專利名稱：一種富鐵酵母及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物，具體地說涉及一種富鐵酵母，本發(fā)明 還涉及該菌種的選育方法以及使用這種菌種進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)的方法。
背景技術(shù)：
鐵是人體和動(dòng)物維持生命和生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，是體 內(nèi)必不可少的一種微量元素，參與血液中氧的運(yùn)輸作用。鐵的缺乏 會(huì)引起人體及動(dòng)物貧血以及其他癥狀。目前，巿場(chǎng)上的補(bǔ)鐵產(chǎn)品琳 瑯滿目，品種繁多，但其鐵源主要是無機(jī)鹽，對(duì)胃的刺激很大，也 不利于人體的吸收和利用。
酵母細(xì)胞能直接將鐵吸收，轉(zhuǎn)化為生物鐵，可以提高鐵的生物 利用度，同時(shí)能消除對(duì)胃以及腸黏膜的刺激。以酵母為載體，將化 學(xué)狀態(tài)下的鐵轉(zhuǎn)化為生物狀態(tài)的鐵，是開發(fā)新的鐵源，提高鐵的生 物利用度的有效措施。富鐵酵母在預(yù)防和治療人和動(dòng)物缺鐵性貧血 及其他一些缺鐵性疾病方面發(fā)揮著顯著作用。此外富鐵酵母還含有 豐富的蛋白質(zhì)、維生素等人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)。
近年來，盡管有些稱作"富鐵酵母"的產(chǎn)品，但這些產(chǎn)品存在
著明顯的缺陷和不足
一是沒有對(duì)酵母菌種進(jìn)行篩選、育種和馴化，經(jīng)常是用隨機(jī)得 到的酵母菌種進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)富鐵酵母。由于不同菌種對(duì)鐵富集效果 的差異性很大，因此產(chǎn)品不穩(wěn)定，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
二是沒有對(duì)富鐵酵母發(fā)酵培養(yǎng)基的鐵離子濃度、培養(yǎng)條件進(jìn)行 優(yōu)化，雖然培養(yǎng)的產(chǎn)物稱為"富鐵酵母"，但酵母細(xì)胞的含鐵量低， 生物量不高，即使能生產(chǎn)，生產(chǎn)成本也較高，不具備可行性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述不足提供一種鐵含量較高的富鐵酵 母菌種以及利用該菌種進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)的方法。
由于高濃度鐵離子對(duì)酵母的生產(chǎn)有一定的抑制， 一般的酵母很 難在含有高濃度鐵離子的條件下生長，即使有生長速率但對(duì)鐵的利 用率不高。因而本發(fā)明首先篩選出耐高鐵的酵母，然后在高濃度鐵 的培養(yǎng)基中不斷馴化，接著通過氯化鋰誘變，選出鐵含量高、生長 速率快、對(duì)鐵的利用率高的富鐵酵母菌種，將其中優(yōu)選的一株命名
為Z2丄該酵母菌株已經(jīng)于2005年10月25日在中國典型培養(yǎng)物 保藏中心(CCTCC，武漢大學(xué)，郵編430072)進(jìn)行了生物保藏，分 類命名為酉良酒酵母(iSacc/zoramyces cerev/s/ae)，保藏編號(hào)為CCTCC M205127。
具體地說，通過如下方法選育菌種
1) 篩選耐高鐵的酵母菌種將不同的酵母菌種接種到不同濃度 的含鐵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，挑選出耐鐵菌種作為馴化菌種。
2) 將耐鐵菌種接種到氨基酸螯合鐵濃度高的培養(yǎng)基中多次傳代 培養(yǎng)馴化。
3) 將多次傳代培養(yǎng)馴化的菌種接種到不同氯化鋰劑量上誘變。
4) 將誘變的酵母菌種再進(jìn)行分離篩選，利用搖瓶和小型發(fā)酵罐 進(jìn)行發(fā)酵選出鐵含量高、生長速率快、對(duì)鐵的利用率高、耐高鐵的 酵母菌種，即為富鐵酵母菌種。
5) 篩選培養(yǎng)基配方
麥芽汁培養(yǎng)基含糖量5~25%，含鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為 150~4500pg/ml， pH值為4 6.5。
6) 篩選培養(yǎng)條件
溫度26 35。C,攪拌培養(yǎng)18~48小時(shí)。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)上述富鐵酵母產(chǎn)品的方法， 包括菌種活化、擴(kuò)大培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵罐培養(yǎng)結(jié)束后對(duì)培養(yǎng) 物進(jìn)行分離、干燥、包裝后即得成品。
其中，菌種活化可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)方法進(jìn)行， 如釆用斜面菌種培養(yǎng)活化。其中，擴(kuò)大培養(yǎng)可包括一級(jí)液體種子培養(yǎng)、二級(jí)液體種子培養(yǎng) 以及發(fā)酵罐種子培養(yǎng)。
其生產(chǎn)流程如下斜面菌種培養(yǎng)4 一級(jí)液體種子培養(yǎng)—二級(jí)
液體種子培養(yǎng)4發(fā)酵罐種子培養(yǎng)4發(fā)酵罐培養(yǎng)4分離4干燥—包 裝。
具體地說可釆用如下方法
