專利名稱：：基于根霉菌的l-乳酸銨的連續(xù)生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及L—乳酸銨的的生產(chǎn)方法，尤其涉及一種L-乳酸銨的發(fā)酵生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
：乳酸是重要的有機(jī)酸，廣泛存在于生物體內(nèi)，發(fā)酵法可以產(chǎn)生D-乳酸、L-乳酸兩種旋光異構(gòu)體。由于人體和許多生物體只含有L-乳酸脫氫酶，因此只能代謝利用其中的L-乳酸，而D-乳酸則不能被人體降解。世界衛(wèi)生組織由此提倡使用L-乳酸作為食品添加劑和內(nèi)服藥，取代目前普遍使用的DL-乳酸。此外，L-乳酸，L-乳酸鹽及其聚合物還廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和化學(xué)工業(yè)。尤其近幾年，人們利用L-乳酸聚合生成的聚L-乳酸生物降解塑料、綠色包裝材料及家用和農(nóng)用薄膜，用以解決日益嚴(yán)重的環(huán)境污染問題，引起了世界的廣泛關(guān)注，應(yīng)用前景十分廣闊。目前L-乳酸已成為市場急需的產(chǎn)品，被稱為"化工產(chǎn)品中沉睡的巨人"，因此其應(yīng)用前景無法估量。目前生產(chǎn)乳酸一般是通過稱之為乳酸菌的細(xì)菌來進(jìn)行，如CN1097635C和CN1306091A公開的技術(shù)，其中主要有乳酸桿菌屬(/^toZ)od//2^)、乳球菌屬(/a"ococc船)等在適當(dāng)培養(yǎng)基和工藝條件下進(jìn)行發(fā)酵的，利用這些菌體發(fā)酵時(shí)，發(fā)酵轉(zhuǎn)化率較高，一般大于90%，但所需要的培養(yǎng)基條件復(fù)雜，生產(chǎn)成本較高，容易消旋得到DL-乳酸，同時(shí)由于菌體較小，其與發(fā)酵液的分離也比較困難。另一種發(fā)酵乳酸常用的方法是利用根霉菌屬的絲狀真菌進(jìn)行L-乳酸的發(fā)酵。通常為有氧發(fā)酵，但其對(duì)糖轉(zhuǎn)化率較低，一般在70-85%左右，其培養(yǎng)條件簡單，添加的微量元素少，選育高糖化水平的菌株可以直接利用淀粉水解液發(fā)酵。整個(gè)過程發(fā)酵液比較清,雜質(zhì)少，有利于乳酸的分離過程。例如Hang等(YuRC，YangYD.KineticsofdirectfermentationofagriculturalcommoditiestoL(+)-lacticacidbyi/z/zo/w07zae，Biotechnol-lett,1989，ll(8):597-600)對(duì)米根霉直接發(fā)酵農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)L-乳酸進(jìn)行研究，以碳酸l丐為中和劑，每千克粗淀粉原料(玉米)可生成350g以上的L-乳酸。曹本昌等人(曹本昌，徐建林，匡群.根霉發(fā)酵L-乳酸。食品與發(fā)酵工業(yè),1991,(1):37-40)選育了一株產(chǎn)L-乳酸的根霉JSMI-R73，在500升發(fā)酵罐，當(dāng)口服葡萄糖濃度為10%時(shí)產(chǎn)酸70g/L，13%時(shí)產(chǎn)酸101g/L以上，該菌可以玉米粉作為培養(yǎng)基，當(dāng)玉米粉濃度為12%時(shí)產(chǎn)酸70g/L以上，20%時(shí)產(chǎn)酸105g/L以上，其中L-乳酸的純度最高達(dá)99n/。；蔣明珠等人(蔣明珠，吳芷萍，許孟琴等.L-乳酸發(fā)酵的研究，微生物學(xué)報(bào)，1991，31,41-47)以根霉R-47為菌種，在搖瓶培養(yǎng)條件下，初始葡萄糖濃度為15%、產(chǎn)L-乳酸達(dá)118.4g/L，對(duì)糖的轉(zhuǎn)化率達(dá)78.9%;虞東勝等人(虞東勝，周曉燕，王健等.米根霉發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸，工業(yè)微生物，2000,30(3):4-7)以米根霉Rs928為菌種葡萄糖為發(fā)酵碳源，在60t發(fā)酵罐中，當(dāng)總糖平均濃度為174g/L時(shí)，發(fā)酵61h產(chǎn)L-乳酸140g/L，對(duì)糖轉(zhuǎn)化率為80.4%。以上工藝均為用碳酸鈣中和發(fā)酵，在分離時(shí)將會(huì)產(chǎn)生大量的硫酸鈣廢渣，很難實(shí)現(xiàn)清潔生產(chǎn)。