專利名稱：：非衰竭與衰竭的人心臟中微小rna的差異表達(dá)的制作方法非衰竭與衰竭的人心臟中微小RNA的差異表達(dá)相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)要求在2007年7月18日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)第60/950，565號(hào)的權(quán)益，將其通過題述整體并入本文。
背景技術(shù)：
：心力衰竭是一種病理生理狀態(tài)，在此狀態(tài)下心臟無法泵送充足的血液以達(dá)到進(jìn)行代謝的組織或細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和氧需求。其為許多心臟病的主要的并發(fā)癥。40歲以上的成年人具有預(yù)計(jì)21%的患上心力衰竭的終身風(fēng)險(xiǎn)(Lloyd-Jones等人，2002，Circulation106，3068-72)，因該狀況住院的人數(shù)多于所有形式的癌癥的總和(AmericanHeartAssociation.HeartDiseaseandStrokeStatistics—2003Update)。心力衰竭為描述多種疾病過程的最終共同結(jié)局的通用術(shù)語。引起心力衰竭的最常見的原因是能夠?qū)е滦募」Ｋ?心臟病發(fā)作)的冠狀動(dòng)脈疾病，通常導(dǎo)致心臟細(xì)胞死亡。為了進(jìn)行補(bǔ)償，心臟則必須用余下的有活力的組織來執(zhí)行同樣的工作。慢性梗阻性冠狀動(dòng)脈疾病(chronicobstructivecoronaryarterydisease)也可以在無心肌梗死的情況下弓I起心力衰竭。瓣膜疾病或高血壓能通過增加心臟的工作負(fù)荷而導(dǎo)致心力衰竭。心力衰竭較少見的原因(其主要涉及心肌)被歸為心肌病(盡管這一術(shù)語有時(shí)被更廣泛用作涵蓋心力衰竭的任何原因)。這些病癥中得到最好表征的是一組肌節(jié)的單基因病癥，其經(jīng)常導(dǎo)致“月巴厚性心肌病”表型(事實(shí)上是一種誤稱，因?yàn)樵S多患者并沒有肥大，即存在可變的表型外顯率)。相反，具有“擴(kuò)張性心肌病(dilatedcardiomyopathy)”的所有患者都具有擴(kuò)張的薄壁的心室。這種狀況的遺傳學(xué)尚有待表征并很可能是多因素的，然而在許多情況中非遺傳原因可以顯著地起作用(例如感染、酒精、化學(xué)治療劑)。在沒有找到易于確定的原因時(shí)，采用的診斷是原發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(通常為排除診斷)。隨著心力衰竭的發(fā)展，心臟會(huì)發(fā)生多種病理生理學(xué)改變。響應(yīng)于體內(nèi)增加的工作負(fù)荷，直接的結(jié)果是心臟往往在大小上增加(心臟肥大)然而繼發(fā)于心臟細(xì)胞的肥大(即，在不存在細(xì)胞分裂的情況下細(xì)胞大小增大)。在細(xì)胞水平和分子水平，心臟肥大的特征在于收縮蛋白質(zhì)表達(dá)的增加和各種各樣的信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活，這些特征在心力衰竭的病理生理學(xué)中所起的作用仍然沒有完全理解。目前心力衰竭的治療包括藥理學(xué)方法，儀器如心室輔助裝置(VDA)、心臟再同步治療(CRT)和心臟移植。藥理學(xué)方法包括但不限于運(yùn)用肌力藥(inotropicagent)(即增強(qiáng)心肌收縮性的化合物)、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑(neurohumoralblocker)(例如β-阻斷劑、血管緊張肽轉(zhuǎn)變酶抑制劑(angiotensinconvertingenzymeinhibitor))、醛固酮拮抗劑(aldosteroneantagonist)、禾丨J尿齊Ll(diuretic)禾口血管擴(kuò)張齊Ll(vasodilator)。然而，這些藥物單獨(dú)或組合使用都不是完全有效的。移植的供應(yīng)度高度受限，并且由于許多患有心力衰竭的個(gè)體健康不佳，他們往往不是外科手術(shù)的好對(duì)象。由于這些原因，心力衰竭仍然是發(fā)病和死亡的主要原因，特別是在發(fā)達(dá)國家。另外，如上所指出的，可能難以確定心力衰竭的明確的病因，這是一個(gè)妨礙開發(fā)出更特異性的療法的因素。此外，全面缺乏在分子水平的診斷技術(shù)。因而，在本領(lǐng)域需要發(fā)現(xiàn)另外的診斷標(biāo)志物和藥理學(xué)靶以開發(fā)治療心力衰竭的新的治療方法。此外，本領(lǐng)域需要改良評(píng)估心力衰竭的嚴(yán)重性及心力衰竭對(duì)治療的響應(yīng)的技術(shù)，如在此和即將描述的。本發(fā)明解決了上述等需要。心臟肥大以及它發(fā)展為心力衰竭的可能性是對(duì)許多心血管疾病(包括高血壓、缺血性心臟病、心瓣膜病和內(nèi)分泌紊亂)的普通的病理學(xué)響應(yīng)。心臟肥大涉及到心臟肌肉(心肌)的增厚，這可能導(dǎo)致血流阻塞和/或心臟功能減退(舒張性舒張(diastolicrelaxation))0當(dāng)心臟對(duì)作為正常生理過程(劇烈運(yùn)動(dòng)(rigorousexcise))或病理生理學(xué)過程如高血壓、瓣膜狹窄或關(guān)閉不全、缺血或代謝病癥的結(jié)果應(yīng)激時(shí)，就會(huì)發(fā)生心臟肥大；其次，心臟肥大常常伴隨程序性細(xì)胞死亡(凋亡)和/或組織壞死?？紤]到大部分心臟細(xì)胞不能分裂，細(xì)胞增大以試圖代償；最初，這種代償是有用的，但是過度肥大能夠進(jìn)行性活化許多其他的病理生理學(xué)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其導(dǎo)致進(jìn)行性心臟機(jī)能障礙并且最終至失代償性心力衰竭。因?yàn)樾呐K肥大可以是一個(gè)獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因素，在其它心臟病風(fēng)險(xiǎn)因素之外，如高血壓，當(dāng)高血壓得到治療后，肥大可能會(huì)或不會(huì)復(fù)原。因此，直接治療心臟肥大是有益的。微小RNA(miRNAs)是一類近期發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性RNA，其在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)。miRNAs在進(jìn)化上是保守(conserved)的，長(zhǎng)度為大約18到25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA。miRNA與特殊“靶”mRNA堿基配對(duì)，并以此來抑制翻譯或促進(jìn)mRNA降解(Bartel，2004Cell,116,281-297)。據(jù)報(bào)道m(xù)iRNAs涉及有機(jī)體的發(fā)育(Ambros，Cell113:673_676)。miRNAs在很多組織中差異表達(dá)(Xu等，2003Curr.Biol.13790-795；Landgraf等，2007Cell1291401-14)。另據(jù)報(bào)道m(xù)iRNAs也涉及病毒感染過程(Pfeffer等，2004Science304734-736)，并與腫瘤生成相關(guān)(Calin，等，2004Proc.Natl.Acad.Sci.USA1012999-3004；Calin等，2002，Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(24):15524_15529)。雖然某些miRNAs在心臟中以高豐度表達(dá)，但是這些miRNAs在各種心臟病中的作用仍然需要進(jìn)一步確定。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種診斷或預(yù)后受試者中心力衰竭的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括測(cè)定來自所述受試者的生物樣品中一種或多種miRNAs的表達(dá)水平；并比較在上述生物樣品中一種或多種miRNAs的表達(dá)水平與在標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNAs的水平；其中上述生物樣品中至少一種或多種miRNAs的表達(dá)水平與在所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNAs的水平相比的差異對(duì)心力衰竭是診斷性或預(yù)測(cè)性的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于診斷或預(yù)后心力衰竭的方法的一種或多種miRNAs選自hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa_miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa-miR-422b(也稱作miR-378;SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDN0:17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa_miR-222(SEQIDN0:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO28)、hsa-miR-484(SEQIDNO29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa_miR-10b(SEQIDNO:32)、hsa-miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa_let_7b(SEQIDNO:49)、hsa-let-7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO:51)。在另一實(shí)施方案中，用于診斷或預(yù)后心力衰竭的方法的一種或多種miRNAs選自hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO:18)、hsa-miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa_miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23),hsa-miR-28(SEQIDNO:24)和hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，用于診斷或預(yù)后心力衰竭的方法的一種或多種miRNAs自hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)和hsa_miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)。在本發(fā)明中的又一個(gè)實(shí)施方案中，心力衰竭的類型是根據(jù)比較上述生物樣品中一種或多種miRNAs的水平與上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNAs的水平來診斷的，其中所述一種或多種miRNAs的水平對(duì)于缺血性心肌病(ischemiccardiomyopathy)或特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(idiopathicdilatedcardiomyopathy)是診斷性的。優(yōu)選地，對(duì)于缺血性心肌病或特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病是診斷性的一種或多種miRNAs選自hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO13)、hsa-miR-342(SEQIDNO14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO15)、hsa_miR-422b(也稱%miR-378；SEQIDNO:16)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO20)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)和hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防受試者中心力衰竭或與心力衰竭有關(guān)的疾病或狀況的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者的心臟細(xì)胞施用治療有效量的miRNA模擬物或miRNA抑制劑。在另一實(shí)施方案中，在所述治療或預(yù)防心力衰竭或與心力衰竭有關(guān)的疾病或狀況的方法中使用的miRNA模擬物或miRNA抑制劑為選自如下組的miRNAs中的一種或多種的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6),hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO15)、hsa_miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDN0:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO:32)、hsa_miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa-let-7b(SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO:51)。在另一實(shí)施方案中，這種方法進(jìn)一步包括向受試者施用第二心臟治療。該第二心臟治療可以包括肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿劑或血管擴(kuò)張藥。在本發(fā)明的又一實(shí)施方案中，治療或預(yù)防受試者中心力衰竭或與心力衰竭有關(guān)的疾病或狀況的方法包括向受試者施用藥物組合物，其中所述藥物組合物包含至少一種miRNA模擬物或至少一種miRNA抑制劑和藥理學(xué)上可接受的載體。所述miRNA模擬物或miRNA抑制劑可以是hsa-miR-542-5p(SEQIDNO1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO15)、hsa_miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19),hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28),hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31),hsa-miR-10b(SEQIDNO:32)、hsa_miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa-let-7b(SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(SEQIDNO50)或hsa_let_7g(SEQIDNO:51)的模擬物或抑制劑。在另一實(shí)施方案中，藥物組合物進(jìn)一步包含一種或多種肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿藥和血管擴(kuò)張藥。本發(fā)明也提供了一種調(diào)節(jié)細(xì)胞中胎兒心臟基因程序(fetalcardiacgeneprogram)(FGP)的再活化的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括提供具有一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物的心臟細(xì)胞，其中所述一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物調(diào)整胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物的表達(dá)。