專利名稱：構(gòu)樹的一種組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的繁殖方法，特別是涉及構(gòu)樹的一種組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
構(gòu)樹(Srai^o"e"a/7"/7_yn/eraL.)是一種落葉喬木，樹高達(dá)16米；樹皮平滑， 淺灰色；枝粗壯，平展，紅褐色，密生白色絨毛；葉闊卵形，長(zhǎng)8-20厘米，寬6-15 厘米，頂端銳尖，基部圓形或近心形，邊緣有粗齒，3-5深裂(幼枝上的葉更為明顯)， 兩面有厚柔毛；葉柄長(zhǎng)3-5厘米，密生絨毛；托葉卵狀長(zhǎng)圓形，早落；花雌雄異株， 雄花序?yàn)橐干麓沟牟它S花序，長(zhǎng)6-8厘米；雌花序頭狀，苞片棒狀，頂端圓錐形， 有毛，花柱基部不分枝。聚花果球形，直徑約3厘米；花期5月，果熟期為9月。
構(gòu)樹適應(yīng)性極強(qiáng)，能耐寒冷和干旱，耐瘠薄和濕熱，根系發(fā)達(dá)，極少有病蟲害， 可作為荒灘、偏僻地帶的綠化樹種，也可用作為行道樹；構(gòu)樹皮為優(yōu)質(zhì)造紙?jiān)希?構(gòu)樹葉蛋白質(zhì)含量高達(dá)20%-30%，氨基酸、維生素、碳水化合物及微量元素等營(yíng)養(yǎng) 成分也十分豐富，經(jīng)科學(xué)加工后可用于生產(chǎn)全價(jià)畜禽飼料；果實(shí)及根可入藥，能補(bǔ) 腎利尿、強(qiáng)筋骨，構(gòu)樹果有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，可制成天然有機(jī)多功能保健飲料；葉 的乳汁，可擦治瘡癬；構(gòu)樹還可以抵抗有毒氣體(二氧化硫和氯氣)，可在大氣污染 嚴(yán)重地區(qū)栽植。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供構(gòu)樹的一種組織培養(yǎng)方法。
本發(fā)明所提供的構(gòu)樹組織培養(yǎng)方法是將構(gòu)樹頂芽或側(cè)芽在萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 得到萌發(fā)的無根苗；所述萌發(fā)培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加IAA、 6-BA和GA得到的 培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0. 1-0. 5毫克/升，所述6-BA的終濃度為0. 1-0. 5毫 克/升，所述GA的終濃度為O — O. l毫克/升。
所述IAA的終濃度具體可為0. 5毫克/升，所述6-BA的終濃度具體可為0. 5毫 克/升，所述GA的終濃度具體可為0. 1毫克/升。
所述方法中還包括將所述萌發(fā)的無根苗在不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基進(jìn)行不定 芽誘導(dǎo)及繼代的步驟，得到無根苗。
所述不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加IAA、 6-BA和ZT得到的培 養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0 — 0. 1毫克/升，所述6-BA的終濃度為0. 1-2. 0毫克/ 升，所述ZT的終濃度為0.3毫克/升。
所述IAA的終濃度具體可為0. 1毫克/升，所述6-BA的終濃度具體可為1. 5毫 克/升。
所述方法中還包括將所述無根苗在不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行不定根誘導(dǎo)的步驟。 所述不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加IAA、 NAA、 6-BA和ZT得到的培 養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0. 3-1. 0毫克/升，所述NAA的終濃度為0. 1-1. 0毫克/ 升，所述6-BA的終濃度為O. l毫克/升，所述ZT的終濃度為O. l毫克/升。
所述IAA的終濃度具體可為1. 0毫克/升，所述NAA的終濃度具體可為1. 0毫 克/升。
所述萌發(fā)的培養(yǎng)條件可為在25土2"，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90一M m—Y1;所述不定芽分化及繼代的培養(yǎng)條件可為在25土2"，光照時(shí)間為14小時(shí)，光 照強(qiáng)度為10(^Mm々s";所述不定根誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件可為在25士2。C，光照時(shí)間為 IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110pMm^"。
本發(fā)明以構(gòu)樹頂芽為外植體，利用其專用培養(yǎng)基，成功地建立了一個(gè)有效的構(gòu) 樹離體培養(yǎng)再生體系，為木本植物大量組織培養(yǎng)快速繁殖提供了一個(gè)可參照的技術(shù) 和方法。本發(fā)明方法具有以下優(yōu)點(diǎn)取材容易，極易獲得無菌材料，變異率低、增 值系數(shù)高，4周增殖倍數(shù)能達(dá)到4一8倍，組培苗生根率達(dá)到92%，煉苗成活率高 達(dá)93%，具有很強(qiáng)的工廠化生產(chǎn)能力。


圖1為構(gòu)樹不定芽分化
圖2為構(gòu)樹生根培養(yǎng)
圖3為構(gòu)樹組培苗煉苗
圖4為1年生構(gòu)樹組培苗生長(zhǎng)情況
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中所涉及實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明均為常規(guī)方法。 下述實(shí)施例中所用培養(yǎng)基均為固體MS基本培養(yǎng)基(含有30g/L蔗糖)。pH為 5. 8-6.0。
實(shí)施例1、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lrag/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA O.lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90^Mm-Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為75±8%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25土2'C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm'Y1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10 mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110wM nT2S—'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為92±5%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為O. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200//Mm—Y1，溫度為20-28°C，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±3%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗l-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1200kg/畝，只保留l根主干的重量為900kg/ 畝。
實(shí)施例2、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 1. 0mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0, lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽,用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為9(^^1111-2^。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為75±8%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2t:，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為lOO^M mS"。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10ram莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照時(shí)間為10小時(shí)，光照強(qiáng)度為110//M nf2s—'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為90±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為O. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200aM m—2s—\溫度為20-28°c ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±4%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量為1250kg/畝，只保留l根主干的重量為910kg/ 畝。
