專利名稱：：蘇云金芽胞桿菌菌株新菌株及其應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微生物新菌株及其應用，具體地說是一種蘇云金芽孢桿菌及其在農(nóng)業(yè)蟲害防治中的應用。
背景技術(shù)：
：在人類生產(chǎn)過程中，蟲害是造成農(nóng)業(yè)生產(chǎn)損失及影響人類健康的重要因素，據(jù)FAO統(tǒng)計，全世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)每年因蟲害造成的經(jīng)濟損失高達14%,病害損失達12%，草害損失達11%。損失額高達1260億美元，相當于中國農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的一半，英國的4倍多。另外，蛺媒病在預防醫(yī)學中占有重要位置，其中登革熱和黃熱病等蚊媒病傳播力強、流行面廣、發(fā)病率高、危害性大。據(jù)WHO統(tǒng)計，全世界每年感染登革熱人數(shù)多達8000萬，我國的海南省在1980和1986年曾經(jīng)暴發(fā)過兩次登革熱，發(fā)病分別達到437469例和113589例。登革熱和黃熱病主要由埃及伊紋傳播。為了減少這些損失，多年來，對農(nóng)作物害蟲及蚊蟲普遍采用化學防治手段進行防治，但由于化學農(nóng)藥的長期、大量使用，造成了對環(huán)境的污染，農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量增加，給人類的生存和健康帶來了危害。此外，化學農(nóng)藥在殺滅害蟲的同時，也殺傷了天敵及其它有益物，破壞了生態(tài)平衡。與化學防治相比，生物防治具有安全、有效、持久的特點。并且避免了化學防治帶來的一系列問題。因此，生物防治技術(shù)成了人們研究的熱點。在生物殺蟲劑中，蘇云金芽孢桿菌是目前世界上用途最廣、產(chǎn)量最大的一類微生物殺蟲劑。蘇云金芽孢桿菌(Bfl"7/wsf/iMn、g!'eraz's,簡稱Bt)是一種革蘭氏陽性細菌，它的分布極為廣泛，在芽孢形成的同時可形成具有殺蟲活性的由蛋白質(zhì)組成的伴胞晶體，又名殺蟲晶體蛋白(Insectididalcrystalproteins,簡稱ICPs)，ICPs是由c^基因編碼的，對敏感昆蟲有強烈毒性，而對高等動物和人無毒性。近幾十年來，Bt已廣泛應用于控制多種鱗翅目、雙翅目、鞘翅目等害蟲。此外，Bt還對膜翅目、同翅目、直翅目、食毛目等多種害蟲及植物病原線蟲、螨類、原生動物有控害作用。目前在農(nóng)田害蟲、森林害蟲及衛(wèi)生害蟲的防治中Bt已成為化學合成農(nóng)藥的有力替代品，Bt還是轉(zhuǎn)基因抗蟲工程植物重要的基因來源。自1981年Schnepf從菌株HD-lDipel中克隆了第一個能表達殺蟲活性的基因以來(AdangM.J""/，Characterizedflill-lengthandtruncatedplasmidclonesofthe3crystalproteinofBac/〃z^決m"."g7,e"5issubsp.A:z^toh'HD-73andtheirtoxicity.toManducasexta,Gene,1985，36(3):289~300.)，人們已經(jīng)分離克隆了390多種編碼殺蟲晶體蛋白的基因，根據(jù)編碼的氨基酸序列同源性它們被分別確定為不同的群、亞群、類和亞類(CrickmoreN，ZeiglerDR，F(xiàn)eitelsonJ，wa/.Revisionofthenomenclatureforthe5(2"'〃ws//zwWwgz'em^pesticidalcrystalproteins.MicrobiolMolBiolRev,1998,62:807-813;http:〃麗w.biols.susx.ac.uk/Home/Nei1—Crickmore/Bt/)。一般而言，Cryl，Cry2和Cry9等毒蛋白對鱗翅目害蟲有效；其中研究的最多的是Cryl和Cry9類蛋白，它們編碼的殺蟲晶體蛋白分子量為130-140kD,許多基因目前已被廣泛應用于植物的鱗翅目害蟲的防治(Kozie，M.G.，Beland，G.L.，Bowman,C.，Wa/.Fieldperformanceofelitetransgenicmaizeplantsexpressinganinsecticidalproteinderivedfrom5a"7/wsA駅'wg/e服.s.Bio/Technology，1993，11:194-200;Perlak,F丄,Deaton,R.W"Armstrong,T.A.，a/.Insectresistantcottonplants,bio/technology,1990;8:939-943;VanFrankenhuyzen,K.，Gringorten,L.,andGauhier,D.1997.Cry9Caltoxin,aS"c/〃船//2肌'wg/e"^insecticidalcrystalproteinwithhighactivityagainstthesprucebudworm(Choristoneurafiiniferana).Appl.Environ,Microbviol.63:4132-4134;王飛，2001，蘇云金芽孢桿菌特異菌株生物學特性及CO;9新基因的研究，碩士論文，南開大學)。蘇云金芽胞桿菌以色列亞種(及決wn力g^ra^subsp.&rae/m^，簡稱Bti)產(chǎn)生的毒素蛋白對蚊蟲具有很好殺蟲活性，被廣泛運用于蚊蟲的防治(GoldbergLJ,andMargalitJ,1977.Abacterialsporedemonstratingrapidlarvicidalactivityagains"w0//2e/asse,ge"/"，t/rawo/ae"/"w"g"/cw/ato,Cw/ex"m'Wta打z^,aegy/"，andCWexpz)/era..MosqitoNews,.37:355-358;)。同時,Cyt蛋白具有溶細胞性，對某些Cry蛋白具有增效作用及延緩昆蟲的抗性(Wu，D.，Johnson,J.J.,andFederici，B.A.1994.SynergismofmosquitocidaltoxicitybetweenCytAandCryIVDProteinsusinginclusionsproducedfromclonedgenesof5"c7'〃mt決"n."g/e"w.義Mol.Microbiol.13:965-972;Wirth,M.C.，Georghiou,G.P"andFedereci，B.A.1997.CytAenablesCryIVendotoxinsof5a"7/"s^z鵬'"gz'em7'51toovercomehighlevelsofCryIVresistanceinthemosquito,Cw/ex，'"《w咖s"'aft/s.Proc.Natl.Acad.Sci.94:10536-10540)自本世紀初發(fā)現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌至今己有100多年的歷史，在農(nóng)作物和園藝植物害蟲、森林害蟲以及衛(wèi)生害蟲的防治方面得到廣泛的應用，也起到良好的效果。但是，由于大規(guī)模和反復使用蘇云金芽胞桿菌，許多昆蟲種群己相繼在不同程度上對殺蟲晶體蛋白產(chǎn)生了抗性。