而且其為分批發(fā)酵，菌種利用率不高，轉(zhuǎn)化率也上不去，發(fā)酵強(qiáng)度也比較低。在L-乳酸的發(fā)酵過程中，菌絲體會(huì)形成小球狀，塊狀和絲狀，不同的菌種通過不同的培養(yǎng)方法可以獲得不同的形態(tài)，而其中小球體和絲狀體研究比較多，如使用米根霉NRRL395(及/^卬wW7加eNRRL395)，在以木糖為前培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)生成直徑l-2mm的小顆粒。以該小顆粒為種子Soccol等(C.R.Soccol，B.Marin，M.Raimbaut;ApplMicrobiolbiotechnol41,86-290(1991))用葡萄糖為原料，碳酸鈣為中和劑進(jìn)行了發(fā)酵，發(fā)酵以后過濾獲得的顆?？梢栽俅伟l(fā)酵實(shí)現(xiàn)了菌體的再利用，但是在連續(xù)使用3次后，該菌株的發(fā)酵性能大大下降。絲狀體的研究集中在使用特殊的介質(zhì)使霉菌不會(huì)聚集成團(tuán)，降低傳質(zhì)過程阻力，從而實(shí)現(xiàn)發(fā)酵轉(zhuǎn)化率的提高。如EnochY.Park等(EnochY.Park,YuukoKosakai,MitsuyasuOkabe.EfficientProductionofL-(+)-LacticAcidUsingMycelialCotton-likeFloesofi/z/zo;ms1inanAir-LiftBioreactor.Biotechnol.Prog.1998,14，699-704)采用添加礦物質(zhì)使之分散形成了絲狀體，并通過氣升式發(fā)酵罐進(jìn)行了發(fā)酵獲得了104.6g/L和87。/。的轉(zhuǎn)化率。但是絲狀菌體容易老化，不容易實(shí)現(xiàn)連續(xù)化發(fā)酵。另外為了抑制所產(chǎn)生的乳酸對(duì)pH值的影響，要添加適當(dāng)?shù)闹泻蛣﹣砜刂苝H的降低，通常使用的pH控制劑為碳酸鈣、氫氧化鈣、氫氧化鈉等，目前所知大多數(shù)用根霉屬發(fā)酵的采用碳酸鈣作為中和劑，而該中和劑給后續(xù)分離過程帶來了麻煩，會(huì)生成大量的硫酸鈣廢渣，為此，岡部滿康(岡部滿康，CN1254016A)篩選了耐氨性L-乳酸生產(chǎn)菌朋/zo;^取MK96-U56發(fā)酵生產(chǎn)乳酸，用氣泡塔型發(fā)酵設(shè)備，流加氨水中和L-乳酸，其發(fā)酵產(chǎn)酸率可達(dá)到81g/L，轉(zhuǎn)化率77.4%，而且可以實(shí)現(xiàn)連續(xù)化發(fā)酵生產(chǎn)。但其發(fā)酵產(chǎn)酸率還比較低，而且需要特定的耐氨型L-乳酸生產(chǎn)菌株和特定的發(fā)酵設(shè)備，實(shí)現(xiàn)工業(yè)化成本比較高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種基于根霉菌的L一乳酸銨的連續(xù)高產(chǎn)速生產(chǎn)方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。本發(fā)明的方法，包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)將根霉菌屬中的任一種的孢子接入種子培養(yǎng)基進(jìn)行有氧液體培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30-40°C，培養(yǎng)時(shí)間為1020hr，pH自然；所說的種子培養(yǎng)基的組分包括碳源、氮源、無機(jī)鹽和水；所說的碳源選自大米淀粉、小麥淀粉、玉米淀粉、玉米粗粉、甘薯淀粉、甘薯粗粉、葡萄糖、麥芽糖、糖蜜或秸稈水解物中的一種以上；所說的氮源選自尿素、硫酸銨、玉米漿、酵母提取物、魚粉、麥芽提取物、硝酸鈉或牛肉提取物中的一種以上；所說的無機(jī)鹽選自磷酸鹽和碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鉀、氯化鎂或硫酸亞鐵中的一種以上，種子培養(yǎng)基中，磷酸鹽的濃度為0.81.2g/L;所說的磷酸鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉；優(yōu)選的，種子培養(yǎng)基中，碳源的含量為6080g/L，氮源的含量為1.02.0g/L，無機(jī