實(shí)施例3、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0.5mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用0. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90^Mm^"。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為70±6%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1. 5-3. 0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-lOmm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25土2'C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm—Y1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10 ram莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110 wM m—2s—'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為91±4%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗
凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后
的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為20(^Mm—V1，溫度為20-28°C，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到95±2%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗l-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1180kg/畝，只保留l根主干的重量為880kg/ 畝。
實(shí)施例4、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 0. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 1.0mg/L+NAA 0, 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽,用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用0. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90/^1111-23-1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為69±3%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25土2X:，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為100//M m—Y1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10 mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110 wM m—2s—'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為92±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)l周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200aM m-2s"，溫度為20-28°c ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±3%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cra時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗卜3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1220kg/畝，只保留l根主干的重量為930kg/ 畝。
實(shí)施例5、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 1. Omg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿的構(gòu)樹頂部冬芽,用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘， 無菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗 3次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90/^Mm—Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為55±4%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cra。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2"C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為100//Mm、"。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2X:，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110wM ii^s:實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為93±4%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200aM m—Y1，溫度為20-28°c ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到93±2%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cra時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗l-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量為1250kg/畝，只保留l根主干的重量為890kg/ 畝。
實(shí)施例6、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 1. Omg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0.3mg/L+NAA 1. Omg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用121。c高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用0. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°c，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90^Mm-V1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為77±2%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cra。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2X:，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為100/Alm—23—1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110//M m"s—、實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為91±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200aM m—2s"，溫度為20-28°c ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±2%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示。砍收地上部分，保留分枝的重量為1150kg/畝，只保留l根主干的重量為920kg/ 畝。
實(shí)施例7、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA O.lmg/L+6-BA 1. Omg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lrag/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90/^VIm-Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為55±5%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mra長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2r，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm—23—1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25土2"C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110//M ra—2s—、實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為92±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗
凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后
的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200/zMm^",溫度為20-28t:，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到91±4%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠郑Ａ舴种Φ闹亓繛?260kg/畝，只保留l根主干的重量為950kg/ 畝。
實(shí)施例8、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0, lmg/L+6-BA 1. Omg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA LOmg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90^Mm-Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為70±3%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm'V1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2i:，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110 ra—Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為93±2%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為20(^Mm、"，溫度為20-28t:，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到93±2%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6ra，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1150kg/畝，只保留l根主干的重量為950kg/ 畝。
實(shí)施例9、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA O.lmg/L+6-BA 1. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 0. 5mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽,用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90z/Mm—Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為61±5%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為100^Mm-Y1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10 ram莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2'C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110wM nT2s—、實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為93±2%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗
凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后
的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200//M m—23—1，溫度為20-28°C ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±3%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠郑Ａ舴种Φ闹亓繛?110kg/畝，只保留l根主干的重量為880kg/ 畝。
實(shí)施例10、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L + GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0, lmg/L+6-BA 1. 5mg/L+ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 3mg/L+NAA 1. 0mg/L+6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用0. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 土2。C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90pMm—V1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉
為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)o
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為55±5%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代 取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25土2X:，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm々s"。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25±2"，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110//M m—2s—'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為95±2%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為20(^Mm々s"，溫度為20-28'C，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±3%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4ra，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠郑Ａ舴种Φ闹亓繛?280kg/畝，只保留l根主干的重量為890kg/ 畝。
實(shí)施例11、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹 一、培養(yǎng)基的配制和滅菌
萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L + 6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L+6-BA 1. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+NAA 0. 3mg/L + 6-BA 0. lmg/L+ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用121。C高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為9(V/Mm—Y1。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為66±5%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為lOO^M m—V1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖1所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110//M m—2s—、實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為90±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后
的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為20(V/Mrn^—1，溫度為20-28°C，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到90±4%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。 六、組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6m，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1140kg/畝，只保留l根主干的重量為870kg/ 畝。
實(shí)施例12、組織培養(yǎng)繁殖構(gòu)樹
一、 培養(yǎng)基的配制和滅菌萌發(fā)培養(yǎng)基MS + IAA 0. 5mg/L+6-BA 0. 5mg/L+GA 0. lmg/L。 不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基MS + IAA 0. lmg/L + 6-BA 1. 5mg/L + ZT 0. 3mg/L。 生根培養(yǎng)基MS + IAA 1.0mg/L+NAA 0. 3mg/L+6-BA 0. lmg/L + ZT 0. lmg/L。 以上培養(yǎng)基采用12rC高壓濕熱滅菌20分鐘。
