專利名稱：：一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，屬應(yīng)用微生物檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：在科研和生產(chǎn)的實(shí)際工作中，常常需要對微生物的數(shù)量進(jìn)行測定。如對水體、空氣、土壤等環(huán)境中的微生物的測定可以監(jiān)測和評價其污染程度；對飲用水中的微生物的測定可以評價其是否達(dá)標(biāo)；對菌劑產(chǎn)品進(jìn)行微生物數(shù)量的測定可判斷產(chǎn)品質(zhì)量是否合格；對油田污水注水中的微生物數(shù)量的測定則可以監(jiān)測和評價污水注水的水質(zhì)等。因此，微生物數(shù)量的測定對科研和生產(chǎn)實(shí)際工作具有十分重要的指導(dǎo)作用和現(xiàn)實(shí)意義。傳統(tǒng)的微生物測定方法十分煩瑣、費(fèi)時，工作效率低且不準(zhǔn)確可靠。如平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)每個活的細(xì)菌能長出一個菌落的原理設(shè)計(jì)的，取一定體積的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)及稀釋倍數(shù)，計(jì)算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。而絕跡稀釋法是將待測定的水樣逐級注入到試管中進(jìn)行接種稀釋，直到最后一個試管中無菌生長為止，然后根據(jù)細(xì)菌生長情況和稀釋倍數(shù)，計(jì)算出水樣中細(xì)菌的數(shù)目。這兩種方法都有明顯的不足，平板菌落計(jì)數(shù)法測定結(jié)果誤差較大，而絕跡稀釋法操作極為繁瑣、費(fèi)時。我國石油資源十分豐富，在石油微生物開采和石油污染生物處理中，石油烴氧化菌具有十分重要的作用。在微生物采油科學(xué)研究、采油菌種產(chǎn)品量檢驗(yàn)、微生物采油現(xiàn)場監(jiān)測、本源微生物采油過程中，常常需要測定石油烴氧化菌的菌數(shù)。石油烴氧化菌的存在與否及其數(shù)量多少，在很大程度上決定著微生物采油成功與否和效果好壞。由此可見，準(zhǔn)確測定石油烴氧化菌的菌數(shù)是十分必要的，而現(xiàn)有的傳統(tǒng)測試技術(shù)和測試手段遠(yuǎn)不能滿足實(shí)際生產(chǎn)的要求。
發(fā)明內(nèi)容為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，使所生產(chǎn)的測試瓶能夠快速準(zhǔn)確地測定石油烴氧化菌的菌數(shù)，用于油氣勘探開發(fā)、尤其是石油微生物開采中石油烴氧化菌數(shù)量的測定。本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)上述目的的。在常溫下分別取氯化鈉(NaCl)1.0%、磷酸二氫鉀(KH2P04)0.2%、硝酸鉀(跳)0.15%、磷酸三鈉(Na3P04)0.1%、蒸餾水(H20)98.55%，然后依次用蒸餾水(H20)將其溶解，并加入到容器中混合、充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的pH值調(diào)節(jié)到7.5，配制成培養(yǎng)液；將7ml模制西林瓶清洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶4.5ml裝入瓶中，再向瓶中加入0.2ml的白油，然后加蓋、封口；將經(jīng)加蓋封口的測試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在12rC、1.05Kg/cii^條件下進(jìn)行高溫滅菌15分鐘，冷卻后即制成石油烴氧化菌測試瓶。本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比具有如下有益效果-1、本發(fā)明所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，生產(chǎn)過程簡單，可靠性強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。2、本發(fā)明所生產(chǎn)的石油烴氧化菌測試瓶能夠快速準(zhǔn)確地測定石油烴氧化菌的菌數(shù)，操作使用簡單、結(jié)果直接準(zhǔn)確。3、本發(fā)明所生產(chǎn)的石油烴氧化菌測試瓶中只有白油為微生物生長的唯一碳源，所培養(yǎng)出的微生物只是以白油為唯一碳源的石油烴氧化菌，測試工作不會受到其它微生物的干擾。具體實(shí)施例方式在常溫下(以配制1L培養(yǎng)液為例，以此類推)，分別稱取氯化鈉(NaCl)10.0g、磷酸二氫鉀(歸04)2.0g、硝酸鉀(跳)1.5g、磷酸三鈉(Na3P04)l.Og，然后依次用蒸餾水(H20)將其溶解，并加入到1L容量瓶中混合、再用蒸餾水(H20)定容到1L刻度線，充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的pH值調(diào)節(jié)到7.5，即配制成石油烴氧化菌測試瓶所需的培養(yǎng)液。將7ml模制西林瓶清洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶4.5ml裝入瓶中，再向瓶中加入0.2ml的白油，然后用A-13型藥用膠塞加蓋，用普通抗生素玻璃瓶鋁蓋經(jīng)專用封口器封口，最后用高溫蒸汽滅菌鍋在12rC、1.05Kg/cm"條件下將測試瓶集中進(jìn)行高溫滅菌15分鐘，冷卻后即制成石油烴氧化菌測試瓶。采用石油烴氧化菌測試瓶測定待測水樣中的石油烴氧化菌的菌數(shù)時，系采用絕跡稀釋法原理，將待測水樣用無菌注射器逐級注入測試瓶中稀釋培養(yǎng)，直到最后一個測試瓶無菌生長為止，根據(jù)稀釋的倍數(shù)計(jì)算出待測水樣中細(xì)菌的數(shù)目?？