專利名稱：一種富鋅蛹蟲草菌絲體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種富鋅蛹蟲草菌絲體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基， 屬于生藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蛹蟲草，又名北冬蟲夏草，屬子囊菌亞門核菌綱球殼目麥角菌科 蟲草屬，是我國名貴中藥材之一。現(xiàn)代藥學(xué)研究表明蛹蟲草中含有核 苷類、多糖類、蟲草素、甾醇類等成分含量基本與冬蟲夏草相同，對 免疫系統(tǒng)，神經(jīng)系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)等疾病具有治療效果，并有抗腫瘤 和抗癌作用，是冬蟲夏草理想的替代品，有廣闊的發(fā)展前景。鋅是微量元素的一種，在人體內(nèi)的含量以及每天所需攝入量都很 少，但對機(jī)體的性發(fā)育、性功能、生殖細(xì)胞的生成卻能起到舉足輕重 的作用，故有"生命的火花"與"婚姻和諧素"之稱。人體正常含鋅 量為2-3克。絕大部分組織中都有極微量的鋅分布，其中肝臟、肌肉 和骨骼中含量較高。鋅是體內(nèi)數(shù)十種酶的主要成分；鋅還與大腦發(fā)育 和智力有關(guān)。人體的睪丸、前列腺、精液當(dāng)中，都含有高濃度的鋅。 當(dāng)人體內(nèi)鋅的含量缺乏時，性功能會因此而低下，合成睪丸素酶發(fā)生 紊亂，男子將會引起陽痿和臉上生長痤瘡。鋅對激發(fā)精子活動有著特 殊的作用，缺鋅會造成精子活動力的下降。長期處于缺鋅狀態(tài)而未能 及時補(bǔ)充，可出現(xiàn)精子數(shù)量明顯減少、睪丸萎縮，最后導(dǎo)致不育。鋅在人體中雖為微量元素，但作用卻非常之大。孩子缺鋅，將直 接影響體格及大腦的發(fā)育，還會出現(xiàn)厭食、免疫力減退等現(xiàn)象。鋅可 以提高人體免疫系統(tǒng)的敏感性，同時可以直接抑制病毒的活性，從而
增強(qiáng)人體抗病能力；還可促進(jìn)大腦蛋白合成，幫助神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和 完善。鋅可促進(jìn)味蕾細(xì)胞的發(fā)育，增強(qiáng)孩子的食欲，改善孩子厭食、 偏食的狀況，保證營養(yǎng)的全面攝入。世界衛(wèi)生組織規(guī)定，成人每天鋅的攝入量為15毫克，而我國對成 年人的日推薦量為12 15mg，而我國男子鋅的攝入量大約才9毫克 左右。膳食補(bǔ)充劑可以日服量為日推薦量的1/3 1/2，即每天可以通 過食物以外的方式補(bǔ)充4mg 7. 5mg。國內(nèi)外目前關(guān)于富鋅蛹蟲草菌絲體產(chǎn)品及其培養(yǎng)方法沒有相應(yīng)的 報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述己有技術(shù)的不足而提供一種操作簡 單，培養(yǎng)周期短，菌絲體產(chǎn)率高，無污染無廢棄物，具有補(bǔ)鋅功能， 可以進(jìn)行工廠化生產(chǎn)的一種富鋅蛹蟲草菌絲體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達(dá)到 一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲 草菌絲體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為葡萄糖1.0%—3.0%,蛋白胨0.5%—1.0%，酵母提取物O. 1%—1.0%，瓊脂粉1.0% —2.0%,水余量，其pH值為5.0—7.5。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為葡萄糖 2，0%，蛋白胨0.6%，酵母提取物0.5%,瓊脂粉1.5%，水余量，其pH 值為6.0。一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重 量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0.5%—1.0%，酵母提取物 0.1%—1.0%,水余量，其pH值為5.0—7.5。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，其配方重量比組分為葡萄糖2.0%，蛋白胨0.6%，酵母提取物0.5%，水余量，其pH值為6.0。
