專利名稱：含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的細胞生長抑制劑的制作方法
含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的細胞生長抑制劑本申請為國際申請PCT/JP2002/006237于2003年12月22日進入 中國國家階段、申請?zhí)枮?2812570.3、發(fā)明名稱為"含有抗磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體的細胞生長抑制劑"的分案申請。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為活性成分的細 胞生長抑制劑。發(fā)明背景磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族一直被報道為細胞表面上存在的硫酸乙 酰肝素蛋白聚糖的新家族。迄今，5種磷脂酰肌醇蛋白聚糖(磷脂酰肌 醇蛋白聚糖l、磷脂酰肌醇蛋白聚糖2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、磷脂 酰肌醇蛋白聚糖4和磷脂酰肌醇蛋白聚糖5)已被報道成磷脂酰肌醇蛋 白聚糖家族的成員。這些家族成員具有大小一致的核心蛋白(約 60kDa)，享有特異和完全保守的半胱氨酸序列，并且通過糖基磷脂酰 肌醇(GPI)錨結(jié)合到細胞膜上。通過對在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中具有異常細胞分裂模式的果蠅 (Drosophila melanogaster)變體的基因進行篩選已鑒定了 Dally(分裂異 常延遲的)基因。已知Dally的cDNA代表一可讀框(ORF)，所述ORF 編碼其序列顯示與含有所有磷脂酰肌醇蛋白聚糖特征的脊椎動物的跨 膜蛋白聚糖(GRIP)同源(24-26。/。的同源性)的產(chǎn)物。并且還已提示dally 基因在調(diào)節(jié)dpp(decapentaplegia)受體機制中發(fā)揮作用。這暗示哺乳動物 的磷脂酰肌醇蛋白聚糖可調(diào)節(jié)TGF和BMP之間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。具體而 言，已提示磷脂酰肌醇蛋白聚糖可起到一些肝素結(jié)合生長因子(例如 EGF、 PDGF、 BMP2和FGF)的共同受體的作用。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3已被分離為大鼠腸中發(fā)育調(diào)節(jié)下的轉(zhuǎn)錄物(Filmus, J.， Church， J.G.和Buick， R.n. (1988) Mol. Cell Biol. 8， 4243-4249)，然后鑒定成一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族的GPI-連接的硫 酸乙酰肝素蛋白聚糖OCT-5，其核心蛋白的分子量為69kDa(Filmus， J.， Shi， W.， Wong， Z,M.和Wong, M丄(1995) Biochem. J. 311， 561-565)。同 樣在人中，編碼磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的基因已從人胃癌細胞系中被 分離為MXR-7(Hermann Lage等，Gene 188 (1997) 151-156)。已有報道， 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3與胰島素樣生長因子-2形成蛋白一蛋白復(fù)合體， 以便調(diào)節(jié)生長因子的作用(Pilia, G.等，(1996) Nat. Genet. 12， 241-247)。 此報道提出磷脂酰肌醇蛋白聚糖3不總是與含有硫酸乙酰肝素鏈的生 長因子相互作用。已有報道建議磷脂酰肌醇蛋白聚糖3可用作肝癌標(biāo)記(Hey-Chi Hsu等，CANCER RESERCH 57， 5179-5184 (1997))。然而，沒有發(fā)現(xiàn) 說明磷脂酰肌醇蛋白聚糖3和癌細胞增殖之間的明確關(guān)系。此外，也有提示磷脂酰肌醇蛋白聚糖可起到內(nèi)皮抑素(endostatin) 受體的作用，所述內(nèi)皮抑素可用作血管形成抑制劑(MolecularCell (2001), 7, 811-822)。但是，這種功能與細胞增殖之間的關(guān)系仍然未加以 闡述。如上所述，已說明了磷脂酰肌醇蛋白聚糖3參與細胞增殖。然而， 細胞增殖機制等是未知的，以及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3對細胞增殖的 調(diào)節(jié)的應(yīng)用從未嘗試過。發(fā)明概述深入研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體通過ADCC(抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性)活性和CDC(補體依賴的細胞 毒性)活性而施加細胞增殖抑制活性，由此完成了本發(fā)明。此外，還預(yù) 測抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體也通過抑制生長因子的作用而施加細 胞增殖抑制活性。而且，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體也通過與諸如 放射性同位素、化療劑或細菌衍生的毒素等的細胞毒性物質(zhì)結(jié)合而施 加細胞增殖抑制活性。本發(fā)明的主題如下(1) 一種細胞生長抑制劑，其含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作 為活性成分；(2) (l)所述的細胞生長抑制劑，其中抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體 具有細胞毒性活性；(3) (2)所述的細胞生長抑制劑，其中細胞毒性活性為抗體依賴的細 胞介導(dǎo)的細胞毒性(ADCC)活性或補體依賴的細胞毒性(CDC)活性；(4) (1)-(3)中任一項所述的細胞生長抑制劑，其中細胞為癌細胞；(5) (4)所述的細胞生長抑制劑，其中細胞選自肝癌細胞、肺癌細胞、 結(jié)腸癌細胞、乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、白血病細胞、淋巴瘤細胞 和胰腺癌細胞-，(6M5)所述的細胞生長抑制劑，其中細胞為肝癌細胞；(7) (1)-(6)中任一項所述的細胞生長抑制劑，其中抗體為單克隆抗體；(8) (1)-(6)中任一項所述的細胞生長抑制劑，其中抗體為人源化抗 體或嵌合抗體；(9) 一種抗體，.