)鹽的含量為0.20.4g/L;采用上述的高磷濃度種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)后的菌體能耐受高濃度的游離乳酸的存在，最低pH可達(dá)1.5，同時(shí)菌絲體團(tuán)聚成直徑0.1-0.5mm的均勻細(xì)顆粒，該顆粒對(duì)氨的耐受也得到了很大的增強(qiáng)，使后續(xù)發(fā)酵過程使用氨作為中和劑成為現(xiàn)實(shí)；培養(yǎng)溫度根據(jù)菌體而定，只要使菌體能正常生長并能發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的任何溫度均可，一般為30-40。C，優(yōu)選32-36。C;種子培養(yǎng)基中接入的孢子個(gè)數(shù)優(yōu)選為105-107個(gè)1，較優(yōu)選2*106-4*106個(gè)/1^,更優(yōu)選為3*106個(gè)1;所說的根霉菌屬的菌種選自黑根霉(AWzop船m'g〃'cara)、爪哇根霉(W/Z;/avam'ctw)、高溫根霉(//^teww;y附)、上海根霉(及/^/""g/w/era的、小麥曲根霉(及A.yhyd)、體根霉(i/.cWwenwX)、假華根霉(i/z.;wem/oc/z/wes^)、米豐艮霉(及/.or;;zae)、曰本根霉(/&./0/0"/)、東京根霉(i^/ow&"em的、少根根霉(i/.a^r//z船)或美麗根霉(及/.e/ege";y)等，優(yōu)選的根霉菌為米根霉(//j.00;Zae);上述的菌種均為本領(lǐng)域公知的菌種，可以采用市售的商業(yè)化產(chǎn)品，或購自于中國微生物保藏中心。(2)將步驟(1)獲得的產(chǎn)物，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧液體發(fā)酵培養(yǎng)，溫度為3236°C,培養(yǎng)時(shí)間為2040小時(shí)，在培養(yǎng)的同時(shí)加入氨水或氨氣，控制培養(yǎng)體系的pH為58，優(yōu)選5~6，然后加入流加培養(yǎng)基，并出料，獲得發(fā)酵產(chǎn)物，然后從發(fā)酵產(chǎn)物中收集目標(biāo)產(chǎn)物乳酸銨；步驟(1)獲得的產(chǎn)物接入發(fā)酵培養(yǎng)基的量為0.050.10L/L發(fā)酵培養(yǎng)基；優(yōu)選的，將發(fā)酵產(chǎn)物過濾，并將過濾后的殘留部分返回發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵，過濾液中乳酸銨的濃度保持在4-6%之間，在上述條件下該發(fā)酵產(chǎn)生乳酸銨的速度達(dá)到了10g/L.h以上，過濾后的濾液先經(jīng)過螯合樹脂去除(^2+、Mg2+、Zi^+等易在堿性條件下析出的金屬離子，然后通過低滲透膜組成的電滲析進(jìn)行分離乳酸銨，并將含有葡萄糖的電滲析殘液重新返回發(fā)酵罐中繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵，電滲析階段獲得重量濃度為2030%(W%)的乳酸銨溶液。整個(gè)過程對(duì)淀粉的轉(zhuǎn)化率達(dá)到了85%以上，分離階段收率在90%以上，平均產(chǎn)酸達(dá)到9.8%,最高達(dá)到10.35%，所說的螯合樹脂可采用市售產(chǎn)品，如商品牌號(hào)有DowexA-l、Chelex-lOO、DiaionCR-IO、KT-1及國產(chǎn)的D401等；所說的低滲透膜組成的電滲析為市售產(chǎn)品，如上?；S牌號(hào)為3361-BW陽膜和3362-BW陰膜的產(chǎn)品；所說的氨水的重量濃度優(yōu)選為2028%;本發(fā)明優(yōu)選采用連續(xù)發(fā)酵進(jìn)行培養(yǎng)，理由如下本發(fā)明中菌體為顆粒狀小球體，具有一定的直徑，不需要固定就非常容易過濾，因此只需要在發(fā)酵罐體出料口添加一個(gè)一定孔徑的篩網(wǎng)就可以實(shí)現(xiàn)料液和菌絲體的分離，方便實(shí)現(xiàn)發(fā)酵液的自動(dòng)分流。同時(shí)該菌體有良好的重復(fù)利用性，可以連續(xù)利用300小時(shí)以上而產(chǎn)酸不會(huì)明顯降低，而一般的菌體尤其是絲狀體其老化速度比較快。