專利名稱：：針對(duì)αVβ6的抗體及其應(yīng)用的制作方法針對(duì)aV(36的抗體及其應(yīng)用根據(jù)異源二聚體的配體特異性，整合蛋白家族可以被分成多個(gè)子家族。一個(gè)子家族由識(shí)別并結(jié)合RGD三肽的全部整合蛋白構(gòu)成。這些受體包括allb/(33和全部aV異源二聚體(Thomas等人，(2006)J.OralPathol.Med.35:1-10)。盡管aV鏈能夠與5種已知的(3鏈配對(duì)，但這些(3鏈中的一些僅能夠與aV配對(duì)。(36鏈對(duì)于與aV異源二聚體化是選擇性的，這種配對(duì)以或高或低的親和力結(jié)合胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子蛋白質(zhì)。aVp6結(jié)合TGFpiLAP和TGF卩3LAP潛伏復(fù)合物上的RGD基序，并激活它們(Munger等人，(1999)Cell96:319-328;Annes等人，(2002)FEBSLetters511:65-68)。然而，它不結(jié)合或激活TGF卩2LAP，這不會(huì)具有三肽(Ludbrook等人，(2003)Biochem.J.369:311-18)。aV(36-介導(dǎo)的TGF(3激活需要潛伏TGF(3結(jié)合蛋白1(LTBP1),這包括了潛伏TGF(3復(fù)合物以及胞外基質(zhì)。激活被認(rèn)為是由于所誘導(dǎo)的構(gòu)型改變，因?yàn)門GFPLAP分別被aV(36和LTBP1保持在細(xì)胞和基質(zhì)之間(Keski-Oja等人，(2004)TrendsCellBiol.14:657-659;Annes等人，(2004)J.CellBiol.165:723-34)。aV(36對(duì)TGF(3LAP復(fù)合物的皮摩爾爾結(jié)合親和力對(duì)于所有其已知的配體是最高的。aV(36的其他配體包括纖連蛋白、結(jié)合腕蛋白、玻璃體結(jié)合蛋白和骨橋蛋白(Busk等人，(1992)J.Biol.Chem.267:5790-6;Prieto等人，(1993)PNAS90:10154-8;Huang等人，(1998)J.Cell.Sci.11l(Pt15):2189-95;Yokosaki等人，(2005)MatrixBiol.24:418-27)。aV(36與這些胞外基質(zhì)蛋白的結(jié)合親和力是低親和力，并且在納摩爾范圍內(nèi)。除了其在傷口修復(fù)中表達(dá)外，aV(36整合蛋白還在許多人類腫瘤的外周被上調(diào)。已經(jīng)報(bào)道aV卩6在口腔中(Breuss等人，(1995)J.CellSci.108:2241-51;Jones等人，(1997)J.OralPathol.Med.26:63-8;Hamidi等人，(2000)Br.JCancer82:1433-40;Regezi等人，(2002)OralOncology38:332-6;Impola等人，(2004)J.Pathol.202:14-22)和皮膚扁平細(xì)胞癌以及肺癌(Smythe等人，(1995)Can.MetRev.14:229-39)、乳癌(Arhiro等人，(2000)BreastCan.7:19-26)、胰腺癌(Sipos,等人，(2004)Histopathology45:226-36)、胃癌(Kawashima等人，(2003)Pathol.Res.Pmct.199:57-64)、結(jié)腸癌(Bates等人，(2005)J.Clin.Invest.115:339-47)、卯巢癌(Ahmed等人，(2002)Carcinogenesis23:237-44;Ahmed等人，(2002)J.Histochem.Cytochem.50:1371-79)和唾液腺(Westernoff等人，(2005)OralOncology41:170-74)中表達(dá)。在這些報(bào)道的一些中，aVp6的表達(dá)與提高的腫瘤級(jí)別(Ahmed等人，(2002)J.Histochem.Cytochem.50:1371-79;Arihiro等人，(2000)BreastCan.7:19-26),最終轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)(Kawashima等人，(2003)Pathol.Res.Pract.199:57-64;Bates等人，(2005)J.Clin.Invest.115:339-47)，或者預(yù)后差(Bates等人，(2005)J.Clin.Invest.115:339-47)相關(guān)。