其磷脂酰肌醇蛋白聚糖3結(jié)合；(10) (9)所述的抗體，其具有細胞毒性活性；(11) (10)所述的抗體，其具有針對肝癌細胞的細胞毒性活性；以及(12) (ll)所述的抗體，其具有針對HuH-7肝癌細胞系的細胞毒性 活性。下文將詳細說明本發(fā)明。本發(fā)明為一種含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖抗體作為活性成分的細 胞生長抑制劑。此外，本發(fā)明為一種含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖抗體 作為活性成分的細胞生長抑制劑，其可用于針對基于異常細胞增殖的 疾病的治療，特別是針對癌癥的治療。本發(fā)明的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的例子包括已知抗體，例如人源化抗體、人抗體(W096/33735)、嵌合抗體(日本專利公布(Kokai) 號4-228089 A(1992))或小鼠抗體以及本發(fā)明中公開的抗體。另外，抗 體可以為多克隆抗體，并且優(yōu)選單克隆抗體。本發(fā)明中所用的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體可來自任何起源， 可屬于任何類型(單克隆或多克隆抗體)以及可以是任何形式，只要其能 夠抑制細胞增殖。1. 抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體本發(fā)明中所用的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體可通過已知途徑以 多克隆抗體或單克隆抗體的形式獲得。本發(fā)明中所用的特別優(yōu)選的抗 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體為源自哺乳動物的單克隆抗體。源自哺乳 動物的單克隆抗體的例子包括由雜交瘤產(chǎn)生的抗體以及通過基因工程 技術(shù)利用含有抗體基因的表達載體轉(zhuǎn)化的宿主所產(chǎn)生的抗體。該抗體 結(jié)合到磷脂酰肌醇蛋白聚糖3上以便抑制細胞增殖。這樣一種抗體的例子為由本發(fā)明的雜交瘤克隆所產(chǎn)生的單克隆抗體。2. 產(chǎn)抗體的雜交瘤產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤可基本上利用如下已知的技術(shù)進行制備。 即，雜交瘤的制備方法如下根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)免疫方法，利用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3作為免疫原進行免疫接種，通過標(biāo)準(zhǔn)細胞融合方法將上述獲 得的免疫細胞與已知的親本細胞融合，然后采用標(biāo)準(zhǔn)篩選方法對產(chǎn)單 克隆抗體的細胞進行篩選。具體而言，單克隆抗體可如下制備。如Lage， H.等所公開(Gene 188 (1997), 151-156)，通過表達磷脂酰 肌醇蛋白聚糖3(MXR7)基因(氨基酸序列)，首先獲得準(zhǔn)備用作免疫原誘 導(dǎo)抗體的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3。具體而言，將編碼磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3的基因序列插入在一已知的表達載體系統(tǒng)中，轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗?細胞，然后通過己知方法從宿主細胞或培養(yǎng)物上清液中純化出靶人磷 脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白。 接著，該純化的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3蛋白用作免疫原?；蛘撸?磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的部分肽可用作致敏抗原。這時，部分肽可以 從人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的氨基酸序列中通過化學(xué)合成獲得?？沽字＜〈嫉鞍拙厶?抗體與ADCC作用、CDC作用和生長因 子的活性一起抑制細胞增殖活性。此外，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗 體還可通過與諸如放射性同位素、化療劑或源自細菌的毒素的細胞毒 性物質(zhì)結(jié)合而抑制細胞增殖。因此，在本發(fā)明中，磷脂酰肌醇蛋白聚 糖3分子上的表位被抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體所識別，其不限于 特定的表位?？沽字＜〈嫉鞍拙厶?抗體可識別任何表位，只要所 述表位存在于磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子上。因而，任何片段可用作 抗原來制備本發(fā)明的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，只要其在磷脂酰 肌醇蛋白聚糖3分子上含有所述表位。用免疫原進行免疫接種的哺乳動物不是特別受限，考慮到與準(zhǔn)備 用于細胞融合的親本細胞的相容性而優(yōu)選加以選擇。例如，通常使用 諸如小鼠、大鼠、倉鼠或兔子或猴子的嚙齒類動物。根據(jù)已知方法，用免疫原對動物進行免疫接種。例如，將免疫原 腹膜內(nèi)或皮下注射哺乳動物，采用這種常規(guī)方法進行免疫接種。具體 而言，將免疫原用適當(dāng)體積的PBS(磷酸鹽緩沖液)、生理鹽水等稀釋或 懸浮于其中；如果需要，把適當(dāng)體積的諸如弗氏完全佐劑的標(biāo)準(zhǔn)佐劑 與產(chǎn)物混合；乳化；然后每4-21天，將溶液施用給哺乳動物若干次。 此外，適當(dāng)?shù)妮d體也可在免疫接種時與免疫原一起使用。如上所述對哺乳動物進行免疫接種，然后確認(rèn)血清中所需抗體的 效價增加。隨后，從哺乳動物中收集免疫細胞，并進行細胞融合。優(yōu) 選的免疫細胞尤其為脾細胞。