、2ii 1 IOXPCR反應(yīng)緩沖液、0.6 ii 1 lOOmM Mg2+、 2 ii 1 20mM dNTP、 4 ii 1 5XQ-solution、 0.2 y 1 5U/y 1 Tag酶、9.8ul d膽20、 0.4 y 1 5pM/y 1上下游引物混合物Pl 或P2組成；2) 、在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下PCR擴增反應(yīng)程序先 95t:變性15分鐘；再經(jīng)過35個循環(huán)，每個循環(huán)包括94°C 30秒、56。C復(fù)性1分鐘30秒、 72°C 1分鐘；然后72t:延伸5分鐘、最后4t:保存；程序設(shè)置完畢后，將PCR反應(yīng)管放 入PCR儀進行反應(yīng)擴增；3) 、反應(yīng)結(jié)束后，取2iU反應(yīng)產(chǎn)物點樣在3.0X瓊脂糖膠中，然后在0.5XTBE緩沖 液中電泳40分鐘，檢測PCR產(chǎn)物擴增片段大小，以ADSL基因擴增產(chǎn)物片段為99bp， A-FABP基因擴增產(chǎn)物片段為75bp，判定PCR擴增片段是否正確；4) 、剩余反應(yīng)產(chǎn)物保存于-20°C 。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用權(quán)利要求1診斷試劑盒的方法，其特征是，所述的PCR 產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng)有以下步驟1) 在PCR擴增產(chǎn)物中加入等體積dd H20稀釋，作為連接反應(yīng)的模板；2) 在200 ii 1的PCR薄壁管中，加入10 ii L連接酶檢測反應(yīng)體系，充分混勻后短暫離 心，最后加入10iU石蠟油；lOiiL連接酶檢測反應(yīng)體系由liUPCR產(chǎn)物、liU10XPCR 反應(yīng)緩沖液、1 P 1 0.5pM/each探針混合物(LI或L2)、 0.05 y 1 40U/ P 1 DNA連接酶、 6.95 ii 1 ddH20組成;3) 在Perkin-Elmer Gene Amp PCR Systems 9600上設(shè)置如下程序先94°C 2分鐘，然 后30個循環(huán)反應(yīng)，每個循環(huán)包括94t:30秒、55"C2分鐘，最后4"C保存，程 序設(shè)置完畢 后，將PCR反應(yīng)管放入PCR儀進行連接反應(yīng)；4) 在每個上樣孔中加入10 ii 1 Loading Buffer, 0.25 y 1內(nèi)參標記1 y 1ABI GS-500 ROX 熒光標記分子量標準，最后加入0.5iU的LDR產(chǎn)物，充分混勻后上樣，運用ABI377測序 儀進行測序膠毛細管電泳；5) 應(yīng)用GENESCAN 672軟件進行數(shù)據(jù)收集、泳道線校正、遷移片段大小測量和校 正內(nèi)在分子量標準；應(yīng)用Genemapper軟件進行數(shù)據(jù)分析和基因分型，基因分型標準為 ADSL基因連接產(chǎn)物檢測出雙峰86bp±0.5bp/88bp±0.5bp為CT基因型，單峰86bp±0.5bp 為CC基因型，單峰88bp士0.5bp為TT基因型；A-FABP基因連接產(chǎn)物檢測出雙峰 82士0.5bp/84士0.5bp為CT基因型，單峰82bp士0.5bp為CC基因型，單峰84bp士0.5bp為 TT基因型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞肉風味物質(zhì)基因診斷試劑盒及使用方法，屬于分子生物學技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明試劑盒包括ADSL基因PCR擴增的上下游引物混合物P1、ADSL基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L1、A-FABP基因PCR擴增上下游引物混合物P2、A-FABP基因LDR反應(yīng)的探針的混合物L2及Tag酶、DNA連接酶；所述的方法以LDR方法檢測這兩個基因的基因型，PCR擴增SNP位點所在片段，PCR產(chǎn)物的連接酶檢測反應(yīng)；ADSL基因第二外顯子C3484T突變對IMP有顯著影響，TT基因型個體的IMP含量最高且顯著高于CC和CT；A-FABP基因第一外顯子C51T突變對IMF有顯著影響，TT基因型個體的IMP含量最高顯著高于CC和CT，TTTT基因型組合為雞肉風味物質(zhì)含量最高的肉雞個體。
文檔編號C12Q1/68GK101691612SQ200910183710
公開日2010年4月7日 申請日期2009年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月5日
發(fā)明者宋衛(wèi)濤, 徐文娟, 朱文奇, 李慧芳, 束婧婷, 湯青萍, 章明, 陳寬維, 韓威 申請人:江蘇省家禽科學研究所