大部分充分研究的肺瘤類型是口腔扁平細(xì)胞癌，其中研究人員還研究了癌前損傷中的aV(36，并其表達(dá)與發(fā)展成惡性有關(guān)(Hamidi等人，(2000)Br.JCancer82:1433-40)。還在結(jié)腸癌中對(duì)aV)36與腫瘤進(jìn)展之間的聯(lián)系進(jìn)行研究，其中整合蛋白的存在與體外模型中的結(jié)腸細(xì)胞的上皮細(xì)胞-間葉細(xì)胞轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)(Brunton等人，(2001)Neoplasia3:215-26;Bates等人，(2005)J.Clin.Invest.115:339-47)。EMT是正常的發(fā)育過程，其使得上皮細(xì)胞能夠離開其產(chǎn)地組織(hometissue),并遷移到新區(qū)域(ThieryandSleeman，(2006)NatRev.Mol.CellBiol.7:131-42)。顯著的是蛋白質(zhì)表達(dá)的提高，這促進(jìn)了細(xì)胞的遷移和侵入，例如基質(zhì)蛋白酶、細(xì)胞因子如TGF(3和多種細(xì)胞粘附分子包括整合蛋白(ZavadilandBottinger,(2005)Oncogene24:5764-5774)。在肺瘤中，特別是侵襲性侵入和轉(zhuǎn)移癌中也已經(jīng)堅(jiān)定了EMT標(biāo)記物的表達(dá)。aVp6促進(jìn)粘附到間質(zhì)纖連蛋白上調(diào)MMP-9以及其他蛋白酶的表達(dá)，并且激活TGF(3的能力表明，其可能有助于惡性細(xì)胞的EMT和腫瘤進(jìn)展(BatesandMercurio,(2005)CancerBio.&Ther.4:365-70)。本發(fā)明的實(shí)施方式還包括抗-aV(36抗體的全人分離的結(jié)合片段。在一個(gè)實(shí)施方式中，結(jié)合片段來自全人抗-aV(36抗體。示例性的片段包括Fv、Fab，或者其他下面更詳細(xì)描述的公知抗體片段。本發(fā)明的實(shí)施方式還包括表達(dá)針對(duì)aV(36的全人抗體的細(xì)胞。細(xì)胞的例子包括雜交瘤或者重組形成的細(xì)胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、CHO細(xì)胞的變體(例如DG44)以及NS0細(xì)胞，其產(chǎn)生針對(duì)aV(36的抗體。關(guān)于CHO細(xì)胞變體的其他信息可見于AndersenandReilly(2004)CurrentOpinioninBiotechnology15,456-462,通過參照將其整體并入本文。在一個(gè)實(shí)施方式中，aVp6生物活性的拮抗劑可以結(jié)合otVp6,并因此防止TGFPLAP介導(dǎo)的細(xì)胞粘附。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是含有正如本文所描述核酸分子或者多個(gè)核酸分子的載體，其中所述載體編碼在上文中所限定的抗體的輕鏈和/或重鏈。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是包含正如上文所描述的載體的宿主細(xì)胞?？商鎿Q的，宿主細(xì)胞可以包含超過一個(gè)載體。抗體給藥的路線是根據(jù)已知方法，例如通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦內(nèi)、肌內(nèi)、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腦脊髓膜內(nèi)、注射或者灌輸、吸入或損傷內(nèi)路線、直接注射到腫瘤位點(diǎn)或者通過下面所述的持續(xù)釋放系統(tǒng)。優(yōu)選通過灌輸或快速濃注(bolusinjection)給藥抗體。(iii)抗-侵入劑(例如c-Src激酶家族抑制劑例如4-(6-氯-2,3-亞曱基二氧苯胺基)-7-[2-(4-曱基哌嗪-l-基)乙氧基]-5-四氫吡喃-4-基羥喹唑啉(AZD0530;國際專利申請(qǐng)WO01/94341)和iV-(2-氯-6-甲基苯基)_2-{6-[4-(2-羥乙基)哌。