作為準(zhǔn)備與上述免疫細胞相融合的配偶體細胞，使用哺乳動物的 骨髓瘤細胞。此處優(yōu)選使用的骨髓瘤細胞的細胞系的例子包括各種已 知的細胞系，例如P3(P3x63Ag8.653)(J. Immuol. (1979) 123, 1548-1550)、 P3x63Ag8U.1 (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7)、 NS-l(Kohler. G.和Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-519)、 MPC-1 l(Margulies. D.H.等，Cell (1976) 8， 405-415)、 SP2/0(Shulman, M.等，Nature (1978) 276, 269-270)、 FO(de St. Groth， S. F.等，J. Imimmol. Methods (1980) 35， 1-21)、 S194(Trowbridge， I. S. J. Exp. Med. (1978) 148， 313-323)和R210(Galfre， G.等，Nature (1979) 277, 131-133)。上述免疫細胞與骨髓瘤細胞的細胞融合可基本上按照已知方法， 例如Kohler和Milstein等(Kohler. G.和Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73， 3-46)的方法進行。更具體而言，上述細胞融合在含有例如細胞融合加速劑的標(biāo)準(zhǔn)營 養(yǎng)培養(yǎng)液中進行。作為細胞融合加速劑，例如，可使用聚乙二醇(PEG)、 日本血細胞凝集病毒(HVJ)等。如果需要，可加入佐劑，例如二甲亞砜，以進一步增強融合效率。對此處所用的免疫細胞與骨髓瘤細胞的任何比例可加以設(shè)定。例 如，免疫細胞數(shù)優(yōu)選高出骨髓瘤細胞數(shù)i-io倍。作為準(zhǔn)備用于上述細 胞融合的培養(yǎng)液，例如，可使用對上述骨髓瘤細胞系生長合適的RPMI1640培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液，或者使用用于這種細胞培養(yǎng)的其他 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液。此外，諸如胎牛血清(FCS)的血清流體可以組合形式使用。細胞融合的方法如下在上述培養(yǎng)液中混合足夠數(shù)量的上述免疫 細胞和骨髓瘤細胞，加入在約37'C預(yù)先加熱的PEG(例如，平均分子量 約為1000-6000)溶液(濃度一般為30-60%(w/v))，然后混合上述溶液， 以便形成靶融合細胞(雜交瘤)。隨后，相繼加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液，并且重 復(fù)通過離心除去上清液的步驟，從而去除對雜交瘤生長不利的細胞融 合的試劑等。通過在諸如HAT培養(yǎng)液(含有次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸苷的培養(yǎng) 液)的標(biāo)準(zhǔn)選擇性培養(yǎng)液中培養(yǎng)雜交瘤而對上述獲得的雜交瘤加以選 擇。在上述HAT培養(yǎng)液中持續(xù)培養(yǎng)一段時間，足夠讓細胞(未融合細胞) 而非靶雜交瘤死亡(通常數(shù)天至數(shù)周)。隨后，采用標(biāo)準(zhǔn)限制稀釋方法，從而對產(chǎn)生耙抗體的雜交瘤進行篩選和單克隆。除了用抗原對非人動物進行接種免疫來獲得上述雜交瘤的方法以 外，通過用磷脂酰肌醇蛋白聚糖3體外致敏人淋巴細胞，并使致敏淋 巴細胞與具有永久分裂潛力的人衍生的骨髓瘤細胞融合的方法也可獲 得與磷脂酰肌醇蛋白聚糖3具有結(jié)合活性的所需的人抗體(參見日本專 利公布(Kokoku)號1-59878 B (1989))。此外，將磷脂酰肌醇蛋白聚糖3作為抗原施用給具有全部人抗體基因庫的轉(zhuǎn)基因動物以獲得產(chǎn)抗磷脂 酰肌醇蛋白聚糖3抗體的細胞，然后磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的人抗體 可從無限增殖化的產(chǎn)抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的細胞中獲得(參見 國際專利公布號WO 94/25585、 WO 93/12227、 WO 92/03918和WO94/02602)。這樣制得的產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤可在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液中傳代培養(yǎng)， 或者可長時間儲存在液氮中。用于從雜交瘤中獲得單克隆抗體的方法的一個例子包括根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 方法培養(yǎng)雜交瘤以及在培養(yǎng)物上清液中獲得單克隆抗體。另一方法包 括將雜交瘤施用給與雜交瘤相容的哺乳動物以使它們增殖，并在腹水 中獲得單克隆抗體。前一方法適用于獲得高純度的抗體。而后一方法 適用于大量生產(chǎn)抗體。3.重組抗體 .可用于本發(fā)明的單克隆抗體為重組單克隆抗體，其制備方法如下 采用基因工程技術(shù)從雜交瘤中克隆抗體基因，把基因整合到合適的載 體中，將載體導(dǎo)入宿主，然后使宿主產(chǎn)生重組單克隆抗體(例如，參見Vandamme， A. M.等，Eur. J. Biochem. (1990) 192, 767-775， 1990)。具體 而言，將編碼抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的可變(V)區(qū)的mRNA從產(chǎn) 抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的雜交瘤中分離出來。mRNA的分離方 法是已知的，例如胍超速離心法(Chirgwin, J. M.等，Biochemistry (1979) 18, 5294-5299)或AGPC法(Chomczynski, P等，Anal. Biochem. (1987) 162, 156-159)，由此制備總RNA。然后采用mRNA純化試劑盒 (Pharmacia)等制備耙mRNA。除此之外，mRNA也可利用QuickPrep mRNA純化試劑盒(Pharmacia)直接制備。.利用反轉(zhuǎn)錄酶從上述制得的mRNA中合成抗體V區(qū)的cDNA。 