所述一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物可以是選自下組的一種或多種miRNAs的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa_miR150(SEQIDNO:12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa-miR-422b(也稱為miR-378;SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDN0:17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO19),hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO28)、hsa-miR-484(SEQIDNO29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa_miR-10b(SEQIDNO:32)、hsa-miR-382(SEQIDNO33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO48)、hsa_let_7b(SEQIDNO49)、hsa-let-7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO:51)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物為hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-100(SEQIDN0:7)或hsa-miR-133b(SEQIDNO19)的模擬物或抑制劑。在另一實(shí)施方案中，所述胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物選自由αMyHC,βMyHC,ANF,BNP,SERCA2a和骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白質(zhì)組成的組中。本發(fā)明也包括監(jiān)測(cè)對(duì)受試者進(jìn)行的心力衰竭治療的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括在第一時(shí)間點(diǎn)從受試者獲得第一生物樣品，其中所述第一時(shí)間點(diǎn)在心力衰竭的藥物治療方案開始之前；在第二時(shí)間點(diǎn)從受試者獲得第二生物樣品，其中所述第二時(shí)間點(diǎn)在心力衰竭的藥物治療方案開始之后；通過miRNA陣列分析、mRNA陣列分析和定向蛋白質(zhì)組達(dá)分析(targetedproteomicexpressionanalysis)處理第一生物樣口口口禾口第二生物樣品；并且將來自第一生物樣品的miRNA、mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)數(shù)據(jù)與來自第二生物樣品的表達(dá)數(shù)據(jù)比較以確定基因表達(dá)模式(geneexpressionpattern)的變化，其中基因表達(dá)的變化指示所述藥物治療方案的效力。在另一實(shí)施方案中，第一時(shí)間點(diǎn)和第二時(shí)間大約間隔三至九個(gè)月。在另一實(shí)施方案中，mRNA分析是通過Affymetrix方案進(jìn)行的。附圖簡(jiǎn)述圖l.miRNAs的相對(duì)表達(dá)。A.非衰竭(NF，η=6)對(duì)衰竭的特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(IDC，η=5)的心臟，和B.NF對(duì)衰竭的、缺血性心肌病(ISC，η=5)的心臟。在對(duì)應(yīng)TSangerhumanmiRBase9.0(—470miRNAs白勺―砠)白勺LCSciences(Houston,TX)miRNA表達(dá)陣列芯片上進(jìn)行分析。以贗熱溫標(biāo)(pseudo-thermalscale)表達(dá)數(shù)據(jù)，其中用紅色表示增加的表達(dá)，以及用綠色表示降低的表達(dá)。僅表示出顯著上調(diào)或下調(diào)(ρ<0.05)的miRNA。圖2.非衰竭(NF，η=6)與衰竭(IDC或ISCH，η=5,5)人心臟中相對(duì)miRNA表達(dá)的圖示。注意某些miRNA在兩種類型的衰竭心臟中都上調(diào)或下調(diào)，然而其它則基于心力衰竭類型差異性地表達(dá)。圖3.具有ρ<0.05的差異性表達(dá)的miRNAs亞組的相對(duì)表達(dá)。圖4.通過RT-PCR從提取自非衰竭(NF)、特發(fā)性心肌病(IDC)或缺血性心肌病(ISC)受試者的RNA評(píng)估m(xù)iRNA的表達(dá)水平。將miRNA表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化為miR-24，其表達(dá)在非衰竭和衰竭心臟之間是恒定的。使用ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。圖5在用miR-92模擬物或miR_92抑制劑轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞中胎兒基因表達(dá)的變化。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)用10_7M異丙腎上腺素(ISO;黑色柱)處理細(xì)胞，并且在處理后48小時(shí)收集。通過RT-PCR測(cè)量基因表達(dá)。將結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化為18SrRNA表達(dá)水平，并與用對(duì)照模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(定義為1(在刻度1處的線))比較。該圖代表3-4個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的平均值。圖6.在用miR-100模擬物或miR-100抑制劑轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞中胎兒基因表達(dá)的變化。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)用10_7M異丙腎上腺素(ISO;黑色柱)處理細(xì)胞并且在處理后48小時(shí)收集。通過RT-PCR測(cè)量基因表達(dá)。將結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化為18SrRNA表達(dá)水平，并與用對(duì)照模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(定義為1(在刻度1處的線))比較。該圖代表3-4個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的平均值。圖7.在用miR_133b模擬物或miR_133b抑制劑轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞中胎兒基因表達(dá)的變化。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)用10_7M異丙腎上腺素(ISO;黑色柱)處理細(xì)胞并且在處理后48小時(shí)收集。通過RT-PCR測(cè)量基因表達(dá)。將結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化為18SrRNA表達(dá)水平，并與用對(duì)照模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(定義為1(在刻度1處的線))比較。該圖代表3-4個(gè)單獨(dú)實(shí)驗(yàn)的平均值。圖8.用模擬物miRNA或抑制劑miRNA轉(zhuǎn)染后的miRNA水平。將miR-92、miR_100和miR-133b的模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染至新生大鼠心室肌細(xì)胞。通過RT-PCR評(píng)估每種miRNA的表達(dá)水平。圖9.在新生大鼠心室肌細(xì)胞中miRNA_133b的過表達(dá)或下調(diào)調(diào)節(jié)細(xì)胞的肥大。將細(xì)胞用miR-133b模擬物(下方的組)或miR-133b抑制劑(上方的組)轉(zhuǎn)染并且用異丙腎上腺素處理(右側(cè)的組)或者不進(jìn)行進(jìn)一步處理(左側(cè)的組)。用抗-輔肌動(dòng)蛋白抗體使圖顯示免疫熒光。圖10.在新生大鼠心室肌細(xì)胞中miRNA_133b的過表達(dá)或下調(diào)調(diào)節(jié)細(xì)胞的肥大。用miR-133b模擬物或miR-133b抑制劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并將轉(zhuǎn)染細(xì)胞的一個(gè)亞組暴露于異丙腎上腺素(黑色柱)。使用ImageJ軟件測(cè)量細(xì)胞的尺寸。測(cè)量來自3個(gè)不同區(qū)域的總共30個(gè)細(xì)胞。圖11.將基因表達(dá)系列分析(SAGE)作為用于發(fā)現(xiàn)基于miRNA的靶的方法的集成方法的示意圖。心力衰竭(HF)患者心內(nèi)膜心肌活檢(endomyocardialbiopsy)被用于為miRNA陣列分析、mRNA(Afflymetrix)陣列分析和(定向)蛋白質(zhì)組學(xué)表達(dá)分析提供生物樣PΡΠO圖12.用β-阻斷劑治療的人患者的miR-133的表達(dá)。對(duì)來自用β-阻斷劑治療的患者的樣品進(jìn)行RT-PCR分析。在末期心力衰竭(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)獲得系列活檢標(biāo)本。將miR-133b(上方的組)和miR-133a(下方的組)的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化為miR-370(右側(cè)的組)和小RNARNU66(左側(cè)的組)的表達(dá)。患者20、21、25和34對(duì)β-阻斷劑治療應(yīng)答，但是患者103對(duì)所述治療無應(yīng)答。圖13.用β-阻斷劑治療的人患者的miR-1和miR_19b的表達(dá)。對(duì)來自用β-阻斷劑治療的患者的樣品進(jìn)行RT-PCR分析。在末期心力衰竭(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)獲得系列活檢標(biāo)本。miR-1(上方的組)和miR-19b(下方的組)的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為miR-370(右側(cè)的組)和小RNARNU66(左側(cè)的組)的表達(dá)。患者20、21、25和34對(duì)β-阻斷劑治療應(yīng)答，但是患者103對(duì)治療無應(yīng)答。圖14用β-阻斷劑治療的人患者的miR_30d和miR-92a的表達(dá)。對(duì)來自用β-阻斷劑治療的患者的樣品進(jìn)行RT-PCR分析。在末期心力衰竭(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)獲得系列活檢標(biāo)本。miR-30d(上方的組)和miR-92a(下方的組)的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為miR-370(右側(cè)的組)和小RNARNU66(左側(cè)的組)的表達(dá)?；颊?0、21、25和34對(duì)β-阻斷劑治療應(yīng)答，但是患者103對(duì)治療無應(yīng)答。圖15.用β-阻斷劑治療的人患者的miR-208b和miR-499的表達(dá)。對(duì)來自用β-阻斷劑治療的患者的樣品進(jìn)行RT-PCR分析。在末期心力衰竭(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)獲得系列活檢標(biāo)本。miR-208b(上方的組)和miR-499(下方的組)的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為miR-370(右側(cè)的組)和小RNARNU66(左側(cè)的組)的表達(dá)。患者20、21,25和34對(duì)β-阻斷劑治療有應(yīng)答，但是患者103對(duì)治療無應(yīng)答。圖16.用β-阻斷劑治療的人患者的miR-let-7g的表達(dá)。對(duì)來自用β-阻斷劑治療的患者的樣品進(jìn)行RT-PCR分析。在末期心力衰竭(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)獲得系列活檢標(biāo)本。miR-let-7g的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為miR-370(右側(cè)的組)和小RNARNU66(左側(cè)的組)的表達(dá)。患者20、21、25和34對(duì)β-阻斷劑治療應(yīng)答，但是患者103對(duì)治療無應(yīng)答。圖17.miR-92a靶向PKCε和PDE1A。用miR_92a模擬物、miR_92a抑制劑或亂序控制序列(scrambledcontrolsequence)轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞的Western印跡分析。A.用PKCε探測(cè)的印跡(η=2)(blotprobedforPKCε)。B.用PDElA探測(cè)的印跡(η=1)。鈣聯(lián)接蛋白表達(dá)被用作上樣對(duì)照。圖18.miR-133b靶向鈣調(diào)蛋白。Α.對(duì)用miR_133b模擬物、miR_133b抑制劑或亂序控制序列轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞中鈣調(diào)蛋白mRNA表達(dá)的RT-PCR分析。鈣調(diào)蛋白的表達(dá)水平被標(biāo)準(zhǔn)化為18S核糖體亞基的表達(dá)。B.用包含連接至鈣調(diào)蛋白3’UTR和miR-133b模擬物、miR-133b抑制劑或亂序控制序列的螢光素酶編碼區(qū)的構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞中的螢光素酶活性。C.對(duì)用miR-133b模擬物、miR-133b抑制劑或亂序控制序列轉(zhuǎn)染的新生大鼠心室肌細(xì)胞的鈣調(diào)蛋白進(jìn)行的Western印跡分析。將鈣聯(lián)接蛋白的表達(dá)用作上樣對(duì)照。所有實(shí)驗(yàn)η=3。發(fā)明詳述本發(fā)明部分基于如下發(fā)現(xiàn)微小RNA(miRNAs)的特殊亞組在健康心臟和衰竭心臟之間存在差異性表達(dá)。有趣的是，一些miRNAs在特定類型的衰竭心臟(如特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病或缺血性心肌病)中是上調(diào)或下調(diào)的。這些差異性表達(dá)的miRNAs為心力衰竭提供了新的生物標(biāo)志物，也為心力衰竭的有效治療的開發(fā)提供了靶。因此，本發(fā)明提供診斷和預(yù)后受試者中心力衰竭的方法。也提供治療或預(yù)防受試者中心力衰竭的方法。miRNAs是源自較大的前體的、長(zhǎng)度為大約18_25個(gè)核苷酸，特別是21_22個(gè)核苷酸的小的、非編碼RNAs。當(dāng)miRNAs和靶mRNA的序列完全互補(bǔ)時(shí)，miRNAs通過促進(jìn)靶mRNAs的降解來發(fā)揮其抑制劑的作用，或者當(dāng)它們的序列包含錯(cuò)配時(shí)，miRNAs通過抑制翻譯來發(fā)揮mRNAs的抑制劑的作用。