1) 斜面菌種培養(yǎng)將耐高鐵的富鐵酵母菌種接種到含糖量為5~ 25%、鐵濃度為150~5000ng/ml、 pH值為4 ~ 6.5的麥芽汁固體斜面 上，在26-35。C培養(yǎng)24 48小時(shí)。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種1~4環(huán)到裝有 100~500ml的含糖量為5~25%、鐵濃度為150 ~ 5000ng/ml、 pH值 為4~6.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在26-35'C培養(yǎng)24 48小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10-40L的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25 %、鐵濃度為150~5000|ig/ml、 pH值為4 ~ 6.5的卡氏培養(yǎng)瓶中， 接種量為1%~10%，在26 35"培養(yǎng)18~48小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為5~25%、鐵 濃度為150~5000|ig/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4-6.5 的種子發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%，在26-35"C培養(yǎng)18-48小 時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含 糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5~25 % 、鐵濃度為150 ~ 5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4 ~ 6.5的發(fā)酵罐中，接種量5%~15%，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式， 鐵釆用流加方式加入，在26 35。C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
6) 分離采用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥采用60-14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性；采 用100 18(TC噴霧干燥或者用0.3-0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡(jiǎn)干燥，
6干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以采用冷凍干燥法干燥。
8)包裝可以釆用多種形式包裝成為高鐵含量的富鐵酵母。鐵 含量達(dá)到2000 ~ 50000mg/kg。
在發(fā)酵罐種子培養(yǎng)和發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)中需要添加適量的氮源和 磷源，氮源選自硫酸氨、碳酸氫銨、氨水、磷酸氨、磷酸氫氨和磷 酸氫二氨，或是這些物質(zhì)的組合。磷源為選自磷酸、磷酸氨、磷酸 氫氨和磷酸氫二氨，或是這些物質(zhì)的組合。優(yōu)選為磷酸氨、磷酸氫 氨和磷酸氫二氨。優(yōu)選氮源和磷源的使用量均為培養(yǎng)基重量的 1~10%。鐵源為選自硫酸亞鐵、葡糖糖酸涯鐵、乳酸亞鐵、富馬酸 亞鐵、氨基酸螯合鐵或是這些物質(zhì)的組合，使用量為培養(yǎng)基重量的 1~10%。鐵源優(yōu)選氨基酸螯合鐵，使用量為培養(yǎng)基重量的1~10%， 從發(fā)酵開始至發(fā)酵14小時(shí)內(nèi)流加完。
如果是連續(xù)的生產(chǎn)可以增加一級(jí)發(fā)酵罐二級(jí)種子發(fā)酵，發(fā)酵條件 是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含糖(淀粉水解糖或糖 蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5 ~ 25 % 、鐵(氨基酸螯合鐵) 濃度為150~5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)臍庠春土自?、pH值為4 ~ 6.5 的二級(jí)種子發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源采用流加方式，鐵釆用流加方 式加入，在26 35。C培養(yǎng)14~36小時(shí)。然后再進(jìn)行發(fā)酵罐發(fā)酵，或 者用離心機(jī)或板框進(jìn)行分離，在4 1(TC儲(chǔ)罐或冷庫中保存，然后根 據(jù)需要接種到發(fā)酵罐中再進(jìn)行下一級(jí)培養(yǎng)。此時(shí)發(fā)酵罐發(fā)酵的條件 優(yōu)選為發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 -300噸的含糖量為5~25%、 鐵濃度為150~5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自础H值為4 ~ 6.5 的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源采用流加方式，鐵采用流加方式加入， 在26-35。C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
本發(fā)明使用的耐高鐵的富鐵酵母菌種，耐鐵性能穩(wěn)定，生長速率 快，對(duì)鐵的利用率高，含鐵高可以達(dá)到80000mg/kg。而現(xiàn)有技術(shù)生 產(chǎn)的富鐵酵母鐵含量通常在1000mg/kg以下，最高才到2000mg/kg。 此外，本發(fā)明生產(chǎn)的高鐵含量的富鐵酵母生物鐵含量高，可以達(dá)到 90%。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明。除非特別指明，本