cDNA的合成采用AMV反轉(zhuǎn)錄酶第一條鏈cDNA合成試劑盒 (SEIKAGAKU CORPORATION)等。此外，為了合成和擴增cDNA,例 如，可采用5，-Ampli FINDER RACE試劑盒(Clontech)和5，-RACE法 (Frohman， M. A.等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988) 85, 8998-9002; Belyavsky, A.等，Nucleic Acids Res. (1989) 17， 2919隱2932)通過PCR進行。從這樣獲得的PCR產(chǎn)物中純化靶DNA片段，然后連接到一載體 DNA上。而且，重組載體從產(chǎn)物中制備，并繼續(xù)將載體導(dǎo)入大腸桿菌 (Escherichia coli)等中，挑選克隆，由此制備所需的重組載體。靶DNA 的核苷酸序列通過已知方法，例如雙脫氧核苷酸鏈終止法而確認(rèn)。在編碼靶抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的V區(qū)的DNA獲得之后， 將該DNA整合到一表達載體中，所述表達載體含有編碼所需抗體的恒 定區(qū)(C區(qū))的DNA。為了產(chǎn)生本發(fā)明所用的抗磯脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，將抗體基 因整合到表達載體中，以便基因在包括例如增強子和啟動子的基因表 達控制區(qū)的調(diào)節(jié)下得以表達。下一步，用表達載體轉(zhuǎn)化宿主細胞，使 宿主表達抗體?？贵w基因的表達可將編碼抗體重鏈(H鏈)的DNA或編碼抗體輕鏈 (L鏈)的DNA分別整合到表達載體中，然后同時把這兩個表達載體轉(zhuǎn) 化宿主細胞；或者將編碼H鏈和L鏈的DNA整合到單一表達載體中， 然后把此載體轉(zhuǎn)化宿主細胞(參見WO 94/11523)。除了上述宿主細胞以外，轉(zhuǎn)基因動物也可用來產(chǎn)生重組抗體。例 如，將抗體基因插入編碼奶中獨特產(chǎn)生的蛋白(例如，山羊P酪蛋白) 的基因，從而制備融合基因。將其中已插入抗體基因的含有融合基因 的DNA片段注射到山羊胚胎中，然后將此胚胎導(dǎo)入雌性山羊。從由轉(zhuǎn) 基因山羊或已接受了胚胎的山羊生出的后代所產(chǎn)生的奶中獲得期望的 抗體。此外，為了增加含有由轉(zhuǎn)基因山羊所產(chǎn)生的期望抗體的奶量， 可對轉(zhuǎn)基因山羊施用激素(Ebert, K.M.等，Bio/Technology (1994) 12, 699-702)。4.變造抗體(altered antibody)在本發(fā)明中，除了上述抗體外，諸如嵌合抗體或人源化抗體的人 工變造的基因重組抗體可用于例如降低針對人的異種抗原性。這些變 造抗體可采用已知的方法產(chǎn)生。嵌合抗體的制備方法如下將編碼上述抗體V區(qū)的DNA連接到 編碼人抗體C區(qū)的DNA上，把此產(chǎn)物整合到表達載體上，然后使載體 導(dǎo)入宿主以使宿主產(chǎn)生抗體。利用這種已知方法，可獲得本發(fā)明中有 用的嵌合抗體。人源化抗體也稱重構(gòu)人抗體，其制備方法是將除人以外的哺乳動 物例如小鼠的抗體CDR(互補決定區(qū))嫁接到人抗體的CDR。其總的基 因重組技術(shù)也是己知的(參見歐洲專利申請公布號EP 125023和WO 96/02576)。具體而言，DNA序列的合成是通過PCR方法利用若干寡核苷酸 作為引物進行的，所述寡核苷酸已事先制備，具有使小鼠抗體CDR的 終止區(qū)和人抗體的框架區(qū)(FR)重疊的部分(參見WO 98/13388中所述的 方法)。對與具有良好抗原結(jié)合部位的CDR連接的框架區(qū)加以選擇。如果 需要，可替換抗體可變區(qū)中的框架區(qū)的氨基酸，以便重構(gòu)人抗體的CDR 形成合適的抗原結(jié)合部位(Sato， K.等，Cancer Res. (1993) 53, 851-856)。對于嵌合抗體和人源化抗體的C區(qū)使用人抗體區(qū)。例如，對于H 鏈，可使用CYl、 Cy2、 Cy3或Cy4，而對于L鏈，可使用Ck或 C入。此外，為了提高抗體或其生產(chǎn)的穩(wěn)定性，人抗體C區(qū)可加以修飾。嵌合抗體由源自除人以外的哺乳動物的抗體的可變區(qū)和衍生自人 抗體的恒定區(qū)組成。詞時，人源化抗體由源自除人以外的哺乳動物的抗體的CDR和衍生自人抗體的框架區(qū)和C區(qū)組成。由于人源化抗體的 抗原性預(yù)定在人體中是低的，因此，其可用作本發(fā)明治療劑的活性成 分。5.修飾抗體用于本發(fā)明的抗體不限于整個分子，只要其能與磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3結(jié)合以及抑制細胞增殖即可，并且可以是抗體片段或其修飾產(chǎn) 物。二價抗體和單價抗體均包括在內(nèi)。抗體片段的例子包括Fab、 F(ab，)2、 Fv、含有一個Fab和完整Fc的Fab/c以及單鏈Fv(scFv)，其 中H鏈或L鏈的Fv與適當(dāng)?shù)慕宇^相連接。具體而言，通過采用諸如木 瓜蛋白酶或胃蛋白酶的酶處理抗體而合成抗體片段，或者構(gòu)建編碼這 些抗體片段的基因，將這些基因?qū)氡磉_載體，然后通過適當(dāng)?shù)乃拗?細胞表達基因(參見例如，Co., M.S.等，J. Immunol. (1994) 152， 2968-2976， Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Academic Press, Inc., Plueckth叫A. & Skerra， A. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496， Academic Press, Inc., Lamoyi, E,， Methods in Enzymology (1989) 121, 652-663， Rousseaux, J.等，Methods in Enzymology (1989) 121， 663-669，以及Bird, R. E.等，TIBTECH (1991) 9， 132-137)。將抗體的H鏈V區(qū)與L鏈V區(qū)連接獲得scFv。在scFv中，H鏈 V區(qū)和L鏈V區(qū)通過接頭或優(yōu)選通過肽接頭連接(Huston， J. S.等，Proc. Natl, Acad. Sci. U.S.A. (1988) 85， 5879-5883)。 scFv中的H鏈V區(qū)和L鏈V區(qū)可源自如本說明書中所述抗體的任一種。