miRNAs通過RNA聚合酶II(polII)或RNA聚合酶III(polIII；參見Qi等(2006)Cellular&MolecularImmunologyVol.3:411_419)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，并且其可以源于單個(gè)的miRNA基因、源于蛋白質(zhì)編碼基因的內(nèi)含子或源于經(jīng)常編碼多個(gè)、緊密相關(guān)的miRNAs的多順反子的轉(zhuǎn)錄物。通過RNApolII或polIII的miRNA基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生最初的轉(zhuǎn)錄物，稱為初級(jí)miRNA轉(zhuǎn)錄物(初miRNA(pri-miRNAs))，其長(zhǎng)度通常為數(shù)千個(gè)堿基。在細(xì)胞核中，初級(jí)miRNA通過RNA酶、Drosha的處理，得到70-至100-核苷酸的發(fā)夾形前體(前miRNA(pre-miRNAs))。在轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)后，發(fā)夾前miRNA由Dicer進(jìn)一步加工產(chǎn)生雙鏈miRNA。然后將成熟的miRNA鏈并入RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)(RNA-inducedsilencingcomplex)，其通過堿基對(duì)互補(bǔ)性與其靶mRNAs結(jié)合。在相對(duì)罕見的情況中，miRNA與靶mRNA的堿基完美配對(duì)，其促進(jìn)mRNA降解。更常見的是，miRNA與靶mRNA形成不完全異源雙鏈，影響mRNA的翻譯。miRNA跨越2_8個(gè)堿基的5’部分，稱為種子區(qū)(‘seed'region)，對(duì)靶識(shí)別尤其重要(KrenzandRobbins(2004)J.Am.Coll.Cardiol.，Vol.44:2390_2397；KiriazisandKranias(2000)Annu.Rev.Physiol.，Vol.62:321_351)。所述種子的序列，連同靶序列的系統(tǒng)發(fā)生學(xué)保守性，形成了許多當(dāng)前靶預(yù)測(cè)模型的基礎(chǔ)。本發(fā)明提供了一種通過測(cè)定獲得自受試者的生物樣品中特殊miRNAs的表達(dá)水平而診斷和預(yù)后所述受試者中的心力衰竭的方法。如在此所用的，術(shù)語“心力衰竭”廣泛涉及降低心臟泵血能力的任何狀況。因此，在組織形成充血和水腫。最常見的，心力衰竭是由冠狀動(dòng)脈血流減少導(dǎo)致的心肌的收縮性降低所引起的，然而，許多其它因素也可導(dǎo)致心力衰竭，包括心瓣膜損傷，維生素缺乏和原發(fā)性心肌病。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括測(cè)定來自受試者的生物樣品中一種或多種miRNAs的表達(dá)水平，并且比較在上述生物樣品中一種或多種miRNAs的表達(dá)水平與在標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNAs的水平，其中在上述生物樣品中至少一種或多種miRNAs的表達(dá)水平與在上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNAs的水平相比的差異對(duì)心力衰竭是診斷性和預(yù)測(cè)性的。生物樣品可以包括，但不局限于，血液、血清、血漿和組織樣品。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，生物樣品是心肌組織(如心耳、心內(nèi)膜心肌活檢等)?！皹?biāo)準(zhǔn)樣品”是指達(dá)標(biāo)無病狀態(tài)的樣品，尤其是代表不存在無心力衰竭或其它任何相關(guān)狀況的狀態(tài)(即健康狀態(tài))。例如，標(biāo)準(zhǔn)樣品可以是生物樣品，如從健康受試者中獲得的心肌組織，所述健康受試者與為其提供診斷和預(yù)后的受試者年齡相似。標(biāo)準(zhǔn)樣品可以是混合樣品(compositesample)，其中將獲得自來自若干健康受試者(即，無心力衰竭的癥狀的對(duì)照受試者)的生物樣品的數(shù)據(jù)平均，從而產(chǎn)生混合樣品。測(cè)定樣品中miRNAs的表達(dá)水平的方法為本領(lǐng)域普通的技術(shù)人員所熟知。這些方法包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)，如逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR和實(shí)時(shí)PCR、Northern印跡和微陣列分析。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括測(cè)定選自下組的一種或多種miRNAs的表達(dá)水平hsa-miR-542-5p(SEQIDNO1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa_miR-483(SEQIDNO:8)、hsa_miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO13)、hsa-miR-342(SEQIDNO14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO15)、hsa-miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)、hsa-miR-221(SEQIDNO17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO32)、hsa-miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(uauugcacucgucccggccucc；SEQIDNO48)、hsa-1et~7b(ugagguaguagguugugugguu；SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(ugagguaggagguuguauaguu；SEQIDNO:50)禾口hsa_let_7g(ugagguaguaguuuguacaguu；SEQIDNO51)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述一種或多種miRNAs選自hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-lOO(SEQIDNO:7)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15),hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa_miR-l(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)和hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述一種或多種miRNAs選自hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)和hsa-miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括根據(jù)與上述標(biāo)準(zhǔn)樣本中一種或多種miRNAs的水平相比的上述生物學(xué)樣本中一種或多種miRNAs的水平來診斷心力衰竭的類型，其中所述一種或多種miRNAs的水平對(duì)缺血性心肌病或特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病是診斷性的。如在此所使用的，“特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病”(IDC)定義為左、右或雙心室擴(kuò)張，伴有未知原因的損傷的收縮性。IDC是產(chǎn)生心力衰竭癥狀的擴(kuò)張性心肌病的一種普通形式。IDC可能出現(xiàn)或不出現(xiàn)明顯的充血性心力衰竭并且常見心率不齊(arrhythmias)，且預(yù)后通常不佳。如在此使用的“缺血性心肌病”(ISC)指的是由于輸送至心肌的氧不足而導(dǎo)致心臟中肌肉衰弱的患者，通常是由于冠狀動(dòng)脈疾病。ISC是充血性心力衰竭的常見原因，并且患有該狀況的患者可能曾經(jīng)一度經(jīng)歷心臟病發(fā)作、心絞痛或不穩(wěn)定心絞痛。在美國ISC是心肌病的一種最常見類型；它影響大約的人口，最常見為中年至老年人?？捎糜谠\斷IDC或ISC的一種或多種miRNAs包括hsa-miR-125b(SEQIDNO2)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)；hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO14),hsa-miR-133a(SEQIDNO:I5)、hsa-miR_422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)和hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)。本發(fā)明也提供一種治療和預(yù)防受試者心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向受試者的心臟細(xì)胞施用治療有效劑量的miRNA模擬物或miRNA抑制劑。“治療有效劑量”是足以改善或預(yù)防至少一種心力衰竭癥狀的量。心力衰竭的癥狀包括，但不限于，呼吸困難(dyspnea)、端坐呼吸(orthopnea)、頭暈(dizziness)、精神錯(cuò)亂(confusion)、出汗(diaphoresis)、外周性水腫(peripheraledema)、腹水(ascites)、肝月中大(h印atomegaly)、疲勞(fatigue)、惡心(nausea)、心率增快(increasedheartrate)禾口月市水月中(pulmonaryedema)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括施用選自下組的miRNAs中的一種或多種的miRNA模擬物或miRNA抑制劑hsa-miR-542_5p(SEQIDNO1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(也稱為miR-378;SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO:32)、hsa_miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(uauugcacucgucccggccucc；SEQIDNO:48)、hsa_let_7b(ugagguaguagguugugugguu;SEQIDN0:49)、hsa_let~7e(ugagguaggagguuguauaguu；SEQIDNO50)禾口hsa_let_7g(ugagguaguaguuuguacaguu；SEQIDNO51)。"miRNA模擬物，，是一種用于增加miRNA表達(dá)和/或功能的作用物。miRNA模擬物還能增加、補(bǔ)充或取代天然miRNA的功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，miRNA模擬物可以是包含成熟miRNA序列的多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，miRNA模擬物可以是包含初miRNA或前miRNA序列的多核苷酸。所述miRNA模擬物可以包含化學(xué)修飾，如鎖核酸、肽核酸，糖修飾，如2’-0-烷基(如2’-0-甲基、2，-0-甲氧基乙基)，2’-氟和4’硫修飾，和主鏈修飾，如一種或多種硫代磷酸酯、嗎啉代或膦?；人狨ミB接(phosphonocarboxylatelinkage)。某些miRNA模擬物從公司購得，如Dharmacon(Lafayette,CO)和Ambion，Inc。在一些實(shí)施方案中，miRNA模擬物可以在體內(nèi)從載體表達(dá)?！拜d體”是可以用于將目標(biāo)核酸遞送至細(xì)胞的內(nèi)部的物質(zhì)組合物。本領(lǐng)域已知多種載體，包括，但不局限于，線性多核苷酸、與離子的或兩親性化合物聯(lián)合的多核苷酸、質(zhì)粒和病毒。因此，術(shù)語“載體”包括自主復(fù)制質(zhì)?；虿《?。病毒載體的實(shí)例包括，但不限于，腺病毒載體、腺伴隨病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等。表達(dá)構(gòu)建體可以在活細(xì)胞中復(fù)制，或者其能夠以合成方法制備。就本申請(qǐng)而言，術(shù)語“表達(dá)構(gòu)建體”、“表達(dá)載體”和“載體”可以互換地使用以總體的、說明的方式闡述本發(fā)明的應(yīng)用，而并非意欲限制本發(fā)明。在一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)miRNA模擬物的表達(dá)載體包含與編碼特定miRNA的多核苷酸“可操作地連接”的啟動(dòng)子。如在此所用的短語“可操作地連接”或“在轉(zhuǎn)錄控制下”意思是所述啟動(dòng)子在與多核苷酸相關(guān)的正確位置和方向以控制通過RNA聚合酶進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄的起始和所述多核苷酸的表達(dá)。編碼所述miRNA的多核苷酸可以編碼初級(jí)_微小RNA序列(初miRNA)、前體-微小RNA序列(前miRNA)或成熟miRNA序列。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，多核苷酸包含hsa-miR-133b(SEQIDNO19)的序列。編碼特定的miRNA的多核苷酸長(zhǎng)度可以是大約18至大約2000個(gè)核苷酸、大約70至大約200個(gè)核苷酸、大約20至大約50個(gè)核苷酸、或大約18至大約25個(gè)核苷酸。在另外的實(shí)施方案中，編碼特定的miRNA的多核苷酸位于編碼內(nèi)含子的核酸中或位于編碼mRNA非翻譯區(qū)的核酸中或位于非編碼RNA中。在一些實(shí)施方案中，所述miRNA模擬物包含hsa_miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(也稱%miR-378；SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa-miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa-let-7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa_miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let-7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)或hsa-miR-10b(SEQIDNO:32)的序列。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述miRNA模擬物包含hsa-miR-133b(SEQIDNO19)的序列。"miRNA抑制劑”是以序列特異性方式抑制miRNA功能的作用物。在一個(gè)實(shí)施方案中，miRNA抑制劑是一種微小RNA拮抗劑(antagomir)。由Kriitzfeldt和同事(Kriitzfeldt等(2005)Nature，Vol.438:685_689)首先描述，“微小RNA拮抗劑”是單鏈的，化學(xué)修飾的核糖核苷酸，其至少與miRNA序列部分互補(bǔ)。微小RNA拮抗劑可以包含一種或多種修飾的核苷酸，如2’-0-甲基-糖修飾。在一些實(shí)施方案中，微小RNA拮抗劑僅包含修飾的核苷酸。微小RNA拮抗劑也可以包含一種或多種硫代磷酸酯連接，其導(dǎo)致部分或完全硫代磷酸酯主鏈。為了促進(jìn)體內(nèi)遞送和穩(wěn)定性，可以將微小RNA拮抗劑在其3’末端與膽固醇部分連接。