以Bt殺蟲晶體蛋白為基礎(chǔ)的殺蟲劑的使用已有50多年的歷史，最初一直沒有檢測到昆蟲對Bt的抗性，但是，上世紀80年中期開始，抗性問題不斷在實驗室及田間試驗中得到證實(McGaughey,W.H.1985.Insectresistancetothebiologicalinsecticide^8fl"7/wAwr/wgz'ew^.Science.229:193-195)，原因主要是持續(xù)使用單品種及亞致劑量的Bt以及Bt轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的應用造成昆蟲種群長期受到殺蟲劑的選擇壓力。1985年，McGaughey報道倉庫谷物害蟲印度谷螟(Plodiainterpunctella)在Dipel(Btsubsp.kurstaikHD-1的商品制劑)的選擇壓力下，繁殖15代后，抗性增加97倍；在高劑量選擇壓力下，抗性可增加250倍。19卯年，在夏威夷首次證實大田中的小菜蛾對Bt殺蟲劑產(chǎn)生了明顯的抗性(Tabashnik,B.E.,Finson,N.,Groeters,F.R.,efa/.1994.Reversalofresistanceto5a"7/wsAwrz'"g/e"w;s/w/Vwfe〃aa;_y/oWe〃a.Proc,Natl.Acad.Sci.USA.91:4120-4124),上世紀90年代以來，在我國應用Bt殺蟲劑時間較長的深圳、廣州、上海等地，發(fā)現(xiàn)Bt殺蟲劑對小菜蛾防治效果明顯下降，意味著抗性已經(jīng)形成(馮夏.1996.廣東小菜蛾對蘇云金桿菌的抗性研究.昆蟲學報,39(3):238-244;Hofte,H.,VanRie,J.,Jansens,S.,VanHoutven,A.，Vanderbruggen,H.,andVaeck,M.，1988.Monoclonalantibodyanalysisandinsecticidalspectrumofthreetypesoflepidopteran-specificinsecticidalcrystalproteinsof5腦'〃ws說wW"gz'e,'s.Appl.Environ.Microbiol.54:2010-2017)。目前發(fā)現(xiàn)在實驗室及田間至少有十幾種昆蟲對Bt及其殺蟲晶體蛋白產(chǎn)生了抗性，用選擇壓力數(shù)學模型預測到，在Bt轉(zhuǎn)基因抗蟲植物選擇壓力的條件下，昆蟲將會產(chǎn)生抗性(Schnepf，E.，Crickmore,N.,VanPie,J.,etal.1998.Sczc/腸^2鵬'—e,'sanditspesticidalCrystalproteins.Microbiol.Mol.Biol.Rev.65(3):775-806)。另外，有研究證明Bti在大田的使用中尚未發(fā)現(xiàn)抗性問題(RegisL,wa/.,2000.TheuseofbacteriallarvicidesinmosquitoandblackflycontrolprogramsinBrazil.Mem./組/加oOsw"WoOm,95:207-210.)，但是故蟲對其抗性問題不斷在實驗室中得到證實，這種情況也可能會在大田中出現(xiàn)(GeorghiouGP,andWirthMC,1997.InfluenceofexposuretosingleversusmultipletoxinsofBac飾s^2鵬-"g7'e肌isubsp./5rae/era/sondevelopmentofresistanceinthemosquitoCw/ex《w—z/eybsc/ato(Diptera:Culicidae).^pip/zW朋c/EhWra/wjewto/M〖craZ)/o/ogy,63:1095-1101.)。為避免抗性昆蟲所造成的損失，尋找新的高毒力菌株及基因資源是解決這個問題的有效途徑，這對我國的生物防治也有著十分重要的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和衛(wèi)生安全領(lǐng)域的一些主要害蟲，特別是蔬菜、棉花、玉米、水稻、以及森林等鱗翅目害蟲和傳播登革熱和黃熱病等蚊媒病的雙翅目害蟲具有較高毒力的蘇云金芽孢桿菌新菌株BtMC28。本發(fā)明菌株是四川省沐川原始森林地區(qū)土壤中分離得到的蘇云金芽孢桿菌(5ac7/wAw/wg/^w/s)新菌株，該菌株已于2008年10月21日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市朝陽區(qū)大屯路甲3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)保藏，分類命名為蘇云金芽孢桿菌(5ac///^AwW"g/e"w:s)，保藏號為CGMCCNo.2719。BtMC28具體通過如下方法篩選獲得釆用醋酸鈉-抗生素分離法，稱取10g土樣(四川省沐川原始森林地區(qū))放入裝有50ml醋酸鈉培養(yǎng)基的搖瓶中，分別加入青霉素鈉鹽和硫酸慶大霉素各400嗎/ml,搖床培養(yǎng)(200r/min，30°C)4h。培養(yǎng)結(jié)東后取土壤懸液10ml,加入無菌的離心管3000r/min離心15min，取上層混濁液2ml于65t水洛15min,取熱處理后的混濁液O.lml涂平板，將平板置30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；48h后從平板上挑取類似Bt的菌株涂片，發(fā)現(xiàn)一株含有球狀晶體形態(tài)的Bt菌株，將其命名為BtMC28。經(jīng)鑒定，關(guān)于該菌株的信息包括能形成芽胞，同時能形成球形伴胞晶體(圖1),SDS-PAGE電泳表明，菌株BtMC28主要產(chǎn)生約130，70，28kDa左右大小的3種蛋白(圖2);其晶體蛋白在16小對開始表達，而生長曲線表明其16小時已進入停滯期(圖3),表明該晶體蛋白啟動子可能為依賴芽孢形成的；生物學測定表明，該菌株對甜菜夜蛾殺蟲活性最高，LG。為5.8|ag/mL;對伊蚊的ZC5。為6.02嗎/mL;對棉鈴蟲殺蟲活性最低，ZA。為13.6嗎/mL(表1)。表lBtMC28的殺蟲活性供試昆蟲LC50/(嗎/mL)95%confidence/(|ig/mL)甜菜夜蛾Zap/^gwacx/gr/a5.084.3-5.6棉鈴蟲/fe//cov"aar附/gera13.611.5-17.2伊紋v4ecfe6.024.2-7.8本發(fā)明進一步對菌株BtMC28中的C7j和基因進行了鑒定。結(jié)果表明，BtMC28中存在co4類、co^類、cr_y53類、類基因。采用基因組DNA純化試劑盒(購自賽百盛公司)提取菌株BtMC28的總DNA;分別設計全長基因引物并以菌株BtMC28總DNA為模板，分別擴增c^30、cr_y53、cry4、cj^的全長基因，結(jié)果表明它們的全長分別約為2kb、2.2kb、3.5kb以及800bp(圖4)。分別將純化后的PCR產(chǎn)物與pGEM-T載體連接，轉(zhuǎn)化，分別挑取有目的片段的陽性克隆，進行測序。將測序結(jié)果在GenBank上進行檢索，結(jié)果表明所獲的的基因均為新基因。co;M、ct少53、crW、c^2基因的核苷酸序列分別如序列表SEQIDNO所示?，F(xiàn)將它們分別命名為crj30i^、coa53jW、c^^CW、qyCAd。通過對BtMC28的毒力測試表明，BtMC28對鱗翅目害蟲、雙翅目害蟲等等，均具有極高的毒力。