作為連接V區(qū)的肽接 頭，例如，使用任一含有12-19個氨基酸殘基的單鏈肽。編碼scFv的DNA可如下獲得。通過PCR方法利用編碼所需氨基 酸序列的整個或部分DNA(編碼上述抗體的H鏈或H鏈V區(qū)的DNA 以及編碼L鏈或L鏈V區(qū)的DNA)作為模板以及規(guī)定兩端的引物對進 行擴增。然后通過組合使用編碼肽接頭部分的DNA和規(guī)定使兩端各自與H鏈和L鏈連接的引物對，進一步進行擴增。此外，一旦制備了編碼scFv的DNA，含有DNA的表達載體以及 轉(zhuǎn)化有表達載體的宿主可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。另外，通過使用宿主，scFv 可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。利用宿主通過以與上述方法相似的方式獲得其基因并且使基因表 達，可產(chǎn)生這些抗體片段。本發(fā)明中的"抗體"也包括這些抗體片段。作為修飾抗體，可采用與聚乙二醇(PEG)或諸如細胞毒性物質(zhì)的各 種各樣的分子之一結(jié)合的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖抗體。本發(fā)明中的"抗 體"也包括這些修飾的抗體。這種修飾抗體可通過化學(xué)修飾得到的抗 體而獲得。此外，抗體修飾方法在本技術(shù)領(lǐng)域中也已建立。而且，用于本發(fā)明中的抗體可以是雙特異性抗體。雙特異性抗體 可具有識別磷脂酰肌醇蛋白聚糖3分子上不同表位的抗原結(jié)合部位。 或者， 一個抗原結(jié)合部位可識別磷脂酰肌醇蛋白聚糖3，而另一抗原結(jié) 合部位可識別諸如化療劑、源自細胞的毒素、放射性物質(zhì)等的細胞毒 性物質(zhì)。在這種情況下，細胞毒性物質(zhì)允許直接作用于表達磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3的細胞上以特異性破壞腫瘤細胞，從而腫瘤細胞的增殖 可以得到抑制。雙特異性抗體可通過結(jié)合兩種抗體的H-L對而制備， 它也可通過融合產(chǎn)不同單克隆抗體的雜交瘤以制備產(chǎn)雙特異性抗體的 融合細胞來獲得。此外，雙特異性抗體也可通過基因工程技術(shù)制備。6.重組抗體或修飾抗體的表達和生產(chǎn)如上所述構(gòu)建的抗體基因可通過已知方法表達和獲得。在哺乳動 物細胞的情況下，基因可通過可操作連接常用的有用啟動子和待表達 的抗體基因以及通過連接位于其3'端下游的polyA信號而得以表達。例如，啟動子/增強子是人巨細胞病毒立即早期啟動子/增強子。此外，另一可在本發(fā)明中用于抗體表達的啟動子/增強子的例子包 括病毒啟動子/增強子，如反轉(zhuǎn)錄病毒、多瘤病毒、腺病毒或猿猴病毒40(SV40)，或者源自哺乳動物細胞的啟動子/增強子，如人延伸因子 la(HEFla)。當(dāng)采用SV40啟動子/增強子時，通過Mulligan等(Nature (1979) 277， 108)的方法可容易地進行基因表達，而當(dāng)采用HEFla啟動子/增強子時， 通過Mizushima等(Nucleic Acids Res. (19卯)18, 5322)的方法可容易地 進行基因表達。在大腸桿菌的情形下，將常用的有用啟動子、用于抗體分泌的信 號序列以及待表達的抗體基因可操作連接，以便基因可得以表達。啟 動子的例子包括lacz啟動子和araB啟動子。當(dāng)采用lacz啟動子時，通 過Ward等(Nature (1098) 341, 544-546; FASEB J. (1992) 6, 2422-2427) 的方法可表達抗體基因，而當(dāng)采用araB啟動子時，通過Better等(Science (1988) 240， 1041-1043)的方法可表達抗體基因。作為抗體分泌的信號序列，當(dāng)抗體在大腸桿菌的周質(zhì)中產(chǎn)生時， 可采用pelB信號序列(Lei， S. P.等，J. Bacteriol. (1987) 169， 4379)。在周質(zhì)中產(chǎn)生的抗體被分離后，將抗體的結(jié)構(gòu)適當(dāng)?shù)丶右哉郫B和使用?？捎玫膹?fù)制起點源自SV40、多瘤病毒、腺病毒、牛乳頭瘤病毒(BPV) 等。此外，為了在宿主細胞系統(tǒng)中擴增基因拷貝數(shù)，表達載體可含有 氨基糖苷轉(zhuǎn)移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大腸桿菌黃嘌呤鳥嘌 呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Ecogpt)基因、二氫葉酸還原酶(dhfr)基因等作為選擇 標(biāo)記。為了生產(chǎn)用于本發(fā)明的抗體，可采用任何表達系統(tǒng)，例如真核細 胞系統(tǒng)或原核細胞系統(tǒng)。真核細胞的例子包括動物細胞，如建立的哺 乳動物細胞系統(tǒng)或昆蟲細胞系統(tǒng)的細胞，以及絲狀真菌細胞和酵母細胞。原核細胞的例子包括諸如大腸桿菌細胞的細菌細胞。優(yōu)選地，用于本發(fā)明中的抗體在諸如CHO、 COS、骨髓瘤、BHK、 Vero或Hda細胞的哺乳動物細胞中表達。接著，將轉(zhuǎn)化的宿主細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)，以便使宿主細胞產(chǎn)生 靶抗體。根據(jù)已知方法，培養(yǎng)宿主細胞。例如，作為培養(yǎng)液，可采用 DMEM、 MEM、 RPMI1640、 IMDM等。諸如胎牛血清(FCS)的血清流 體可以組合形式使用。7. 抗體的分離和純化-如上所述表達和生產(chǎn)的抗體可從細胞或宿主動物中分離，并純化 成一致的水平。準(zhǔn)備用于本發(fā)明中的抗體的分離和純化可利用親和柱 進行。利用蛋白A柱的例子為HyperD、 POROS、 Sepharose F.F.(Pharmacia)。其他用于蛋白的標(biāo)準(zhǔn)分離和純化方法也可使用，對其 應(yīng)用沒有限制。例如，除了上述親和柱以外的層析柱、滲濾、超濾、 鹽析方法、透析等可適當(dāng)加以選擇并組合使用，以便分離和純化抗體 (Antibodies A Laboratory Manual. Ed Harlow, David Lane, Cold Spring ■Harbor Laboratory, 1988)。8. 