適合抑制miRNAs的微小RNA拮抗劑的長(zhǎng)度可以是大約15至大約50個(gè)核苷酸，更優(yōu)選是大約18至大約30個(gè)核苷酸，并且最優(yōu)選是大約20至25個(gè)核苷酸?！安糠只パa(bǔ)”指的是與靶多核苷酸序列至少大約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%互補(bǔ)的序列。所述微小RNA拮抗劑可以與成熟miRNA序列至少大約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%互補(bǔ)。在一些實(shí)施方案中，所述微小RNA拮抗劑與成熟miRNA序列100%互補(bǔ)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，miRNA抑制劑是靶向成熟miRNA序列的反義寡核苷酸。所述反義寡核苷酸可以包含核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸。在一些實(shí)施方案中，所述反義寡核苷酸具有至少一種化學(xué)修飾。反義寡核苷酸可以包含一種或多種“鎖苷酸(lockednucleicacid)”?！版i核酸”(LNAs)是修飾的核糖核苷酸，其包含位于核酸糖部分的2’和4’碳之間的額外的橋鍵，該橋鍵導(dǎo)致“鎖”構(gòu)象，該構(gòu)象賦予含有LNAs的寡核苷酸增強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。或者，所述反義寡核苷酸可以包含肽核酸(PNAs)，其包含基于肽的主鏈而非糖-磷酸主鏈。反義寡核苷酸可以包含的其它化學(xué)修飾包括，但不局限于，糖修飾，如2’-0-烷基(如2’-0-甲基、2’-0-甲氧基乙基)，2’-氟和4’硫修飾和主鏈修飾，如一種或多種硫代磷酸酯、嗎啉代或膦?；人狨ミB接(參見，例如，美國專利第6，693，187和7，067,641號(hào)，將它們?nèi)客ㄟ^題述整體并入本文)。在一些實(shí)施方案中，合適的反義寡核苷酸是在中心具有至少10個(gè)脫氧核糖核苷酸的、在5’和3’末端均包含2’-0-甲氧乙基-修飾的核糖核苷酸的2’-0_甲氧基乙基“缺口聚物(gapmer)”。這些“缺口聚物”能夠觸發(fā)RNA酶H依賴性的RNA靶降解機(jī)制。增強(qiáng)穩(wěn)定性和提高效力的反義寡核苷酸的其它修飾(如那些在美國專利第6，838，283號(hào)所描述的那些，將其全部通過題述整體并入本文)是本領(lǐng)域已知的并且適用于本發(fā)明的方法?？捎糜谝种苖iRNAs活性的優(yōu)選的反義寡核苷酸長(zhǎng)度是大約19至大約25個(gè)核苷酸。反義寡核苷酸可以包含與成熟miRNA序列至少部分互補(bǔ)的序列，如至少與成熟miRNA序列大約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%互補(bǔ)。在一個(gè)實(shí)施方案中，反義寡核苷酸包含與成熟miRNA序列100%互補(bǔ)的序列。在一些實(shí)施方案中，miRNA抑制劑包含與hsa_miR-125b(SEQIDNO2)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-26b(SEQIDNO30)或hsa-miR-382(SEQIDNO33)互補(bǔ)的序列。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，miRNA抑制劑包含與hsa-miR-100(SEQIDNO7)互補(bǔ)的序列。在又一實(shí)施方案中，miRNA抑制劑是與成熟miRNA序列至少具有部分序列同一性的抑制性RNA分子。該抑制性RNA分子可以是雙鏈的、小干擾RNA(siRNA)或包含莖環(huán)結(jié)構(gòu)的短發(fā)夾RNA分子(shRNA)。抑制性RNA分子的雙鏈區(qū)可以包含與成熟miRNA序列具有至少大約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的序列。在一些實(shí)施方案中，抑制性RNA分子的雙鏈區(qū)可以與靶mRNA序列含有100%同一性的序列。抑制性RNA分子可以包含與hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-23a(SEQIDNO10)、hsa_miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-28(SEQIDNO:24)、hsa-miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-26b(SEQIDNO30)或hsa-miR-382(SEQIDNO33)具有至少部分序列同一性的序列。所述miRNA抑制劑可以在活體內(nèi)自表達(dá)載體產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)miRNA抑制劑的表達(dá)載體包含與編碼反義寡核苷酸的多核苷酸可操作地連接的啟動(dòng)子，其中表達(dá)的反義寡核苷酸的序列與成熟miRNA序列互補(bǔ)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，表達(dá)miRNA抑制劑的表達(dá)載體包含與編碼shRNA或siRNA的多核苷酸可操作地連接的一種或多種啟動(dòng)子，其中表達(dá)的shRNA或siRNA包含與成熟miRNA序列完全相同或基本相同的序列?！盎鞠嗤敝傅氖桥c靶多核苷酸序列至少大約75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的序列。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，治療或預(yù)防受試者心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的方法還包括向受試者施用第二心臟治療。心臟治療包括通常用于治療心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的一種或多種癥狀任何療法。第二心臟治療可以包括，那不局限于，所謂“β阻斷劑”，抗高血壓藥、強(qiáng)心劑、抗血栓藥、血管擴(kuò)張劑、激素拮抗劑、肌力藥(iontropes)、禾丨J尿齊[J、內(nèi)皮素受體拮抗齊[J(endothelinreceptorantagonist)、丐通道阻斷劑、磷酸二酯酶抑制劑，ACE抑制劑、血管緊張肽2型拮抗劑和細(xì)胞因子阻斷劑/抑制劑、HDAC抑制劑和組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二心臟治療是肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿劑、血管擴(kuò)張藥、內(nèi)皮素受體拮抗劑或HDAC抑制劑?！凹×λ?inotropicagent)”指的是增加或降低肌肉收縮的力或能量的藥物，特別是增加心肌收縮性的強(qiáng)度的藥物。正性肌力藥(positiveinotropicagent)可以包括鈣；鈣增敏劑左西孟旦(calciumsensitizerlevosimendan)；強(qiáng)心苷(cardiacglycoside)、地高辛(digoxin)；兒茶酚胺類(catecholamines)，如多巴胺、多巴酚丁胺(dobutamine)、多培沙明(dopexamine)、腎上腺素(印in印hrine)、異丙腎上腺素(isoproterenol)和去甲腎上腺素(nor印in印hrine)；以及磷酸二酯酶抑制劑，如依諾西蒙(enoximone)、米力農(nóng)(milrinone)禾口茶堿(theophylline)。負(fù)性肌力藥(negativeinotropicagent)包括β腎上腺素能阻斷劑(betaadrenergicblocker)，如拉貝洛爾(Iabetalol)和卡維地洛(carvedilol)；以及鈣通道阻斷劑，如地爾硫卓(diltiazam)和維立中白米(verapamil)“神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑”指的是阻斷神經(jīng)介質(zhì)應(yīng)答的藥物且包括β腎上腺素能阻斷劑，如比索洛爾(bisoprolol)、卡維地洛和美托洛爾(metoprolol)；以及血管緊張肽轉(zhuǎn)變酶抑制劑，如依那普利(enalapril)、賴諾普利(Iisinopril)、雷米普利(ramipril)和卡托普利(captopril)?！袄騽敝傅氖且?guī)定用于液體潴留(fluidretention)和腳、腿及腹部腫脹的藥物。利尿劑促進(jìn)腎從血液中濾過更多的鈉和水。體內(nèi)液體變少，心臟就能用更小的力量來泵送和循環(huán)血液。另外，利尿藥能夠減少肺、踝、腿和身體其它部位中的液體潴留。利尿劑包括，例如呋塞米(furosemide)、布美他尼(bumetanide)、美托拉宗(metolazone)、螺內(nèi)酯(spironolactone)禾口依普利酮(eplerenone)?！叭┕掏卓箘敝傅氖菍?duì)抗醛固酮在鹽皮質(zhì)激素受體上的作用的藥物。這組藥物通常與其他藥物組合作為輔助治療用于處理慢性心力衰竭。醛固酮拮抗劑包括，例如螺內(nèi)酯和依普利酮?！把軘U(kuò)張藥”指的是擴(kuò)張或引起血管的直徑增加的藥物。血管擴(kuò)張劑包括，例如胼屈嗪(hydralazine)、硝酸異山梨酯(isosorbidedinitrate)和單硝酸異山梨酯(isosorbidemononitrate)、卡托普禾丨J(captopril)禾口較長(zhǎng)效因子如麥他明(metamine)、二氧林(paveril)、硝酸甘油(nitroglyn)和長(zhǎng)效硝酸甘油(peritrate)。內(nèi)皮素(ET)是21-氨基酸肽，其具有似乎與心力衰竭發(fā)展相關(guān)的強(qiáng)力生理學(xué)和病理生理學(xué)效應(yīng)。ET的作用是通過與兩類細(xì)胞表面受體的相互作用介導(dǎo)的。A型受體(ET-A)與血管收縮和細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)，而B型受體(ET-B)與內(nèi)皮細(xì)胞介導(dǎo)的血管舒張和其它神經(jīng)激素(如醛固酮)的釋放有關(guān)。本領(lǐng)域已知能夠抑制ET的產(chǎn)生或其刺激相關(guān)細(xì)胞的能力的藥理制劑。抑制ET的產(chǎn)生涉及阻斷稱為內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶的酶的作用物的施用，該酶涉及自其前體加工活性肽。抑制ET刺激細(xì)胞的能力涉及使用阻斷ET與其受體的相互作用的作用物。內(nèi)皮素受體拮抗劑(ERA)的非限制性實(shí)例包括波生坦(Bosentan)、恩拉生坦(Enrasentan)、安貝生坦(Ambrisentan)、達(dá)盧生坦(Darusentan)、替唑生坦(Tezosentan)、阿曲生坦(Atrasentan)、阿伏生坦(Avosentan)、克拉生坦(Clazosentan)、艾多南坦(Edonentan)、西他生坦(sitaxsentan)、TBC3711、BQ123和BQ788?？梢詫⒌诙呐K治療與所述miRNA模擬物或miRNA抑制劑向受試者共施用(例如同時(shí))。或者，第二心臟治療可以在miRNA模擬物或miRNA抑制劑之前或之后施用。施用miRNA模擬物或miRNA抑制劑和施用第二心臟治療之間的時(shí)間間隔的范圍可以是從數(shù)分鐘到數(shù)周。在一些實(shí)施方案中，兩種治療可以在彼此的12-24小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選在彼此的6-12小時(shí)內(nèi)，并且最優(yōu)選在彼此的12小時(shí)內(nèi)施用。然而，在一些情況下，顯著延長(zhǎng)治療時(shí)間可能是理想的，其中在各施用時(shí)間之間經(jīng)過若干天(2、3、4、5、6或7)至若干周(1、2、3、4、5、6、7或8)。本發(fā)明也包括治療和預(yù)防受試者心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的方法，其包括向受試者施用藥物組合物，其中所述藥物組合物包含至少一種miRNA模擬物或至少一種miRNA抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一種miRNA模擬物或至少一種miRNA抑制劑是選自下組的miRNA中的一種或多種的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa_miR150(SEQIDNO12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa-miR-422b(也稱為miR-378;SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO32)、hsa-miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(uauugcacucgucccggccucc；SEQIDNO48)、hsa_let_7b(ugagguaguagguugugugguu；SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(ugagguaggagguuguauaguu；SEQIDNO:50)禾口hsa_let_7g(ugagguaguaguuuguacaguu;SEQIDNO:51)。所述藥物組合物可以包含如上所述通常規(guī)定用于治療心力衰竭的第二治療藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物進(jìn)一步包含肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿劑、血管擴(kuò)張藥、內(nèi)皮素受體拮抗劑或HDAC抑制劑中的一種或多種。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含至少一種miRNA模擬物，其中所述的miRNA模擬物包含hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa_miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-133a(SEQIDNO15)、hsa_miR-422b(也稱為miR-378；SEQIDNO16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19),hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa_miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)或hsa-miR-lOb(SEQIDNO32)的序列。而在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含至少一種miRNA抑制劑，其中所述miRNA抑制劑包含與hsa-miR-125b(SEQIDNO2)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa_miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-26b(SEQIDNO30)或hsa-miR-382(SEQIDNO33)互補(bǔ)的序列。所述藥物組合物可以以任何合適的手段施用用于在此所述的任何用途，所述手段，例如口服，如以片劑、膠囊、顆粒或粉末的形式；舌下地；含服；胃腸外地，如通過皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、或腦池內(nèi)(intracistemal)注射或灌注技術(shù)(如作為無菌可注射水或非-水溶液或懸液)；經(jīng)鼻地，包括向鼻粘膜施用，如用吸入噴霧；局部地，如以乳劑(cream)或軟膏(ointment)的形式；或經(jīng)直腸如以栓劑的形式；以含有無毒的、藥學(xué)上可接受的載體后稀釋劑的劑量單位制劑的形式。如此處所應(yīng)用的，“藥學(xué)上可接受的載體”包括用于配制藥物，例如適合于施用給人的藥物時(shí)可接受的溶劑、緩沖液、溶液、分散介質(zhì)、包衣(coating)、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑(isotonicandabsorptiondelayingagent)等。