秦-1-基]-2-曱基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-曱酰胺(達(dá)沙替尼(Dasatinib),BMS-354825;J.Med.Chem.,2004，47,6658-6661)以及金屬蛋白酶抑制劑如馬馬司他(Marimastat)、尿激酶血纖維蛋白溶酶原激活受體功能的抑制劑或者肝素酶的抗體)；(iv)生長(zhǎng)因子功能的抑制劑例如這些抑制劑包括生長(zhǎng)因子抗體和生長(zhǎng)因子受體抗體(例如抗-erbB2抗體曲妥珠單抗(Trastuzumab)[Herceptin],抗-EGFR抗體西妥昔單抗(panitumumab)、抗-EGFR抑制劑Bevacizumab(AvastinTM)、抗-erbBl抗體cetuximab[Erbitux,C225]以及所有Stern等人,Criticalreviewsinoncology/haematology,2005,Vol.54,ppll-29所公開的生長(zhǎng)因子或生長(zhǎng)因子受體抗體)；這些抑制劑還包括酪氨酸激酶抑制劑例如表皮生長(zhǎng)因子家族的抑制劑(例如EGFR家族絡(luò)氨酸激酶抑制劑例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-曱氧基-6-(3-嗎啉丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839),>1-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-曱氧基乙氧基)會(huì)唑啉-4-胺(erlotinib,OSI-774)和6-丙烯酰胺_^[-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI1033),erbB2酪氨酸激酶抑制劑例如拉帕替尼(lapatinib),肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族抑的制劑，血小板衍生家族的抑制劑例如馬替尼(Imatinib),絲氨酸/蘇氨酸激酶的抑制劑(例如Ras/Raf信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑例如法尼基(Farnesyl)轉(zhuǎn)移酶抑制劑例如索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006))，通過MEK和/或AKT激酶的信號(hào)傳導(dǎo)的抑制劑，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的抑制劑，c-kit抑制劑，abl激酶抑制劑，IGF受體(胰島素類生長(zhǎng)因子)激酶抑制劑；aurora激酶抑制劑(例如AZD1152,PH739358,VX-680,MLN8054,R763,MP235,MP529,VX-528ANDAX39459)和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑例如CDK2和/或CDK4抑制劑；(vii)反義治療，例如針對(duì)上述所列靶的，例如例如ISIS2503,抗-ras反義；(ix)免疫治療途徑，包括例如先體外后體內(nèi)("-v/w)和體內(nèi)途徑以提高患者肺瘤細(xì)胞的免疫原性，例如轉(zhuǎn)染細(xì)胞因子例如白介素2,白介素4或者粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子，降低T細(xì)胞缺失的途徑，使用被轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞的途徑例如轉(zhuǎn)染細(xì)胞因子的樹突狀細(xì)胞，使用轉(zhuǎn)染細(xì)胞因子的肺瘤細(xì)胞系的途徑以及使用抗-獨(dú)特型抗體的途徑。對(duì)從所收獲細(xì)胞收集的上清液進(jìn)行測(cè)試以檢驗(yàn)所分泌抗體與穩(wěn)定過表達(dá)aV(36的HEK293細(xì)胞的結(jié)合。使用親代293F細(xì)胞作為陰性對(duì)照。以50pL/孔的體積，以對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子2500個(gè)細(xì)胞/孔的密度，對(duì)于親代細(xì)胞密度為22,500個(gè)細(xì)胞/孔，將Freestyle培養(yǎng)基(Invitrogen)中的細(xì)胞接種到384-孔FMAT平板中，并將細(xì)胞在37°C下孵育過夜。接著加入10inL/孔的上清液，并將平板在4。