試劑。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不能限制本發(fā)明 的保護(hù)范圍。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì) 的前提下，對(duì)這些實(shí)施方案中的培養(yǎng)基組分、含量、培養(yǎng)條件、分離 加工條件進(jìn)行的各種改變或改動(dòng)也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1:本發(fā)明對(duì)釀酒酵母菌種的篩選
1 )將酉良酒酵母(Sacc/wramyc" cerev/w'ae)菌種接種到不同濃 度的含鐵培養(yǎng)基中，篩選能夠在高鐵培養(yǎng)基中生長的菌種。挑選出 耐鐵的菌種作為馴化的菌種。
2) 將耐鐵的菌種接種鐵含量更高的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并逐漸 提高培養(yǎng)基中鐵的含量。然后在高氨基酸螯合鐵濃度的培養(yǎng)基上多 次傳代培養(yǎng)。
3) 將傳代培養(yǎng)的酵母菌株再進(jìn)行分離篩選，利用搖瓶和小型發(fā) 酵罐進(jìn)行發(fā)酵選出鐵含量高、生長速率快、對(duì)鐵的利用率高的耐高 鐵的富鐵酵母菌種，即為耐高鐵的富鐵酵母菌種。經(jīng)篩選得到一株 鐵含量高、生長速率快、對(duì)鐵的利用率高的耐高鐵的富鐵酵母菌種， 將其命名為Z2.1，并進(jìn)行了保藏。
4) 篩選培養(yǎng)基配方
麥芽汁培養(yǎng)基含糖量10%,含鐵(氨基酸螯合鐵)量150 ~ 5000嗎/ml， pH值為5.5。
5) 篩選培養(yǎng)條件 溫度3(TC，攪拌培養(yǎng)24小時(shí)。
實(shí)施例2:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
生產(chǎn)高鐵含量富鐵酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液 體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐 培養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下
l)斜面菌種培養(yǎng)將耐高鐵的富鐵酵母菌種接種到含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為150嗎/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在30。C，培養(yǎng)24小時(shí)。
2 )—級(jí)液體種子培養(yǎng):將斜面的酵母菌種接種2環(huán)到裝有250ml 的含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為150pg/ml、 pH值為 5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在30'C培養(yǎng)24小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有25L 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為10%、鐵(氨 基酸螯合鐵)濃度為150)Lig/ml、pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30°C 培養(yǎng)24小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有81113的含糖 (麥芽汁和糖蜜各半)量為20%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為
150pg/ml，加5%磷酸氫氨、pH值為5.5的種子發(fā)酵罐中，在30°C 培養(yǎng)48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到150噸的含糖 (淀粉水解糖和糖蜜各半)量為20%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為
150|ig/ml，加5%磷酸氫氨、pH值為5的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源 釆用流加方式，鐵釆用流加方式加入，在30'C培養(yǎng)24小時(shí)。
6) 分離釆用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥采用IO(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性
8) 包裝可以釆用多種形式包裝成為高鐵含量的富鐵酵母。鐵 含量達(dá)到2000mg/kg左右。
實(shí)施例3:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
生產(chǎn)高鐵含量富鐵酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液 體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐 培養(yǎng)—分離—干燥—包裝。具體工藝如下
l)斜面菌種培養(yǎng)將耐高鐵的富鐵酵母菌種接種到含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為500pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在30。C，培養(yǎng)24小時(shí)。