包含miRNA抑制劑或miRNA模擬物的藥物組合物也可以通過導(dǎo)管系統(tǒng)或分離冠狀循環(huán)用于向心臟遞送治療劑的系統(tǒng)來給藥。用于給心臟遞送治療劑的不同的導(dǎo)管系統(tǒng)和冠狀血管系統(tǒng)在本領(lǐng)域是已知的。美國專利第6，416，510號(hào)；美國專利第6，716，196號(hào)；美國專利第6，953，466號(hào)；W02005/082440，WO2006/089340，美國專利公開第2007/0203445號(hào)，美國專利公開第2006/0148742號(hào)和美國專利公開第2007/0060907號(hào)公開了適用于本發(fā)明的一些基于導(dǎo)管遞送方法或冠狀分離法的非限制性實(shí)例，將他們?nèi)客ㄟ^提述并入本文。miRNA模擬物或miRNA抑制劑可以，例如，以適合于立即釋放或延長(zhǎng)釋放的形式施用。立即釋放或延長(zhǎng)釋放可以通過使用包含miRNA模擬物或miRNA抑制劑的合適的藥物組合物來實(shí)現(xiàn)，或者，特別是在延長(zhǎng)釋放的情況下，通過使用裝置如皮下植入物或滲透泵來實(shí)現(xiàn)。膠體分散體系，如大分子復(fù)合物、納米膠囊(nanocapsule)、微球、珠和包括水包油乳液、微團(tuán)(micelle)、混合的微團(tuán)和脂質(zhì)體的基于脂質(zhì)的體系可以被用作miRNA模擬物和miRNA抑制物的遞送運(yùn)載體。適用于將本發(fā)明的核酸遞送至心臟和骨骼肌組織的市售脂肪乳劑包括Intralipid、Liposyn、Liposynll、LiposynIII、Nutrilipid和其它類似脂質(zhì)乳劑。在體內(nèi)用作遞送運(yùn)載體的優(yōu)選的膠體體系是脂質(zhì)體(即，人工膜囊)。這些體系的制備和用途在本領(lǐng)域是已知的。美國5，981，505；美國6，217，900；6,383，512；美國5，783，565；美國7，202，227；美國6，379，965；美國6，127，170；美國5，837，533；美國6，747，014和WO03/093449中也公開了示例性的制劑，將它們?nèi)客ㄟ^題述并入本文。用于口服施用的示例性的組合物包括懸液，其可以包括，例如，用于賦予(imparting)大體積的微晶纖維素、作為助懸劑的海藻酸或海藻酸鈉、作為粘性增強(qiáng)劑的甲基纖維素和增甜劑或調(diào)味劑如本領(lǐng)域已知的那些；以及立即釋放的片劑，其可以含有，例如，微晶纖維素、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂和/或乳糖和/或其它賦形劑、粘合劑、增充劑(extender)、崩解劑、稀釋劑和潤(rùn)滑劑，如本領(lǐng)域已知的那些。所述miRNA模擬物和miRNA抑制劑也可以經(jīng)過口腔通過舌下和/或口腔含服施用來遞送。模壓片劑、壓縮片劑或冷凍干燥片劑是可以使用的示例性的形式。示例性的組合物包括將本發(fā)明的化合物與快速溶解的稀釋劑(如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或環(huán)糊精)一起配制的那些。高分子量賦形劑如纖維素(微晶粉末纖維素(avicel))或聚乙二醇(PEG)也可以包含在這些制劑中。這些制劑還可以包括以幫助粘膜粘附的賦形劑，如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(SCMC)、順丁烯二酸酐共聚物(如Gantrez)；和控制釋放的作用劑，如聚丙烯酸共聚物(如Carb0p01934)。為了便于配制和使用也可以加入潤(rùn)滑劑、助流劑、香味劑(flavor)、著色劑和穩(wěn)定劑。用于鼻的氣溶膠或吸入施用的示例性的組合物包括鹽水溶液，其含有，例如苯甲醇或其它合適的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑和/或其它增溶劑或分散劑如本領(lǐng)域已知的那些。用于胃腸外施用的示例性的組合物包括可注射溶液或懸浮液，其含有，例如，合適的非毒性、胃腸外可接受的稀釋劑(parenterallyacceptablediluent)或溶劑，如甘露醇、1，3_丁二醇、水、林格氏液(Ringer’ssolution)、等滲氯化鈉溶液、或其它合適的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑，包括合成的甘油一酯或甘油二酯，和脂肪酸，包括油酸或Cremaphor。用于直腸施用的示例性的組合物包括栓劑，其包含，例如，合適的非灌注-賦形齊U，如可可脂、合成的甘油酯或聚乙二醇，其在常溫下是固體，但在直腸腔內(nèi)液化和/或溶解以釋放藥物。用于局部施用的示例性的組合物包括局部的載體如Plastibase(用聚乙烯凝膠化的礦物油)。可以理解的是對(duì)任何特定的受試者來說具體的劑量水平和用藥頻率可以變化，并會(huì)取決于包括采用的具體化合物(如特殊的miRNA模擬物或miRNA抑制劑)的活性、代謝的穩(wěn)定性和化合物的作用的時(shí)長(zhǎng)、物種、年齡、體重、總體健康狀況、受試者的性別和飲食、施用的模式和時(shí)間、排泄的頻率、藥物組合和特定狀況的嚴(yán)重度在內(nèi)的多種因素。本發(fā)明也考慮了調(diào)節(jié)細(xì)胞中胎兒心臟基因程序(FGP)再活化的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括提供具有一種或多種miRNA抑制劑和miRNA模擬物的心臟細(xì)胞，其中一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物調(diào)整胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物的表達(dá)。術(shù)語“心臟細(xì)胞”指的是心肌細(xì)胞和/或心內(nèi)皮細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，所述術(shù)語包括心成纖維細(xì)胞和/或心臟中存在的其它細(xì)胞類型如平滑肌細(xì)胞(如在心血管壁中)，心臟神經(jīng)中的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等。胎兒心臟基因程序(FGP)的再活化是與心臟功能受損和不良預(yù)后相關(guān)的肥大和衰竭心臟的特有特征。(Kuwahara等，2003，EMBOJ.22(23)=6310-6321)β-肌球蛋白重鏈(βMyHC)、α-肌球蛋白重鏈(aMyHC)、心房鈉尿因子(atrialnatriureticfactor)(ANF)、腦鈉妝(brainnatriureticpeptide)(BNP)、SERCA2a和α-骨骼肌肌動(dòng)蛋白(Skα-肌動(dòng)蛋白)是反映FGP的活化和在心力衰竭中表達(dá)改變的標(biāo)志物基因，且可能不利地影響疾病的進(jìn)展。在一些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)胎兒心臟程序的至少一種標(biāo)志物的表達(dá)，其中所述胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物選自βMyHC,αMyHC、ANF、BNP、SERCA2a和骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白(skeletalα-actin)中。用于調(diào)節(jié)FGP的再活化的合適的miRNA抑制劑和miRNA模擬物包括選自下組的miRNA的一種或火種miRNA抑制劑或miRNA模擬物hsa-miR-542_5p(SEQIDNO:1)、hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa-miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa_miR150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(也稱%miR-378；SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO18),hsa-miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa-let-7a(SEQIDNO22)、hsa_miR-l(SEQIDNO23)、hsa_miR-28(SEQIDNO24)、hsa-miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let-7c(SEQIDNO:28)、hsa_miR-484(SEQIDNO:29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let-7d(SEQIDNO31)、hsa_miR-10b(SEQIDNO32)、hsa_miR-382(SEQIDNO33)>hsa-miR-92b(uauugcacucgucccggccucc；SEQIDNO48)>hsa-let-7b(ugagguaguagguugugugguu；SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(ugagguaggagguuguauaguu；SEQIDNO:50)禾口hsa-let-7g(ugagguaguaguuuguacaguu；SEQIDNO51)$一f胃中，一禾中$多禾中miRNA抑制劑或miRNA模擬物是hsa-miR-92a(SEQIDNO5),hsa-miR-100(SEQIDNO7)或hsa-miR-133b(SEQIDNO19)的模擬物或抑制劑。本發(fā)明還考慮監(jiān)測(cè)對(duì)受試者心力衰竭進(jìn)行的治療的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括在第一時(shí)間點(diǎn)從受試者獲得第一生物樣品，其中所述第一時(shí)間點(diǎn)是在心力衰竭的藥物治療方案開始之前；在第二時(shí)間點(diǎn)從受試者中獲得第二生物樣品，其中所述第二時(shí)間點(diǎn)是在心力衰竭的藥物治療方案開始之后；用miRNA陣列分析、mRNA陣列分析和定向蛋白質(zhì)組學(xué)表達(dá)分析處理第一生物樣品和第二生物樣品；并且比較來自第一生物樣品的miRNA、mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)數(shù)據(jù)和來自第二生物學(xué)樣品的表達(dá)數(shù)據(jù)以確定基因表達(dá)模式的改變，其中基因表達(dá)的改變指示所述藥物治療方案的效力。所述第一時(shí)間點(diǎn)和第二時(shí)間點(diǎn)可以間隔大約3至大約18個(gè)月、間隔大約3至大約12個(gè)月，或優(yōu)選間隔大約3至大約9個(gè)月。額外的生物樣品可以在藥物治療方案開始之后在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)從各患者獲得。在一些實(shí)施方案中，在藥物治療方案開始之后收集兩個(gè)或更多的樣品。在其它的實(shí)施方案中，在藥物治療方案開始之后收集三個(gè)或更多的樣品。這些樣品可以大約每3個(gè)月收集一次、大約每6個(gè)月收集一次、大約每9個(gè)月收集一次或大約每12個(gè)月收集一次。用于治療受試者的藥物治療方案可以是治療心力衰竭的任何標(biāo)準(zhǔn)藥物治療方案，如ACE抑制劑(如卡托普利、賴諾普利等)、β_阻斷劑(如美托洛爾、卡維地洛)、醛固酮拮抗劑、利尿劑(如呋塞米、螺內(nèi)酯(spirolactone)、依普利酮)和地高辛。藥物治療方案也可以是包括施用在本文中所披露的一種或多種miRNA模擬物或miRNA抑制劑的任何治療方法。藥物治療的劑量或形式可以根據(jù)在治療后一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)獲得的表達(dá)譜數(shù)據(jù)來調(diào)整。本發(fā)明方法允許為治療特定的患者中的心力衰竭而進(jìn)行藥物治療方案的調(diào)整。通過如下的附加實(shí)施例進(jìn)一步示例本發(fā)明，而不應(yīng)解釋成對(duì)本發(fā)明的限制。本申請(qǐng)通篇引用的所有參考文獻(xiàn)、專利和公開的專利申請(qǐng)的內(nèi)容，以及附圖，全部通過題述并入本文。實(shí)施例實(shí)施例1.miRNA在衰竭和非衰竭的人心臟中差異性地表達(dá)使用基于陣列的技術(shù)，比較來自非衰竭(NF)和衰竭的人心臟的人心臟組織中心源miRNAs(cardiacderivedmiRNA)的表達(dá)水平。衰竭心臟包括由特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(IDC)和缺血性心肌病(ISC)導(dǎo)致的那些。470個(gè)微小RNA的生物信息學(xué)分析(SangermiRBaseRelease9.0)被用于鑒定在非衰竭相對(duì)于衰竭心臟中差異表達(dá)的多種miRNAs。揭示了一種獨(dú)特的miRNA表達(dá)“指紋”，其中特定miRNAs在表達(dá)上增加或者降低。這些miRNAs代表心力衰竭的生物標(biāo)志物，也是心力衰竭治療的新的治療靶。如圖IA和圖2所示，比較NF與IDC心臟之間的miRNA表達(dá)，注意到22種miRNAs的表達(dá)發(fā)生改變，其中6種與NF心臟相比在IDC心臟中表達(dá)增加(hsa_miR-125b、hsa-miR-195、hsa-miR-100、hsa_miR-181b、hsa_miR-23a禾口hsa-miR-382)，且其中16種與NF心臟相比在IDC心臟中表達(dá)降低(hsa-miR-133a、hsa_miR-133b、hsa-miR-221、hsa—miR-197、hsa_miR-30c、hsa-miR-92、hsa-miR-22、hsa-miR-486、hsa-miR-542_5p、hsa-miR-139、hsa-miR-150、hsa—miR—lOb、hsa-miR-483、hsa-miR-594、hsa_miR-422b(也稱為miR-378)和hsa_miR-20a)?；赟angermiRBase9.2版，目標(biāo)成熟miRNAs的序列示于表1中(下文)。如圖IB和圖2所示，比較NF與ISC心臟之間的miRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)22種miRNAs表達(dá)發(fā)生改變，與NF心臟相比，其中6種在ISC心臟中表達(dá)增加(hsa-miR-195、hsa-miR-100、hsa-miR-342、hsa-miR-28、hsa_miR-199a和hsa_miR-26b)，以及16種在ISC中表達(dá)下降(hsa-miR-92、hsa-miR-221、hsa-miR-486、hsa-miR-133a、hsa-miR-150、hsa_miR-422b(也禾爾為miR-378)、let_7f、let-7a>hsa-miR-Uhsa-miR-222>let_7c、hsa-miR-133b>hsa-miR-224、hsa-miR-484、hsa-miR-594禾口let_7d)?；赟angermiRBasever.9.2，選擇的成熟的miRNAs序列示于表1中(下文)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>**hsa-miR-594是miRBase中注釋的tRNA基因的片段。t在SangermiRBase數(shù)據(jù)庫中hsa_miR-422b已被重命名為miR-378(版本11.0)J在SangermiRBase數(shù)據(jù)庫中has-miR-92已被重命名為miR_92a(版本11.0)圖3顯示NF與IDC以及NF與ISC之間人心臟miR表達(dá)數(shù)據(jù)的比較，ρ<0.05(不成對(duì)t-檢驗(yàn))。3種miRNAs的表達(dá)在IDC中比NF中有顯著增加(hsa-miR-125b、hsa_miR-195禾口hsa-miR-100)，而6種miRNAs的表達(dá)在IDC中比NF心臟中顯著降低(hsa-miR-22、hsa-miR-92、hsa-miR-221、hsa-miR-486、hsa-miR-30c禾口hsa_miR-133a)。