專利名稱：人磷脂酰肌醇3－激酶δ的抑制劑的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的相互參考
本申請(qǐng)要求于2000年4月25日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/199,655和2000年10月25日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/238,057的優(yōu)先權(quán)益。發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)酶，更具體地說，涉及PI3K活性的選擇性抑制劑，以及涉及使用這類物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
細(xì)胞信號(hào)通過3’-磷酸化磷酸肌醇參與多種細(xì)胞過程，例如，惡性轉(zhuǎn)化、生長因子信號(hào)、炎癥和免疫(參見Rameh等，J. Biol Chem，2748347-8350(1999)的綜述)。擔(dān)負(fù)生成這些磷酸化信號(hào)產(chǎn)物的酶，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-激酶；PI3K)最初被確定為與病毒癌基因蛋白質(zhì)和生長因子受體酪氨酸激酶有關(guān)地活性，后者使磷酸肌醇(PI)及其肌醇環(huán)上的3′-羥基的磷酸化衍生物磷酸化(Panayotou等，Trends Cell Biol 2358-60(1992))。
磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸酯(PIP3)(PI3-激酶激活的主要產(chǎn)物)的水平隨著用各種激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞的處理而得到提高。因此，確信PI3-激酶激活參與廣泛的細(xì)胞響應(yīng)，包括細(xì)胞生長、分化和細(xì)胞程序死亡(Parker等，Current Biology，5577-99(1995)；Yao等，Science，2672003-05(1995))。盡管PI3-激酶激活后生成的磷酸化類脂的下游靶標(biāo)尚未很好地鑒定，已呈現(xiàn)的證據(jù)表明當(dāng)與各種磷脂酰肌醇類脂結(jié)合時(shí)，含有血小板-白細(xì)胞C激酶底物-同源性區(qū)和FYVE-指紋域的蛋白質(zhì)被激活(Sternmark等，J.Cell Sci，1124175-83(1999)；Lemmon等，Trends Cell Biol，7237-42(1997))。在體外，蛋白激酶C(PKC)的一些同工型被PIP3直接激活，并且顯示出與PKC有關(guān)的蛋白激酶PKB被PI3-激酶激活(Burgering等，Nature，376599-602(1995))。
目前，基于底物的特異性將PI3-激酶酶家族分為三類。I型PI3Ks能夠使磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸酯和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸酯(PIP2)磷酸化，分別產(chǎn)生磷脂酰肌醇-3-磷酸酯(PIP)、磷脂酰肌醇-3，4-二磷酸酯和磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸酯。II型PI3Ks使PI和磷脂酰肌醇-4-磷酸酯磷酸化，而III型PI3Ks僅使PI磷酸化。
PI3-激酶的首次純化和分子克隆揭示它是由p85和p110亞單位組成的異源二聚體(Otsu等，Cell，6591-104(1991)；Hiles等，Cell，70419-29(1992))。自那時(shí)起，已鑒定出四種不同的I型PI3Ks，稱為PI3Kα、β、δ和γ，每種由110 kDa催化亞單位和調(diào)節(jié)亞單位組成。更具體地說，三種催化亞單位即p110α、p110β和p110δ，各與相同的調(diào)節(jié)亞單位p85相互作用；而p110γ與不同的調(diào)節(jié)亞單位p101相互作用。如下所述，人細(xì)胞和組織中這些PI3Ks中每一種的表達(dá)模式也是不同的。盡管近年來已收集到豐富的PI3-激酶總體的細(xì)胞功能的信息，各自同工型所起的作用所知甚少。
牛p110α的克隆已有描述。該蛋白已被鑒定為與釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白Vps34p有關(guān)，它是一種參與液泡蛋白質(zhì)加工的蛋白。重組p110α產(chǎn)物也顯示出與p85α有關(guān)，得到在轉(zhuǎn)染的COS-1細(xì)胞中具有活性的PI3K。參見Hiles等，Cell，70419-29(1992))。
在Hu等，Mol Cell Biol 137677-88(1993)中描述了第二種稱為p110β的人p110同工型的克隆。該同工型的克隆據(jù)稱與細(xì)胞中的p85有關(guān)，并且在許多細(xì)胞中表達(dá)，如在許多人和小鼠組織中以及在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、Jurkat人白血病T細(xì)胞、293人胚胎腎細(xì)胞、小鼠3T3成纖維細(xì)胞、Hela細(xì)胞和NBT2大鼠膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)p110βmRNA。這樣廣泛的表達(dá)表明該同工型在信號(hào)途徑中一般說來是重要的。
在Chantry等，J.Biol Chem，27219236-41(1997)中描述了PI3-激酶的p110δ同工型的鑒定。觀察到人p110δ同工型以受組織限制的方式表達(dá)。它在淋巴細(xì)胞和淋巴組織中高水平地表達(dá)表明該蛋白在免疫系統(tǒng)中的PI3-激酶-介導(dǎo)的信號(hào)中起作用。關(guān)于p110δ同工型的細(xì)節(jié)可參見美國專利號(hào)5,858,753、5,822,910和5,985,589。還可參見Vanhaesebroeck等，Proc Natl Acad Sci USA，944330-5(1997)和國際公開WO97/46688。
在PI3Kα、β和δ亞型的每一種中，p85亞單位通過它的SH2區(qū)與靶蛋白中的磷酸化酪氨酸殘基(存在于合適的序列成分中)相互作用來起作用，以使PI3-激酶定位于質(zhì)膜(Rameh等，Cell 83821-30(1995))。已鑒定出p85的兩種同工型p85α(在多種細(xì)胞中表達(dá))和p85β(主要在腦和淋巴組織中發(fā)現(xiàn))(Volinia等，Oncogene，7789-93(1992))。p85亞單位對(duì)PI3-激酶p110α、β和δ催化亞單位的關(guān)聯(lián)似乎對(duì)于這些酶的催化活性和穩(wěn)定性是需要的。另外，Ras蛋白的結(jié)合還負(fù)調(diào)節(jié)PI3-激酶活性。
p110γ的克隆還進(jìn)一步揭示了PI3K酶家族的復(fù)雜性(Stoyanov等，Science，269690-93(1995))。p110γ同工型與p110α和p110β(在催化區(qū)具有45-48％的相同)密切相關(guān)，但如所提及的那樣，并不利用p85作為標(biāo)靶亞單位。相反，p110γ包含另一個(gè)鄰近其氨基末梢的稱作“血小板-白細(xì)胞C激酶底物同源區(qū)”的區(qū)。該區(qū)使p110γ與異源三聚體G蛋白的βγ亞單位相互作用，并且這種相互作用似乎調(diào)節(jié)它的活性。
PI3Kγ的p101調(diào)節(jié)亞單位先在豬中克隆，隨后進(jìn)行人定向進(jìn)化同源鑒定(Krugmann等，J.Biol.Chem，27417152-8(1999))。p101的N-末端區(qū)與p101γ的N-末端區(qū)之間的相互作用顯示出對(duì)通過以上提及的Gβγ的PI3Kγ激活是至關(guān)重要。
在國際公開WO96/25488中描述了組成型活性PI3K多肽。該專利公開了嵌合融合蛋白的制備，其中稱作inter-SH2(iSH2)區(qū)的p85的102-殘基片段通過連接區(qū)與鼠p110的N-末端融合。p85 iSH2區(qū)顯然能以與完整p85相比的方式激活PI3K活性(Klippel等，Mol Cell Biol，142675-85(1994))。
因此，通過PI3-激酶的氨基酸同一性或者通過PI3-激酶的活性可對(duì)其作出定義。這個(gè)不斷增長的基因家族的另外的成員包括更互不相關(guān)的類脂和蛋白激酶，包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的Vps34 TOR1和TOR2(及它們的哺乳動(dòng)物同源物如FRAP和mTOR)、共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張基因產(chǎn)物(ATR)和DNA-依賴的蛋白激酶(DNA-PK)的催化亞單位。主要參見Hunter，Cell，831-4(1995)。
PI3-激酶也顯示出參與白細(xì)胞激活的多種方面。與PI3-激酶活性有關(guān)的p85已顯示與CD28的細(xì)胞質(zhì)粒區(qū)生理相關(guān)，CD28是一種用于激活T-細(xì)胞以對(duì)抗原作出響應(yīng)的重要的共同刺激分子(Pages等，Nature，369327-29(1994)；Rudd，Immunity，4527-34(1996))。T細(xì)胞通過CD28的激活降低經(jīng)抗原激活的閾值，并且提高增殖性響應(yīng)的數(shù)值和持續(xù)時(shí)間。這些作用增加了包括白介素-2(IL-2)(一種T細(xì)胞生長因子)在內(nèi)的多種基因的轉(zhuǎn)錄(Fraser等，Science，251313-16(1991))。CD28的突變(使得它不能再與PI3-激酶相互作用)導(dǎo)致無法啟動(dòng)IL2產(chǎn)生，表明PI3-激酶在T細(xì)胞激活中起了至關(guān)重要的作用。
對(duì)酶家族的各個(gè)成員的特異性抑制劑可為每種酶的譯碼功能提供非常有價(jià)值的工具。兩種化合物，LY294002和渥曼青霉素已經(jīng)廣泛用作PI3-激酶抑制劑。然而這些化合物是非特異性的PI3K抑制劑，因此它們無法識(shí)別I型PI3-激酶的四個(gè)成員。例如，渥曼青霉素對(duì)各種I型PI3-激酶中的每一種的IC50值介于1-10nM之間。類似地，LY294002對(duì)這些PI3-激酶中的每一種的IC50值為約1μM(Fruman等，Ann Rev Biochem，67481-507(1998))。因此，這些化合物在研究各種I型PI3-激酶的作用中的用途收到限制。
基于使用渥曼青霉素的研究，有證據(jù)表明對(duì)于白細(xì)胞信號(hào)通過G-蛋白偶聯(lián)受體的一些特性也需要PI3-激酶功能(Thelen等，Proc NatlAcad Sci USA，914960-64(1994))。另外，已顯示渥曼青霉素和LY294002阻斷嗜中性白細(xì)胞遷移和超氧化物釋放。然而，由于這些化合物不能識(shí)別PI3K的各種同工型，特異性PI3K同工型或多種同工型中哪一種參與這些現(xiàn)象也尚不清楚。
鑒于以上考慮可見已有的知識(shí)缺少關(guān)于PI3-激酶的結(jié)構(gòu)和功能特征，包括亞細(xì)胞定位、激活狀態(tài)、底物親和性等。另外，這些酶在正常的和疾病化的組織兩者中發(fā)揮的功能也待推測(cè)。特別是白細(xì)胞中的PI3Kδ的功能以前未被鑒定，關(guān)于它在人生理學(xué)中功能的知識(shí)是有限的。其它的PI3K同工型在這些組織中的共表達(dá)使得分離每種酶的活性的工作迄今仍是令人感到繁瑣的事。此外，沒有鑒定抑制劑以證實(shí)各種選擇性抑制特性，各種PI3K同工酶的活性的分離將是不可能的。的確，本申請(qǐng)人至今還沒得知PI3K同工酶的這種選擇性，或者更確切地說特異性抑制劑已得到證實(shí)。