一種富鋅蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于包括試管斜面 菌種培養(yǎng)(活化)一試管液體菌種培養(yǎng)一三角瓶液體種子培養(yǎng)一種 子罐培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一板框過濾一粉碎一真空干燥一粉碎一 粉末狀菌絲體步驟，具體步驟為(1) 試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1.0%—3.0%，蛋白胨0.5%一1.0%，酵母提取物0.1%—1. 0%，瓊脂粉1.0%—2.0%，水余量，其 pH值為5.0—7.5;將蛹蟲草菌種在無菌條件下接入試管斜面，15 30 "C暗培養(yǎng)5—10天；(2) 試管液體菌種培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5% 一1.0%，酵母提取物O. 1%—1.0%，水余量，其pH值為5.0—7.5，滅 菌，接入步驟1活化后斜面菌種，15 3(TC培養(yǎng)5天 10天；(3) 三角瓶液體種子培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5% 一l. 0%，酵母提取物0. 0%，水余量，其pH值為5. 0—7. 5，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，封口后在120 13(TC條件下滅菌 18~30分鐘，取出培養(yǎng)基，自然冷卻至2(TC 3(TC，在無菌條件下接 入步驟2培養(yǎng)好的試管液體菌種，15 3(TC培養(yǎng)5天~10天；(4) 種子罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5% 一l. 0%，酵母提取物0. 1%—1. 0%，水余量，其pH值為5. 0—7. 5，滅 菌；接入步驟3培養(yǎng)好的液體菌種，投料體積60%—80%，溫度15-30 °C，通氣1 : 0. 5，在種子罐中15 3(TC培養(yǎng)2—5天，并逐級擴(kuò)大至 生產(chǎn)規(guī)模攪拌培養(yǎng)2—5天；(5) 發(fā)酵罐培養(yǎng)
配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%,蛋白胨0.5%一1.0%，酵母提取物0. 1%—1.0%，硫酸鋅0. 01%—2. 50%，水余量， 其pH值為5. 0—7. 5;當(dāng)種子罐培養(yǎng)至菌絲體收得率0. 4-0. 8%時，轉(zhuǎn) 入發(fā)酵罐，投料體積60%-80%，溫度15 30。C，通氣1:0.5，培養(yǎng)至 菌絲體收得率1.2-1.8%，培養(yǎng)基還原糖含量至多0. 2%時，放罐收獲；(6) 板框過濾及粉碎 將培養(yǎng)好的富鋅蛹蟲草菌絲體倒入板框過濾機(jī)中，經(jīng)過板框過濾后取出菌絲體，得到的菌絲體濾餅用粉碎機(jī)打成小塊狀菌絲體；(7) 干燥及粉碎將得到的小塊狀菌絲體50°C-70'C真空干燥，干燥后用粉碎機(jī)進(jìn) 行粉碎，得到粉末狀菌絲體產(chǎn)品。本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果和顯著的進(jìn)步申請 人通過對蛹蟲草菌絲體對鋅離子富集規(guī)律的研究，了解到蛹蟲草菌絲 體的富集鋅的能力高，本發(fā)明培養(yǎng)周期短，菌絲體產(chǎn)率高，無污染無 廢棄物，具有補(bǔ)鋅功能。本發(fā)明采用特定的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)方法培養(yǎng) 的富鋅蛹蟲草菌絲體，可以增加產(chǎn)品的功效。并且富鋅菌絲體在培養(yǎng) 的過程中加入無機(jī)鋅，通過蛹蟲草菌在生長過程中對鋅元素的吸收和 轉(zhuǎn)化，降低了鋅對胃腸道的刺激，使鋅能夠更高效、更安全地被人體 吸收利用。藥理實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，蛹蟲草每天服用3g可以有顯著 的免疫調(diào)節(jié)作用。在蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)過程中，采用本發(fā)明的培養(yǎng) 基不僅原料易得且成本低，而且富鋅蛹蟲草產(chǎn)率高，達(dá)到每百克富鋅 8至11克，比天然蛹蟲草富鋅率高出8000至10000倍，可以使蛹蟲草產(chǎn)品除了發(fā)揮蟲草本身的藥理作用之外，還能起到補(bǔ)充鋅的作用。本發(fā)明可以通過設(shè)計培養(yǎng)基中的鋅加入量，控制產(chǎn)品中的鋅含 量，獲得所需要的鋅含量的蛹蟲草菌絲體。