5種miRNAs的表達(dá)在ISC中比NF心臟中顯著增力Π(hsa-miR-195、hsa-miR-100、hsa-miR-342、hsa-miR-28和hsa_miR-199a)，而10種miRNAs在ISC心臟中比NF中的表達(dá)顯著增加(hsa-miR-92、hsa-miR-221、hsa-miR-486、hsa-miR-133a、hsa-miR-150、hsa_miR-422b(也稱為miR-378)、let_7f、let_7a、hsa-miR-l和hsa-miR-222)。比較NF與IDC心臟以及NF與ISC心臟的miRNA表達(dá)水平的綜合分析結(jié)果表明幾種miRNA的一致性調(diào)節(jié)(concordantregulation)，和以唯一的、心力衰竭亞型特異性的方式調(diào)節(jié)的miRNA(圖2)。miRNAshsa-miR-92、hsa-miR-221、hsa-miR-486、hsa-miR-150和hsa-miR-422b在IDC和ISC心臟中都顯著下調(diào)，而hsa-miR-195和hsa-miR-100在IDC和ISC心臟中都是上調(diào)的。后一結(jié)果與Rooij等人，2006的研究是一致的，Rooij等人先前證明了在衰竭的(IDC)人心臟中以及用機(jī)械_或遺傳誘導(dǎo)病理性肥大的轉(zhuǎn)基因小鼠中的miR-195都是上調(diào)的。從完整的數(shù)據(jù)集中得到來自Sanger人miRBase9.O數(shù)據(jù)集的每一個(gè)可檢測(cè)的miRNAs的相對(duì)表達(dá)的詳細(xì)分析。所有的心臟具有介于87到238之間(在有可能的454中)的可定量檢測(cè)的miR轉(zhuǎn)錄物(沒有顯示數(shù)據(jù))。具體的方法微小RNA提取從來自6例非衰竭(NF)、5例特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(IDC)和5例缺血性心肌病(ISC)患者的人心臟的左心室提取了miRNA。所有患者都是50-65歲之間的男性。在心臟移植的時(shí)候，患者接受包括ACE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、洋地黃、抗凝劑、胰島素、β-激動(dòng)劑和硝酸鹽的多種藥物制劑。通過超聲波心動(dòng)描記法評(píng)估在心臟移植時(shí)各患者的心臟表現(xiàn)。每個(gè)組的射血分?jǐn)?shù)百分比如下NF:64士4.3%；IDC:12士3.1%；以及ISC18.6士3.5(平均值士SEM)。提取使用mirVanaTM試劑盒(Ambion)根據(jù)廠商的建議進(jìn)行。陣列分析樣品提交給LCSciences,LLC,休斯頓，德克薩斯進(jìn)行微小RNA的檢測(cè)微陣列服務(wù)。用生物信息學(xué)分析鑒定470個(gè)微小RNA的相對(duì)表達(dá)(SangermiRBaseRelease9.0)。這種分析鑒定了多種在非衰竭(NF)與衰竭心臟(ISC和/或IDC)中差異性表達(dá)的miRNA。檢驗(yàn)了兩種衰竭心臟類型，其源自那些患有特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病(IDC)的患者或源自患有缺血性心肌病(ISC)的那些患者。在NF組中，檢驗(yàn)了6例心臟(n=6)。比較NF與IDC心臟(η=5)，發(fā)現(xiàn)12種miRNA在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著變化(ρ<0.05,不成對(duì)t_檢驗(yàn))，其中3種增加及9種降低，如圖IA所示。在NF與ISC心臟(η=5)之間的類似分析揭示了16種miRNAs的表達(dá)的變化，其中5種增加，及11種下降，如圖IB所示。在圖2中顯示了在微陣列上的平均miR表達(dá)，其為在人心臟中，所有與IDC或者ISC比較在NF中的miR表達(dá)的顯著變化。miRNART-PCR使用TaqMan微小RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(ABI)根據(jù)廠家的建議進(jìn)行miRNA的逆轉(zhuǎn)錄。簡(jiǎn)言之，將5ng的miRNA與dNTP、MultiScribe逆轉(zhuǎn)錄酶和對(duì)靶miRNA特異性的引物混合。將得到的cDNA稀釋15倍，并用于PCR反應(yīng)中。根據(jù)廠家(AppliedBiosystems)的建議進(jìn)行PCR。簡(jiǎn)言之，將cDNA與對(duì)靶miRNA特異性的TaqMan測(cè)定組合，并使用ABI7300進(jìn)行PCR反應(yīng)。圖4顯示RT-PCR確認(rèn)(validation)的6例非衰竭(NF)、5例特發(fā)性心肌病(IDC)和5例缺血性心肌病(ISC)患者的人心臟的miRNA表達(dá)。由于這種微小RNA的表達(dá)水平?jīng)]有變化，所以將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為miRNA-24。當(dāng)與NF心臟比較時(shí)，IDC和ISC衰竭心臟的miR-92和miR-133b的表達(dá)顯著降低，而當(dāng)與NF心臟比較時(shí)，miR-100和miR-195的表達(dá)顯著增加。由于miR-133a和miR_133b的序列高度相似，進(jìn)行其中將miR_133a或者miR_133b抑制劑或模擬物過表達(dá)的實(shí)驗(yàn)。通過RT-PCR得到的數(shù)據(jù)證實(shí)了檢測(cè)對(duì)于每種miR是特異性的。因此，miR-133a的過表達(dá)表明miR-133a的表達(dá)增加，而miR_133b的豐度卻沒有變化。轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果得到相同程度的特異性。實(shí)施例2.通過調(diào)節(jié)特異性的miRNA可以調(diào)節(jié)胎兒心臟基因程序胎兒心臟基因程序(FGP)的再活化為與受損的心臟功能和不良預(yù)后相關(guān)的肥大和心力衰竭的典型特征。(Kuwahara等，2003，EMBOJ.22(23)6310-6321)心臟α-肌球蛋白重鏈(αMyHC)、β-肌球蛋白重鏈(βMyHC)、心房鈉尿因子(ANF)、腦鈉肽(BNP)、骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白(Sk-肌動(dòng)蛋白)和鈣ATP酶屬于其表達(dá)指示FGP活化并在心力衰竭中有變化的基因，且可能不利地影響疾病的進(jìn)展。例如，腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)在擴(kuò)張性心肌病的天然歷史中起到重要的作用。在心臟應(yīng)激(cardiacstress)期間β-腎上腺素能受體(βI-AR和i32-AR)的慢性活化通過包括基因表達(dá)的改變的機(jī)制最終損害衰竭的心臟。Sucharov等人之前在2006年報(bào)道了新生大鼠心室肌細(xì)胞中用異丙腎上腺素(β_腎上腺素能受體激動(dòng)劑)刺激β-AR引起人心臟胎兒和/或成人基因啟動(dòng)子的相對(duì)活性的“胎兒”應(yīng)答，其包括人和大鼠α-肌球蛋白重鏈(a-MyHC)啟動(dòng)子的阻抑，和同時(shí)的人心房鈉尿肽(ANP)和大鼠βMyHC啟動(dòng)子的活化(Sucharov等，2006，Abetal-adrenergicreceptorCaMkinaseII-dependentpathwaymediatescardiacmyocytefetalgeneinductionAmJPhysiolHeartCircPhysiol291:H1299_H1308)。其之前也顯示了啟動(dòng)子的變化與內(nèi)源基因表達(dá)的變化相關(guān)聯(lián)，所述內(nèi)源基因表達(dá)是通過mRNA表達(dá)測(cè)量的。在本實(shí)施例中描述的實(shí)驗(yàn)的目的是在不存在和存在β"腎上腺素能受體刺激時(shí)測(cè)定特定的miRNA的表達(dá)或抑制對(duì)胎兒基因程序的活化的影響。使用Amaxa技術(shù)(AmaxaAG,Cologne,德國)將miRIDIAN微小RNA模擬物和抑制劑(Dharmacon)轉(zhuǎn)染至新生大鼠心室肌細(xì)胞(NRVM)。使用的Dharmacon模擬物和抑制劑的產(chǎn)品編號(hào)如下hsa-miR-92模擬物C-00030_02；基于miR-92的Sanger序列的雙鏈miRNA；hsa-miR-92抑制劑1-300030-02，基于miR-92的基于Sanger的序列的單鏈miRNA:uauugcacuugucccggccugu(SEQIDNO:5)。hsa-miR-100模擬物C-300036_01；基于miRlOO的Sanger序列的雙鏈miRNA；hsa-miR-100抑制劑；1-300036-01；基于miR-100^STSanger的Ιψ歹Ij的Jp-miRNA:aacccguagauccgaacuugug(SEQIDNO7)。hsa-miR-133b模擬物C-300199_01；基于miR133b的Sanger序列的雙鏈miRNA；hsa-miR-133b抑制劑1-300199_01；基于miR133b的基于Sanger的序列的單鏈miRNAuugguccccuucaaccagcua(SEQIDN0:19)。將2.4x106NRVM懸浮在用于心肌細(xì)胞的合適的Amaxa溶液中，并與20微摩爾的模擬物或抑制劑混合。使用心肌細(xì)胞程序?qū)?xì)胞進(jìn)行電穿孔，其導(dǎo)致短RNA的95%的轉(zhuǎn)染效力。將含有血清的培養(yǎng)基加入細(xì)胞。24小時(shí)后，用無血清培養(yǎng)基置換所述培養(yǎng)基。在轉(zhuǎn)染72小時(shí)后收獲細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)用腎上腺素能激動(dòng)劑異丙腎上腺素(I(T7M)處理細(xì)胞亞組。使用TRIZol(Invitrogen)從收獲的細(xì)胞提取mRNA。基本按照廠家的說明使用iScript(Bio-Rad)制備含有多聚腺苷酸的mRNA的cDNA。通常，在RT-PCR反應(yīng)中使用0.Ing的cDNA、12.5nM的各種引物和PowerSyberGreenPCRMasterMix(ABI)。使用ABI7300系統(tǒng)進(jìn)行反應(yīng)。使用的引物示于表2中(見下面)。根據(jù)如在實(shí)施例1中所述的ABI合成miRNAcDNA,并進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。表2:用于RT-PCR反應(yīng)的引物的序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>如上所述，用具有受體激活劑異丙腎上腺素(ISO)的β_腎上腺素能受體進(jìn)行的刺激活化胎兒基因程序(FGP)。FGP的ISO介導(dǎo)的誘導(dǎo)是通過對(duì)成年基因、a-肌球蛋白重鏈(a-MyHC)和SERCA的阻抑，以及胎兒基因、b_型鈉尿肽(BNP)、心房利納因子(ANF)、骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白和β-肌球蛋白重鏈(β-MyHC)的上調(diào)表明的。圖5顯示在不存在和存在異丙腎上腺素時(shí)用miR-92模擬物或miR-92抑制劑轉(zhuǎn)染的新生兒心肌細(xì)胞中的胎兒基因程序(FGP)表達(dá)。模擬物和抑制劑亂序的HiiR(Dharmac0n)被用作對(duì)照(分別為Con-M和Con-I)。用模擬物或抑制劑對(duì)照轉(zhuǎn)染的ISO-處理的NRVM顯示了αMyHC和SERCA降低的表達(dá)和ANF、BNP,α-骨骼肌肌動(dòng)蛋白和βMyHC增加的表達(dá)，其為FGP的活化的特征。由于在心力衰竭中，miR-92是下調(diào)的，我們假定對(duì)miR-92的抑制(即，用miR-92抑制劑治療)會(huì)導(dǎo)致誘導(dǎo)對(duì)胎兒基因程序的誘導(dǎo)，并假設(shè)miR-92的上調(diào)(S卩，用miR-92模擬物治療)會(huì)防止對(duì)胎兒基因程序的誘導(dǎo)。如與對(duì)照組相比，觀察到用miR-92模擬物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中ANF、BNP和α-骨骼肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)的輕微增加，以及SercamRNA的降低(圖5)。然而，一般而言，對(duì)miR-92的抑制或上調(diào)對(duì)胎兒或成人基因表達(dá)調(diào)節(jié)具有最低限度的影響。這些結(jié)果表明在心力衰竭中miR-92的下調(diào)可能涉及調(diào)節(jié)心力衰竭表型的其它途徑。圖6顯示在存在和不存在異丙腎上腺素時(shí)用miR-100模擬物或miR-100抑制劑轉(zhuǎn)染的新生兒心肌細(xì)胞中的胎兒基因程序(FGP)表達(dá)。模擬物和抑制劑亂序miR被用作對(duì)照(分別為Con-M和Con-I,Dharmacon)。用miR-100模擬物轉(zhuǎn)染心室肌細(xì)胞導(dǎo)致對(duì)成人基因αMyHC和SERCA的阻抑，以及增強(qiáng)的ISO-介導(dǎo)的對(duì)胎兒基因ANF和βMyHC的上調(diào)。令人感興趣的是，對(duì)miR-100的下調(diào)防止了對(duì)αMyHC和SERCA的ISO-介導(dǎo)的阻抑，但是沒有防止對(duì)胎兒亞型的ISO-誘導(dǎo)作用(圖6)，表明miR-100的抑制作用特異性地調(diào)節(jié)涉及成人亞型的ISO-介導(dǎo)的阻抑的基因的表達(dá)。圖7顯示了在存在和不存在異丙腎上腺素時(shí)，用miR-133b模擬物或miR-133b抑制劑轉(zhuǎn)染的新生兒心肌細(xì)胞中的胎兒基因程序(FGP)表達(dá)。模擬物和抑制劑亂序miR(Dharmacon)被用作對(duì)照(分別為Con-M和Con-I)。對(duì)miR_133b的阻抑導(dǎo)致與對(duì)照(Con-I)相比小但是普遍的對(duì)所分析基因的上調(diào)。然而，用miR-133b模擬物轉(zhuǎn)染的miR-133b的上調(diào)防止了對(duì)αMyHC和SERCA的ISO-介導(dǎo)的下調(diào)，ISO-介導(dǎo)的對(duì)MyHC的上調(diào)，以及減弱的ISO-介導(dǎo)的對(duì)BNP的上調(diào)(圖7)。當(dāng)與對(duì)照(Con-M)比較時(shí)，miR_133b的過表達(dá)也導(dǎo)致對(duì)骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白和βMyHC的阻抑，而BNP和ANF的表達(dá)沒有變化。這些結(jié)果表明miR-133b表達(dá)的變化在調(diào)節(jié)胎兒基因程序中具有重要的作用，其類似于在Care等(NatMed(2007)，Vol.13(5):613_618)中所描述的那樣，Care等人證明了對(duì)miR-133的上調(diào)防止或降低了α-腎上腺素能對(duì)肥大基因程序的誘導(dǎo)。這些發(fā)現(xiàn)表明miR-133家族可為心臟病中基因表達(dá)的全局調(diào)節(jié)子(globalregulator)。為了確認(rèn)各miRNA模擬物或抑制劑分別對(duì)靶miRNA產(chǎn)生了上調(diào)或下調(diào)，如上所述將miR-92、miR-100和miR_133b的模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染入NRVM。通過RT-PCR測(cè)試各miRNA的表達(dá)水平。示于圖8的結(jié)果顯示miRNA模擬物導(dǎo)致靶miRNA的過表達(dá)，而miRNA抑制劑阻抑特異性miRNA的表達(dá)，并且miR這種改變的表達(dá)水平保持72小時(shí)。實(shí)施例3.miR-133b和細(xì)胞肥大由于對(duì)miR_133b的抑制誘導(dǎo)胎兒亞型BNP、骨骼肌α-肌動(dòng)蛋白和ANF的表達(dá)，并且miR-133b的過表達(dá)阻斷ISO-介導(dǎo)的對(duì)胎兒基因程序的活化(實(shí)施例2)，所以測(cè)試了miR-133b的過表達(dá)或抑制對(duì)細(xì)胞肥大的影響。