因此，本領(lǐng)域存在存在對(duì)PI3Kδ多肽進(jìn)行進(jìn)一步結(jié)構(gòu)表征的需要。也存在對(duì)PI3Kδ的功能進(jìn)行表征的需要。此外，我們對(duì)PI3Kδ的理解需要對(duì)p110δ與其調(diào)節(jié)亞單位和細(xì)胞中其它的蛋白的結(jié)構(gòu)相互作用的進(jìn)一步的闡釋。為了能夠更好地表征每種同工酶的功能，也存在對(duì)PI3K同工酶的選擇性或者特異性抑制劑的需要。具體地講，為了開發(fā)該同工酶的作用，以及為了開發(fā)調(diào)節(jié)所述同工酶活性的藥物需要PI3Kδ的選擇性或者特異性抑制劑。
本發(fā)明一方面提供可抑制人PI3Kδ生物活性的化合物。本發(fā)明另一方面提供選擇性抑制PI3Kδ，而對(duì)其它的PI3K同工型具有相對(duì)低的抑制效力的化合物。本發(fā)明還一方面提供鑒定人PI3Kδ功能的方法。本發(fā)明再一方面提供選擇性調(diào)節(jié)人PI3Kδ活性的方法，由此促進(jìn)由PI3Kδ機(jī)能失調(diào)介導(dǎo)的疾病的醫(yī)學(xué)治療。本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)對(duì)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的技術(shù)人員來說將是顯而易見的。發(fā)明概述
目前已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)這些和其它方面，其中一方面為干擾白細(xì)胞功能的方法，包括使白細(xì)胞與選擇性抑制白細(xì)胞內(nèi)的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接觸。按照所述方法，白細(xì)胞可包括選自嗜中性白細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的細(xì)胞。
例如，在其中白細(xì)胞包括嗜中性白細(xì)胞的情況下，所述方法可包括干擾至少一種選自受激超氧化物釋放、受激胞吐作用和趨化性遷移的嗜中性白細(xì)胞功能。優(yōu)選所述方法基本上不干擾嗜中性白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬作用或?qū)?xì)菌的殺傷。在其中白細(xì)胞包括B淋巴細(xì)胞的情況下，所述方法可包括干擾B淋巴細(xì)胞的增殖或者B淋巴細(xì)胞的抗體的產(chǎn)生。在其中白細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞的情況下，所述方法可包括干擾T淋巴細(xì)胞的增殖。在其中白細(xì)胞包括嗜堿性粒細(xì)胞的情況下，所述方法可包括干擾嗜堿性粒細(xì)胞釋放組胺。
在本發(fā)明的采用選擇性PI3Kδ抑制劑的方法中，優(yōu)選在基于細(xì)胞的測(cè)定中，所述化合物對(duì)抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于其它I型PI3K同工型的約10倍。更優(yōu)選在基于細(xì)胞的測(cè)定中，所述化合物對(duì)抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于其它I型PI3K同工型的約20倍。仍更優(yōu)選在生化試驗(yàn)中，所述化合物抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于其它I型PI3K同工型的約50倍。
可用于本發(fā)明方法的優(yōu)選的選擇性化合物包括具有結(jié)構(gòu)(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物)
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(＝O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亞烷基-芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基-OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)鹵基、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基。
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代；
其中在基于細(xì)胞的測(cè)定中，所述化合物抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于其它I型PI3K同工型的約10倍。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為用于治療由嗜中性白細(xì)胞介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)癥狀的方法，該方法包括給予需要治療的動(dòng)物有效量的選擇性抑制在嗜中性白細(xì)胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物。本發(fā)明方法能夠治療的示例性醫(yī)學(xué)癥狀包括那些具有不符合需要的選自受激超氧化物釋放、受激胞吐作用和趨化性遷移的嗜中性白細(xì)胞功能特征的癥狀。優(yōu)選本發(fā)明方法基本上不抑制嗜中性白細(xì)胞吞噬細(xì)胞的活性或者對(duì)細(xì)菌的殺滅。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為用于干擾破骨細(xì)胞功能的方法，該方法包括使破骨細(xì)胞與選擇性抑制在破骨細(xì)胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接觸。根據(jù)本發(fā)明方法，該化合物可包括優(yōu)先結(jié)合于骨的部分。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為在需要治療的動(dòng)物體內(nèi)緩解骨重吸收疾病的方法，該方法包括給予所述動(dòng)物有效量的抑制動(dòng)物破骨細(xì)胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物。適合用本發(fā)明方法治療的優(yōu)選骨重吸收疾病為骨質(zhì)疏松。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為用于抑制造血源的癌細(xì)胞的生長或增殖的方法，該方法包括使癌細(xì)胞與選擇性抑制癌細(xì)胞的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接觸。所述方法可有利地抑制選自淋巴癌、多發(fā)性骨髓瘤和白血病的癌癥的生長或增殖。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)多肽的激酶活性的方法，該方法包括使PI3Kδ多肽與具有通式結(jié)構(gòu)(I)的化合物接觸。
可用于本發(fā)明方法的優(yōu)選的化合物包括選自以下的化合物
其中Y不存在或選自S和NH；
R4選自H、鹵素、NO2、OH、OCH3、CH3和CF3；
R5選自H、OCH3和鹵基；
或者R4和R5與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)。
R6選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷氧基苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)，和
；和
q為1或2；
前提是當(dāng)R6為苯基或2-氯代苯基時(shí)，R4和R5中至少一個(gè)不為H。
更優(yōu)選所述化合物選自
其中Y不存在或選自S和NH；
R7選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；
R8選自H、OCH3和鹵素；
或者R7和R8與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)。
R9選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)，和
q為1或2；
前提是R7和R8中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-二甲氧基，且R9不為4-氯代苯基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為用于干擾白細(xì)胞功能的方法，g1該方法包括使白細(xì)胞與具有通式結(jié)構(gòu)(I)的化合物接觸。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為一類在生化和基于細(xì)胞的測(cè)定中觀察到可抑制PI3Kδ活性并期望在醫(yī)學(xué)癥狀中呈現(xiàn)治療效益的化合物，其中PI3Kδ活性是過度的或者不合乎需要的。因此，本發(fā)明提供一類具有結(jié)構(gòu)(II)的化合物。
優(yōu)選所述化合物具有通式結(jié)構(gòu)(IV)，
其中Y不存在或選自S和NH；
R10選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；
R11選自H、OCH3和鹵基；
或者R10和R11與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)。
R12選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)C2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)，和
q為1或2；
前提是
(a)R10和R11中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-二甲氧基；
(b)R12不為4-氯代苯基；和
(c)當(dāng)R12為苯基或2-氯代苯基且X為S時(shí)，R10和R11中至少一個(gè)不為H。
通過下面詳細(xì)的描述和實(shí)施例，本發(fā)明的這些和其它的特征以及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。提供詳細(xì)的描述和實(shí)施例以增強(qiáng)對(duì)本發(fā)明的理解，但無意限制本發(fā)明的范圍。附圖概述


圖1顯示本發(fā)明的選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)三種PI3K同工型的活性的影響。
圖2顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)在TNF或IgG存在下人嗜中性白細(xì)胞的超氧化物產(chǎn)生的影響。
圖3顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)在TNF或fMLP存在下人嗜中性白細(xì)胞的超氧化物產(chǎn)生的影響。
圖4顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)在fMLP存在下人嗜中性白細(xì)胞的彈性蛋白酶胞吐作用的影響。
圖5顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)人嗜中性白細(xì)胞的fMLP誘導(dǎo)的趨化性遷移的影響。
圖6顯示了選擇性PI3Kδ抑制劑不影響人嗜中性白細(xì)胞對(duì)金黃色葡萄球菌的吞噬作用和殺傷。
圖7顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)人B淋巴細(xì)胞的增殖和抗體產(chǎn)生的影響。
圖8顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)抗IgM刺激的小鼠脾B淋巴細(xì)胞增殖的影響。
圖9顯示選擇性PI3Kδ抑制劑對(duì)動(dòng)物模型體內(nèi)彈性蛋白酶胞吐作用的影響。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述
本發(fā)明提供選擇性抑制PI3Kδ活性的化合物。本發(fā)明還提供抑制PI3Kδ活性的方法，包括在細(xì)胞，尤其是白細(xì)胞、破骨細(xì)胞和癌細(xì)胞中選擇性調(diào)節(jié)PI3Kδ同工酶活性的方法。該方法包括體外、體內(nèi)和離體的應(yīng)用。