所說的發(fā)酵培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基的組分包括碳源、氮源、無機(jī)鹽和水；所說的碳源選自大米淀粉、小麥淀粉、玉米淀粉、玉米粗粉、甘薯淀粉、甘薯粗粉、麥芽糖、糖蜜或秸稈水解物中的一種以上；所說的氮源選自尿素、硫酸銨、玉米槳、酵母提取物、魚粉、麥芽提取物、硝酸鈉或牛肉提取物中的一種以上；所說的無機(jī)鹽選自磷酸鹽、碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鉀、氯化鎂或硫酸亞鐵中的一種以上；所說的磷酸鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉；；優(yōu)選的，發(fā)酵培養(yǎng)基中，碳源的含量為110140g/L，氮源的含量為L02.0g/L，無機(jī)鹽的含量為0.20.4g/L;優(yōu)選的，在種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基中還包括含量為0.20.5g/L的消泡劑，消泡劑是大豆油、聚醚多元醇或硅氧烷等；在種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)過程中，優(yōu)選通入空氣或純氧中的一種以上，通入氣體后，培養(yǎng)液中氧的體積濃度DO為8.412.6%;優(yōu)選的，種子培養(yǎng)采用氣流攪拌培養(yǎng)，如EnochY.Park(EnochY.Park,YuukoKosakai,andMitsuyasuOkabe.EfficientProductionofL-(+)陽LacticAcidUsingMycelialCotton-likeFloesofi/z/zopwso，aeinanAir-LiftBioreactor.Biotechnol.Prog.1998，14，699-704)報(bào)道的培養(yǎng)方法，可以控制菌絲體的完整性，利于生成細(xì)小顆粒而不會(huì)纏繞到攪拌軸上被打碎；優(yōu)選的，發(fā)酵過程釆用通氣機(jī)械攪拌培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)由于都是細(xì)小顆粒而不存在纏繞的問題，且可以強(qiáng)化傳質(zhì)過程，有利于發(fā)酵的快速進(jìn)行和產(chǎn)物的有效分離；培養(yǎng)溫度根據(jù)菌體而定，只要使菌體能正常生長并能發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的任何溫度均可，優(yōu)選30-4(TC，更優(yōu)選32-36。C;本發(fā)明采用高磷濃度種子培養(yǎng)基，通過培養(yǎng)獲得了較高耐氨性能的菌體，從而可以采用氨水或氨氣進(jìn)行中和，獲得乳酸銨。操作簡單，生產(chǎn)成本大幅度降低，所獲得的乳酸銨可以通過電滲析過程很容易就從發(fā)酵液中分離，回收率高，從而能夠克服現(xiàn)有技術(shù)采用碳酸鈣中和所導(dǎo)致的產(chǎn)生大量的廢渣、且回收率低的缺陷。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1采用的菌種為米根霉(i/.0o^ae)3.819，購自中國微生物保藏中心；將米根霉(i^oo^M)3.819的孢子接入種子培養(yǎng)基進(jìn)行有氧液體培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35°C，培養(yǎng)時(shí)間為12小時(shí)，種子培養(yǎng)基中接入的孢子個(gè)數(shù)為3*106個(gè)化，通空氣，通氣速率為15L/min，種子培養(yǎng)基的組分和含量如表1:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>ZnS04-7H200.04所說的淀粉液化液為采用(x-淀粉酶對(duì)淀粉進(jìn)行液化的液體，淀粉的重量含量為30%，如采用諾維信利可來耐高溫淀粉酶Supra(LiquozymeSupra)根據(jù)其要求的工藝制備。培養(yǎng)溫度為34'C，培養(yǎng)時(shí)間為42小時(shí)，在培養(yǎng)的同時(shí)加入重量濃度為20%的氨水，控制培養(yǎng)體系的pH為5.7，通空氣，通氣速率為13L/min，然后加入流加培養(yǎng)基，加料速度為lL/h，同時(shí)開始出料，出料速度也控制在1L/h。