C下孵育大約1小時(shí)，之后以2.8pg/ml的濃度加入10^L/孔抗-人IgG-Cy5二抗(終濃度400ng/ml)。接著將平板在4。C下孵育1小時(shí)，并使用FMAT大共聚焦掃描儀(AppliedBiosystems)讀取熒光。表3中概述了11種抗體的FMAT結(jié)果。使用50pL10pg/mlTGF(31LAP(TGF(3LAP)對(duì)NuncMaxiSorp(Nunc)板進(jìn)行包被過夜，并在檢驗(yàn)之前使用3%BSA/PBS預(yù)封閉1小時(shí)。將HT29細(xì)胞培養(yǎng)到最佳密度，接著沉淀并在HBBS(具有1%BSA而沒有Mn2+)中清洗兩次，之后接著30,000個(gè)細(xì)胞/孔將細(xì)胞重懸浮在HBSS中。從板除去包被液，接著使用100|iiL3%BSA在室溫下封閉1小時(shí)，之后使用PBS清洗兩次。將結(jié)合培養(yǎng)基96孑L板(Costar,catalog#3368)包被50(aL/孔10pg/mlPBS以及0.05%疊氮化鈉中的GST-LAP,并在4。C下孵育過夜。接著使用300pL/孑L檢驗(yàn)稀釋液(在TBS(50mMTris,50mMNaCl，lmMMgCl2和lmMCaCl2,pH6.9)中的牛奶)將板清洗3次，之后使用300pL/孔TBS中的5%牛奶將板進(jìn)行封閉，并在室溫下孵育30分鐘。將mAb(以10ng/m卜0.01pg/ml范圍內(nèi)的1:3系列稀釋)與ocV(36(在78含有0.05%疊氮化鈉的檢驗(yàn)稀釋液中為250ng/ml)孵育過夜。第二天，將50pL/孔預(yù)孵育的第一抗體轉(zhuǎn)移到包被GST-LAP肽的板，并在室溫下孵育1小時(shí)。接著使用300pL/孔的檢驗(yàn)稀釋液將孔清洗3次。接著，為了檢測(cè)結(jié)合到板的aVp6的量，以在檢驗(yàn)稀釋液中1(Lig/ml的濃度加入mAb2075(Chemicon)(50pL/孔)，并在室溫下孵育1小時(shí)。接著使用300pL/孔的檢驗(yàn)稀釋液將孔清洗3次，并與檢驗(yàn)稀釋液中的400ng/ml山羊抗-小鼠IgGFc-過氧化物酶(50pL/孔)在室溫下孵育1小時(shí)。接著使用300(aL/孔的檢驗(yàn)稀釋液將孔清洗3次，并使用l-stepTMB(Neogen)以總體積為50(nL/孔進(jìn)行顯影。15分鐘后，使用50^L/孔的1N鹽酸淬滅顯影反應(yīng)。在450nm處讀取板，圖1中概述了5種抗體的結(jié)果，其顯示抗體能夠抑制aVp6結(jié)合GST-LAP。實(shí)施例12與aVp3或者otV(35整合蛋白的交叉反應(yīng)將檢驗(yàn)板包被骨橋蛋白肽。使用兩種骨橋蛋白肽OPN17-168和OPN17-314。在檢驗(yàn)前使用3。/。BSA/PBS將檢驗(yàn)板進(jìn)行預(yù)封閉1小時(shí)。從培養(yǎng)瓶中取出A375M細(xì)胞，沉淀，并使用含有1%BSA和lmMCa"與lmMMg2+的HBSS清洗兩次。接著將細(xì)胞懸浮在HBSS中，濃度為每孔30,000個(gè)細(xì)胞。除去含有骨橋蛋白片段的涂覆液，在室溫下使用100pL3%BSA對(duì)板進(jìn)行封閉1小時(shí)。使用含有1%BSA的HBSS將經(jīng)涂覆的板進(jìn)行清洗兩次。以1:4系列稀釋制備兩次30L終體積以及終濃度的抗體滴定液。將重懸浮的細(xì)胞加入到V底板中含有滴定法測(cè)量的抗體的孔中，并將細(xì)胞和抗體在4tl下共孵育40分鐘。接著，將細(xì)胞-抗體混合物轉(zhuǎn)移到經(jīng)包被的板上，之后在37。C下孵育40分鐘。下一步在溫HBSS中將經(jīng)包被板上的細(xì)胞清洗4次，接著將板中的細(xì)胞在-80。C下冷凍15分鐘。在室溫下融化細(xì)胞，接著根據(jù)制造商的指導(dǎo)向每個(gè)孔中加入100|nLCyQuant染料/裂解緩沖液(MolecularProbes)。在485nm的激發(fā)波長(zhǎng)和530nm的發(fā)射波長(zhǎng)處讀取熒光。表16中概述了11種抗體的結(jié)果。商業(yè)購得的(31整合蛋白特異性抗體在該檢驗(yàn)中用作陽性對(duì)照，其表現(xiàn)出抑制97%的粘附。商業(yè)購得的aV(36特異性抗體在該檢驗(yàn)中作為粘附a4pi的陰性對(duì)照。所有抗體均以5pg/ml的濃度進(jìn)行測(cè)試，并且沒有測(cè)試抗體能夠阻斷粘附a4(31。表16.