特別有利的是為緩解由PI3Kδ活性介導(dǎo)的疾病或癥狀，在臨床中選擇性調(diào)節(jié)PI3Kδ活性的方法。因此，通過使用本發(fā)明的PI3Kδ選擇性調(diào)節(jié)劑，可治療以過度的或不適合的PI3K δ活性為特征的疾病或病癥。
本發(fā)明的其它方法包括使該同工酶的生理學(xué)作用的其它的性質(zhì)得以實(shí)現(xiàn)。此外，本發(fā)明提供包含選擇性PI3Kδ抑制劑的藥用組合物。還提供包含選擇性PI3Kδ抑制劑化合物(或包含所述化合物的藥用組合物)的制備的說明和使用所述化合物的指導(dǎo)原則?，F(xiàn)在詳細(xì)描述本發(fā)明這些和其它的有用的實(shí)施方案。
此處描述的方法得益于選擇性抑制、且優(yōu)選特異性抑制細(xì)胞(包括體外、體內(nèi)或者離體的細(xì)胞)中的PI3Kδ活性的化合物的使用。本發(fā)明方法中有用的細(xì)胞包括那些表達(dá)內(nèi)源PI3Kδ的細(xì)胞，其中內(nèi)源表明在沒有將一種或者更多種多核苷酸編碼的PI3Kδ多肽或其生物活性片段重組引入到細(xì)胞中的情況下，細(xì)胞表達(dá)PI3Kδ。本發(fā)明方法還包括表達(dá)外源PI3Kδ的細(xì)胞的用途，其中采用重組方法，可將一種或者更多種多核苷酸編碼的PI3Kδ或其生物活性片段導(dǎo)入到細(xì)胞中。
特別有利的是，所述細(xì)胞能夠在體內(nèi)，即在生命體例如動(dòng)物體或人體中，其中PI3Kδ抑制劑可用作抑制患者體內(nèi)PI3Kδ活性的治療藥物?；蛘撸黾?xì)胞能夠以分散的細(xì)胞分離或者在組織中分離，用于離體或者體外方法。也包括在本發(fā)明中的體外方法可包括使PI3Kδ酶或其生物活性片段與本發(fā)明的抑制劑化合物接觸的步驟。PI3Kδ酶可包括已純化的和已分離的酶，其中所述酶分離自天然來源(例如，在沒有通過重組技術(shù)修飾下正常表達(dá)PI3Kδ多肽的細(xì)胞或者組織)，或者分離自通過重組技術(shù)修飾以表達(dá)外源酶的細(xì)胞。
此處所用的術(shù)語“選擇性PI3Kδ抑制劑”指與抑制PI3K家族的其它同工酶比較，能更有效抑制PI3Kδ同工酶的化合物。“選擇性PI3Kδ抑制劑”化合物被理解為與常規(guī)的和一般稱為PI3K抑制劑(如渥曼青霉素或LY294002)的化合物比較，其對(duì)PI3Kδ更具選擇性。同時(shí)將渥曼青霉素和LY294002稱為“非選擇性PI3K抑制劑”。選擇性負(fù)調(diào)節(jié)PI3Kδ的表達(dá)或活性的任何類型的化合物可用作本發(fā)明方法中的選擇性PI3Kδ抑制劑。此外，選擇性負(fù)調(diào)節(jié)PI3Kδ的表達(dá)或活性并且具有可接受的藥理性質(zhì)的任何類型的化合物可用作本發(fā)明治療方法中的選擇性PI3Kδ抑制劑。
通過測(cè)定每種化合物抑制所述活性至預(yù)定程度時(shí)的濃度，并且隨后比較結(jié)果，能夠確定作為酶活性(或者其它的生物活性)抑制劑的化合物的相對(duì)效力。通常，優(yōu)選測(cè)定生化試驗(yàn)中抑制50％的活性的濃度，即50％抑制濃度或“IC50”。采用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)可完成IC50測(cè)定。通常，通過在一定濃度范圍的所研究的抑制劑存在下測(cè)量所給出的酶的活性可測(cè)定IC50。然后將實(shí)驗(yàn)所得到的酶活性的值對(duì)所采用的抑制劑濃度作圖。將顯示50％酶活性(與不存在任何抑制劑下的活性比較)的抑制劑的濃度作為IC50值。類似地，通過合適的活性測(cè)定可確定其它的抑制濃度。例如在一些情況中，可能要求確定90％的抑制濃度，即IC90等。
因此，“選擇性PI3Kδ抑制劑”可被理解為指對(duì)PI3Kδ的50％抑制濃度(IC50)與任何或所有其它I型PI3K家族成員的IC50值比較低至少10倍，優(yōu)選至少20倍，更優(yōu)選至少30倍的化合物。術(shù)語“特異性PI3Kδ抑制劑”可被理解為指對(duì)PI3Kδ的50％抑制濃度(IC50)與任何或所有其它I型PI3K家族成員的IC50值比較低至少50倍，優(yōu)選至少100倍，更優(yōu)選至少200倍，并仍更優(yōu)選至少500倍。
出外，本發(fā)明提供抑制白細(xì)胞功能的方法。更具體地說，本發(fā)明提供抑制嗜中性白細(xì)胞和T及B淋巴細(xì)胞功能的方法。對(duì)于嗜中性白細(xì)胞，意外地發(fā)現(xiàn)PI3Kδ活性的抑制作用可抑制嗜中性白細(xì)胞的功能。例如，已觀察到本發(fā)明化合物引導(dǎo)抑制嗜中性白細(xì)胞的典型的功能，例如受刺激的超氧化物釋放、受刺激的胞吐作用和趨化性遷移。然而，已進(jìn)一步觀察到本發(fā)明的方法使得可以抑制嗜中性白細(xì)胞的一些功能，而同時(shí)基本上不影響這些細(xì)胞的其它功能。例如，已觀察到本發(fā)明的選擇性PI3Kδ抑制劑化合物基本上不抑制嗜中性白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬作用。
因此，本發(fā)明包括用于抑制嗜中性白細(xì)胞功能，而同時(shí)基本上不抑制對(duì)細(xì)菌的吞噬作用的方法。適合用本發(fā)明方法抑制的嗜中性白細(xì)胞功能包括由PI3Kδ活性或者表達(dá)介導(dǎo)的任何功能。這些功能包括(但不限于)受刺激的超氧化物釋放、受刺激的胞吐作用或者脫粒、趨化性遷移、粘附于血管內(nèi)皮(例如，嗜中性白細(xì)胞的粘連和翻滾、嗜中性白細(xì)胞活性的引發(fā)、和/或嗜中性白細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮的封閉)、透壁血細(xì)胞滲出或者通過內(nèi)皮滲出到外周組織中。通常，將這些功能總的稱作“炎性功能”，因?yàn)樗鼈兺ǔＥc響應(yīng)炎癥的嗜中性白細(xì)胞有關(guān)。嗜中性白細(xì)胞的炎性功能與這些細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的殺傷功能(例如對(duì)細(xì)菌的吞噬作用和殺傷)不同。因此，本發(fā)明還包括治療其中嗜中性白細(xì)胞的一種或者更多種炎性功能異?；虿缓虾跣枰牟“Y的方法。
通過本發(fā)明已進(jìn)一步確定PI3Kδ在淋巴細(xì)胞(包括B細(xì)胞和T細(xì)胞)的受激增殖中起作用。此外，PI3Kδ似乎在經(jīng)B細(xì)胞刺激的抗體分泌中起作用。本發(fā)明的選擇性PI3Kδ抑制劑化合物已證實(shí)通過對(duì)PI3Kδ的抑制作用可以消除這些現(xiàn)象。因此，本發(fā)明包括抑制淋巴細(xì)胞增殖的方法、抑制經(jīng)B淋巴細(xì)胞的抗體產(chǎn)生的方法。通過本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)的其它方法包括治療其中這些淋巴細(xì)胞的一種或者更多種功能異常或不合乎需要的病癥的方法。
目前已確定能夠選擇性或者特異性地抑制PI3Kδ活性，以利于治療PI3Kδ-介導(dǎo)的疾病，而減少或者消除通常伴隨抑制其它的I型PI3-激酶產(chǎn)生的并發(fā)癥。為闡述該實(shí)施方案，采用所發(fā)現(xiàn)的與其它PI3K同工酶比較能夠選擇性抑制PI3Kδ的一類化合物來實(shí)施本發(fā)明的方法。
使用具有通式結(jié)構(gòu)(III)的化合物可實(shí)施該實(shí)施方案的方法。優(yōu)選的方法使用已經(jīng)經(jīng)驗(yàn)測(cè)定對(duì)PI3Kδ的抑制選擇性至少為其它PI3Kδ同工酶的10倍的化合物。例如，使用以下化合物可實(shí)施所述方法
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-y-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；乙酸乙酯；
3-(2，4-二甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-異丙基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
還確定通過使用一類具有PI3Kδ抑制活性、由此有利于抑制由PI3Kδ介導(dǎo)的疾病中的PI3Kδ活性的化合物，可有利地實(shí)施本發(fā)明的方法。例如，在該實(shí)施方案中，使用具有通式結(jié)構(gòu)(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物)可實(shí)施本發(fā)明方法。
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(＝O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基-NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-3亞烷基芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)鹵基、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基。
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
例如，本發(fā)明的方法可使用如下具有PI3Kδ抑制活性的化合物；
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；乙酸乙酯；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-t-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮；
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮。
本發(fā)明還提供作為PI3Kδ活性的選擇性抑制劑的化合物。所述化合物在生化試驗(yàn)中呈現(xiàn)出對(duì)PI3Kδ的抑制作用，并且在基于細(xì)胞的測(cè)定中選擇性干擾PI3Kδ-表達(dá)的細(xì)胞的功能。如在此其它地方描述的，已證實(shí)本發(fā)明化合物可抑制嗜中性白細(xì)胞和其它白細(xì)胞中的某些功能以及破骨細(xì)胞的功能。
總的來說，本發(fā)明提供的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽和其溶劑合物(如水合物)具有通式結(jié)構(gòu)(I)，其藥學(xué)上可接受的鹽或其藥物前體
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(＝O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-3亞烷基芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基-OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)鹵基、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)-C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基。
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
此處所用的術(shù)語“烷基”包括含明確碳原子數(shù)目的直鏈和支鏈的烴基，一般是甲基、乙基和直鏈和支鏈的丙基和丁基。烴基可含有最多可達(dá)16個(gè)碳原子，優(yōu)選1-8個(gè)碳原子。術(shù)語“烷基”包括“橋連的烷基”，即C6-C16雙環(huán)或多環(huán)烴基，例如，降冰片基、金剛烷基、雙環(huán)[2.2.2]辛基、雙環(huán)[2.2.1]庚基、雙環(huán)[3.2.1]辛基或十氫萘基。術(shù)語“環(huán)烷基”定義為環(huán)狀C3-C8烴基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)己基和環(huán)戊基。
術(shù)語“鏈烯基”的定義除含有碳-碳雙鍵外，其余與“烷基”相同?！碍h(huán)烯基”的定義除了環(huán)上具有碳-碳雙鍵外，其余的與“環(huán)烷基”相同。