其中所出料液經(jīng)儲(chǔ)罐后當(dāng)累計(jì)到2L時(shí)開始過濾，并將過濾后的殘留部分返回發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵。過濾液中乳酸銨的重量濃度保持在5%，在上述條件下該發(fā)酵產(chǎn)生乳酸銨的速度最高達(dá)到了lOgZL.h以上。經(jīng)過濾后，先經(jīng)過CR-10螯合樹脂去除C^+、Mg2+、Z^+等易在堿性條件下析出的金屬離子。然后通過低滲透膜組成的電滲析進(jìn)行分離乳酸銨，并將含有葡萄糖的電滲析殘液重新返回發(fā)酵罐中繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵，電滲析階段獲得24%(W%)的乳酸銨溶液。整個(gè)過程對(duì)淀粉的轉(zhuǎn)化率達(dá)到了85%以上，分離階段收率在90%以上。流加培養(yǎng)基的組分和含量如表3所示表3配料用量g/L淀粉液化液葡萄糖糖當(dāng)量130(NH4)2S040.5KH2P040.05MgS04.7H200.15ZnS047H200.04所說的淀粉液化液為采用a-淀粉酶對(duì)淀粉進(jìn)行液化的液體，淀粉的重量含量為30%，如采用諾維信利可來耐高溫淀粉酶Supra(LiquozymeSupra)根據(jù)其要求的工藝制備。實(shí)施例2采用與實(shí)施例l相同的工藝步驟，其中所采用的菌種為東京根霉3.1179(iWz印^to"射"e"^)，購自中國微生物保藏中心；菌種培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，通純氧，通氣速率為4L/min;發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)溫度為34'C，培養(yǎng)時(shí)間為40小時(shí)，在培養(yǎng)的同時(shí)通入氨氣，控制培養(yǎng)體系的pH為6.5;電滲析階段獲得23%(W%)的乳酸銨溶液。整個(gè)發(fā)酵過程對(duì)淀粉的轉(zhuǎn)化率達(dá)到了80%，分離階段收率在90%。種子培養(yǎng)基的組分和含量如表4:表4配料用量g/L葡萄糖60尿素2.00KH2P040.85MgS04.7H200.25ZnS04-7H200.03淀粉液化液30發(fā)酵培養(yǎng)基的組分和含量如表5所示表5配料用量g/L淀粉液化液葡萄糖糖當(dāng)量120尿素1.00KH2P040.10MgS04.7H200.25ZnS04-7H200.03流加培養(yǎng)基的組分和含量如表6所示表6配料用量g/L淀粉液化液葡萄糖糖當(dāng)量130尿素1.00KH2P040.10MgS04-7H200.25ZnS04'7H200.03消泡劑大豆油0.30權(quán)利要求1.基于根霉菌的L-乳酸銨的連續(xù)生產(chǎn)方法，其特征在于，包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)將根霉菌屬中的任一種的孢子接入種子培養(yǎng)基進(jìn)行有氧液體培養(yǎng)，所說的種子培養(yǎng)基的組分包括碳源、氮源、無機(jī)鹽和水，種子培養(yǎng)基中，磷酸鹽的濃度為0.8～1.2g/L；(2)將步驟(1)獲得的產(chǎn)物，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧液體發(fā)酵培養(yǎng)，在培養(yǎng)的同時(shí)加入氨水或氨氣，控制培養(yǎng)體系的pH為5～8，然后加入流加培養(yǎng)基，并出料，獲得發(fā)酵產(chǎn)物，然后從發(fā)酵產(chǎn)物中收集目標(biāo)產(chǎn)物乳酸銨。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所說的磷酸鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所說的碳源選自大米淀粉、小麥淀粉、玉米淀粉、玉米粗粉、甘薯淀粉、甘薯粗粉、葡萄糖、麥芽糖、糖蜜或秸稈水解物中的一種以上；所說的氮源選自尿素、硫酸銨、玉米漿、酵母提取物、魚粉、麥芽提取物、硝酸鈉或牛肉提取物中的一種以上；所說的無機(jī)鹽選自磷酸鹽和碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鉀、氯化鎂或硫酸亞鐵中的一種以上；種子培養(yǎng)基中，碳源的含量為6080g/L,氮源的含量為1.02.0g/L，無機(jī)鹽的含量為0.20.4g