2 )—級(jí)液體種子培養(yǎng):將斜面的酵母菌種接種3環(huán)到裝有100ml 的含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為500!ig/ml、 pH值為 5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24小時(shí)。
3)二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10L 的含糖(麥芽汁或糖蜜或麥芽汁和糖蜜的混合物)量為10%、鐵(氨 基酸螯合鐵)濃度為500pg/ml、pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30°C 培養(yǎng)24小時(shí)。
4 )發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有2m3的含糖 (糖蜜)量為5 ~ 25 % 、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為500|iig/ml,加1 ~ 5%磷酸氫氨、pH值為5.5的種子發(fā)酵罐中，在28'C培養(yǎng)48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的 含糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為25 % 、 鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為500pg/ml、加1%磷酸氫氨、pH值為6.5 的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源采用流加方式，鐵采用流加方式加入， 在35'C培養(yǎng)36小時(shí)。
6) 分離采用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥采用60 14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性； 釆用100-18(TC噴粉干燥或者用0.3 0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡(jiǎn)干燥， 干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。
8) 包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鐵含量的富鐵酵母。 鐵含量達(dá)到6500mg/kg左右。
實(shí)施例4:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
生產(chǎn)高鐵含量富鐵酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液 體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)■>發(fā)酵罐
10培養(yǎng) >分離—干燥■>包裝。具體工藝如下
1) 斜面菌種培養(yǎng)將耐高鐵的富鐵酵母菌種接種到含糖量為 10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為1000ng/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在3(TC,培養(yǎng)24小時(shí)。
2) —級(jí)液體種子培養(yǎng)將斜面的酵母菌種接種1~4環(huán)到裝有 100~500ml的含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為1000|ig/ml、 pH值為5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在30'C培養(yǎng)24小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10-40L的含糖(麥芽汁)量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為1000pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30'C培養(yǎng)24小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5~15m3 的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為5 ~ 25 % 、鐵(氨基酸螯合鐵)濃 度為1000|ig/ml，力口 1 ~5%磷酸氫氨、pH值為4 — 6.5的種子發(fā)酵罐 中，在26-35。C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的 含糖(淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為5 ~ 25 %、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為1000ng/ml、力口 1~5%磷酸氫氨、 pH值為4~6.5的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鐵釆用流 加方式加入，在26 35""C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
6) 分離采用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60-14(TC流化態(tài)干燥，干燥的產(chǎn)品具有活性； 釆用100 18(TC噴粉干燥或者用0.3 0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡(jiǎn)干燥，