術(shù)語“亞烷基”指具有取代基的烷基。例如，術(shù)語“C1-3亞烷基芳基”指含有1至3個(gè)碳原子且被芳基取代的烷基。
術(shù)語“鹵基”或者“鹵素”在此處的定義包括氟、溴、氯和碘。
術(shù)語“鹵代烷基”在此處的定義為用一個(gè)或者更多個(gè)鹵基取代基，或者氟基、氯基、溴基、碘基或者它們的組合取代的烷基。類似地，“鹵代環(huán)烷基”定義為具有一個(gè)或者更多個(gè)鹵基取代基的環(huán)烷基。
單獨(dú)或組合使用的術(shù)語“芳基”在此處的定義為單環(huán)或多環(huán)芳環(huán)，優(yōu)選單環(huán)或雙環(huán)芳基，例如苯基或萘基。除非另外指明，否則“芳基”可為未取代的或者例如被以下一個(gè)或者更多個(gè)，特別是1-3個(gè)取代基取代鹵基、烷基、苯基、羥基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、鹵代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、烷硫基、烷基亞磺?；屯榛酋；?。示例性的芳基包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、四氫萘基、氯代苯基、氟代苯基、氨基苯基、甲基苯基、甲氧基苯基、三氟甲基苯基、硝基苯基、羧基苯基等。術(shù)語“芳基C1-3烷基”和“雜芳基-C1-3烷基”定義為具有C1-3烷基取代基的芳基或雜芳基。
術(shù)語“雜芳基”此處定義為含有1或2個(gè)芳環(huán)，且在芳族環(huán)上包含至少一個(gè)氮、氧或硫原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，它們可以是未取代的或者被以下一個(gè)或者更多個(gè)，特別是1-3個(gè)取代基取代如鹵基、烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基、烷氧基烷基、鹵代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、烷硫基、烷基亞磺酰基和烷基磺酰基。雜芳基的實(shí)例包括噻吩基、呋喃基、吡啶基、噁唑基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、三唑基、異噻唑基、異噁唑基、咪唑基、苯并噻唑基、吡嗪基、嘧啶基、噻唑基和噻二唑基。
術(shù)語“Het”定義為包含一個(gè)或者更多個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)基團(tuán)?！癏et”也可包含連接于環(huán)的氧代基團(tuán)(＝O)。Het基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括1，3-二氧戊環(huán)、2-吡唑啉、吡唑烷、吡咯烷、哌嗪、吡咯啉、2H-吡喃、4H-吡喃、嗎啉、硫代嗎啉、哌啶、1，4-二噻烷和1，4-二噁烷。
術(shù)語“羥基”定義為-OH。
術(shù)語“烷氧基”定義為-OR，其中R為烷基。
術(shù)語“烷氧基烷基”定義為其中氫被烷氧基置換的烷基。術(shù)語“(烷硫基)烷基”定義與烷氧基烷基類似，不同之處在于存在的是硫原子而非氧原子。
術(shù)語“羥基烷基”定義為連接有羥基的連接于烷基。
術(shù)語“氨基”定義為-NH2，術(shù)語“烷基氨基”定義為-NR2，其中至少一個(gè)R為烷基而第二個(gè)R為烷基或氫。
術(shù)語“酰氨基”定義為RC(＝O)N，其中R為烷基或芳基。
術(shù)語“烷硫基”定義為-SR，其中R為烷基。
術(shù)語“烷基亞磺?；倍x為R-SO2，其中R為烷基。
術(shù)語“氨基”定義為-NH2，術(shù)語“烷基氨基”定義為-NR2，其中至少一個(gè)R為烷基而第二個(gè)R為烷基或氫。
術(shù)語“酰氨基”定義為RC(＝O)N，其中R為烷基或芳基。
術(shù)語“烷硫基”定義為-SR，其中R為烷基。
術(shù)語“烷基亞磺酰基”定義為R-SO2，其中R為烷基。
術(shù)語“烷基磺?；倍x為R-SO3，其中R為烷基。
術(shù)語“硝基”定義為-NO2。
術(shù)語“三氟甲基”定義為-CF3。
術(shù)語“三氟甲氧基”定義為-OCF3。
術(shù)語“氰基”定義為-CN。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，X選自CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH(CH3)、CH2CH(CH3)和C(CH3)2。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y不存在或選自S和NH。
A環(huán)可為單環(huán)或者雙環(huán)。單環(huán)的A環(huán)系統(tǒng)為芳環(huán)。雙環(huán)的A環(huán)系統(tǒng)包含至少一個(gè)芳環(huán)，但兩個(gè)環(huán)可為芳環(huán)。A環(huán)系統(tǒng)的實(shí)例包括(但不限于)咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、pyridizinyl、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、嘌呤基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮雜萘基、蝶啶基、1H-吲唑基和苯并咪唑基。
在一組優(yōu)選的式(I)化合物中，A由選自以下的任選取代的環(huán)系統(tǒng)表示
，和
A環(huán)系統(tǒng)可任選被1-3個(gè)、優(yōu)選1-2個(gè)選自以下的取代基取代N(Ra)2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、ORa，和
具體的取代基包括(但不限于)NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、NHCH2C6H5、NH(C2H5)、Cl、F、CH3、SCH3、OH和
在另一組優(yōu)選的式(I)化合物中，R1和R2獨(dú)立為氫、ORa、鹵基、C1-6烷基、CF3、NO2、N(Ra)2、NRaC1-3亞烷基N(Ra)2和OC1-3亞烷基ORa。具體的取代基包括(但不限于)H、OCH3、Cl、F、Br、CH3、CF3、NO2、OH、N(CH3)2、
和O(CH2)2OCH2C6H5。R1和R2也可一起形成環(huán)，例如苯環(huán)。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3選自任選取代的C1-6烷基、芳基、雜芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C(＝O)ORa、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基N(Ra)2和C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra。具體的R3基團(tuán)包括(但不限于)
R3基團(tuán)可被1-3個(gè)以下的取代基取代例如鹵基、ORa、C1-6烷基、芳基、雜芳基、NO2、N(Ra)2、NRaSO2CF3、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)ORa、N(Ra)C1-4亞烷基(Ra)2、SO2N(Ra)2、CN、C(＝O)Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2。R3基團(tuán)的具體的取代基包括(但不限于)Cl、F、CH3、CH(CH3)2、OCH3、C6H5、NO2、NH2、NHC(＝O)CH3、CO2H和N(CH3)CH2CH2N(CH3)2。
此處使用的喹唑啉環(huán)結(jié)構(gòu)和環(huán)結(jié)構(gòu)的編號(hào)為
嘌呤環(huán)結(jié)構(gòu)和環(huán)結(jié)構(gòu)的編號(hào)為
本發(fā)明提供的化合物如下舉例說明
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；乙酸乙酯；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮；
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮。
本發(fā)明提供的優(yōu)選化合物具有結(jié)構(gòu)(IV)，示例如下；
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；乙酸乙酯；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
在此處使用的術(shù)語“藥物前體”指在體內(nèi)如經(jīng)水解而迅速轉(zhuǎn)化為上述具有結(jié)構(gòu)式(I)化合物的化合物。在Hardma等編輯的Goodmanand Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics，第9版，第11-16頁(1996)中主要討論了藥物前體的設(shè)計(jì)。在Higuchi等的Prodrugs as Novel Delivery Systems，14卷，ASCD專題討論會(huì)系列和在Roche編輯的Bioreversible Carriers in Drug Design，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press(1987)中提供了詳盡的討論。簡而言之，在給藥后，接下來為從身體中排出或者發(fā)生一些生物轉(zhuǎn)化，由此降低或消除了所述藥物的生物活性?；蛘?，生物轉(zhuǎn)化過程會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物，后者與最初給予的藥物比較更具有活性或具有等同的活性。對(duì)這些生物轉(zhuǎn)化過程不斷深入的理解產(chǎn)生了所謂的“藥物前體”的設(shè)計(jì)，這種藥物前體在生物轉(zhuǎn)化后，在改變后的狀態(tài)下變得更具生理學(xué)活性。因此，藥物前體包括藥學(xué)上無活性的化合物，可轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂猩锘钚缘拇x物。
例如，通過如藥物前體的酯或酰胺鍵的水解，由此在所得的產(chǎn)物上引入或者暴露出其官能團(tuán)，可將所述藥物前體轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)活性形式。可設(shè)計(jì)藥物前體使其與內(nèi)源化合物反應(yīng)形成水溶性共軛物，以進(jìn)一步增強(qiáng)所述化合物的藥理性質(zhì)，例如延長循環(huán)半衰期。或者，可設(shè)計(jì)藥物前體，用例如葡糖醛酸、硫酸酯、谷胱甘肽、氨基酸或者乙酸酯共價(jià)改性其官能團(tuán)。得到的共軛物可為無活性的并從尿中排泄出，或者比母體化合物更有效。高分子量共軛物也可分泌到膽汁中，經(jīng)歷酶促裂解，并釋放回到循環(huán)中，因而有效延長最初所給予的化合物的生物半衰期。鑒定PI3Kδ活性的負(fù)調(diào)節(jié)劑的方法
在各種藥物篩選技術(shù)的任一種中，可使用具有生物活性的PI3Kδ蛋白及其片段以篩選出假定的負(fù)調(diào)節(jié)劑化合物。PI3Kδ的負(fù)調(diào)節(jié)劑為降低或消除PI3Kδ發(fā)揮其生物功能的任一種的能力的化合物。這類化合物的一個(gè)實(shí)例是降低PI3Kδ多肽磷酸化磷脂酰肌醇或者標(biāo)靶細(xì)胞內(nèi)合適的結(jié)構(gòu)的能力。通過將負(fù)調(diào)節(jié)PI3Kδ活性的化合物對(duì)PI3Kδ的活性與其對(duì)其它蛋白的活性比較，可評(píng)價(jià)該化合物的選擇性。選擇性負(fù)調(diào)節(jié)劑包括例如抗體和其它蛋白或者特異性結(jié)合于PI3Kδ多肽上的肽，特異性結(jié)合于PI3Kδ多肽上的寡核苷酸、以及與PI3Kδ多肽特異性相互作用的其它非肽類化合物(例如分離或者合成的有機(jī)分子)。負(fù)調(diào)節(jié)劑還包括如上描述的，但與PI3Kδ多肽的特異性結(jié)合配偶體相互作用的化合物。