具體實(shí)施例方式下面對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明 實(shí)施例l:菌種蛹蟲草菌種蛹蟲草5.701，來源于中國普通微生物菌種保 藏管理中心。試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)配制培養(yǎng)基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g，瓊脂粉10g，水960g，其pH值為5.0，分裝于試管中；將蛹蟲草菌種在 無菌條件下接入試管斜面，15 30'C暗培養(yǎng)5—10天； 試管液體菌種培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g，水970g， 其pH值為5.0，分裝于試管中，滅菌；接入活化后斜面菌種，15~30 °C，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm,培養(yǎng)5天~10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g，水970g， 其pH值為5. 0,將配制好的培養(yǎng)基分裝入500ml錐形瓶中，每瓶裝 200ml，封口后在120 13CTC條件下滅菌18 30分鐘，取出培養(yǎng)基， 自然冷卻至20~30°C;在無菌條件下每瓶接入10ml—20ml培養(yǎng)好的 試管液體菌種，15~30°C,攪拌轉(zhuǎn)速120rpm,培養(yǎng)5天 10天；種子罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖10g，蛋白胨10g，酵母提取物10g，水970g, 其pH值為5.0，分批滅菌，接入培養(yǎng)好的三角瓶液體菌種，投料體 積60%—80%，溫度15~30°C，通氣1 : 0. 5，在100L種子罐中15~30 "C培養(yǎng)2—5天，并逐級擴(kuò)大至10噸罐中攪拌培養(yǎng)2—5天；發(fā)酵罐培養(yǎng)當(dāng)種子罐培養(yǎng)至菌絲體收得率0. 4-0. 8%時，轉(zhuǎn)入50噸發(fā)酵罐培 養(yǎng)。投料體積40噸，投料為葡萄糖800kg，蛋白胨400kg，酵母提 取物400kg，水37. 4噸，硫酸鋅1000kg，其pH值為5. 0，溫度25 。C，通氣1 : 0. 5，攪拌轉(zhuǎn)速120 rpm，培養(yǎng)至菌絲體收得率1. 2-1. 8%， 培養(yǎng)基還原糖含量至多0. 2%時，放罐收獲； 板框過濾及粉碎將培養(yǎng)好的富鋅蛹蟲草菌絲體倒入板框過濾機(jī)中，經(jīng)過板框過濾后取出菌絲體，得到的菌絲體濾餅用粉碎機(jī)打成小塊狀菌絲體； 干燥及粉碎將得到的小塊狀菌絲體50-7(TC真空干燥，干燥后用粉碎機(jī)進(jìn)行 粉碎，得到粉末狀菌絲體產(chǎn)品。 實(shí)施例2:菌種蛹蟲草菌種蛹蟲草5.701，來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心。試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)配制培養(yǎng)基葡萄糖20g,蛋白胨6g，酵母提取物9g，瓊脂粉 15g，水950g，其pH值為6.0，分裝于試管中；將蛹蟲草菌種在無菌 條件下接入試管斜面，15 3(TC暗培養(yǎng)5—10天；試管液體菌種培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨6g，酵母提取物9g，水965g， 其pH值為6.0，分裝于試管中，滅菌；接入活化后斜面菌種，15~30 'C，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)5天~10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨6g，酵母提取物9g，水965g， 其pH值為6. 0，將配制好的培養(yǎng)基分裝入500ml錐形瓶中，每瓶裝 200ml，封口后在120 130。C條件下滅菌18 30分鐘，取出培養(yǎng)基， 自然冷卻至20~30°C;在無菌條件下每瓶接入10ml—20ml培養(yǎng)好的