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，從發(fā)酵產(chǎn)物中收集目標(biāo)產(chǎn)物乳酸銨，包括如下步驟將發(fā)酵產(chǎn)物過濾，并將過濾后的殘留部分返回發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵，過濾液中乳酸銨的濃度保持在4-6%之間，過濾后的濾液先經(jīng)過螯合樹脂去除C^+、Mg2+、Zn2+等易在堿性條件下析出的金屬離子，然后通過低滲透膜組成的電滲析進(jìn)行分離乳酸銨，并將含有葡萄糖的電滲析殘液重新返回發(fā)酵罐中繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所說的氨水的重量濃度優(yōu)選為2030%。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所說的發(fā)酵培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基的組分包括碳源、氮源、無機(jī)鹽和水；所說的碳源選自大米淀粉、小麥淀粉、玉米淀粉、玉米粗粉、甘薯淀粉、甘薯粗粉、麥芽糖、糖蜜或秸稈水解物中的一種以上；所說的氮源選自尿素、硫酸銨、玉米漿、酵母提取物、魚粉、麥芽提取物、硝酸鈉或牛肉提取物中的一種以上；所說的無機(jī)鹽選自磷酸鹽、碳酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、氯化鉀、氯化鎂或硫酸亞鐵中的一種以上。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所說的磷酸鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉或磷酸氫二鈉。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基中，碳源的含量為碳源的含量為110140g/L，氮源的含量為1.02.0g/L，無機(jī)鹽的含量為0.20.4g/L。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)過程中，優(yōu)選通入空氣或純氧中的一種以上，通入氣體后，培養(yǎng)液中氧的體積濃度DO為8.412.6%。10.根據(jù)權(quán)利要求1~9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所說的根霉菌屬的菌種選自黑根霉(iWzo/Wlym'gn'cara)、爪哇根霉(//2.yawm'c^)、高溫根霉(朋.^mmm^)、上海裉霉(i/z.W朋g/w/m"5)、小麥曲根霉(i/.yhycZ)、體根霉(i/2.c/z/"e"s的、假華根霉(i/t/we"ctoc/7/"ew's)、米根霉(i/z.0A7zae)、日本*艮霉(及/y'apow.c^)、東京根霉rcmA:/"em7'力、少根根霉(i/.arrWzus)或美麗根霉(i/z.e/egera)。全文摘要本發(fā)明提供了一種基于根霉菌的L-乳酸銨的連續(xù)生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)將根霉菌屬中的任一種的孢子接入種子培養(yǎng)基進(jìn)行有氧液體培養(yǎng)，所說的種子培養(yǎng)基的組分包括碳源、氮源、無機(jī)鹽和水，種子培養(yǎng)基中，磷酸鹽的濃度為0.8～1.2g/L；(2)將步驟(1)獲得的產(chǎn)物，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧液體發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程通入氨水或氨氣，維持培養(yǎng)體系的pH為5～8，然后流加培養(yǎng)基，同時(shí)出料，獲得發(fā)酵產(chǎn)物，并通過連續(xù)分離技術(shù)從發(fā)酵產(chǎn)物中收集目標(biāo)產(chǎn)物乳酸銨。本發(fā)明的方法操作簡單，生產(chǎn)成本大幅度降低，乳酸銨從發(fā)酵液中分離容易，回收率高。文檔編號(hào)C12P7/56GK101186934SQ200710170658公開日2008年5月28日申請(qǐng)日期2007年11月22日優(yōu)先權(quán)日2007年11月22日發(fā)明者健王,鄧興良,黃房生申請(qǐng)人:上海氯堿化工股份有限公司