目前開發(fā)PI3Kδ的選擇性負(fù)調(diào)節(jié)劑的優(yōu)選靶包括，例如
(1)接觸其它蛋白和/或定位細(xì)胞內(nèi)PI3Kδ的PI3Kδ多肽的胞質(zhì)區(qū)；
(2)結(jié)合特異性結(jié)合的配偶體的PI3Kδ多肽區(qū)；
(3)結(jié)合底物的PI3Kδ多肽區(qū)；
(4)能夠或者不能直接與調(diào)節(jié)信號(hào)的活性部位相互作用的PI3Kδ多肽的別構(gòu)調(diào)節(jié)部位；
(5)介導(dǎo)多聚化的PI3Kδ多肽區(qū)。例如，開發(fā)調(diào)節(jié)劑的一個(gè)靶是已鑒定的p85與p110δ的調(diào)節(jié)相互作用，其能夠參與p110δ部分的激活和/或亞細(xì)胞定位。而其它選擇性調(diào)節(jié)劑包括那些識(shí)別特異性調(diào)節(jié)或PI3Kδ編碼的核苷序列的物質(zhì)。PI3Kδ活性調(diào)節(jié)劑在治療廣泛范圍的包含異常PI3Kδ活性的疾病和生理癥狀中是治療有效的。
因此，本發(fā)明提供鑒定作為PI3Kδ多肽抑制劑的受測(cè)化合物的效力的方法，所述方法包括以下步驟(a)在受測(cè)化合物存在下測(cè)量PI3Kδ多肽的活性；(b)將在受測(cè)化合物存在下PI3Kδ多肽的活性與在等量的參比化合物(例如此處描述的本發(fā)明的PI3Kδ抑制劑化合物)存在下的PI3Kδ多肽的活性做比較，其中如果在受測(cè)化合物存在下PI3Kδ多肽的活性低于在參比化合物存在下的活性，則表明受測(cè)化合物是一種比參比化合物更有效的抑制劑，而如果在受測(cè)化合物存在下PI3Kδ多肽的活性高于在參比化合物存在下的活性，則表明受測(cè)化合物是比參比化合物效力更小的抑制劑。
本發(fā)明還提供鑒定作為PI3Kδ多肽抑制劑的受測(cè)化合物的效力的方法，所述方法包括以下步驟(a)通過，測(cè)定對(duì)照化合物(例如此處所描述的本發(fā)明的PI3Kδ抑制劑化合物)抑制PI3Kδ多肽活性至某個(gè)參比抑制作用百分?jǐn)?shù)時(shí)的量，由此確定所述對(duì)照化合物的參比抑制量；(b)通過，測(cè)定受測(cè)化合物抑制PI3Kδ多肽活性至某個(gè)參比抑制作用百分?jǐn)?shù)時(shí)的量，由此確定所述受測(cè)化合物的參比抑制量；(c)將所述受測(cè)化合物的參比抑制量與對(duì)照化合物的參比抑制量作比較，其中如果所述受測(cè)化合物的參比抑制量低于對(duì)照化合物的參比抑制量，表明受測(cè)化合物是一種比對(duì)照化合物更有效的抑制劑，而如果受測(cè)化合物的參比抑制量高于對(duì)照化合物的參比抑制量，則表明受測(cè)化合物是一種比對(duì)照化合物效力更小的抑制劑。一方面，所述方法采用抑制PI3Kδ多肽活性達(dá)到50％、60％、70％或80％時(shí)的化合物的量作為參比抑制量。另一方面，所述方法采用抑制PI3Kδ多肽活性達(dá)到90％、95％或99％時(shí)的化合物的量作為參比抑制量。這些方法包括測(cè)定在體外生化試驗(yàn)、體外基于細(xì)胞的試驗(yàn)或者體內(nèi)試驗(yàn)中所述化合物的參比抑制量。
本發(fā)明還提供鑒定PI3Kδ活性的負(fù)調(diào)節(jié)劑的方法，所述方法包括以下步驟(i)測(cè)量在受測(cè)化合物存在和不存在下PI3Kδ多肽的活性，和(ii)確定降低PI3Kδ活性并且與結(jié)合于PI3Kδ的本發(fā)明化合物競(jìng)爭(zhēng)的受測(cè)化合物為負(fù)調(diào)節(jié)劑。此外，本發(fā)明提供鑒定抑制PI3Kδ活性的化合物的方法，所述方法包括以下步驟(i)在受測(cè)化合物存在和不存在下使PI3Kδ多肽與本發(fā)明化合物接觸，和(ii)確定與結(jié)合于PI3Kδ的本發(fā)明的化合物競(jìng)爭(zhēng)的受測(cè)化合物為PI3Kδ活性的負(fù)調(diào)節(jié)劑。因此本發(fā)明提供了篩選作為候選的PI3Kδ活性的負(fù)調(diào)節(jié)劑和/或確認(rèn)候選者如負(fù)調(diào)節(jié)劑的作用模式的方法。對(duì)其它的PI3K同工酶可以平行采用這樣的方法，以確定受測(cè)化合物相對(duì)于這些同工酶和/或相對(duì)于本發(fā)明化合物的比較活性。
在這些方法中，PI3Kδ多肽可為呈現(xiàn)激酶活性的p110δ的片段，即包含p110δ的催化部位的片段?；蛘撸琍I3Kδ多肽可為得自p85的p110δ-結(jié)合域的片段，并且提供鑒定PI3Kδ變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的方法。這些方法可用于內(nèi)源或外源表達(dá)PI3Kδ或其亞單位的細(xì)胞。因此，在這類方法中所采用的多肽可為在溶液中的游離形式，固定于固體支撐物的形式，經(jīng)過修飾而存在于細(xì)胞表面的形式或者定位于細(xì)胞內(nèi)的形式。然后可測(cè)量PI3Kδ多肽和受測(cè)藥物之間的結(jié)合復(fù)合物的活性或者形成的調(diào)節(jié)作用。
按照本領(lǐng)域已知和常用的方法，人PI3K多肽可適合于生化或基于細(xì)胞的高流通量篩選試驗(yàn)(HTS)，包括研究受體-配體相互作用的黑色素細(xì)胞試驗(yàn)系統(tǒng)、基于酵母的試驗(yàn)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。這方面的綜述可參見Jayawickreme和Kost的Curr Opin Biotechnol,8629-34(1997)。例如在Houston和Banks的Curr Opin Biotechnol，8734-40(1997)中的描述，也可包括自動(dòng)化和小型化的HTS試驗(yàn)。
這樣的HTS試驗(yàn)用于篩選化合物庫以鑒定具有所需性質(zhì)的具體化合物?？墒褂萌魏位衔飵?，包括化學(xué)品庫、天然產(chǎn)物庫和包含隨機(jī)或設(shè)計(jì)的寡肽、寡核苷酸或其它的有機(jī)化合物的組合庫。
化學(xué)品庫可包含已知的化合物、已知的化合物的專利結(jié)構(gòu)類似物或者自天然產(chǎn)物篩選鑒定的化合物。
天然產(chǎn)物庫為分離自天然來源、一般為微生物、動(dòng)物、植物或海洋生物的物質(zhì)的集合。通過微生物發(fā)酵，接著通過發(fā)酵培養(yǎng)液的分離和萃取，或者直接通過對(duì)微生物或組織(植物或動(dòng)物)的萃取可將天然產(chǎn)物從它們的來源中分離出來。天然產(chǎn)物庫包括聚酮化合物、非核糖體肽和它們的變體(包括非天然來源的變體)。綜述可參見Cane等的Science，28263-68(1998)。
組合庫由大量的相關(guān)化合物組成，例如肽、寡核苷酸或其它有機(jī)化合物的混合物。這類化合物可用相對(duì)流水的作業(yè)來設(shè)計(jì)，且可通過傳統(tǒng)的自動(dòng)合成方法、PCR、克隆或?qū)＠铣煞椒ㄖ苽?。其中特別有用的是肽和寡核苷酸組合庫。
而其它有用的庫包括肽庫、蛋白庫、肽模擬庫(peptidomimetic)、多平行合成集合庫、重組庫和多肽庫。此處所引用的組合化學(xué)和庫的綜述可參見Myers的Curr Opin Biotechnol，8701-07(1997)。
一旦確定化合物具有作為PI3Kδ功能的負(fù)調(diào)節(jié)劑的活性，可進(jìn)行優(yōu)化程序以改進(jìn)效力和/或活性的選擇性。結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系(SAR)的分析一般包括化合物結(jié)構(gòu)的選擇性修飾和它們與生化或生物活性的關(guān)系的迭代系列。可設(shè)計(jì)出相關(guān)化合物的家族，家族的所有成員，即那些具有適宜的藥理學(xué)分布、被定性為潛在的治療候選者均具有要求的活性。PI3Kδ活性抑制劑的治療用途
本發(fā)明提供用于選擇性或特異性抑制PI3Kδ活性的治療或預(yù)防方法。所述方法包括給予有效量的PI3Kδ活性的選擇性或特異性抑制劑。該方法可用于治療患有或可能會(huì)患有任何其癥狀或者病理由PI3Kδ表達(dá)或活性介導(dǎo)的的疾病的人或動(dòng)物。
在此處所用的“治療”指預(yù)防可能會(huì)患上某種疾病，但尚未診斷出患有該種疾病的動(dòng)物體患該種疾??；抑制病癥，即阻止疾病的發(fā)展；緩解病癥，即消退疾??；或改善病癥，即減少伴隨病癥產(chǎn)生的癥狀的嚴(yán)重性?！凹膊　钡囊馑及ㄡt(yī)學(xué)病癥、疾病、癥狀、綜合征等，未加以限制。
本發(fā)明方法包括各種治療動(dòng)物體(優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選為靈長類，仍更優(yōu)選為人)的方式?？杀恢委煹牟溉閯?dòng)物有例如寵物，包括狗和貓；耕作動(dòng)物，包括牛、馬、羊、豬和綿羊；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，包括大鼠、小鼠、兔、豚鼠和非人靈長類以及動(dòng)物園種類。非哺乳動(dòng)物包括例如鳥、魚、爬蟲類和兩棲動(dòng)物。
在一方面，本發(fā)明的方法可用于治療性或者預(yù)防性地治療患者，所述患者患有或者可能會(huì)患上炎性疾病。本發(fā)明一方面涉及PI3Kδ參與介導(dǎo)的炎癥過程的方面。不想受任何理論的束縛，推理是因?yàn)檠装Y涉及一般由白細(xì)胞(例如嗜中性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)激活和趨化性遷移介導(dǎo)的過程，并且是由于PI3Kδ能夠介導(dǎo)這樣的現(xiàn)象，因此PI3Kδ的拮抗劑可用于減少與炎癥有關(guān)的損傷。
本文所用的術(shù)語“炎性疾病”是指任何其中過度或不受調(diào)節(jié)的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致過度炎性癥狀、宿主組織損傷或組織功能喪失的疾病、病癥或綜合征?！把仔约膊　边€指由白細(xì)胞和/或嗜中性白細(xì)胞趨化性的流入介導(dǎo)的病理狀態(tài)。
此處所用的“炎癥”是一種局限化保護(hù)性反應(yīng)，它是由組織損傷或破壞引起的，它可以破壞、稀釋或隔絕(即隔離)損傷因子和受損的組織。炎癥顯然與白細(xì)胞和/或嗜中性白細(xì)胞趨化性的流入相關(guān)。炎癥可起因于受致病微生物和病毒的感染，并且可起因于非感染性方式如創(chuàng)傷或者心肌梗塞或中風(fēng)后的再灌注、對(duì)外部抗原的免疫應(yīng)答和自身免疫應(yīng)答。因此，適合于本發(fā)明的炎性疾病包括與特異性防御系統(tǒng)反應(yīng)以及與非特異性防御系統(tǒng)反應(yīng)有關(guān)的疾病。
此處所用的術(shù)語“特異性防御系統(tǒng)”指與存在的特異性抗原反應(yīng)的免疫系統(tǒng)的成分。導(dǎo)致特異性防御系統(tǒng)應(yīng)答的炎癥的實(shí)例包括外部抗原、自身免疫疾病和T-細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型過敏反應(yīng)的一般性應(yīng)答。慢性炎性疾病、實(shí)體組織和器官移植排斥、例如腎和骨髓移植、和移植物抗宿主反應(yīng)疾病(GVHD)是特異性防御系統(tǒng)的炎性反應(yīng)的其它實(shí)例。
此處所用的術(shù)語“非特異性防御系統(tǒng)”指由不能免疫記憶的白細(xì)胞(例如粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)介導(dǎo)的炎性疾病。導(dǎo)致(至少部分導(dǎo)致)非特異性防御系統(tǒng)反應(yīng)的炎癥的實(shí)例包括伴隨以下癥狀的炎癥例如成人急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)或多發(fā)性器官損傷綜合征、再灌注損傷、急性腎小球性腎炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、含有急性炎性成分的皮膚病、急性化膿性腦膜炎或其它的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病如中風(fēng)、熱損傷、炎性腸道疾病、粒細(xì)胞輸血有關(guān)的綜合征、及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的毒性。