二、 冬芽萌發(fā)培養(yǎng)
取健康飽滿構(gòu)樹頂部冬芽，用70% (體積百分含量)的酒精表面消毒1分鐘，無 菌水沖洗3次后，再用O. 1% (質(zhì)量百分含量)的升汞消毒10分鐘，無菌水沖洗3 次，每次10分鐘。然后，將消毒后的冬芽接種到裝有冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基的三角瓶中， 每個(gè)三角瓶中外植體個(gè)數(shù)為5個(gè)。將接種后的三角瓶置于光照培養(yǎng)箱中，溫度為25 ±2°C，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90/^1111-2^。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù) IOO個(gè)頂部冬芽。培養(yǎng)3周后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率(萌發(fā)的芽數(shù)/接種的芽數(shù))，以長(zhǎng)出幼葉 為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)。
培養(yǎng)2-3周后大部分冬芽都能萌發(fā)長(zhǎng)出幼葉，接種3周的萌發(fā)率為68±2%; 2 個(gè)月后，冬芽生長(zhǎng)旺盛，苗高達(dá)1.5-3.0 cm。
三、 不定芽分化及繼代
取苗高為1.5-3.0 cm的萌發(fā)小苗100株，剪成5-10mm長(zhǎng)短的帶葉莖段。共將 200個(gè)莖段接種在不定芽分化及繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為25士2"C，光照時(shí)間為 14小時(shí)，光照強(qiáng)度為10(^Mm—V1。培養(yǎng)4周時(shí)，該200個(gè)莖段均從莖段葉腋處和 基部長(zhǎng)出4-8個(gè)腋芽和不定芽，生長(zhǎng)情況如圖l所示，故繁殖系數(shù)為4-8。
剪取所有腋芽和不定芽，將較長(zhǎng)的芽切成長(zhǎng)約8-10mm莖段并將下端插入到不 定芽分化及繼代培養(yǎng)基上。在上述培養(yǎng)條件下每4周繼代培養(yǎng)一次，共繼代25次。 每次繼代的繁殖系數(shù)均為4-8。
四、 不定根誘導(dǎo)
將上述生長(zhǎng)健壯、高度為1. 5-3. Ocm、繼代10次的無根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上， 置于光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為25士2"C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為110 nTY'。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)1000株。培養(yǎng)2周后，小苗基部長(zhǎng)出3-7條不定 根，培養(yǎng)情況如圖2所示，不定根誘導(dǎo)率為89±3%。將生根苗在1/2MS培養(yǎng)基上再 培養(yǎng)1周，使根和苗生長(zhǎng)更加健壯，即可出瓶煉苗。
五、 移栽煉苗
將步驟四獲得的生根苗先在培養(yǎng)箱中開蓋鍛煉3天，然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗 凈根部的培養(yǎng)基，移栽到溫室中6X6厘米的營(yíng)養(yǎng)缽中。栽培介質(zhì)為按l: l體積比 混合的草炭土和蛭石，裝缽前用濃度為0. 1%的多菌靈對(duì)栽培介質(zhì)進(jìn)行消毒。移栽后 的前3-5天覆蓋地膜，保持溫室的光照強(qiáng)度為200/^1 m^'1,溫度為20-28°C ，相對(duì) 濕度為70-100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù),每次重復(fù)2000株。結(jié)果煉苗成活率(煉苗成活 率=營(yíng)養(yǎng)缽中成活的株數(shù)/移栽的試管苗株數(shù))達(dá)到92±3%。之后，除去地膜，進(jìn) 行澆水、施肥等正常管理。經(jīng)過2-3周出新根和新梢，當(dāng)苗高達(dá)到20-30cm時(shí)，即 可移栽到室外大田上，移栽成活率為100%。移栽苗大田生長(zhǎng)情況如圖3所示。
六、 組織培養(yǎng)繁殖的構(gòu)樹生長(zhǎng)形態(tài)測(cè)定
大連地區(qū)4月中下旬種植上述組培苗，在次耕地上每畝可栽種300-500株，當(dāng)年 IO月落葉，分枝數(shù)可達(dá)5-13個(gè)，樹高2-4m，桿粗1-3cm，生長(zhǎng)情況如圖4-A所示；如 摘除側(cè)芽，保留1根主干，則樹高可達(dá)4-6ra，桿粗可達(dá)4-6cm，生長(zhǎng)情況如圖4-B所 示?？呈盏厣喜糠?，保留分枝的重量為1290kg/畝，只保留l根主干的重量為890kg/
權(quán)利要求
1、構(gòu)樹的組織培養(yǎng)方法，是將構(gòu)樹頂部冬芽在冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到萌發(fā)冬芽；所述冬芽萌發(fā)培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加IAA、6-BA和GA得到的培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0.1-0.5毫克/升，所述6-BA的終濃度為0.1-0.5毫克/升，所述GA的終濃度為0-0.1毫克/升。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述IAA的終濃度為0. 5毫克/升， 所述6-BA的終濃度為0. 5毫克/升，所述GA的終濃度為0. 1毫克/升。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中還包括將所述萌發(fā)冬 芽在不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)及繼代，得到無根苗。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述不定芽誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)基為 在MS培養(yǎng)基中添加IAA、 6-BA和ZT得到的培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為O — O. 1毫 克/升，所述6-BA的終濃度為O. 1-2.0毫克/升，所述ZT的終濃度為0.3毫克/升。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述IAA的終濃度為0. 1毫克/升， 所述6-BA的終濃度為1. 5毫克/升。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于所述方法中還包括將 所述無根苗在不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行不定根誘導(dǎo)的步驟。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為在MS培 養(yǎng)基中添加IAA、 NAA、 6-BA和ZT得到的培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0. 3-1. 0毫克 /升，所述NAA的終濃度為O. 1-1.0毫克/升，所述6-BA的終濃度為O. l毫克/升，所 述ZT的終濃度為0. l毫克/升。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述IAA的終濃度為1. 0毫克/升， 所述NAA的終濃度為1. 0毫克/升。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一所述的方法，其特征在于所述冬芽萌發(fā)的培養(yǎng) 條件為在25土2℃，光照時(shí)間為12小時(shí)，光照強(qiáng)度為90μMm-2s-1/zMm、"；所述不定芽分化及 繼代的培養(yǎng)條件為在25土2℃，光照時(shí)間為14小時(shí)，光照強(qiáng)度為100μMm-2s-1;所述 不定根誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為在25士2。C，光照時(shí)間為IO小時(shí)，光照強(qiáng)度為11μMm-2s-1。
全文摘要
本發(fā)明公開了構(gòu)樹的一種組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明所提供的構(gòu)樹的組織培養(yǎng)方法，是將構(gòu)樹的頂部冬芽在萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到萌發(fā)冬芽；所述萌發(fā)培養(yǎng)基為在MS培養(yǎng)基中添加IAA、6-BA和GA得到的培養(yǎng)基，所述IAA的終濃度為0.1-0.5毫克/升，所述6-BA的終濃度為0.1-0.5毫克/升，所述GA的終濃度為0.1毫克/升。本發(fā)明方法具有取材容易、變異率低、增值系數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)，培養(yǎng)4周增殖倍數(shù)達(dá)到4-8倍，組培苗生根率達(dá)到92％，煉苗成活率達(dá)到93％。利用本發(fā)明方法繁殖構(gòu)樹，可提高構(gòu)樹的生物產(chǎn)量。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101200704SQ20071030412
公開日2008年6月18日 申請(qǐng)日期2007年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月25日
發(fā)明者宏 張, 偉 熊 申請(qǐng)人:大連中植環(huán)境生物科技有限公司