干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以釆用冷凍干燥法干燥。
8) 包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鐵含量的富鐵酵母。 鐵含量達(dá)到13800mg/kg左右。
實(shí)施例5:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
ii生產(chǎn)高鐵含量富鐵酵母的生產(chǎn)流程斜面菌種培養(yǎng)— 一級(jí)液
體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐
培養(yǎng)"> 分離—干燥包裝。具體工藝如下
1)斜面菌種培養(yǎng)將耐高鐵的富鐵酵母菌種接種到含糖量為 10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為5000pg/ml、 pH值為5.5的麥芽汁 固體斜面上，在3(TC,培養(yǎng)24小時(shí)。
2 )—級(jí)液體種子培養(yǎng):將斜面的酵母菌種接種4環(huán)到裝有250ml 的含糖量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為500(Hig/ml、 pH值為 5.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在3(TC培養(yǎng)24小時(shí)。
3) 二級(jí)液體種子培養(yǎng)；將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有25L 的含糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為10%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度 為13000pg/ml、 pH值為5.5的卡氏培養(yǎng)瓶中，在30。C培養(yǎng)24小時(shí)。
4) 發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有10mS的含 糖(麥芽汁和糖蜜各半)量為20%、鐵(氨基酸螯合鐵)濃度為 13000^ig/ml，加5%磷酸氫氨、pH值為5.5的種子發(fā)酵罐中，在30°C 培養(yǎng)48小時(shí)。
5) 發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到150噸的含糖 (淀粉水解糖或糖蜜或淀粉水解糖和糖蜜的混合物)量為20% 、鐵 (氨基酸螯合鐵)濃度為13000ng/ml、加5%磷酸氫氨、pH值為5.5
的發(fā)酵罐中，所用的營養(yǎng)源采用流加方式，氨基酸螯合鐵釆用流加 方式加入，在3(TC培養(yǎng)36小時(shí)。
6) 分離釆用疊片式分離機(jī)分離再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框 壓濾。
7) 干燥釆用60 14(TC流化態(tài)千燥，干燥的產(chǎn)品具有活性； 采用100 ~ 18(TC噴粉干燥或者用0.3 ~ 0.6Mpa的蒸汽壓力滾簡(jiǎn)干燥， 干燥產(chǎn)品沒有活性是粉狀或小片狀；也可以采用冷凍干燥法干燥。
S)包裝可以釆用多種形式的包裝成為高鐵含量的富鐵酵母。鐵含量達(dá)到82000mg/kg。 實(shí)例6:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
本實(shí)施例增加一級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)，生產(chǎn)工藝為斜面菌種培 養(yǎng)— 一級(jí)液體種子培養(yǎng)■> 二級(jí)液體種子培養(yǎng)— 一級(jí)發(fā)酵罐種 子培養(yǎng)_> 二級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培養(yǎng)—分離—干燥 —包裝。所增加的一級(jí)發(fā)酵罐種子培養(yǎng)方法和發(fā)酵罐培養(yǎng)大致相 同，其他工藝同實(shí)施例2，只是發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)選擇淀粉水解糖8% 和糖蜜作碳源5%、氨水3%作氮源、磷酸氫氨2%作磷源，培養(yǎng)液 中的鐵含量為2000pg/ml， pH值為5.2，溫度28 ~ 32。C鼓風(fēng)培養(yǎng)26 小時(shí)。
本實(shí)施例生產(chǎn)出來的高鐵含量的富鐵酵母鐵含量達(dá)到 25900mg/kg。
實(shí)施例7:富鐵酵母產(chǎn)品的生產(chǎn)
本實(shí)施例的生產(chǎn)方法同實(shí)施例2,但在干燥過程中釆用流化態(tài)干 燥的方法干燥出具有活性的高鐵含量的富鐵酵母，干燥工藝是進(jìn) 風(fēng)溫度120~ 140。C,出風(fēng)溫度70 10(TC，干燥20 50分鐘，水分 小于7%。
生產(chǎn)工藝
斜面菌種培養(yǎng)■> 一級(jí)液體種子培養(yǎng)—二級(jí)液體種子培養(yǎng) ■>發(fā)酵罐種子培養(yǎng)—發(fā)酵罐培養(yǎng)~>分離—干燥■>包裝。
本實(shí)施例生產(chǎn)出來的高鐵含量的富鐵酵母的活細(xì)胞率達(dá)到80% 以上。
綜上所述，本發(fā)明的充分利用微生物遺傳育種技術(shù)，微生物發(fā) 酵技術(shù)，根據(jù)酵母菌對(duì)鐵耐受的特性進(jìn)行篩選出耐高鐵的酵母菌種， 再通過誘變技術(shù)選育出鐵含量高、生長速率快、產(chǎn)率高、對(duì)鐵的利 用率高的耐高鐵的富鐵酵母菌種。針對(duì)該菌種制定的特定工藝生產(chǎn) 出高鐵含量的富鐵酵母，特點(diǎn)是耐鐵性能穩(wěn)定，生長速率快，對(duì)鐵的利用率高；生物鐵含量高，可以達(dá)到90%;該高鐵含量的富鐵 酵母可以是活性也可是沒有活性。具有更廣闊的應(yīng)用空間。