試管液體菌種，15~30°C，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)5天~10天； 種子罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖20g，蛋白胨6g，酵母提取物9g，水965g, 其pH值為6.0，分批滅菌，接入培養(yǎng)好的三角瓶液體菌種，投料體 積60%—80%，溫度15~30°C,通氣1 : 0. 5，在100L種子罐中15-30 'C培養(yǎng)2—5天，并逐級擴(kuò)大至10噸罐中攪拌培養(yǎng)2—5天；當(dāng)種子 罐培養(yǎng)至菌絲體收得率0. 4-0. 8%時，轉(zhuǎn)入50噸發(fā)酵罐。發(fā)酵罐培養(yǎng)投料體積30噸，投料葡萄糖900kg，蛋白胨240kg，酵母提取 物180kg，水28.65噸，硫酸鋅30kg，其pH值為6.0，溫度25。C， 通氣1 : 0.5，攪拌轉(zhuǎn)速120 rpm,培養(yǎng)至菌絲體收得率1.2-1.8%， 培養(yǎng)基還原糖含量至多0. 2%時，放罐收獲；板框過濾及粉碎將培養(yǎng)好的富鋅蛹蟲草菌絲體倒入板框過濾機(jī)中，經(jīng)過板框過濾 后取出菌絲體，得到的菌絲體濾餅用粉碎機(jī)打成小塊狀菌絲體； 干燥及粉碎將得到的小塊狀菌絲體50-7(TC真空干燥，干燥后用粉碎機(jī)進(jìn)行 粉碎，得到粉末狀菌絲體產(chǎn)品。 實(shí)施例3:菌種蛹蟲草菌種蛹蟲草5.701，來源于中國普通微生物菌種保 藏管理中心。試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)配制培養(yǎng)基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g，瓊脂粉 20g，水940g，其pH值為7.5，分裝于試管中；將蛹蟲草菌種在無菌 條件下接入試管斜面，15 30'C暗培養(yǎng)5—IO天；試管液體菌種培養(yǎng)
配制培養(yǎng)基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g,水960g， 其pH值為7.5,分裝于試管中，滅菌；接入活化后斜面菌種，15~30 °C，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)5天 10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g，水960g， 其pH值為7. 5，將配制好的培養(yǎng)基分裝入500ml錐形瓶中，每瓶裝 200ml，封口后在120 130'C條件下滅菌18 30分鐘，取出培養(yǎng)基， 自然冷卻至20~30°C;在無菌條件下每瓶接入10ml—20ml培養(yǎng)好的 試管液體菌種，15~30°C，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)5天~10天；種子罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基葡萄糖30g，蛋白胨5g，酵母提取物5g，水960g， 其pH值為7.5，分批滅菌，接入培養(yǎng)好的三角瓶液體菌種，投料體 積60%—80%，溫度15~30°C，通氣1 : 0. 5，在100L種子罐中15~30 'C培養(yǎng)2—5天，并逐級擴(kuò)大至10噸罐中攪拌培養(yǎng)2—5天，當(dāng)種子 罐培養(yǎng)至菌絲體收得率0. 4-0. 8%時，轉(zhuǎn)入50噸發(fā)酵罐；發(fā)酵罐培養(yǎng)投料體積35噸，葡萄糖350kg，蛋白胨175kg，酵母提取物35kg， 水34. 09噸，硫酸鋅350kg，其pH值為6. 0，溫度25°C,通氣1 : 0. 5， 攪拌轉(zhuǎn)速120rpm，培養(yǎng)至菌絲體收得率1.2-1.8%，培養(yǎng)基還原糖含 量至多0.2%時，放罐收獲；板框過濾及粉碎將培養(yǎng)好的富鋅蛹蟲草菌絲體倒入板框過濾機(jī)中，經(jīng)過板框過濾后取出菌絲體，得到的菌絲體濾餅用粉碎機(jī)打成小塊狀菌絲體； 干燥及粉碎 . 將得到的小塊狀菌絲體50-70'C真空干燥，干燥后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，得到粉末狀菌絲體產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1、一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為葡萄糖1.0％—3.0％，蛋白胨0.5％—1.0％，酵母提取物0.1％—1.0％，瓊脂粉1.0％—2.0％，水余量，其pH值為5.0—7.5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲草菌絲體的 培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為葡萄糖2. 0%，蛋白胨0. 6%， 酵母提取物0.5%，瓊脂粉1.5%，水余量，其pH值為6.0。