刹捎靡韵碌姆椒ê筒襟E(1)準(zhǔn)備數(shù)支相同的lml醫(yī)用注射器，用蒸餾水(H20)清洗干凈后高溫滅菌(高壓蒸汽滅菌鍋12rC、1.05Kg/cii^下滅菌15分鐘)，冷卻備用。(2)根據(jù)待測水樣中石油烴氧化菌的大致多少，將數(shù)個上述的石油烴氧化菌測試瓶排成一組，并依次編上序號l、2、3、4……。(3)用上述滅菌后的無菌注射器取0.5mL待測水樣并注入到1號石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)，充分震蕩10秒。(4)另取一支無菌注射器從搖勻后的1號石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)取出0.5mL液體注入到2號石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)，充分震蕩10秒。(5)再另取一支無菌注射器從搖勻后的2號石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)取出0.5mL液體注入到3號石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)，充分震蕩10秒。(6)依次重復(fù)上述操作程序，一直到最后一ii:為止。(7)把上述加入待測水樣后的一組石油烴氧化菌測試瓶放在30°C(或現(xiàn)場溫度)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)過7天后觀察測試瓶內(nèi)的變化，判斷細(xì)菌的生長情況。(8)判斷標(biāo)準(zhǔn)無菌存在的石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)的培養(yǎng)液無變化，而有菌存在的石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)的培養(yǎng)液則出現(xiàn)明顯渾濁乳化現(xiàn)象，因此，石油烴氧化菌測試瓶中的培養(yǎng)液出現(xiàn)明顯渾濁乳化現(xiàn)象的，表示有石油烴氧化菌生長。(9)根據(jù)石油烴氧化菌測試瓶內(nèi)指示細(xì)菌生長的情況和有菌生長的測試瓶的瓶數(shù)，査表1可計(jì)算出待測水樣中的石油烴氧化菌菌數(shù)。表l單瓶細(xì)菌最大可能值有菌生長測試瓶數(shù)菌數(shù)/個mL'111—10210—1003100—100041000—10000<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1、一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于在瓶內(nèi)加入由蒸餾水(H2O)、氯化鈉(NaCl)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、硝酸鉀(KNO3)、磷酸三鈉(Na3PO4)等組成的培養(yǎng)液和白油，經(jīng)加蓋封口、高溫蒸汽滅菌完成。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于在常溫下分別取氯化鈉(NaCl)1.0%、磷酸二氫鉀(KH2P04)0.2%、硝酸鉀(認(rèn)03)0.15%、磷酸三鈉(Na3P04)0.1%、蒸餾水(H20)98.55%,然后依次用蒸餾水(H20)將其溶解，并加入到容器中混合、充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的pH值調(diào)節(jié)到7.5，即配制成所需的培養(yǎng)液。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于將7ml模制西林瓶清洗干凈、干燥，用液體分裝器將所配制的培養(yǎng)液按每瓶4.5ml分裝，再向瓶中加入0.2ml的白油，然后加蓋、封口。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，其特征在于將經(jīng)加蓋封口的測試瓶用高溫蒸汽滅菌鍋在121°C、1.05Kg/cm2條件下進(jìn)行高溫滅菌15分鐘。全文摘要本發(fā)明涉及一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，屬應(yīng)用微生物檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，其特征在于在常溫下分別取氯化鈉(NaCl)1.0％、磷酸二氫鉀(KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>)0.2％、硝酸鉀(KNO<sub>3</sub>)0.15％、磷酸三鈉(Na<sub>3</sub>PO<sub>4</sub>)0.1％、蒸餾水(H<sub>2</sub>O)98.55％，然后依次用蒸餾水(H<sub>2</sub>O)將其溶解，并加入到容器中混合、充分搖勻，用酸液或堿液將溶液的pH值調(diào)節(jié)到7.5，配制成所需的培養(yǎng)液；將所配制的培養(yǎng)液按每瓶4.5ml裝入瓶中，再向瓶中加入0.2ml的白油，然后加蓋、封口、高溫滅菌、冷卻后即制成石油烴氧化菌測試瓶。本發(fā)明所述的一種石油烴氧化菌測試瓶的生產(chǎn)方法，生產(chǎn)過程簡單，可靠性強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。應(yīng)用該測試瓶能準(zhǔn)確測定待測水樣中石油烴氧化菌菌數(shù)，提高工作效率。文檔編號C12Q1/04GK101555513SQ20081010369公開日2009年10月14日申請日期2008年4月10日優(yōu)先權(quán)日2008年4月10日發(fā)明者易紹金申請人:長江大學(xué)