因而，可以將本發(fā)明蘇云金芽孢桿菌BtMC28制成殺蟲劑，用于農(nóng)作物害蟲的防治。從而使蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑的產(chǎn)品多樣化和系列化，擴大了蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑的使用范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以根據(jù)本發(fā)明公開的基因，將其轉(zhuǎn)化棉花、玉米、水稻、蔬菜等農(nóng)作物，使其具備相應的抗蟲活性。從而降低農(nóng)藥的使用量，減少環(huán)境污染，具有重要的經(jīng)濟價值和應用前景。圖1為BtMC28菌株的球形伴孢晶體、芽孢及營養(yǎng)細胞(5000X);圖2為BtMC28菌株SDS-PAGE電泳分析，其中M為蛋白質(zhì)Marker;圖3為BtMC28菌株的生長曲線；圖4為BtMC28菌株中及基因型的PCR鑒定，其中M為DNAMarker100bp，l為cry30類基因擴增產(chǎn)物，2為trj4類基因擴增產(chǎn)物，3為c/j53類基因擴增產(chǎn)物，4為c^2類基因擴增產(chǎn)物；圖5菌株BtMC28中ct73(9，crj53，c/j^和全長基因的PCR擴增產(chǎn)物，其中M為DNA分子量標準，1為ciy4的PCR產(chǎn)物，2為ciy53的PCR產(chǎn)物，3為cyt2的PCR產(chǎn)物，4為ctjM的PCR產(chǎn)物。具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1含有多種c/j基因的蘇云金芽孢桿菌的篩選與鑒定土壤采自四川省成都溫江地區(qū)。采用醋酸鈉-抗生素分離法，稱取10g土樣放入裝有50ml醋酸鈉培養(yǎng)基的搖瓶中，分別加入青霉素鈉鹽和硫酸慶大霉素各400嗎/ml，搖床培養(yǎng)(200r/min，30°C)4h。培養(yǎng)結(jié)束后取土壤懸液10ml,加入無菌的離心管3000r/min離心15min,取上層混濁液2ml于65。C水洛15min,取熱處理后的混濁液O.lml涂平板，將平板置30。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后從平板上挑取類似Bt的菌株涂片。發(fā)現(xiàn)一株含有球狀晶體形態(tài)的Bt菌株(見附圖1)。經(jīng)用光學顯微鏡和電子顯微鏡觀察，該菌株細胞呈桿狀，兩端鈍圓，菌株大小為0.9-1.1(imX2.7-4.0|im，通常單個、或兩個、或短鏈細胞存在，一個營養(yǎng)細胞為一個孢子囊，每個孢子囊內(nèi)含有一個芽孢，次端生，另一端有一個伴孢晶體，孢子囊不膨大。實施例2菌株BtMC28中c/j和基因的鑒定根據(jù)C/T4類基因保守序列設計1對特異引物5-GTGTCAAGAGAACCAACAGTATG-35-ACTAAGTCTCCTCCTGTATGACCAG-3根據(jù)c77^類基因保守序列設計1對特異引物5-AAGATTGGCTCAATATGTGTC-35-GATTATCAGGATCTACACTAG-3根據(jù)crj;53類基因設計一對通用引物5-AATAAAAATGAATATGAAATATT-35-TTTCACAGCCGGAATTTGTGTAAT-3根據(jù)wG類基因設計一對通用引物5-ATTACAAATTGCAAATGGTATTCC-35-TTTCAACATCCACAGTAATTTCAAATGC-3用下列PCR反應體系鑒定10xbuffer2.5^1MgCl2(25mM)1.5^1Taq酶0.2^1dNTPs(2.5mM)2(J引物2|al模板最終反應體積25^1熱循環(huán)反應94'C預變性5min;94。C變性lmin，退火溫度根據(jù)引物而定，72。C延伸2min，30個循環(huán)；72'C延伸5min;4'C停止反應。擴增反應產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠上電泳，置凝膠成像系統(tǒng)中觀察PCR擴增結(jié)果。結(jié)果如圖4所示，利用上述引物分別對模板進行擴增，分別得到了目標擴增產(chǎn)物，表明BtMC28中cry和c少？基因。實施例3c/^J^FVi，crj;53^A，c/j^Cc和基因的克隆采用基因組DNA純化試劑盒(購自賽百盛公司)提取菌株BtMC28的總DNA;設計其全長基因引物P1、P2、P3、P4、P5,P6，P7和P8(引物序列如下)；以菌株BtMC28總DNA為模板分別用所述引物進行PCR擴增，反應體系和反應程序同實施例2;用Pl和P2擴增co^0類全長基因，得到長約2kb的片段；用P3和P4擴增cry53類全長基因，得到長約2.2kb的片斷；用引物P5和P6擴增cr^類全長基因，得到長約3.5kb的片段；用引物P7和P8擴增cyt2類全長基因，得到長約800bp的片段(見附圖5)。將純化后的PCR產(chǎn)物與pGEM-T載體連接，轉(zhuǎn)化，分別挑取含有有目的片段的陽性克隆，測序，分別得到序列SEQIDNo.17、SEQIDNo.19、SEQIDNo.21、SEQIDNo.23和SEQIDNo.25。Pl:5'ATGAAGCCGTATCAAAGTG3'P2:5'GTTCACTGGACAAGCAAATGC3，P3:5，ATGAATTCATATCAAAATAAAAATG3，P4:5，TTATTCGACAAATAAACTATTTACA3'P5:5，ATGAATTCATATCAAAATAAAAATG3'P6:5，TTACCCTTTCATACAAAGAAACTCG3'P7:5，ATGTATACTAAAAATTTTA3，P8:5，TCAATTCGATAAATTTAAA3'1、co^OFb基因的序列分析序列SEQIDNo.19的全長為2064bp，分析表明，GC含量為33.87%，編碼687個氨基酸組成的蛋白。經(jīng)測定，其氨基酸序列如SEQIDNo.24所示7^Rb^網(wǎng)站采用bacterialsigma7.0promoter程序?qū)θ蛄羞M行預測表明，在基因編碼區(qū)上游含有RNA聚合酶活化位點的序列，將其命名為co^0F"/。本發(fā)明進一步分析了Ciy30Fal蛋白的氨基酸組成(見表2)。表2Cry30Fal蛋白的氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2、co;5W6基因的序列分析序列SEQIDNo.25的全長為2111bp,分析表明，GC含量為36.9%，編碼703個氨基酸組成的蛋白。經(jīng)測定，其氨基酸序列如SEQIDNo.26所示。在softberry網(wǎng)站采用bacterialsigma7.0promoter程序?qū)θ蛄羞M行預測表明，在基因編碼區(qū)上游含有RNA聚合酶活化位點的序列，將其命名為coJWW。本發(fā)明進一步分析了Cry53Abl蛋白的氨基酸組成(見表3)。表3Cry53Abl蛋白的氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3、co^Cc基因的序列分析序列SEQIDNo.27的全長為3474bp，分析表明，GC含量為35.72%，編碼1157個氨基酸組成的蛋白。