抗體活性的確認(rèn)已知方法可用來分析本發(fā)明中所用的抗體的抗原結(jié)合活性 (Antibodies A Laboratory Manual. Ed Harlow， David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988)以及抑制配體受體結(jié)合的活性(Harada， A.等， International Immunology (1993) 5， 681-690)。作為測定本發(fā)明中所用的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的抗原結(jié) 合活性的方法，可采用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)、EIA(酶免疫測定)、 RIA(放射免疫測定)或熒光抗體技術(shù)。例如，當(dāng)采用酶免疫測定時，將 含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的樣品，如產(chǎn)抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的細胞的培養(yǎng)物上清液，或者純化的抗體加入到涂覆有磷脂 酰肌醇蛋白聚糖3的平板上。加入標(biāo)記有諸如堿性磷酸酶的酶的第二 抗體。然后將平板溫育，洗滌，加入酶底物，如對硝基苯基磷酸，接 著測定吸光度，以便對抗原結(jié)合活性加以評價。為了證實用于本發(fā)明的抗體的活性，對抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體的中和活性進行測定。9. 細胞毒性活性用于本發(fā)明中的抗體具有ADCC活性或CDC活性作為細胞毒性 活性。通過混合效應(yīng)細胞、靶細胞和抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體，然 后檢測ADCC的水平，可對ADCC活性進行測定。作為效應(yīng)細胞，例 如，可采用小鼠脾細胞、人外周血或分離自骨髓的單細胞。作為靶細 胞，例如，可釆用人建立的細胞系，如HuH-7人肝癌細胞系。耙細胞 事先用"Cr標(biāo)記，將抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體加入到細胞中，然 后進行溫育。接著，以效應(yīng)細胞與靶細胞適當(dāng)?shù)谋壤尤胄?yīng)細胞， 然后進行溫育。溫育后，收集上清液，對上清液中的放射性進行計數(shù)， 從而可測定ADCC活性。CDC活性的測定方法如下混合上述標(biāo)記的靶細胞和抗磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體，加入補體，溫育，培養(yǎng)，然后對上清液中的放射 性進行計數(shù)?？贵w需要Fc部分施加細胞毒性活性。當(dāng)本發(fā)明的細胞生長抑制劑 利用抗體的細胞毒性活性時，用于本發(fā)明的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 抗體需要含有Fc部分。10. 抑制血管形成本發(fā)明的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體可用于抑制血管形成。 11.給藥方法以及藥物制劑本發(fā)明的細胞生長抑制劑用于治療或改善由基于異常細胞增殖的 疾病，特別是癌癥引起的狀況。本發(fā)明的細胞生長抑制劑的靶癌細胞的優(yōu)選例子包括，但不特異 性限于，肝癌細胞、肺癌細胞、結(jié)腸癌細胞、乳腺癌細胞、前列腺癌 細胞、白血病細胞、淋巴瘤細胞和胰腺癌細胞。肝癌細胞是特別優(yōu)選 的。有效劑量選自每次給藥每kg體重為0.001mg至1000mg的范圍內(nèi)。 或者，可選擇的劑量范圍為每個患者0.01-100000mg。然而，含有本發(fā) 明的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體的治療劑不限于這些劑量。另外，作為本發(fā)明的治療劑的服藥時間，藥劑可在疾病臨床癥狀 發(fā)作之前或之后施用。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法(Remington，s Pharmaceutical Science,最新版，Mark Publishing Company, Easton， U.S.A.),含有本發(fā)明的抗磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體作為活性成分的治療劑可加以配制，并且可一起含有可藥 用的載體和添加劑。這種載體和藥物添加劑的例子包括水、可藥用有機溶劑、膠原蛋 白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、羧甲基纖維素鈉、 聚丙烯酸鈉、藻酸鈉、水溶性葡聚糖、羧甲基淀粉鈉、果膠、甲基纖 維素、乙基纖維素、黃原膠、阿拉伯膠、酪蛋白、瓊脂、聚乙二醇、 雙甘油、甘油、丙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂酸、人血清白 蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖以及可接受的表面活性劑作為藥 物添加劑。上述添加劑的一種或適當(dāng)組合在實踐中根據(jù)本發(fā)明治療劑的劑型 加以選擇，但不限于此。例如，可用作注射用藥物制劑的藥劑的制備 方法是將純化的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體溶解在諸如生理鹽水、緩沖液或葡萄糖溶液的溶劑中，然后向溶液中加入諸如Tween80、 Tween20、明膠或人血清白蛋白的吸附抑制劑?；蛘?，凍干劑可用來制 備劑型，其在用前復(fù)溶而溶解。作為凍干的賦形劑，例如，可采用諸 如甘露醇或葡萄糖的糖醇或糖類。附圖簡述