與a4pi整合蛋白的交叉反應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>CS-1片段包被的沒有抗體的板10實(shí)施例14與a5(31整合蛋白的交叉反應(yīng)[t)247為了確定抗體僅對(duì)aVp6整合蛋白有功能，而對(duì)a5pl整合蛋白沒有功能，進(jìn)行粘附檢驗(yàn)以測(cè)試抗體抑制K562粘附纖連蛋白的能力。為了確定是否抗體表現(xiàn)出與小鼠aV(36或者獼猴ocVp6的交叉反應(yīng)，進(jìn)4亍下列^r-瞼。ug/mL,mAbsc264稀釋到0.94|ug/mL,mAbsc254.2稀釋到0.87|ug/mL,以及mAbsc298稀釋到1.6|ug/mL。接著對(duì)每種mAb開發(fā)捕獲水平規(guī)程，其通過在每種細(xì)胞流上捕獲每種mAb,其中所述細(xì)胞流的流速為10]uL/分鐘，濃度如上所列。將mAbsc133、sc298和sc254.2捕獲30秒，而將mAbsc188和sc264捕獲1分鐘。以50iuL/分鐘進(jìn)行4分鐘的清洗步驟，以穩(wěn)定mAb。作為Biacore的替代，還使用FACS分析評(píng)估抗體之一與K562細(xì)胞的結(jié)合親和力，其中K562細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)人aVp6抗原。對(duì)抗原的量進(jìn)行滴定，以產(chǎn)生結(jié)合曲線，并評(píng)估與抗原的親和力。根據(jù)如實(shí)施例18中所述測(cè)量sc264RAD抗體與aV(36的結(jié)合親和力。表28中概述了該檢驗(yàn)的結(jié)果，并證明sc264RAD抗體具有〈50pM的親和力。表28.使用FACS分析親和力親和力<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table>實(shí)施例28SC264RAD與SC264RAD/ADY活性的比較[0285在Detroit-562粘附檢驗(yàn)中比較sc264RAD抗體和生殖系d(GL)版本的264RAD(在輕鏈中含有突變A84D)、264RAD/ADY的活性。[0286在4。C下將板包被0.5|iig/mlGST-TGF-bLAP融合蛋白過夜，第二天早上進(jìn)行清洗，并接著使用3%BSA/PBS封閉1小時(shí)。接著將Detroit-562細(xì)胞(每孔25000個(gè)細(xì)胞)在37。C下在含有2mMMgCl2的HBSS中粘附到板上持續(xù)45分鐘。45分鐘后，將板在PBS中清洗3次，接著在乙醇中固定。通過使用Hoescht對(duì)細(xì)胞進(jìn)行可^L化，并在CellomicsArrayscanII上，通過計(jì)算每孔結(jié)合的細(xì)胞的數(shù)目而進(jìn)行定量。圖5中的數(shù)據(jù)顯示sc264RAD和sc264RAD/ADY都具有類似的活性，并且在修飾的抗體中保持了阻斷0tVp6的能力。實(shí)施例29生長(zhǎng)研究[0287為了確定抗體264RAD，133和188SDM在體內(nèi)阻斷aVp6功能，均對(duì)其測(cè)試抑制aV(36陽性腫瘤異種移植物的生長(zhǎng)的能力。一種這類模型是Detroit-562鼻咽癌細(xì)胞系(nasophayngealcellline),其表達(dá)aV(36,還生長(zhǎng)為皮下腫瘤異種移植物。[0288將Detroit562細(xì)胞培養(yǎng)在EMEM中，其具有Earle'sBSS以及2mML-Glu十1.0mM丙酮酸鈉、O.lmMNEAA十1.5§凡碳酸氳鈉+10%FBS。收集細(xì)胞，并重懸浮在50Q/()PBS+50。/()基質(zhì)膠(matrigel)中。接著以0.1ml的體積將懸浮液在小鼠的右側(cè)植入每只小鼠5xl0《個(gè)細(xì)胞。動(dòng)物是6-8周的NCR雌性棵鼠。在腫瘤達(dá)到0.1cn^時(shí)，開始給藥，并在整個(gè)研究過程中以每周一次20mg/kg的劑量給藥。所有三種抗體均抑制肺瘤生長(zhǎng)(參見圖4)。264RAD最有效，接著是133和188。該數(shù)據(jù)明顯表示抗體264RAD、133和188在體內(nèi)有活性，并且能夠降低依賴ocVP6信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行生長(zhǎng)的腫瘤的生長(zhǎng)。