本文所用的術(shù)語“自身免疫疾病”是指任何種類的其中組織損傷與對(duì)于身體自身成分的體液或細(xì)胞介導(dǎo)應(yīng)答有關(guān)的疾病。本文所用的術(shù)語“變應(yīng)性疾病”是指由變態(tài)反應(yīng)引起的任何癥狀、組織損傷或組織功能喪失。本文所用的術(shù)語“關(guān)節(jié)疾病”是指特征在于各種病因引起的關(guān)節(jié)炎性損傷的一大類任何疾病。本文所用的術(shù)語“皮炎”是指特征在于各種病因引起的皮膚炎癥的一大類任何皮膚疾病。本文所用的術(shù)語“移植排斥”是指特征在于移植組織和周圍組織功能喪失、疼痛、腫脹、白細(xì)胞增多和血小板減少的直接針對(duì)移植組織(包括器官和細(xì)胞(例如骨髓))的任何免疫反應(yīng)。
本發(fā)明的治療方法包括治療與炎性細(xì)胞激活有關(guān)的疾病的方法?！把仔约?xì)胞激活”指經(jīng)刺激物(包括(但不限于)細(xì)胞因子、抗原或自動(dòng)-抗體)誘導(dǎo)的增殖性細(xì)胞應(yīng)答、可溶解介質(zhì)(包括(但不限于)細(xì)胞因子、氧自由基、酶、前列腺素類或血管活性胺)的產(chǎn)生、或者在炎性細(xì)胞(包括(但不限于)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞(即多形核白細(xì)胞如嗜中性白細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞)、肥大細(xì)胞、樹突細(xì)胞、胰島細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞)中新的或增加的各種介質(zhì)(包括(但不限于)大部分組織相容性抗原或細(xì)胞粘附分子)的細(xì)胞表面表達(dá)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該意識(shí)到在這些細(xì)胞中這些表現(xiàn)型中的一種或者組合的激活能夠有助于炎性疾病的引發(fā)、延續(xù)或加劇。
已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物可抑制嗜中性白細(xì)胞的超氧化物釋放。嗜中性白細(xì)胞釋放超氧化物以對(duì)各種刺激(包括感染信號(hào))中的任一種作出反應(yīng)，作為細(xì)胞殺傷的機(jī)制。例如，已知超氧化物釋放由腫瘤壞死因子α(TNFα)誘導(dǎo)，當(dāng)與細(xì)菌細(xì)胞壁成分如脂多糖(LPS)接觸時(shí)，由巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞釋放TNFα。TNFα為炎性過程中一種常見的有效和混棲激活劑，參與嗜中性白細(xì)胞及各種其它的細(xì)胞類型的激活，誘導(dǎo)白細(xì)胞/內(nèi)皮細(xì)胞粘附，發(fā)熱，增強(qiáng)MHCI型的產(chǎn)生，以及刺激血管生成?；蛘撸ㄟ^甲酰-Met-Leu-Phe(fMLP)或者其它由甲酰蛋氨酸在N-末端封端的肽類可刺激超氧化物的釋放。通常在真核生物中沒有發(fā)現(xiàn)這樣的多肽，而基本上是細(xì)菌所特有的，因此作為細(xì)菌存在于免疫系統(tǒng)中的信號(hào)。表達(dá)fMLP受體的白細(xì)胞(例如嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)受到刺激將這些多肽向上朝著感染區(qū)呈梯度遷移(即趨化性)。如此處所描述，本發(fā)明化合物抑制由于嗜中性白細(xì)胞響應(yīng)TNFα或fMLP而發(fā)生的受激超氧化物釋放。還顯示出本發(fā)明的PI3Kδ抑制劑可抑制嗜中性白細(xì)胞的其它功能，包括受激胞吐作用和所涉及的趨化性遷移。因此，可預(yù)期本發(fā)明的化合物可用于治療各種由這些嗜中性白細(xì)胞功能的任一種或者全部介導(dǎo)的疾病(例如炎性疾病)。
本發(fā)明使治療以下疾病的方法成為可能，這些疾病包括例如關(guān)節(jié)炎疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、單關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎炎；貝切特氏??；膿毒癥、膿毒性休克、內(nèi)毒素休克、革蘭氏陰性膿毒癥、革蘭氏陽性膿毒癥和毒性休克綜合征；多發(fā)性器官損傷綜合征、繼發(fā)性敗血病、創(chuàng)傷或出血；眼科疾病如過敏性結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、葡萄膜炎和與甲狀腺有關(guān)的眼病；細(xì)胞內(nèi)芽腫病；肺或呼吸疾病如哮喘、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、ARDS、慢性肺炎疾病(如慢性阻塞性肺病)、矽肺、肺肉樣瘤病、胸膜炎、牙槽炎、脈管炎、肺氣腫、肺炎、支氣管擴(kuò)張和肺氧毒性；心肌、腦或肢的再灌注損傷；纖維變性如膽囊纖維變性；瘢痕瘤形成或瘢痕組織形成；動(dòng)脈粥樣硬化；自身免疫疾病如系統(tǒng)紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫甲狀腺炎、多發(fā)性硬化癥、某些形式的糖尿病和Reynaud’s綜合征；及移植排斥疾病如GVHD和同種異體移植物排斥；慢性腎小球性腎炎；炎性腸疾病如慢性炎性腸疾病(CIBD)、Crohn病、潰瘍性結(jié)腸炎和壞死的小腸結(jié)腸炎；炎性皮膚病如接觸性皮炎、特應(yīng)性皮炎、牛皮癬或?qū)ぢ檎睿黄鹨蛴诟腥镜陌l(fā)熱和肌痛；中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病如腦膜炎、腦炎、起因于較小創(chuàng)傷的腦或脊髓損傷、斯耶格倫氏綜合征、涉及白細(xì)胞血細(xì)胞滲出的疾病、酒精性肝炎、細(xì)菌性肺炎、抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾病、低血容量休克、I型糖尿病、急性和遲發(fā)型過敏反應(yīng)、起因于白細(xì)胞體液不調(diào)和轉(zhuǎn)移的疾病狀態(tài)、熱損傷、與粒細(xì)胞輸血有關(guān)的綜合征及細(xì)胞因子誘導(dǎo)的毒性。
所述方法可用于患有再灌注損傷(即再灌注前組織或器官經(jīng)歷的局部缺血階段而引起的損傷)的受治療患者再灌注再灌注。術(shù)語“局部缺血”指由于動(dòng)脈血液內(nèi)流的阻塞而造成的局部組織貧血。再灌注前的短暫性缺血的特征在于導(dǎo)致嗜中性白細(xì)胞激活和透過受影響區(qū)域的血管內(nèi)皮的遷移。經(jīng)激活的嗜中性白細(xì)胞的集聚依次導(dǎo)致活性氧代謝物的生成，這將損傷所涉及的組織或器官的成分?！霸俟嘧p傷”現(xiàn)象通常伴隨有如脈管中風(fēng)(包括全身或局部缺血)、出血休克、心肌缺血或心肌梗塞、器官移植和腦血管痙攣的癥狀。例如，當(dāng)心臟一旦無法接受到血而開始再灌注時(shí)，再灌注在心臟分流過程的結(jié)束或者心絞痛期間發(fā)生再灌注損傷?？深A(yù)期抑制PI3Kδ的活性將導(dǎo)致在這樣的情況下減少再灌注損傷的次數(shù)。
就神經(jīng)系統(tǒng)而言，當(dāng)血液停止流向整個(gè)腦部分一段時(shí)間，將發(fā)生全身缺血。全身缺血會(huì)導(dǎo)致心動(dòng)停止。當(dāng)腦的一部分缺乏正常的血液供給時(shí)，發(fā)生局部缺血。局部缺血會(huì)導(dǎo)致形成腦脈管血栓、頭部外損傷、水腫或腦瘤。即使是短暫的，全身或局部缺血都會(huì)導(dǎo)致廣泛神經(jīng)元損傷。盡管在缺血開始后數(shù)小時(shí)或甚至數(shù)天后才發(fā)生神經(jīng)組織損傷，但是在血液開始停止流向大腦的數(shù)分鐘內(nèi)可能造成一些永久性的神經(jīng)組織損傷。
在心臟中也會(huì)因冠心病和其它的心血管疾病(其中因動(dòng)脈粥樣硬化、血栓或者痙攣而發(fā)生冠狀動(dòng)脈堵塞)而發(fā)生局部缺血。因此，確信本發(fā)明可用于治療心臟組織損壞，尤其是因心臟局部缺血造成的損壞或者由哺乳動(dòng)物體內(nèi)再灌注損傷引起的損壞。
另一方面，PI3Kδ活性的選擇性抑制劑(例如本發(fā)明化合物)可用于治療骨疾病的方法，尤其是其中破骨細(xì)胞功能異?；蛘卟缓虾跣枰募膊　Ｈ缭趯?shí)施例6中所示，本發(fā)明化合物在體外抑制破骨細(xì)胞的功能。因此，這類化合物和其它的PI3Kδ選擇性抑制劑可用于治療骨質(zhì)疏松癥、培吉特氏病和相關(guān)的骨再吸收疾病。
另一方面，本發(fā)明包括采用PI3Kδ抑制劑化合物抑制血源的癌細(xì)胞，優(yōu)選為淋巴源的癌細(xì)胞，更優(yōu)選為與B淋巴細(xì)胞或者B淋巴細(xì)胞祖代相關(guān)或衍生自B淋巴細(xì)胞或者B淋巴細(xì)胞祖代的癌細(xì)胞的生長或增殖的方法。適合于采用本發(fā)明方法治療的癌癥包括(但不限于)淋巴瘤，例如淋巴樣和網(wǎng)狀內(nèi)皮組織的惡性腫瘤，如Burkitt淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、成淋巴細(xì)胞淋巴瘤等；多發(fā)性骨髓瘤；以及白血病如淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓(骨髓內(nèi)產(chǎn)生的)白血病等。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，PI3Kδ抑制劑化合物可用于抑制或者控制慢性骨髓(骨髓內(nèi)產(chǎn)生的)白血病細(xì)胞的生長或增殖。
另一方面，本發(fā)明包括抑制嗜堿性粒細(xì)胞和/或肥大細(xì)胞的功能的方法，因此使得可以治療以過度或者不合乎需要的嗜堿性粒細(xì)胞和/或肥大細(xì)胞活性為特征的疾病或病癥。按照本發(fā)明方法，可采用本發(fā)明的化合物選擇性抑制在嗜堿性粒細(xì)胞和/或肥大細(xì)胞中的磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)的表達(dá)或活性。優(yōu)選所述方法采用足以抑制嗜堿性粒細(xì)胞和/或肥大細(xì)胞的受激組胺釋放的量的PI3Kδ抑制劑。因此，這類化合物和其它的PI3Kδ選擇性抑制劑可用于治療以組胺釋放為特征的疾病，即包括如慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、ARDS、肺氣腫和相關(guān)疾病在內(nèi)的變應(yīng)性疾病中。PI3Kδ活性抑制劑的藥用組合物
本發(fā)明化合物能夠以純凈的化學(xué)品給服，但一般優(yōu)選以藥用組合物或者制劑的形式給服所述化合物。因此，本發(fā)明也提供包含作為PI3Kδ活性調(diào)節(jié)劑的化學(xué)或生物化合物(“藥物”)以及生物配伍的藥用載體、輔劑或媒介物的藥用組合物。所述組合物可包含作為僅有的活性部分或者與賦形劑或其它的藥學(xué)上可接受的載體混合的其它的藥物(如寡-或聚核苷酸、寡-或多肽、藥物或者激素)組合的藥物。只要載體和其它的成分與制劑的其它成分配伍且對(duì)它們的接受者不造成損害，這可認(rèn)為是藥學(xué)上可接受的。
藥用組合物的配制和給藥技術(shù)可參見Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack Publishing Co，Easton，PA，1990。本發(fā)明的藥用組合物可采用以下任何常規(guī)方法制造，這些方法包括例如混合、溶解、造粒、糖錠劑-制備、研碎、乳化、包囊、包載、熔紡、噴霧干燥或者冷凍干燥方法。然而，依給藥途徑和要求的劑量而定，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定最佳的藥物劑型。這類制劑可以影響所給予的藥物的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。這些藥用組合物可依受治療的癥狀進(jìn)行配制，并采用全身或局部給藥。