如在實(shí)施例2中所述，用模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染NRVM，并用抗-α-輔肌動(dòng)蛋白(anti-actinin)抗體染色。在轉(zhuǎn)染后用異丙腎上腺素處理一些細(xì)胞。根據(jù)Harrison等(Molecular&CellularBiology(2004)Vol.24(24)10636-10649)實(shí)施免疫熒光法。簡(jiǎn)而言之，用TBST洗滌細(xì)胞，并用10%甲醛固定20分鐘。再次用TBST洗滌細(xì)胞，并用0.Triton-X溫育額外的30分鐘。然后用TBST中的1%BSA阻斷細(xì)胞1小時(shí)，接著與抗-輔肌動(dòng)蛋白抗體的1500的稀釋一起溫育1小時(shí)。接著，與Alexa594的抗-小鼠抗體的11000稀釋和2g/ml的Hoechest染色劑一起溫育1小時(shí)。用裝配有數(shù)碼相機(jī)(ZeissAxioCam)和ZeissAxioVision3.0.6.36版成像軟件的熒光顯微鏡(NikonE800)在40倍放大率下進(jìn)行拍照。使用ImageJ軟件程序(NIH)定量各種狀況的3個(gè)不同區(qū)域的30個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞表面積。如圖9和10所示，miR-133b的下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞尺寸的增加，而miR_133b的過表達(dá)顯著地降低ISO-介導(dǎo)的心肌細(xì)胞細(xì)胞尺寸的增加。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了這樣的觀點(diǎn)miR-133b可為心肌細(xì)胞肥大的全局調(diào)節(jié)子。實(shí)施例4.發(fā)現(xiàn)基于miR的靶的SAGE方法圖11中的示意圖描述了用于鑒定心力衰竭的治療性靶的基因表達(dá)系列分析(SAGE)方法。與心力衰竭的臨床試驗(yàn)相關(guān)的患有心力衰竭(HF)的患者，在三個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行任擇的心內(nèi)膜心肌活檢。第一時(shí)間點(diǎn)為β-阻斷劑(BB)治療開始之前，其它時(shí)間點(diǎn)為治療開始之后的3個(gè)月和12個(gè)月。對(duì)于每位患者，用miRNA陣列分析、mRNA(Afflymetrix)陣列分析和(定向)蛋白質(zhì)組學(xué)表達(dá)分析處理各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的活檢。來自相同樣品的miR/mRNA/蛋白質(zhì)表達(dá)的唯一組合同時(shí)表示在多種水平檢驗(yàn)基因表達(dá)模式中的變化的唯一時(shí)機(jī)。因?yàn)閙iRNA表達(dá)影響mRNA表達(dá)，其接著又影響蛋白質(zhì)表達(dá)，由此(here-to-for)，可以檢測(cè)到調(diào)節(jié)性對(duì)照的控制點(diǎn)之間的不明確的關(guān)聯(lián)(linkage)。此外，來自相同患者的不同時(shí)間的樣品分析消除了與個(gè)人與個(gè)人之間的遺傳變異相關(guān)的顯著問題。通過比較來自相同患者的不同時(shí)間點(diǎn)(例如治療后3個(gè)月對(duì)治療前等)的基因表達(dá)水平，可以鑒定治療性靶。基因表達(dá)水平也可以與臨床結(jié)果相關(guān)聯(lián)。實(shí)施例5.用β-阻斷劑治療處理的人患者中miRNA表達(dá)的改變?yōu)榱诉M(jìn)一步說明心力衰竭中miRNA的重要性，在用β-阻斷劑治療之前或之后評(píng)估人患者中miRNA的表達(dá)。在心力衰竭末期(治療之前)，用阻斷劑治療處理后3個(gè)月和處理后12個(gè)月從5位患者獲得了系列心臟活檢。對(duì)每一個(gè)患者的每一個(gè)樣品進(jìn)行miRNA陣列分析以確定幾種在衰竭的心臟中是下調(diào)的miRNAs的表達(dá)水平，包括miR-1、miR_19b、miR-133b、miR-133a、miR-30d、miR-92a、miR-208b、miR-499和miR-let_7g的表達(dá)水平。通過如實(shí)施例1所述的RT-PCR確認(rèn)在miRNA陣列分析中的表達(dá)水平。RT-PCR的結(jié)果示于圖12-16中。將特定miRNA的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化為用作對(duì)照的miR_370(右側(cè)的組)或小RNARNU66(左側(cè)的組)。在心力衰竭末期(A)、治療后3個(gè)月(B)和治療后12個(gè)月(C)評(píng)估m(xù)iRNA的表達(dá)。在4個(gè)對(duì)β-阻斷劑治療有響應(yīng)的患者(20、21、25和34)的治療后樣品中miRNA的表達(dá)是上調(diào)的。在獲得自對(duì)治療無應(yīng)答的患者(患者103)的樣品中特定的miRNAs沒有上調(diào)。結(jié)果顯示miRNAs的亞組的表達(dá)水平與心力衰竭的嚴(yán)重性有關(guān)，并且可以被用作生物標(biāo)志物以如實(shí)施例4中所述的監(jiān)測(cè)患者對(duì)具體藥物治療的應(yīng)答?？梢愿鶕?jù)這些miRNAs中一種或多種的表達(dá)水平調(diào)整藥物治療的劑量或類型。實(shí)施例6.miR-92和miR-133的靶是蛋白激酶Cε、磷酸二酯酶IA和鈣調(diào)蛋白TargetScan4·2(可在TargetScan(靶掃描)網(wǎng)頁得到)對(duì)蛋白激酶Cε(PKCε)和磷酸二酯酶IA(PDElA)mRNAs進(jìn)行的3，UTR分析顯示miR_92a(以前稱為miR-92)的可能的靶位點(diǎn)。為了測(cè)試miR-92a是否靶向這兩種mRNAs，將新生大鼠心肌細(xì)胞用miR-92a模擬物轉(zhuǎn)染，導(dǎo)致miR-92a過表達(dá)，或用miR-92a抑制劑轉(zhuǎn)染，導(dǎo)致miR_92a的下調(diào)。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)收獲細(xì)胞，并用Western印跡分析細(xì)胞溶解物。通過miR_92a抑制劑對(duì)miR-92a的下調(diào)導(dǎo)致PKCε(圖17Α)和PDE1A(圖17B)蛋白水平的上調(diào)。通過miR_92a模擬物進(jìn)行的對(duì)miR-92a的上調(diào)導(dǎo)致了對(duì)PKCε(圖17Α)和PDE1A(圖17B)表達(dá)的阻抑。通過靶掃描對(duì)鈣調(diào)蛋白mRNA的3’UTR進(jìn)行了類似的分析。該分析顯示了miR_133b可能的靶位點(diǎn)。為了測(cè)試miR-133b是否靶向鈣調(diào)蛋白，將新生大鼠心肌細(xì)胞用miR-133b模擬物(導(dǎo)致miR-133b過表達(dá))或miR-133b抑制劑(導(dǎo)致miR_133b下調(diào))轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)收獲細(xì)胞，并用RT-PCR分析鈣調(diào)蛋白mRNA表達(dá)(圖18A)。用Western印跡分析了鈣調(diào)蛋白的蛋白質(zhì)表達(dá)(圖18C)。通過miR-133b抑制劑進(jìn)行的對(duì)miR-133b的下調(diào)導(dǎo)致了鈣調(diào)蛋白mRNA和蛋白質(zhì)水平的上調(diào)，而通過miR-133b模擬物進(jìn)行的對(duì)miR-133b的上調(diào)對(duì)鈣調(diào)蛋白表達(dá)的影響很小。為了測(cè)定miR_133b是否對(duì)鈣調(diào)蛋白3’UTR有直接的影響，將新生大鼠心臟細(xì)胞用miR-133b模擬物或miR-133b抑制劑和包含與螢光素酶在3，UTR連接的鈣調(diào)蛋白的構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染(圖18B)。螢光素酶測(cè)定的結(jié)果證實(shí)了mRNA和蛋白表達(dá)分析的發(fā)現(xiàn)。用miR_133b模擬物的轉(zhuǎn)染在螢光素酶水平方面沒有產(chǎn)生顯著的改變。然而，miR-133b抑制劑的轉(zhuǎn)染導(dǎo)致了螢光素酶的上調(diào)，證明鈣調(diào)蛋白是miR-133b的直接的靶。綜上，這些結(jié)果顯示PKCε和PDElA是miR_92a的靶，而鈣調(diào)蛋白是miR_133b的靶。所有這三個(gè)靶都與導(dǎo)致心力衰竭的心肌病的發(fā)展有關(guān)。應(yīng)該理解到披露的本發(fā)明不僅僅限于描述的特定的方法學(xué)、方案和物質(zhì)，因?yàn)檫@些均可變化。還應(yīng)該理解這里所用的術(shù)語僅僅是為了描述特定的實(shí)施方案的目的，而不是試圖限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅受限于所附的權(quán)利要求。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，或者能夠確認(rèn)使用不超過常規(guī)實(shí)驗(yàn)，在本文中所述的本發(fā)明的具體的實(shí)施方案的許多等價(jià)物。這種等價(jià)物意欲包含在所附的權(quán)利要求中。參考文獻(xiàn)Lloyd-Jones,D.Μ.etal·Lifetimeriskfordevelopingcongestiveheartfailure:theFraminghamHeartStudy.Circulation106，3068-72(2002)AmericanHeartAssociation.HeartDiseaseandStrokeStatistics—2003Update，AmericanHeartAssociation,Dallas,Tex.，2003Bartel,2004Cell，116，281-297Ambros,2003MicroRNApathwaysinfliesandwormsgrowth,death，fat，stressandtiming.Cell113:673-676Xuetal.,2003TheDrosophilamicroRNAMir-14suppressescelldeathandisrequiredfornormalfatmetabolism.Curr.Biol.13790~795Landgrafetal,2007AMammalianmicroRNAExpressionAtlasBasedonSma11RNALibrarySequencing.Cell129:1401—14Pfeffer，S.etal.，2004Identificationofvirus-encodedmicroRNAs.Science304:734_736Calin，GAetal.，2004HumanmicroRNAgenesarefrequentlylocatedatfragilesitesandgenomicregionsinvolvedincancers.Proc.Natl.Acad.Sci.USAlOl2999-3004CalinGAetal.，2002Frequentdeletionsanddownregulationofmicro-RNAgenesmiR15andmiR16at13ql4inchroniclymphocyticleukemia.Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(24):15524_15529Careetal.，2007，MicroRNA-133controlscardiachyPertrophy,NatureMed.13(5):613_618Chengetal.，2007，MicroRNAsareaberrantIyexpressesinhypertrophicheart,AmJ.Pathol170:1831-1840Sayedetal.，2007，MicroRNAsplayanessentialroleinthedevelopmentofcardiachypertrophy,Circ.Res.100:416_424Yangetal.，2007Themuscle-specificmicroRNAmiR-1regulatescardiacarrhythmogenicpotentialbytargetingGJAlandKCNJ2，NatureMed.13(4)486-491vanRooijetal·，2007，Controlofstress-dependentcardiacgrowthandgeneexpressionbyamicroRNA,Science316:575_579vanRooijetal.，2006，Asignaturepatternofstress-responsivemicroRNAsthatcanevokecardiachypertrophyandheartfailure.PNAS10318255-18260Pfeffer,S.etal.,2004Identificationofvirus-encodedmicroRNAs.Science304:734_736Schenaetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:1061410619，1996Helleretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:21502155,1997HutvaRneretal.2004,SequencespecificinhibitionofsmallRNAfunction,PLoSBiology2(4):0465_0475Meistereta1.2004,Sequence-specificinhibitionofmicroRNA-andsiRNA-inducedRNAsilencing,RNA10544-550Kuwaharaetal.，2003，EMBOJ.22(23)6310-6321Sucharovetal.,2006,Abetal-adrenergicreceptorCaMkinaseII-dependentpathwaymediatescardiacmyocytefetalgeneinductionAmJPhysiolHeartCircPhysiol291:H1299_H1308權(quán)利要求診斷或預(yù)后受試者中心力衰竭的方法，該方法包括a.確定來自所述受試者的生物樣品中一種或多種miRNA的表達(dá)水平；知b.將所述生物樣品中一種或多種miRNA的表達(dá)水平與標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNA的水平比較，其中所述生物樣品中至少一種或多種miRNA的表達(dá)水平與所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNA的水平相比的差異對(duì)心力衰竭是診斷性和預(yù)后性的。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種miRNA選自hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO:3)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa-miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa_miR-139(SEQIDNO:6)、hsa_miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa_miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDN0:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa_let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa_miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-1(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO30)、hsa-let_7d(SEQIDNO31)、hsa-miR-10b(SEQIDNO:32)、hsa_miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa-let-7b(SEQIDNO49)、hsa_let_7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO51)。