權(quán)利要求
1、一種富鐵酵母(Saccharomyces cerevisiae)Z2.1 CCTCC M205127。
2、 權(quán)利要求l所述富鐵酵母的生產(chǎn)方法，其包括菌種活化、 擴(kuò)大培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)。
3、 如權(quán)利要求2所述的方法，其還包括在發(fā)酵培養(yǎng)后對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行分離、干燥和包裝。
4、 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中菌種活化的方法是將 所述富鐵酵母菌種接種到含糖量為5~25%、鐵濃度為 150~5000ng/ml、 pH值為4~6.5的麥芽汁固體斜面上，在26 35。C 培養(yǎng)24~48小時(shí)。
5、 如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中擴(kuò)大培養(yǎng)包括 一級(jí)液體種子培養(yǎng)將活化的菌種接種1-4環(huán)到裝有100 ~500ml的含糖量為5 ~ 25 % 、鐵濃度為150 ~ 5000ng/ml、 pH值為4 ~ 6.5的麥芽汁專用培養(yǎng)瓶中，在26~35°。培養(yǎng)24~48小時(shí)；二級(jí)液體種子培養(yǎng);將一級(jí)液體種子培養(yǎng)液接種到裝有10 ~ 40L 的含糖量為5~25%、鐵濃度為150~5000ng/ml、 pH值為4 ~ 6.5 的卡氏培養(yǎng)瓶中，接種量為1%~10%,在26 ~ 35°。培養(yǎng)18-48小 時(shí)；發(fā)酵罐種子培養(yǎng)將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到裝有0.5 ~ 15m3的含 糖量為5~25%、鐵濃度為150~500(^g/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土?源、pH值為4~6.5的種子發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%，在26~ 35'C培養(yǎng)18~48小時(shí)。
6、如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的 方法是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1 -300噸的含糖量為5~25%、 鐵濃度為150~5000|ig/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4-6.5 的發(fā)酵罐中，接種量為5%~15%，所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鐵 源采用流加方式加入，在26 35'C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
7、 如權(quán)利要求5所述的方法，其還包括在二級(jí)發(fā)酵罐種子發(fā)酵 培養(yǎng)，培養(yǎng)方法是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含糖量 為5~25%、鐵濃度為150~5000pg/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自础?pH值為4~6.5的發(fā)酵罐中，接種量為1%~10%，所用的營養(yǎng)源釆 用流加方式，鐵源采用流加方式加入，在26 35。C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
8、 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)的 方法是將發(fā)酵罐種子培養(yǎng)液接種到1~300噸的含糖量為5~25%、 鐵濃度為150~5000ng/ml、補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牡春土自?、pH值為4-6.5 的發(fā)酵罐中，接種量為5%~15%,所用的營養(yǎng)源釆用流加方式，鐵 采用流加方式加入，在26-35。C培養(yǎng)14~36小時(shí)。
9、 如權(quán)利要求3所述的方法，其中分離釆用疊片式分離機(jī)分離， 再用真空轉(zhuǎn)鼓過濾或者用板框壓濾。
10、 如權(quán)利要求3所述的方法，其中，干燥a) 釆用60 14(TC流化態(tài)干燥；或b) 釆用100 18(TC噴霧干燥；或c) 用0.3 0.6Mpa的蒸汽壓力滾筒干燥；或d) 釆用冷凍干燥法干燥。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種富鐵酵母(Saccharomyces cerevisiae)Z2.1CCTCC M 205127。該菌株耐鐵性能穩(wěn)定，生長速率快，對(duì)鐵的利用率高，含鐵高，可以達(dá)到80000mg/kg，其中生物鐵含量可達(dá)90％。
文檔編號(hào)C12R1/865GK101575579SQ20081010597
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2008年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月6日
發(fā)明者余明華, 俞學(xué)鋒, 夏長虹, 娟 姚, 彥 張, 李知洪 申請(qǐng)人:安琪酵母股份有限公司