配制所述藥用組合物，使得包含合適的藥學(xué)上可接受的載體，并且可任選包含有利于將所述活性化合物加工成藥學(xué)上可用的制劑的賦形劑和添加劑。給藥形式主要決定載體的性質(zhì)。例如，非腸道給藥的制劑可以包含水溶性活性化合物的水溶液。適于非腸道給藥的載體可選自鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水和其它的生理學(xué)上相配伍的溶液。用于非腸道給藥的優(yōu)選載體為生理學(xué)上相配伍的緩沖液，例如Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理學(xué)緩沖鹽水。對(duì)于組織或細(xì)胞給藥，在所述制劑中可使用適于待穿透的具體屏障的滲透劑。這樣的滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的。對(duì)包含蛋白的制劑，可包含穩(wěn)定材料，例如多元醇(例如蔗糖)和/或表面活性劑(例如非離子表面活性劑)等。
或者用于非腸道給藥的制劑可包含制成合適的油狀注射懸浮液的活性化合物的分散劑或者混懸劑。合適的親脂性溶劑或媒介物包括脂肪油，如芝麻油和合成脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯或脂質(zhì)體。含水注射混懸劑可包含提高所述混懸劑粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或右旋糖?；鞈覄┮踩芜x包含合適的穩(wěn)定劑或者可增加所述化合物的溶解度的試劑，使得可制備高濃度的溶液。還可使用提供具有對(duì)pH-敏感的增溶作用和/或持續(xù)釋放活性藥物的水性聚合物作為包衣或基質(zhì)物質(zhì)，這類聚合物如甲基丙烯酸酯聚合物，如得自Rhm America Inc.(Piscataway，NJ)的EUDRAGJT系列。還可使用任選用乳化劑或者分散劑(表面活性物質(zhì)；表面活性劑)穩(wěn)定化的乳劑，如水包油和油包水分散液?；鞈覄┛砂缫已趸愑仓肌⒕垩趸蚁┥嚼嫣谴减ズ涂s水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂、西黃蓍膠和它們的混合物。
非腸道給藥還可使用包含活性成分的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體通常衍生自磷脂或其它的類脂物質(zhì)。脂質(zhì)體形式的組合物還可包含其它的成分，例如穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的類脂包括天然和合成的磷脂和磷脂酰膽堿(卵磷脂)。形成脂質(zhì)體的方法是本領(lǐng)域已知的。參見例如Prescott編輯的Methods in Cell Biology，第XIV卷，33頁，Academic Press，New York(1976)。
采用本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受的載體可配制包含適合于口服給藥的劑量的藥物的藥用組合物。配制用于口服給藥的制劑能夠以片劑、丸劑、膠囊劑、扁囊劑、糖錠劑、錠劑、液體劑、凝膠劑、糖漿劑、膏劑、酏劑、混懸劑或粉末劑的形式存在。例如，通過將活性化合物與固體賦形劑結(jié)合，任選將得到的混合物研磨，在加入合適的添加劑(如果需要)后，加工所得的顆?；旌衔?，得到片劑或者糖錠劑的芯部分，這樣可以得到用于口服的藥用制劑?？诜苿┛墒褂妙愃朴诜悄c道用途所描述的類型的液體載體，例如緩沖水溶液、懸浮液等。
優(yōu)選口服制劑包括片劑、糖錠劑和明膠膠囊劑。這些制劑可包含一種或更多種賦形劑，這些賦形劑包括(但不限于)
a)稀釋劑，如糖、包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖或山梨糖醇；
b)粘合劑，如硅酸鋁鎂、得自玉米、小麥、大米、馬鈴薯等的淀粉；
c)纖維素物質(zhì)，如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素和羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、樹膠(如阿拉伯膠和西黃蓍膠)、蛋白(如明膠和膠原)；
d)崩解劑或增溶劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、瓊脂、藻酸或其鹽，如藻酸鈉或泡騰組合物；
e)潤滑劑，如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其鎂或鈣鹽及聚乙二醇；
f)矯味劑和甜味劑；
g)著色劑或顏料，例如用來鑒定產(chǎn)物或表征活性化合物的量(劑量)；和
h)其它成分，如防腐劑、穩(wěn)定劑、膨脹劑、乳化劑、溶解促進(jìn)劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和緩沖劑。
明膠膠囊包括由明膠組成的推入配合(push-fit)膠囊，以及由明膠和包衣劑(如甘油或山梨糖醇)組成的軟的、密封膠囊。推入配合膠囊可包含與填充劑、粘合劑、潤滑劑和/或穩(wěn)定劑等混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮于合適的流體，例如脂肪油、液體石蠟、或者含有或不含有穩(wěn)定劑的液體聚乙二醇中。
可為糖錠劑的芯部分配備合適的包衣，如濃縮的糖溶液，所述包衣也可包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波泊爾膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、天然漆溶液及合適的有機(jī)溶劑或者溶劑混合物。
藥用組合物可以活性藥物的鹽形式提供。鹽比相應(yīng)的游離酸或堿形式更易于溶于水或者其它質(zhì)子溶劑中。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的。包含酸性部分的化合物與合適的陽離子可形成藥學(xué)上可接受的鹽。合適的藥學(xué)上可接受的陽離子包括例如堿金屬(例如鈉或鉀)和堿土金屬(例如鈣或鎂)陽離子。
包含堿性部分的結(jié)構(gòu)式(I)的化合物與合適的酸可形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。例如，Berge等在J Pharm Sci，661(1977)中詳細(xì)描述了藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明化合物的最終分離和純化期間可原位制備這些鹽，或者在獨(dú)立的步驟中通過使游離堿官能團(tuán)與合適的酸反應(yīng)制備這些鹽。
代表性的酸加成鹽包括(但不限于)乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽(isothionate)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽或硫酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、或氫磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和十一酸鹽?？捎糜谛纬伤帉W(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的實(shí)例包括(但不限于)例如無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，例如有機(jī)酸如草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸。
如前所述，本文出現(xiàn)的任何指本發(fā)明化合物均包括結(jié)構(gòu)式(I)-(V)的化合物，它們的藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物以及藥物前體。
在本發(fā)明化合物的最終分離和純化期間可原位制備堿性加成鹽，或者在獨(dú)立的步驟中通過使含有羧酸的部分與合適的堿如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽反應(yīng)，或者與氨或有機(jī)伯、仲或叔胺反應(yīng)可制備堿性加成鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括(但不限于)基于堿金屬或堿土金屬如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等的陽離子，和以下的非毒性季銨和胺陽離子銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、乙基銨、二乙基銨、三乙基銨等。用于形成堿加成鹽的其它的代表性有機(jī)胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。
用如低級(jí)烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸鹽如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長鏈烷基鹵化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物；芳基-烷基鹵化物如芐基和苯乙基溴化物等的試劑可將堿性含氮基團(tuán)季銨化。由此得到具有改善的溶解性或分散性的產(chǎn)物。
可制得包含本發(fā)明化合物的組合物(在藥學(xué)上可接受的載體中配制)，將其置于容器中，并且貼上治療所指定癥狀的標(biāo)簽。因此，本發(fā)明也涉及產(chǎn)品，例如包含本發(fā)明化合物的劑型和包含化合物用途的說明的標(biāo)簽的容器。本發(fā)明也包括試劑盒。例如，試劑盒可包含藥用組合的劑型，以及包括所述組合物在治療醫(yī)學(xué)癥狀中的用途的說明的包裝說明。在任一種情況下，在標(biāo)簽上所指明的癥狀可包括治療炎性疾病、癌癥等。PI3Kδ活性抑制劑的給藥方法
通過包括非腸道和腸道技術(shù)在內(nèi)的任何常規(guī)方法，可將包含PI3Kδ活性抑制劑的藥用組合物給予患者。非腸道給藥方式包括那些通過除胃腸道以外的途徑給予組合物的方式，包括例如靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、髓內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)腔內(nèi)、鞘內(nèi)和腦室內(nèi)注射。腸道給藥方式包括，例如口服(包括口腔和舌下)和直腸給藥。經(jīng)上皮給藥方式包括例如經(jīng)粘膜給藥和經(jīng)皮給藥。經(jīng)粘膜給藥包括例如腸道給藥以及鼻、吸入和肺深部給藥；陰道給藥和直腸給藥。經(jīng)皮給藥包括或被動(dòng)或主動(dòng)經(jīng)皮或者經(jīng)皮膚方式，包括例如貼劑和離子透入裝置以及糊劑、油膏劑或軟膏劑的局部應(yīng)用。采用高壓技術(shù)，例如POWDERJECT，也可完成非腸道給藥。
外科手術(shù)技術(shù)包括儲(chǔ)存(貯庫)組合物、滲透泵等的植入。用于治療炎癥的優(yōu)選給藥途徑可對(duì)如關(guān)節(jié)炎這樣的局部疾病定位或者局部給藥，或者對(duì)擴(kuò)散性疾病全身給藥，例如靜脈內(nèi)給藥用于再灌注損傷或用于全身疾病如敗血癥。對(duì)于其它的疾病，包括那些涉及呼吸道的疾病，例如慢性阻塞性肺病、哮喘和肺氣腫等疾病，通過噴霧劑、氣溶膠、粉末等吸入或肺深部給藥可完成給藥。
對(duì)于治療腫瘤疾病，尤其是白血病和其它擴(kuò)散性癌癥，通常優(yōu)選非腸道給藥。使所述化合物在非腸道給藥后能夠最好地進(jìn)行生物分布的化合物制劑是合乎需要的。化學(xué)療法、放射療法和/或手術(shù)之前、期間或者之后，可以給予PI3Kδ抑制劑化合物。
另外，通過對(duì)所述化合物進(jìn)行修飾或者衍生物化以靶向傳遞至表達(dá)鑒定這樣細(xì)胞的標(biāo)記物的癌細(xì)胞，可增加PI3Kδ抑制劑化合物的治療指數(shù)。例如，可將所述化合物連接于可識(shí)別對(duì)癌細(xì)胞具有選擇性或特異性的標(biāo)記物的抗體上，這樣如先前的描述(參見例如Pietersz等，Immunol Rev，12957(1992)；Trail等，Science，261212(1993)；和Rowlinson-Busza等，Curr Opin Oncol，41142(1992))，化合物通過連接在細(xì)胞的周圍來局部發(fā)揮它們的作用。特別是通過使可由放療或化療引起的潛在的非特異性毒性最小化，使得這些化合物瞄準(zhǔn)腫瘤傳遞的治療效益得到增強(qiáng)。在另一方面，PI3Kδ抑制劑化合物和放射性同位素或化學(xué)治療藥物可結(jié)合于相同的抗腫瘤抗體上。