3. 一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)基，其特征在于其 配方重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0.5%—1.0%，酵母 提取物0. 1%—1. 0%，水余量，其pH值為5.0—7.5。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用于培養(yǎng)富鋅蛹蟲草菌絲體的 培養(yǎng)基，其特征在于其配方重量比組分為葡萄糖2. 0%，蛋白胨0. 6%， 酵母提取物0.5%，水余量，其pH值為6.0。
5. 一種富鋅蛹蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于包括試 管斜面菌種培養(yǎng)(活化)一試管液體菌種培養(yǎng)一三角瓶液體種子培. 養(yǎng)一種子罐培養(yǎng)一發(fā)酵罐培養(yǎng)一板框過濾一粉碎一真空干燥一 粉碎一粉末狀菌絲體步驟，具體步驟為(1) 試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%_3. 0%，蛋白胨0. 5% _1.0%，酵母提取物0. 1%—1. 0%，瓊脂粉1.0%_2.0%，水余量，其 pH值為5.0—7.5;將蛹蟲草菌種在無菌條件下接入試管斜面，15~30 'C暗培養(yǎng)5—10天；(2) 試管液體菌種培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%_3. 0%，蛋白胨0. 5% —1.0%,酵母提取物0. 0%，水余量，其pH值為5.0—7.5，滅菌，接入步驟1活化后斜面菌種，.15 30'C培養(yǎng)5天~10天；(3) 三角瓶液體種子培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%,蛋白胨0.5%— 1.0%,酵母提取物0. 1%—1. 0%，水余量，其pH值為5.0—7.5，將配 制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，封口后在120 13(TC條件下滅菌18~ 30分鐘，取出培養(yǎng)基，自然冷卻至2(TC 3(TC，在無菌條件下接入步 驟2培養(yǎng)好的試管液體菌種，15 3(TC培養(yǎng)5天 10天；(4) 種子罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5% —1.0%，酵母提取物O. 1%—1.0%，水余量，其pH值為5.0—7.5，滅 菌；接入步驟3培養(yǎng)好的液體菌種，投料體積60%—80%，溫度15~30 。C，通氣1 : 0. 5，在種子罐中15-30。C培養(yǎng)2—5天，并逐級擴(kuò)大至 生產(chǎn)規(guī)模攪拌培養(yǎng)2—5天；(5) 發(fā)酵罐培養(yǎng)配制培養(yǎng)基其重量比組分為葡萄糖1. 0%—3. 0%，蛋白胨0. 5%—1.0%，酵母提取物0. 0%，硫酸鋅0. 01%_2. 50%，水余量，其pH值為5. 0—7. 5;當(dāng)種子罐培養(yǎng)至菌絲體收得率0. 4-0. 8%時，轉(zhuǎn) 入發(fā)酵罐，投料體積60%-80%，溫度15 30。C，通氣1:0.5，培養(yǎng)至 菌絲體收得率1. 2-1. 8%，培養(yǎng)基還原糖含量至多0. 2%時，放罐收獲；(6) 板框過濾及粉碎 將培養(yǎng)好的富鋅蛹蟲草菌絲體倒入板框過濾f幾中，經(jīng)過板框過濾后取出菌絲體，得到的菌絲體濾餅用粉碎機(jī)打成小塊狀菌絲體；(7) 干燥及粉碎將得到的小塊狀菌絲體50'C-7(TC真空干燥，干燥后用粉碎機(jī)進(jìn) 行粉碎，得到粉末狀菌絲體產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種富鋅蛹蟲草菌絲體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方重量比組分為葡萄糖1.0％-3.0％，蛋白胨0.5％-1.0％，酵母提取物0.1％-1.0％，瓊脂粉1.0％-2.0％，水余量，其pH值為5.0-7.5，其人工培養(yǎng)方法包括試管斜面菌種培養(yǎng)(活化)→試管液體菌種培養(yǎng)→三角瓶液體種子培養(yǎng)→種子罐培養(yǎng)→發(fā)酵罐培養(yǎng)→板框過濾→粉碎→真空干燥→粉碎→粉末狀菌絲體步驟，其操作簡單，培養(yǎng)周期短，菌絲體產(chǎn)率高，無污染無廢棄物，具有補(bǔ)鋅功能，可以進(jìn)行工廠化生產(chǎn)。
文檔編號C12R1/645GK101397542SQ200810157380
公開日2009年4月1日 申請日期2008年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日
發(fā)明者劉林德, 孫慧涌, 張秋勝, 林 朱, 蓋宇鵬, 程顯好, 高興喜 申請人:魯東大學(xué)