圖1示出抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)對HuH-7細胞的 ADCC活性。圖2示出抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6511)對HuH-7細胞的 CDC活性。圖3示出磷脂酰肌醇蛋白聚糖在HuH-7細胞上的表達。圖4A示出FACS分析由人肺癌細胞系表達GPC3的結(jié)果。它們是 用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4B示出FACS分析由人白血病細胞系表達GPC3的結(jié)果。它們 是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4C示出FACS分析由人淋巴瘤細胞系表達GPC3的結(jié)果。它們 是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4D示出FACS分析由人結(jié)腸癌細胞系表達GPC3的結(jié)果。它們 是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4E示出FACS分析由人乳腺癌細胞系表達GPC3的結(jié)果。它們 是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4F示出FACS分析由人前列腺癌細胞系表達GPC3的結(jié)果。它 們是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的結(jié)果。圖4G示出FACS分析由人胰腺癌細胞系和人肝癌細胞系表達 GPC3的結(jié)果。它們是用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)分析的 結(jié)果。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明將參考下列實施例進一步描述。然而，本發(fā)明的技術(shù)范圍 不受這些實施例等的限制。實施例1針對磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3合成肽的單克隆抗體的制備合成具有人磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白的氨基酸序列(第355位到 第371位的氨基酸)(RQYRSAYYPEDLFIDKK)的肽。利用馬來酰亞胺 苯甲酰氧基琥珀酰亞胺(MBS)型交聯(lián)劑將合成肽結(jié)合到匙孔血藍蛋白 (KLH)上，由此制備免疫原。將小鼠(BALB/c，雌性，6周齡)用免疫原 以每只小鼠100ug的劑量免疫接種3次。分析血清中的抗體效價?？?體效價測定方法包括使稀釋血清與固定在平板上的肽(0.5yg)反應(yīng)，與 HRP標(biāo)記的抗小鼠抗體進行反應(yīng)，加入底物，然后在顯色的450nm處 測定吸光度(肽固相ELISA方法)。在確認(rèn)抗體效價后，收集脾細胞， 再與骨髓瘤細胞(P3/X63-AgS)融合(K6hler, G， Milstein， C: Nature， 256: 495 (1975)),由此制備雜交瘤。接著對5種雜交瘤生產(chǎn)的單克隆抗體進 行純化。利用肽固相ELISA方法，測定對肽的結(jié)合活性，然后選擇具 有高結(jié)合活性的IgGl抗體(下文稱K6534)和IgG3抗體(下文稱K6511)。實施例2利用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體抑制細胞增殖 根據(jù)Current Protocols in Immunology,第7章,Immunologic studies in humans, John E, Cologan等編,John Wiley & Sons, Inc., 1993 中所述的方法，對ADCC(抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性)活性和 CDC(補體依賴的細胞毒性)活性進行測定。1.制備效應(yīng)細胞從CBA/N小鼠(8周齡，雄性)摘出脾臟，然后將脾細胞分離在 RPMI1640培養(yǎng)基(GIBCO)中。把細胞洗滌在含有10。/。肽牛血清(FBS, HyClone)的同樣培養(yǎng)基中，使制得的細胞濃度為5X 106/mL，由此制備 效應(yīng)細胞。2. 制備補體溶液將幼兔補體(CEDARLANE)在10%含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基 (GIBCO)中稀釋10倍，由此制備補體溶液。3. 制備耙細胞將HuH-7人肝癌細胞系(Japanese Collection of Research Bioresources (JCRB) No. JCRB0403, Human Science Research Support Bank (Human Science Kenkyu Shien Bank))用0.2mCi的"Cr-鉻酸鈉 (Amersham Pharmacia Biotech)在10%含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)基中37°C 下培養(yǎng)1小時，由此進行放射性標(biāo)記。在放射性標(biāo)記后，將細胞在10% 含F(xiàn)BS的RPMI1640培養(yǎng)基中洗滌3次，制得的細胞濃度為2X 105/mL， 由此制備靶細胞。4. 測定ADCC活性各50y 1的耙細胞和抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534)加入到 96孔的U型底平板(BecktonDickinson)中，在冰上反應(yīng)15分鐘。然后 加入100yl的效應(yīng)細胞，并在二氧化碳氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時?？?體的終濃度制成0或10y g/mL。培養(yǎng)后，收集100nL的上清液，并 利用Y計數(shù)器(COBRA II AUTO-GAMMA， MODEL D5005， Packard Instrument Company)測定放射性。細胞毒性活性(。/。)利用公式 (A-C)/(B-C)X100求出。其中，"A"代表各樣品中的放射性(cpm)， "B" 代表補充有1。/。NP-40(nacalaitesque)的樣品中的放射性(cpm)，以及"C" 代表僅含有耙細胞的樣品中的放射性(cpm)。試驗重復(fù)兩次，并計算出 平均值。5. 測定CDC活性各50y 1的靶細胞和抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6511)加入到 96孔的平底平板(Beckton Dickinson)中，在冰上反應(yīng)15分鐘。然后加 入100yl的補體溶液，接著在二氧化碳氣體培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時?？贵w的終濃度為0或3"g/mL。培養(yǎng)后，收集100uL的上清液，并利用 y計數(shù)器測定放射性。以在"4.測定ADCC活性"中所用的同樣方式求出細胞毒性活性(％)。試驗重復(fù)兩次，并計算出平均值。圖1示出ADCC活性，而圖2示出CDC活性。