通過參照并入[0289本文引述的所有參考文獻(xiàn)，包括專利、專利申請(qǐng)、論文、教科書等及其中引述的參考文獻(xiàn)，通過引用整體結(jié)合到本文中。等同[02901前面的書面說明書被認(rèn)為足以使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明。前面的說明內(nèi)容和實(shí)施例詳述了本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施方案，描述了本發(fā)明人所構(gòu)思的最佳方式。但是需要認(rèn)識(shí)到，前述內(nèi)容無論在文本上可能顯得如何詳盡，本發(fā)明都還可用多種方式進(jìn)行實(shí)施，本發(fā)明應(yīng)按照所附權(quán)利要求或其任何等同權(quán)利要求進(jìn)行解釋。<table>tableseeoriginaldocumentpage97</column></row><table>權(quán)利要求1.靶向結(jié)合劑，其特異性結(jié)合αVβ6并抑制配體結(jié)合αVβ6。2.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑抑制99%的TGF(3-LAP介導(dǎo)的HT29細(xì)胞的粘附。3.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑以低于0.070pg/ml的IC5。抑制TGFP-LAP介導(dǎo)的HT29細(xì)胞粘附。4.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑以低于35納摩爾(nM)的Kd結(jié)合aV(36。5.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑以低于25納摩爾(nM)的Kd結(jié)合aV(36。6.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑以低于10納摩爾(nM)的Kd結(jié)合aVp6。7.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，，其中所述靶向結(jié)合劑以低于60皮摩爾(pM)的Kd結(jié)合aV(36。8.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑是單克隆抗體.9.權(quán)利要求8的靶向結(jié)合劑，其中所述靶向結(jié)合劑是全人單克隆抗體.10.權(quán)利要求9的耙向結(jié)合劑，其中所述耙向結(jié)合劑是sc264RAD、sc264RAD/ADY、sc188SDM、sc133、sc133TMT、sc133WDS、sc133TMT/WDS、sc188、sc254、sc264或者sc298。11.權(quán)利要求11的靶向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑至少包含具有SEQIDNO.:14的98~102位氨基酸的VHCDR3。12.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑至少包含具有SEQIDNO.:22的99~113位氨基酸的VHCDR3。13.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑至少包含具有SEQIDNO.:26的99~117位氨基酸的VHCDR3。14.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑至少包含具有SEQIDNO.:30的99~U4位氨基酸的VHCDR3。15.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑至少包含具有SEQIDNO.:38的97~113位氨基酸的VHCDR3。16.權(quán)利要求1的把向結(jié)合劑，其中所述結(jié)合劑包含具有SEQIDNO.:14序列的重鏈多肽。其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述結(jié)合劑包含具有SEQID其中所述抗體包含17.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:22序列的重鏈多肽。18.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:26序列的重鏈多肽。19.