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述一種或多種miRNA選自:hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO19)、hsa-miR-222(SEQIDNO20)、hsa_let_7a(SEQIDNO22),hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)和hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)。4.權(quán)利要求3的方法，其中所述一種或多種miRNA選自hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa-miR-92a(SEQIDNO5),hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-486(SEQIDN0:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)和hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)。5.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括c.基于與所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中一種或多種miRNA的水平相比的所述生物樣品中一種或多種miRNA的水平診斷心力衰竭的類型，其中所述一種或多種miRNA的水平對(duì)缺血性心肌病或特發(fā)性擴(kuò)張性心肌病是診斷性的。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述一種或多種miRNA選自hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO14),hsa-miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa_miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-let-7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)和hsa-miR-199a(SEQIDNO25)。7.治療或預(yù)防受試者中心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的方法，包括向受試者的心臟細(xì)胞施用治療有效量的miRNA模擬物或miRNA抑制劑。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述miRNA模擬物或miRNA抑制劑為選自下組的miRNA中的一種或多種的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa_miR-100(SEQIDNO7)、hsa_miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa_miR-222(SEQIDNO20)、hsa-miR-224(SEQIDNO21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO30)、hsa-let_7d(SEQIDNO31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO:32)、hsa-miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa_let_7b(SEQIDNO:49)、hsa-let-7e(SEQIDNO:50)和hsa_let_7g(SEQIDNO:51)。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述miRNA模擬物包含hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO:22)、hsa-miR-l(SEQIDNO23)、hsa_miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO28),hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)或hsa-miR-lOb(SEQIDNO:32)的序列。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述miRNA模擬物包含hsa-miR-133b(SEQIDNO19)的序列。11.權(quán)利要求8的方法，其中所述miRNA抑制劑包含與hsa-miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-195(SEQIDNO:4)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-26b(SEQIDNO30)或hsa-miR-382(SEQIDNO33)互補(bǔ)的序列。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述miRNA抑制劑包含與hsa-miR-100(SEQIDNO:7)互補(bǔ)的序列。13.權(quán)利要求8的方法，其中所述miRNA抑制劑為微小RNA拮抗劑(antagomir)。14.權(quán)利要求7的方法，進(jìn)一步包括向受試者施用第二心臟治療。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述第二心臟治療選自下組正性肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿劑、血管擴(kuò)張藥、內(nèi)皮素受體拮抗劑和HDAC抑制劑。16.權(quán)利要求14的方法，其中所述第二心臟治療是與所述miRNA模擬物或miRNA抑制劑共施用的。17.權(quán)利要求14的方法，其中所述第二心臟治療是在所述miRNA模擬物或miRNA抑制劑之前或之后施用的。18.治療或預(yù)防受試者心力衰竭或與心力衰竭相關(guān)的疾病或狀況的方法，包括向受試者施用藥物組合物，其中所述藥物組合物包含至少一種miRNA模擬物或至少一種miRNA抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述至少一種miRNA模擬物或至少一種miRNA抑制劑是選自下組的miRNA中的一種或多種的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa-miR-125b(SEQIDNO2)、hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa-miR-92a(SEQIDNO:5)、hsa-miR-139(SEQIDNO:6)、hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa-miR-483(SEQIDNO:8)、hsa-miR-22(SEQIDNO:9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa-miR-342(SEQIDNO:14)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa-miR-28(SEQIDNO24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-20a(SEQIDNO:27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO31),hsa-miR-10b(SEQIDNO:32)、hsa_miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa-let-7b(SEQIDNO:49)、hsa_let_7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO51)。20.權(quán)利要求19的方法，其中所述至少一種miRNA模擬物包含hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-92a(SEQIDNO5),hsa-miR-139(SEQIDNO6),hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa-miR-486(SEQIDNO:11)、hsa-miR-150(SEQIDNO12)、hsa-miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa_miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let_7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa-miR-222(SEQIDNO:20)、hsa-miR-224(SEQIDNO:21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-1(SEQIDNO23)、hsa_miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO:28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)或hsa-miR-lOb(SEQIDNO32)序列。21.權(quán)利要求19的方法，其中所述至少一種miRNA抑制劑包含與hsa-miR-125b(SEQIDNO2),hsa-miR-195(SEQIDNO4),hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、hsa_miR-23a(SEQIDNO:10)、hsa-miR-342(SEQIDNO14),hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa-miR-181b(SEQIDNO:26)、hsa_miR-26b(SEQIDNO:30)或hsa-miR-382(SEQIDNO33)互補(bǔ)的序列。22.權(quán)利要求19的方法，其中所述至少一種miRNA抑制劑為微小RNA拮抗劑。23.權(quán)利要求18的方法，其中所述藥物組合物進(jìn)一步包含肌力藥、神經(jīng)介質(zhì)阻斷劑、醛固酮拮抗劑、利尿劑、血管擴(kuò)張藥、內(nèi)皮素受體拮抗劑和HDAC抑制劑中的一種或多種。24.調(diào)節(jié)細(xì)胞中胎兒心臟基因程序(FGP)再活化的方法，包括提供具有一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物的心臟細(xì)胞，其中所述一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物調(diào)節(jié)胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物的表達(dá)。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物是選自下組的miRNA的模擬物或抑制劑hsa-miR-542-5p(SEQIDNO:1)、hsa_miR-125b(SEQIDNO:2)、hsa-miR-197(SEQIDNO3)、hsa-miR-195(SEQIDNO4)、hsa_miR-92a(SEQIDNO5)、hsa-miR-139(SEQIDNO6)、hsa-miR-100(SEQIDNO7)、hsa-miR-483(SEQIDNO8)、hsa-miR-22(SEQIDNO9)、hsa_miR-23a(SEQIDNO10)、hsa-miR-486(SEQIDNO11)、hsa-miR150(SEQIDNO:12)、hsa_miR-30c(SEQIDNO:13)、hsa_miR-342(SEQIDNO:14)、hsa-miR-133a(SEQIDNO:15)、hsa_miR-422b(SEQIDNO:16)、hsa-miR-221(SEQIDNO:17)、hsa-let-7f(SEQIDNO:18)、hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)、hsa_miR-222(SEQIDNO20)、hsa-miR-224(SEQIDNO21)、hsa_let_7a(SEQIDNO22)、hsa-miR-l(SEQIDNO:23)、hsa-miR-28(SEQIDNO:24)、hsa_miR-199a(SEQIDNO:25)、hsa_miR-181b(SEQIDNO26)、hsa-miR-20a(SEQIDNO27)、hsa-let_7c(SEQIDNO28)、hsa-miR-484(SEQIDNO:29)、hsa-miR-26b(SEQIDNO:30)、hsa-let_7d(SEQIDNO:31)、hsa-miR-lOb(SEQIDNO:32)、hsa-miR-382(SEQIDNO:33)、hsa_miR-92b(SEQIDNO:48)、hsa_let_7b(SEQIDNO:49)、hsa-let-7e(SEQIDNO50)和hsa_let_7g(SEQIDNO:51)。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述一種或多種miRNA抑制劑或miRNA模擬物是hsa-miR-92a(SEQIDNO5),hsa-miR-100(SEQIDNO:7)、或hsa_miR-133b(SEQIDNO:19)的模擬物或抑制劑。27.權(quán)利要求24的方法，其中所述胎兒心臟基因程序的至少一種標(biāo)志物選自下組αMyHC,βMyHC,ANF,BNP,SERCA2a禾口骨||肌α-肌動(dòng)蛋白。28.監(jiān)測(cè)對(duì)受試者中的心力衰竭進(jìn)行的處理的方法，包括a.在第一時(shí)間點(diǎn)從受試者獲得第一生物樣品，其中所述第一時(shí)間點(diǎn)在開始進(jìn)行對(duì)心力衰竭的藥物治療方案之前；b.在第二時(shí)間點(diǎn)從受試者獲得第二生物樣品，其中所述第二時(shí)間點(diǎn)在開始進(jìn)行對(duì)心力衰竭的藥物治療方案之后；c.通過miRNA陣列分析、mRNA陣列分析和定向蛋白質(zhì)組學(xué)表達(dá)分析處理第一生物樣品和第二生物樣品；和d.將來自第一生物樣品的miRNA、mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)數(shù)據(jù)與來自第二生物樣品的表達(dá)數(shù)據(jù)比較以確定基因表達(dá)模式的變化，其中基因表達(dá)的變化是藥物治療方案效力的指示。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述第一時(shí)間點(diǎn)和第二時(shí)間點(diǎn)間隔大約3至9個(gè)月。30.權(quán)利要求28的方法，其中用AfTymetrix方案進(jìn)行所述mRNA分析。全文摘要本發(fā)明公開了作為治療心力衰竭的新的生物標(biāo)志物和治療性靶的特殊miRNA。本發(fā)明公開了通過施用這些特定的miRNA的模擬物和抑制劑來治療或預(yù)防受試者中心力衰竭的方法。本發(fā)明也公開了通過測(cè)定一種或多種miRNA的表達(dá)水平來診斷或預(yù)后受試者中心力衰竭的方法。文檔編號(hào)C12P19/34GK101802227SQ200880107570公開日2010年8月11日申請(qǐng)日期2008年7月18日優(yōu)先權(quán)日2007年7月18日發(fā)明者喬納森·D·波特,卡門·蘇查羅夫,邁克爾·R·布里斯托申請(qǐng)人:科羅拉多大學(xué)董事會(huì)