經(jīng)測定，其氨基酸序列如SEQIDNo.28所示。在softberry網(wǎng)站采用bacterialsigma7.0promoter程序?qū)θ蛄羞M行預測表明，在基因編碼區(qū)上游含有RNA聚合酶活化位點的序列，將其命名為co;4C"。本發(fā)明進一步分析了Cry4Ccl蛋白的氨基酸組成(見表4)。表4Cry4Ccl蛋白的氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>序列SEQIDNo.29的全長為780bp,分析表明，GC含量為27.95%，編碼259個氨基酸組成的蛋白。經(jīng)測定，其氨基酸序列如SEQIDNo.30所示。在softberry網(wǎng)站采用bacterialsigma7.0promoter程序?qū)θ蛄羞M行預測表明，在基因編碼區(qū)上游含有RNA聚合酶活化位點的序列該基因序列與已報道的c^Z4"7序列同源性皆高達99%,彼此之間僅存在著少數(shù)幾個核苷酸以及編碼氨基酸的差別，將其命名為qv^Ad。本發(fā)明進一步分析了Cyt2Aa3蛋白的氨基酸組成(見表6)。表6Cyt2Aa3蛋白的氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例4菌株BtMC28的活性檢測對鱗翅目害蟲將菌株BtMC28在液體LB培養(yǎng)基中30°C，200r/min振蕩培養(yǎng)30h;離心收集菌體(12,000r/min,15min，4°C),超凈工作臺風干，計量菌體重量；然后把菌株懸浮于蒸餾水中，配制成從l嗎/ml到100ng/ml6個不同濃度；選老嫩適中的巻心菜葉片洗凈，晾干；紫外燈下照射15min，剪成2x2cn^大小，分放在不同濃度菌液中，浸泡5min;取出新去多余的液體，放在消毒的培養(yǎng)皿中晾干，以LB浸泡葉片作為對照，每個培養(yǎng)皿放4片葉片；選放健康的2-3齡棉鈴蟲，甜菜夜蛾30頭；每處理重復3次，置室內(nèi)，于3d后調(diào)查幼蟲死亡情況，用SPSS10.0軟件計算LC5Q;結(jié)果如表l，表明菌株對這兩類害蟲具有極高的毒殺活性。對雙翅目害蟲將菌株BtMC28在液體LB培養(yǎng)基中30°C，200r/min振蕩培養(yǎng)30h;離心收集菌體(12,000r/min,15min,4°C)，超凈工作臺風干，計量菌體重量；然后把菌株懸浮于蒸餾水中，配制成從l嗎/ml到100ng/ml6個不同濃度；選放健康的4齡蟻蚊30頭于1L含不同菌體濃度懸浮液中；每處理重復3次，置28。C培養(yǎng)箱內(nèi)，于2d后調(diào)查幼蟲死亡情況，用SPSS10.0軟件計算LC5();結(jié)果如表l，表明菌株對妖蚊具極高的毒殺活性。序列表說明SEQIDNo.l&2、SEQIDNo.3&4、SEQIDNo.5&6、SEQIDNo.7&8、分別是用于擴增類、a73O類、c77W類qy〃類基因保守序列的特異性引物；SEQIDNo.9&10、SEQIDNo.ll&12、SEQIDNo.l3&14、SEQIDNo.l5&16分別是引物對pl&p2、p3&p4、p5&p6、p7&p8，分別用于擴增co^OPa7,c^y5j爿W,co^/C"和t;y/Z4a3基因的特異性引物；SEQIDNo.17&18、SEQIDNo.l9&20、SEQIDNo.21&22、SEQIDNo.23&24分別是co/30P"7,co^_L4W,c^^Cc7和qy/Z4o基因的核苷酸序列及其編碼的氨基酸序列。序列表<110〉四川農(nóng)業(yè)大學中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所<120>蘇云金芽胞桿菌菌株新菌株及其應用<130>KHP09112130.7<160>24<170>Patentlnversion3.5<210〉1<211〉23<212>DNA<213〉人工序列<400〉1gtgtcaagagaaccaacagtatg23<210>2<211〉25<212>DNA<213>人工序列<400〉2actaagtctcctcctgtatgaccag25<210〉3<211〉21<212>DNA<213〉人工序列<柳〉3aagaUggctcaatatgtgtc21<210〉4<211〉21<212〉DNA<213〉人工序列<400〉4gattatcaggatctacactag21<210>5<211〉23<212〉DNA<213〉人工序列<400>5aataaaaatgaatatgaaatatt23<210〉6<211〉24<212〉DNA<213〉人工序列<400〉6tttcacagccggaatttgtgtaat24<210〉7說<211〉24<212〉腿<213>人工序列〈400〉7aLLacaaattgcaaatggtattcc24<210>8<211>28<212>腿〈213〉人工序列<400>8tttcaacatccacagtaatttcaaatgc28<210>9<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>93tgaagccgtstcaaagtg19<210〉10<211〉21<212>麗<213〉人工序列<400〉10gttcactggacaagcaaatgc21<210>11<211>25<212〉謹<2丄3〉人工序列<400〉11atgaattcatatcaaaataaaaatg25<210>12<211〉25<212〉DNA<213〉人工序列<400〉12ttattcgacaaat肪3Ctattt8ca25<210〉13<211〉25<212〉薩<213〉人工序列<400〉13algaattcaLtitcaaaataaaaatg25<210〉14<211〉25<212〉DNA<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>c犯gctggtaccaatgtaaaac3ggtagctctactggagcttccagacgt1740gcatgcgttatgctgc犯ataatgcatttacsgtgagtctatcatatact1800tt織gggtggtaatacaataggtacaacatttattaccgaacgtacattttcaagacct1860aataats_taataccaacggatttaaaatacg3gg兆ttt3stataatcaa1920attattacagtgacttcacctcaaaataca3tagtaactatagctattcg1980cc:gatccc肌tttatccagtggatcaagat2040gcatttgcttgtccagtgeieict犯2064〈210〉18<211〉687<212〉PRT<213〉蘇云金芽胞桿菌菌株(Bacillus<400>18MetLysProTyrGinSerGluAsnGlu15ProLysTyrSerAsnAsnAsnAsnMet50SerLys65AlaMetSerThrLysGluArgAsp130AlsLeu145AspLysGlyValAsnProAsnlie210TrpAla225GinlieTyrCysProAsnLeuGly290TyrPro35CysLeuProliePhe115AlaLysAspValAla195AspLysPheAlalie275AlaSer20GinGinValGlylie100ThrlieAspArgAsn180AsnLeuAlaTyrGlu260GinLeuValThrAlaPro85ProLysGluHisThr165GlyGinlielieAsp245ThrTrpAsplieProlieThr70GlylieGinlieMet150GinLysProLeuAsn230SerTyrAspLeuValCeuThr55AlaSerLeuGlylie135AsnThrlieAlaTyr215AspteuArglieVal295AsnGin40ProlieAlaTrpLeu120GlyAspAsnliePhe200GinSerLysAsnTyr280AlaVal25AsnLeuGlyValPro105GinAsnPheAlaAsp185LeuArgSerAlaSer265AsnLeuthuringiensis)BtMC28GlulieLeuAspArgTyrTyrTyr10TyrThrCyslieGly90AsnLeuAspGluThr170LeuAsnGlylieLys250LeuArgPheSerSerThrLeu75LeuAspPheValThr155TyrLysLeuAlaSer235lieThrTyrProPro60GlyPheAsnArgGin140LysLeuAsnTyrVal220ProLyslieArgAsn300Lys45lieAlaLeuThrPro125SerPhelieGinAla205TyrPheGluLeuArg285TyrPro30AspThrLeu15LeuAlaAsplieLysPro110GluGlyGluThrPhe190GinGlyAsnTyrLys270GluAspTrpLeulieAspPheLys80ThrPhe95lieTrpLeuGlyPheAsnlieTrp160AlsPhe175LeulieThrAlaAspAspSerSer240ThrAsn255AsnGinAlaThrI]eCys16GluLeuSerThr385lieSerAspGinMet465GinGlyValAlaPro545GinAlaPheThrPro625lieArgGluTyrSerAsnAsnSer370lieProGinMetThr450AsnThrGlyAspVal530GlyAlaSerThrThr610ThrlieGinPheProPheGinLeu355LeuLeulieTyrThr435TyrGlyAsnValLeu515LysHisGlyArgVal595PheAspThrLeuTyr675lieTyrLeu340TyrSerProlieArg420PheGinProHisTyr500AspAlaThrLysArg580SerlieLeuValAsn660ProSerThrLys310LeuGinAla325ThrHisProThrlieGlyLeuAsnPro390GlyLeu405HisProTyrLysAlaGlyGinAsn470lieLeu485AspPheAsnLeuAsnPheGlyGly550MetGin565TyrGlyLeuSerThrGluLysTyr630ThrSer645ProlieValAspArgGin375ProAsnAsnSerArg455AlaSerGlyTieLeu535AsplielieTyrArg615GluProProGinThrLeuProGlu360AlaAlaAsnAspAsp440AsnSerAspTyrVal520SerLeuGinArgThr600ThrGluGinAsnAsp680GluGinSer345AsnLysGinLeuCys425TyrSerSer丄leSer505ProSerValCysMet585LeuPhePheAsnAsp665AlaLeuThr315HisSer330LeuPhePheAsnTyrArgGlylie395Phelie410ValProAsnGlyAsnAsnSerAsn475LysMet490PheAlaAsnArgProAlaAlaLeu555LysThr570ArgTyrGinGlySerArgLysTyr635Thrlie650GinLeuPheAlaArgAsnThrProTyr380ThrTyrlieAsnVal460AsnAsnTrplieArg540LeuGlyAlaGlyPro620LysVallieCysLyslieTrpAla365ThrAsnI>ysAlaAla445lielieTyrThrThr525ValAsnSerAlaAsn605AsnGluThrliePro685ValGluLeu350LeuGinGlyLeuGly430SerAspSerAlaHis510GinlieGlySerAsn590ThrAsnTyrlieAsp670ValTyrThr335AsnGinAsnThrSer415lieAlaThrlieArg495ThrlieAlaGlyThr575AsnlielieAsnAla655ArgAsnMet320LeuGluValSerPro400MetSerThrPheAsn480SerSerProGlyThr560GlyAlaGlylieGin640lielie<210>19<211>2111<212>腿17<213〉蘇云金芽胞桿菌菌株(Bacillusthuringiensis)BtMC28〈400〉19atgaattcatatcaaaataaaaatgaatatgaaatattggatgcttcacaaaacaactct60aatatgtctaatcgttatccaaggtatccattagcaaatgatccaca.a.gcttctatgcag120aatacgaattataaagattggttggctacgtgcaacggaacgcctgccccgctttataat180tcttcacaactacttaaaatttcaggaaatgtagtttctagggctctcggaatgcttccc240attcctgggattgctcctcttttaagttttctctctactttgctttggcc朋gtggatca300tccggaaatactatttgggaatcgttgatgaaagaagctgcggatttgatagaccaaaag360ttagaggagaatatattacgccaagcaacggccaatttagccggattacaaggactattg420ggatcatataacagcgcttttgcttcatggg犯gcaggcggcaatgcaactcctgatctg480gtaaa鄉(xiāng)ttatatggagagccttcatcgtacgtttgtgcaggatattataggcagcttc540acgataccaggttatga犯aaatattattacctacctatgcgattaccgccaattttcat600ttgatgttattacgtgacattgaaatttatggaggtaaaaaaaccccagaaggtaaagat660ggcctgaattttgatccaaaagacctaaatttttataattgtgaactaaagaaatataag720gaa"gLaLacgaatcattgcttaaatacttac朋taaaggtttggcctcagaaaaagaa780aaaggttgggtgcctttccatcgatatcgtagag犯atgactttggctgtattagalata840attgcattattcccactctatgatgcaagactctatcctgctaagaataataa3g肌atg900ccagttaaatccgaattgactcgag犯atttattcggeitgtcattaatagcgataggttc960ggagtggtacccccttateiattatgctcaaaacgaagaacgttatacacgaccacctcat1020ctcttcacttggttacgagggcttgactttgtaaccaatgttctgactagcggaacttgg1080gtttatagatggagcgttttaactgggttgtca犯agaaatattcttatacaaaagggaa1140tggtactataactggtccttttcggggttatcctgtagagtctggtggaagaacttccaa1200cattactattgcagaaggttcctatatttagaacttgttgccaag犯gctttcaatatat1260ttccccttggtattttacgacaaatatcgcactga/ttactttcttactaacaaaaataat1320agttcaacagaaaaagtttatgg丄Latgtagccggcaacgctaatttacctactgttcaa1380acagattttgattttcttac犯ataaag犯gtadctggccctcc朋cat,ac犯taactat1440aatcatattttgtcatacttgttgctaggttatgattggaatcagacgggtggaataggc1500acacacggatattcatttgcatttacacatagtagcgttgatccttataacaccattgcc1560ccagataa肌ttacgc肌attcctgcagtgaaggcttttgaaatatcagatgcaggacca1620agtcaagtcatagctggacctggtcatacetggaggagatgtagtaaggttatacctttca1680ggccgtttaaaaatacgtttaactcctgcatccacg犯taaaaattaccttgttagagtt1740cgctatgcaagtccggtatctggtacgttacgagtagaaagatggtcgcctagttctgtt1800acaaatcgtgattttactcgtttggctacgggtggttttaattcatttggctatgtggac1860accttagttactacatgtaatcaatcaggtgttgaaataattatacaaaatctaggtgct1920tctgacgttatcattgacaaagttgaatttatcccttatgacatcccaattgataaatgt1980acgaaatgtgaattcgaagg朋acgtatgtacatgtagatgtgaaggagtacaatcctta2040gaaa肌gaaaaag3geLt:tgLaaatagtttstttgtca朋gaaaacaaagtatgtsctgaa2100gtaggaggtaa2111<210>20<211>703<212〉PRT〈213〉蘇云金芽胞桿菌菌株(Bacillusthuringiensis)BtMC28〈400〉20MetAsnSerTyrGinAsnLysAsnGluTyrGlulieLeuAspAlaSer151015GinAsnAsnSerAsnMetSerAsnArgTyrProArgTyrProLeuAla202530AsnAspProGinAlaSerMetGinAsnThrAsnTyrT.ysAspTrpLeu354045AlaThrCysAsnGlyThrProAlaProLeuTyrAsnSerSerGinLeu<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage20</image>ggtattgcgaatcgatatagctttaccaMtctaatggagagatatgggggcctatttct1140gggaatcctactggtgtatcgtctgatttaaccatagataataatttttctatttacaaa1200ctttcaatattacgtggttatcaactctcaccagatttttcatttcataatccagttcac1260caaattgatttttctacaacgaataaccaacagggacgagttcagtcatataaatcaggc1320ggccctactcctgttaatccggagacgacagctattcatttaccgatagattcaaaatgt1380acacaaaactgtaatcctscatttaataattacagtcatatattatcttacgcaaa犯ct1440ttcacatcaaatttaaccattggtaccacatcaaatatcacttcgtttggttggacgcat1500aatagtgtggatcgtgaaaatacaattgattt犯ataatattacacagattccagctgta1560aaggccagtcaagtttatccagaaaactctgtaattaaaggtcctggtcat已caggtgga1620aatctggttagaattgatagtagtggttatatgtcaattgtttgtaaattccceictacaa1680gta犯gggatgtcgtgttcgtattagatatgcagca肌ts3tagagctgaactttatat31740tcgtcagctggaaatagtccaagtaaaaatgttgatctagaccctacattttxaggtact1800aactatgaaagcttaaattatacaaattttaaagataaaga犯ctgagtttataataaca1860gaaggacagctcgttaaacaatcaataatattctcaaccaatggaaatgttctcctggat1920aagattgaatttattccactgggaacgacaacctatgagtatg犯gagaagcagaatcta1980gaaaaagcgcagaaagcgttgaacgctttgtttacggatggcacgaatggctatctacaa2040atggatgccactgattatgatatcaatcaaactgcaaacttaata.ga.atgtgtatcagat2100gaattgtatgcaaaagaa犯gatagttttattagatgaagLcaaatatgcgaagcggctt2160agcatatcacgtaacctacttttgaacgatgatttagaattttcagatggatttggagaa2220肌cggatggacgacaagtgataatatttcaatccaggcggataatcccctttttaagggg2280aattatttaaaaatgtttggggcaagagatattgatggaaccctatttcc肌cttatctc2340tatcaaaaaatagatgagtccaggtta犯accatatocacgttatcgagtaageigggttt2400gtgggaagtagtaaaaatctaaaattagtggtaacacgctatgagaaagaaattgatgcc2460attatgaatgttccaaatgatttggcacatatgcagcttaacccttcatgtggagattat2520cgctgtgaatcatcgtcccagtttttggtgaaccaagtgcatcctacaccaacagctgga2580tatgctcctgatatgtatgcatgcccgtcaaattcagatgaaaaacatgttatgtgccac2640gatcgLcatccatttgattttcatattgacaccggagaattaaatccaaacacaaatctg2700ggtattgatgtcttgtttaaaatttct幼tccaaatggatacgctacattagggaatcta2760gaagtcattg33ga^ggacc3Ct犯C3g3tg犯gC3ttggtac;atgtaa_a_acfia朋gg朋2820aagaaatggcgtcagcacatggagaaaaaacgaatggaaacacaacaagcctatgatcca2880gca犯acaggctgtagatgcsttatttacaaatg肪caagagttacactatcatattact2940ttagatcatattcaaaatgctggtcggctggtacagttgattccatatgcacaccatgct3000tggttactggatgttccaggtstgaactatgatgtatatacag肌tta^acgtgcgtata3060acgcaagctcgttatttatataaggaacgaaatgtcataacaaatggtgacttteicacaa3120ggattaacaggatggcaggaaacagga犯ggcaacggtacaacagatggatggagcttct3180gtattagttctgtcaaactggagtgctggggtatctcaaaatctgcatgtccaagatcag3240catggctatgtgttacgtgtgactgcaaaaaaagaaggtcctggaaaagggtatgtaacg3300atgatggattgtaatggaaagcaggaaacacttaggtttacttcttgtgaagaaggatat3360atgacaaaaacagtagaggtattcccagaaagtgatcatgtacggattgaaatgggagaa3420accgaaggtacgttttatatagatagcatcgagtttctug'tatgaaagggtaa3474<210>22<211〉1157<212>PRT<213>蘇云金芽胞桿菌菌株(Bacillusthuringicnsis)BtMC28<400〉22MetAsnSerTyrGinAsnLysAsnGluTyrGlulieLeuAspAlaSer1510L5GinAsnAsnSerAsnMetSerAsnArgTyrGinArgTyrProLeuAla202530HisAsnProGinThrSerlieGinThrThrAsnTyrLysAspTrpLeu21LysMetCysGinAsnProHisGinAsnProLeuAspMetGluGlyTyr505560AspSerAsnSerValValValValSerThrGlyLeulieValValGly65707580ThrLeulieSerlieLeuSerAlaGlyLeuGlySerlieProlielie859095TyrGlyThrLeuLeuProValLeuTrpAsnAspProAsnAsnProGin100105110LysThrTrpHisGluPheMetSerHisGlyGluThrLeuLeuAsnGin115120125ThrlieSerThrValGluArgAsnArgAlaAlaAlaTyrLeuGluGly130135140TyrThrThrAlaValLysAsnVaiLysLysHisLeuAsnVaJTrpLeu145150155160ThrAlaProAsnGinAlaAsnAlaArgThrValAlaAspLeuTyrLys165170175AspThrAspPheLeuPhePheThrThrLeuProHisLeuLysLeuArg180185190AspPheGluThrLeuLeuLeuSerSerTyrThrGinAlaAlaAsnMet195200205HisLeulieLeuL_euLysGinAlaSerLysTyrAlaAspGinTrpAsn210215220AlaGinLeuProValSerValArgLysThrAlaAsnAspTyrTyrThr225230235240AspLeuValLysLeulieGlyGluTyrThrAspTyrCyslieAlaThr245250255TyrArgSerGlyLeuAsnThrlieLysSerArgAlaThrSerTrpAsn260265270lieTyrAsnMetTyrArgArgGluMetThrlieLeuValLeuAspLeu275280285ValAlaLeuPheProAlaTyrAsplieLysLysTyrProSerGlyThr290295300LysValGluLeuThrArgGlulieTyrThrA印AlaLeuGlyAlaVal305310315320AlalieProGinAsnlieA印AlaThrGluGinLeuAlaThrArgAla325330335ProAsnLeuPheSerTrpLeuLysGlyPheLysPhelieThrThrGin340345350SerThrAsnArgTyrTyrLeuSerGlylieAlaAsnArgTyrSerPhe355360365ThrAsnSerAsnGlyGlulieTrpGlyProlieSerGlyAsnProThr370375380GlyValSerSerAspLeuThrlieAspAsriAsnPheSerlieTyrLys385390395400LeuSerlieLeuArgGlyTyrGinLeuSerProAspPheSerPheHis405410415AsnProValHisGinlieAspPheSerThrThrAsnAsnGinGinGly420425430ArgValGinSerTyrLysSerGlyGlyProThrProValAsnProGlu435440445ThrThrAlalieHisLeuProlieAspSerLysCysThrGinAsnCys450455460Asn465PheGlyAsnAsnlie545ValGluLeuAsnVal625LysLysAspAsnLys705SerGlyAlaArgAsp785ValGluLeuLeuMet865ProThrTrplieSer530AspLysLeuAspPhe610LyslieGinGlyGin690GluliePheAspAsp770GluGlylieAsnVal850TyrThrSerThrThr515ValSerGlyTyrPro595CysGinGluAsnThr675ThrLysSerGlyAsn755lieSerSerAspPro835AsnAlaPheAsnHis500GinlieScrCyslie580ThrAspSerPheLeu660AsnAlalieArgGlu740ProAspArgSerAla820SerGinCysAsnLeu485AsnlieLysGlyArg565SerPheLyslielie645GluGlyAsnValAsn725AsnLeuGlyLeuLys805lieCysValProAsn470ThrSerProGlyTyr550ValSerSerGlulie630ProLysTyrLeuCeu710LeuGlyPheThrLys790AsnMetGlyHisSer870TyrlieValAlaPro535MetArgAlaGlyThr615PheLeuAlaI觀lie695LeuLeuTrpLysLeu775ProLeuAsnAspPro855AsnSerGlyAspVal520GlySerlieGlyThr600GluSerGlyGinGin680GluAspLeuThrGly760PheTyrLysVal柳ThrSerHisThrArg505CysHislieArgAsn585AsnPheThrThrLys665MetCysGluAsnThr745AsnProThrLeuPro825AfgProAsplieThr490GluAlaThrValTyr570SerTyrlieAsnThr650AlaAspValValAsp730SerTyrThrArgVal810AsnCysThrGluLeu475SerAsnSerGlyCys555AlaProGlulieGly635ThrLeuAlaSerLys715AspAspLeuTyrTyr795ValAspGluAlaLys875SerTyrAsnlieThrlieGinVal525GlyAsn540l>ysPheAlaAsnSerLysSerI.eu605Thr620AsnTyrAsnThrAsp700TyrCeuAsnLysLeu780ArgThrLeuSerGluValG丄uAlaAsp685GluAlaGlulieMet765TyrValArgAlaSer845TyrGly860HisValAlaThrAsp510TyrLeuProAsnAsn590AsnGlyLeuTyrLeu670TyrLeuLysPheSer750PheGinArgTyrHis830SerAlaMet匕ysSer495二euProValLeuArg575ValTyrGinLeuGlu655PheAspTyrArgSer735lieGlyLysGlyGlu815MetGinProCysThr480PheAsnGluArgGin560AlaAspThrLeuAsp640GluThrlieAlaLeu720AspGinAlaliePhe800LysGinPheAspHis88023AspArgAsnThrGlyTyrThrAsp930GinHis945AlaLysTyrHisLeulieHisAsnAla915GluMetGinlieProPhe885LeuGly900ThrLeuAlaLeuGluLysAlaVal965ThrLeu980TyrAlaPro艦AspValAsplieGlyValLys950AspAspHisPheAspAsnHis935ArgAlaHisHisHisValLeu920ValMetLeulielieLeu905GluLysGluPheGin985Asp890PheValGinThrThr970AsnThrLyslieLysGin955AsnAlaGlylieGluGlu940GinGluGlyGluSerGlu925LysAlaGinArgLeuAsn910GlyLysTyrGluLeu卿Asn895ProProTrpAspLeu975ValProAsnLeuArgPro960HisGinAsnTyr1010ArgTyrLeuTyr1025ThrGinGlyLeu1040GinGinMetAsp1055AlaGlyValSer1070ValLeuArgVa]廳ValThrMetMet1100ThrSerCysGlu1115ProGluSerAsp1130ThrPheTyrlie1145Ala1000TyrThrGluLeu1015LysGluArgAsn1030ThrGlyTrpGin1045GlyAlaSerVal1060GinAsnLeuHis1075ThrAlaI,ysLys1090AspCysAsnGly1105GluGlyTyrMet1120HisValArglie1135AspSerlieGlu1150TrpLeuLeuAspValProGlyMet1005AsnValArglieThrGinAla1020VallieThrAsnGlyAspPhe1035GluThrGlyLysAlaThrVal1050LeuVaiLeuSerAsnTrpSer1065ValGinAspGinHisGlyTyr1080GluGlyProGlyLysGlyTyr1095LysGinGluThrLeuArgPhe1110ThrLysThrValGluValPhe1125GluMetGlyGluThrGluGly1M0PheLeuCysMetLysGly1155<210>23<211>780<212〉DNA<213〉蘇云金芽胞桿菌菌株(Bacillusthuringiensis)BtMC28<400>23taattccagsatggaagtaacgggtgttct60gcacctattattagaaaaccattgtattaeicggttccatc120gataattttaeitacagtcttttatgtacaatt肌tcaggctcttcattta180gC3犯tgCttttcaaggggcatttc犯ttt240tcctaattctgcaattgtaaaaactcttaatcaaagtgtt300atacagcaaattcagttatggttgagcaactattcaagag360gttttaggacttgttattaacagtactagtttttggaattcggtag卿ctacaattaaa420ggcacatttacaaatttagacactcaaatagatgaagcatggattttttggcatagttta柳Lccgcccacaattttattttctattca朋a540ggtgcagttatggcagtattacctttagcatttgaaattacLgLggstgt600<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>權(quán)利要求1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)BtMC28，保藏號為CGMCCNo.2719。2、含有權(quán)利要求1所述菌株的殺蟲劑。3、權(quán)利要求l所述菌株或權(quán)利要求2所述殺蟲劑在農(nóng)作物蟲害防治中的應用。4、如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于，所述蟲害為鱗翅目或雙翅目害蟲。全文摘要本發(fā)明提供了一種蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)新菌株BtMC28，保藏號為CGMCCNo.2719。通過對BtMC28的毒力活性測試表明，BtMC28對鱗翅目、雙翅目害蟲等，均具有極高的毒力?？梢詫⒈景l(fā)明蘇云金芽孢桿菌BtMC28制成殺蟲劑，用于重要農(nóng)作物害蟲的防治。從而使蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑的產(chǎn)品多樣化和系列化，擴大了蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑的使用范圍，降低農(nóng)藥的使用量，減少環(huán)境污染，具有重要的經(jīng)濟價值和應用前景。文檔編號C12R1/07GK101503666SQ20091007889公開日2009年8月12日申請日期2009年3月5日優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日發(fā)明者劉懷年,宋福平,杰張,軍朱,平李,李雙成,束長龍,王世全,王玲霞,譚芙蓉,鄧其明,鄭愛萍申請人:四川農(nóng)業(yè)大學;中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所