這些結(jié)果揭示出 抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體對HuH-7人肝癌細胞系施加了 ADCC活 性和CDC活性，從而抑制了細胞增殖。實施例3測定磷脂酰肌醇蛋白聚糖在HuH-7細胞上的表達水平 將大約5X 105個HuH-7細胞懸浮在100 u 1的FACS/PBS(通過將 lg牛血清白蛋白(SIGMA)溶解在1L的CellWASH(Beckton Dickinson) 中來制備)。然后，把抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6511)或小鼠 IgG2a(Biogenesis)作為對照抗體以25 U g/mL的濃度加入，并讓溶液在 冰上放置30分鐘。在用FACS/PBS洗滌后，產(chǎn)物懸浮在100ixl的 FACS/PBS中。加入4 y 1的山羊抗小鼠Ig FITC(Becton Dickinson),并 讓溶液在冰上放置30分鐘。在用FACS/PBS洗滌兩次之后，將產(chǎn)物懸浮于1 ml的FACS/PBS 中。利用流式細胞儀(EPICS XL， BECKMAN COULTER)測定細胞的熒光強度。圖3示出流式細胞儀測定的結(jié)果。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在HuH-7 細胞上表達，這提示抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體結(jié)合于在細胞上表 達的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3，從而抑制細胞增殖(圖3)。實施例4利用FCM分析GPC3在癌細胞組上的表達利用FCM對人癌癥細胞系(肺、結(jié)腸、直腸、乳腺、前列腺、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、胰腺和肝臟)表達的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)進行分析。將細胞培養(yǎng)2天，然后進行分析。利用已經(jīng)細胞解離緩沖液(目錄號13150-016,批號1098554, GIBCO)稀釋10倍的胰蛋白酶-EDTA(目錄 號25300-054，批號14210, GIBCO)收集附著的細胞。讓收集的細胞在 冰上與抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體(K6534， 600 n g/ml)或mlgG2a抗 體作為陰性對照(Biogenesis, M-IgG2a-i，批號EA990719A， 1 mg/ml)(抗 體終濃度為10ug/ml)反應(yīng)。洗滌后，讓細胞與FITC標(biāo)記的抗小鼠Ig 抗體(目錄號349031， BD PharMingen)在冰上反應(yīng)(2u 1/測試)。細胞洗滌 后，利用流式細胞儀(EPICS XL, BECKMAN COULTER)測定熒光強度。 結(jié)果，GPC3的表達在下列細胞系中得到證實肺癌細胞系(A549， NCI-H460, NCI-H23, NCI-H226, DMS114, EKVX， HOP-62和NCI-H322 M;白血病細胞系P30/OHK, BALL-l, THP-1和P39/TSU)、淋巴瘤細胞 系(MLMA, Ramos和U937)-,、結(jié)腸癌細胞系(SW480, COLO205, Lo Vo 和SW837)、乳腺癌細胞系(MDA-MB-231, SK-BR-3和MDA-MB-468)、 前列腺癌細胞系(LNCaP和22Rvl)、胰腺癌細胞系(MIAPaCa-2)和肝癌 細胞系(HepG2)。根據(jù)這些結(jié)果，可得出結(jié)論本發(fā)明的細胞生長抑制 劑在治療肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、胰腺 癌等中是有用的。工業(yè)實用性根據(jù)本發(fā)明，提供了含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為活性 成分的細胞生長抑制劑。而且，根據(jù)本發(fā)明，提供了含有抗磷脂酰肌 醇蛋白聚糖3抗體作為活性成分的癌細胞生長抑制劑?？沽字＜〈?蛋白聚糖3抗體與在人肝癌細胞系的HuH-7細胞上表達的磷脂酰肌醇 蛋白聚糖3結(jié)合，從而抑制細胞增殖。由此，含有抗磷脂酰肌醇蛋白 聚糖3抗體的藥劑作為細胞生長抑制劑是有用的，特別是作為癌細胞 抑制劑。所有在此引用的出版物、專利和專利申請以其全文在此引作參考。 所以，本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員容易理解，在不背離如所附權(quán)利要求中所 述的本發(fā)明的技術(shù)概念和范圍的情況下，有可能對本發(fā)明作出眾多修 改和變化。本發(fā)明旨在包括這樣的修改和變化。
權(quán)利要求
1. 具有胞毒活性的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體。
2. 權(quán)利要求l所述的抗體，胞毒活性為抗癌細胞的胞毒活性。
3. 權(quán)利要求1或2所述的抗體，其中癌細胞為肝癌細胞。
4. 權(quán)利要求3所述的抗體，其中肝癌細胞為HuH-7肝癌細胞系細胞。
5. 權(quán)利要求l-4任一項所述的抗體，其中胞毒活性為抗體依賴的 細胞介導(dǎo)的胞毒活性。
6. 權(quán)利要求l-4任一項所述的抗體，其中胞毒活性為補體依賴的 胞毒活性。
7. 權(quán)利要求l-6任一項所述的抗體，其中所述抗體為單克隆抗體。
8. 權(quán)利要求l-7任一項所述的抗體，其中所述抗體為嵌合抗體。
9. 權(quán)利要求l-8任一項所述的抗體，其中所述抗體為人源化抗體。
10. 藥物組合物，包含權(quán)利要求l-9任一項所述的抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種細胞生長抑制劑，其可用于治療基于異常細胞增殖的疾病，尤其是癌癥。細胞生長抑制劑含有抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗體作為活性成分。
文檔編號C12N15/06GK101240022SQ20071009603
公開日2008年8月13日 申請日期2002年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月22日
發(fā)明者中村徹雄, 土屋政幸, 油谷浩幸 申請人:中外制藥株式會社