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:30序列的重鏈多肽。20.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:38序列的重鏈多肽。21.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:71序列的重鏈多肽。22.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，NO.:75序列的重鏈多肽。23.分離的抗體，其結(jié)合aV(36:重鏈可變區(qū)，其包含CDR1、CDR2和CDR3序歹'J;以及輕鏈可變區(qū)，其包含CDR1、CDR2和CDR3序列，其中重鏈可變區(qū)CDR3序列包含選自SEQIDNO.:14、SEQIDNO.:22、SEQIDNO.:26、SEQIDNO.:30或者SEQIDNO.:38、SEQIDNO:71、SEQIDNO:76、SEQIDNO:79及其保守序列修飾的氨基酸序列，以及輕鏈變區(qū)CDR3序列包含選自SEQIDNO.:16、SEQIDNO.:24、SEQIDNO.:28、SEQIDNO.:32或者SEQIDNO.:40、SEQIDNO:85、SEQIDNO:93及其保守序列修飾的氨基酸序列。24.權(quán)利要求l的靶向結(jié)合劑，其與藥物上可以接受的載體結(jié)合。25.權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑，其中所述耙向結(jié)合劑是全人分離抗-aV(36抗體的結(jié)合片段。26.核酸分子，其編碼權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑。27.載體，其包含權(quán)利要求26的核酸分子。28.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求27的載體。29.治療動(dòng)物中惡性肺瘤的方法，其包括為有此需要的所述動(dòng)物給藥治療有效量的權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述動(dòng)物是人。31.權(quán)利要求29的方法，其中所述靶向結(jié)合劑是單克隆抗體sc264RAD、sc264RAD/ADY、sc188SDM、sc133、sc133TMT、sc133WDS、sc133TMT/WDS、sc188、sc254、sc264或者sc298。32.權(quán)利要求29的方法，其中所述惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、曱狀腺瘤、胃(胃)癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食道癌、頭頸癌、間皮瘤、肉瘤、膽(膽管腺癌)、小腸腺癌、小兒惡性胂瘤和表皮樣癌。33.治療炎癥的方法，其包括為有此需要的動(dòng)物給藥治療有效量的權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述動(dòng)物是人。35.權(quán)利要求33的方法，其中所述靶向結(jié)合劑是全人單克隆抗體。36.權(quán)利要求33的方法，其中所述靶向結(jié)合劑結(jié)合aV(36。37.抑制aVf36與其配體相互作用的方法，其包括將aV(36與權(quán)利要求1的靶向結(jié)合劑接觸。全文摘要描述了針對(duì)抗原αVβ6的靶向結(jié)合劑，例如抗體，以及這些結(jié)合劑的應(yīng)用。特別的，公開了針對(duì)抗原αVβ6的全人單克隆抗體。公開了編碼核苷酸序列，以及氨基酸序列，所述氨基酸序列包括重鏈和輕鏈免疫球蛋白分子，特別地對(duì)應(yīng)形成框架區(qū)和/或互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的連續(xù)重鏈和輕鏈序列的序列，特別是從FR1到FR4，或者CDR到CDR3。還公開了表達(dá)這些免疫球蛋白分子和單克隆抗體的雜交瘤或者其他細(xì)胞系。文檔編號(hào)C12N15/13GK101553505SQ200780037251公開日2009年10月7日申請(qǐng)日期2007年8月2日優(yōu)先權(quán)日2006年8月3日發(fā)明者A·阿爾夫里德,I·福爾茨,J·林肯伯格,S·T·貝里,V·貝迪安申請(qǐng)人:阿斯利康(瑞典)有限公司