為治療骨再吸收疾病或破骨蛋白介導(dǎo)的疾病，可通過任何合適的方法傳遞PI3Kδ抑制劑。局灶給藥，例如通過關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射將是合乎要求的。在一些情況下，可按要求使化合物與能使化合物靶向骨的部分偶合。例如，PI3Kδ抑制劑可與對(duì)羥基磷灰石(骨的主要成分)具有高親合性的化合物偶合。通過采用用來將雌激素靶向傳遞至骨所開發(fā)的四環(huán)素-偶合方法(Orme等，Bioorg Med Chem Lett，4(11)1375-80(1994))可以完成這種偶合。
當(dāng)在外圍(peripherally)給藥時(shí)，為有效地治療調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的靶標(biāo)，本發(fā)明方法所用的藥物應(yīng)易于透過血腦屏障。然而，未能透過血腦屏障的化合物仍然能夠通過靜脈途徑有效給藥。
如以所述，藥物本身的特性和藥物的劑型會(huì)影響所給予藥物的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。通過臨床前體外和體內(nèi)研究(后者通過臨床試驗(yàn)，在人體中的情況也得到證實(shí))可收集到這樣的藥物動(dòng)力學(xué)和藥效信息。因此，對(duì)于在本發(fā)明方法中所用的任何化合物，可自生化和/或基于細(xì)胞的測(cè)定初步評(píng)價(jià)治療有效量。然后，可在動(dòng)物模型上計(jì)算劑量，以獲得所需的調(diào)節(jié)PI3Kδ表達(dá)或活性的循環(huán)濃度范圍。在進(jìn)行人體研究時(shí)，將得到進(jìn)一步的關(guān)于用于治療多種疾病和癥狀的合適的劑量水平和持續(xù)時(shí)間的信息。
這類化合物的毒性和治療效果可以通過細(xì)胞培養(yǎng)或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法測(cè)定，例如測(cè)定LD50(50％群體致死的劑量)和ED50(50％群體有效治療的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比率為“治療指數(shù)”，該指數(shù)一般表示為LD50和ED50的比值。優(yōu)選高治療指數(shù)，即毒性劑量明顯高于治療劑量的化合物。由這類細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和其它動(dòng)物研究得到的數(shù)據(jù)可用于計(jì)算用于人的劑量范圍。這類化合物的劑量優(yōu)選在包括幾乎沒有或者沒有毒性的ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。
對(duì)于本發(fā)明的方法，可采用任何有效的規(guī)定給藥時(shí)間和順序的給藥方案。藥物的劑量優(yōu)選包括含有有效量藥物的藥用劑型。此處所用的“有效量”指通過給予一個(gè)或者多個(gè)藥物單元?jiǎng)┝慷阋哉{(diào)節(jié)PI3Kδ的表達(dá)或活性，和/或使得患者的生理參數(shù)發(fā)生可測(cè)量的變化的量。
對(duì)人類患者的示例性劑量水平為每公斤體重約0.001毫克(mg/kg)-約100mg/kg活性藥物的級(jí)別。通常，依說明和給藥途徑等而定，活性藥物的單元?jiǎng)┝繛榧s0.01mg-約10,000mg，優(yōu)選約0.1mg-約1,000mg。根據(jù)給藥途徑，可按照體重、身體表面積或器官體積計(jì)算出合適的劑量?？紤]改善藥物作用的多種因素，例如藥物的具體活性、疾病狀態(tài)的特性和嚴(yán)重性、患者的反應(yīng)、患者的年齡、癥狀、體重、性別和飲食，任何感染的嚴(yán)重性等，主治醫(yī)師根據(jù)良好的醫(yī)學(xué)實(shí)踐應(yīng)能確定最終的劑量方案?？煽紤]到的其它因素包括給藥的時(shí)間和次數(shù)、藥物的聯(lián)用、反應(yīng)敏感性以及療法的耐受性/應(yīng)答。尤其是按照所公開的劑量信息和試驗(yàn)、以及在人臨床試驗(yàn)中所觀察到的藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，熟練的專業(yè)人員可按常規(guī)確定適于治療的劑量(包括此處提及的任何一種制劑)的進(jìn)一步的改進(jìn)，而不須進(jìn)行過多的實(shí)驗(yàn)。通過采用已建立的用于測(cè)定體內(nèi)流體中的藥物或其它樣品的濃度的試驗(yàn)以及劑量響應(yīng)的數(shù)據(jù)一起，可以確定合適的劑量。
給藥次數(shù)將依藥物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)和給藥途徑而定。調(diào)整劑量和給藥以提供足夠水平的活性部分或者維持要求的作用。因此，按照維持所需的最低水平的藥物的要求，藥用組合物可以以單一劑量、多個(gè)分開的劑量、持續(xù)輸注、持續(xù)釋放滴劑或者它們的組合給藥，短效(即短的半衰期)藥用組合物可每天給藥一次或者每天給藥一次以上(例如每天兩、三或四次)。長效藥用組合物可每3-4天、每周或者每兩周給藥一次。對(duì)持續(xù)輸注來說，優(yōu)選注入，例如皮下、腹膜內(nèi)或者硬膜下注入。
提供以下實(shí)施例以進(jìn)一步幫助理解本發(fā)明，預(yù)先假定在實(shí)施例中所帶的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的常規(guī)方法是能被理解的，這些方法如載體和質(zhì)粒的構(gòu)建、將基因編碼的多肽插入到載體和質(zhì)粒中，或者將載體和質(zhì)粒引入到宿主細(xì)胞中。在以下多種出版物中詳細(xì)描述了這些方法例如Sambrook等，Molecular CloningALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)，Ausubel等(編輯)，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley &Sons，Inc.(1994)，以及Ausubel等(編輯)，Current Protocols in MolecularBiology，第4版，John Wiley & Sons，Inc.(1999)。以下所描述的具體物質(zhì)和條件是用于舉例說明本發(fā)明的具體方面，而非構(gòu)成對(duì)它們合理范圍的限制。實(shí)施例1重組PI3Kα、β和δ的制備與純化
采用BAC-TO-BACHT桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(GIBCO/BRL)，過量表達(dá)由p110催化亞單位和p85調(diào)節(jié)亞單位組成的重組PI3K異源二聚體復(fù)合物，然后經(jīng)純化用于生化試驗(yàn)。如下將四種I型PI3-激酶克隆到桿狀病毒載體中
p110δ采用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)，將FLAG-標(biāo)記形式的人p110δ(SEQ ID號(hào)1)(參見Chantry等，J Biol Chem，27219236-41(1997))亞克隆到昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體pFastbac HTb(Life Technologies，Gaithersburg，MD)的BamH1-Xba1部位上，使得克隆與載體的His尾端適配。FLAG系統(tǒng)在美國專利4703004、4782137、4851341和5001912中描述，并且可自Eastman Kodak Co.得到試劑。
p110α與以上描述的用于p110δ的方法類似，F(xiàn)LAG-標(biāo)記形式的p110α(參見Volinia等，Genomics，24(3)427-477(1994))被亞克隆到pFastbac HTb(Life Technologies)的BamH1-HindIII部位上，使得克隆與載體的His尾端適配。
p110β按照制造商的方案，采用以下引物，自人MARATHONReady脾cDNA庫(Clontech，Palo Alto CA)擴(kuò)增p110β(參見Hu等，MolCell Biol，137677-88(1993))克隆5’-引物5′-GATCGAATTCGGCGCCACCATGGACTACAAGGACGACGATGACAAGTGCTTCAGTTTCATAATGCCTCC-3′(SEQ ID NO3)3’引物5′-GATCGCGGCCGCTTAAGATCTGTAGTCTTTCCGAACTGTGTG-3′(SEQ ID NO4)構(gòu)建包含與p110β序列適配的FLAG標(biāo)記物的5’引物。擴(kuò)增后，采用標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)將FLAG-p110β序列亞克隆到pFastbac Hta(LifeTechnologies)的EcoR1-Not1部位上，使得克隆與載體的His尾端適配。
p110γ按照制造商的方法，采用以下引物，自人Marathon Ready脾cDNA庫(Clotech)擴(kuò)增p110γ cDNA(參見Stoyanov等，Science，269690-93(1995))5’-引物5 ′-AGAATGCGGCCGCATGGAGCTGGAGAACTATAAACAGCCC-3′(SEQID NO5)3’-引物5′-CGCGGATCCTTAGGCTGAATGTTTCTCTCCTTGTTTG-3′(SEQ IDNO6)隨后將FLAG標(biāo)記物連接于p110γ序列的5’尾端，并且采用標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)使之克隆到pFastbac HTb(Life Technologies)的BamH1-Spe1部位上，F(xiàn)LAG-p110γ序列與載體的His尾端適配。
P85α將FLAG-標(biāo)記的p85 cDNA(參見Skolnik等，Cell，6583-89(1991))的BamH1-EcoR1片段亞克隆到載體pFastbac dual(LifeTechnologies)的BamH1-EcoR1部位上。
采用制造商(Life Technologies)推薦的方案生成包含以上克隆的重組桿狀病毒。將表達(dá)的His標(biāo)記的p110α、p110β或p110δ催化亞單位和p85亞單位的桿狀病毒共感染到Sf21昆蟲細(xì)胞中。為使富含異源二聚體酶復(fù)合物，感染過量的表達(dá)p85亞單位的桿狀病毒，在鎳親和柱上純化與p85復(fù)合的His標(biāo)記的p110催化亞單位。因?yàn)閜110γ與p85無關(guān)，僅用表達(dá)His標(biāo)記的p110γ的重組桿狀病毒感染Sf21細(xì)胞。在另一個(gè)方法中，可將p101克隆到桿狀病毒中，使之與其優(yōu)選的結(jié)合配偶體p110γ共表達(dá)。
收獲72小時(shí)轉(zhuǎn)染后的Sf21細(xì)胞(3升)，并采用Dounce勻漿器在低滲緩沖液(20mM HEPES-KOH，pH 7.8，5.0mM KCl，完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche Biochemicals，Indianapolis，IN)中勻漿化。在1,000xg下將勻漿離心15分鐘。在10,000xg下將上清液進(jìn)一步離心20分鐘，隨后在100,000xg下進(jìn)行超速離心60分鐘。將可溶性部分迅速裝入10mL 的HITRAP鎳親和柱(Pharmacia，Piscataway，NJ)上，用50mL的緩沖液A(50mM HEPES-KOH，pH 7.8，0.5M NaCl，10mM咪唑)平衡。用緩沖液A徹底沖洗柱，并用線性梯度的10-500mM咪唑洗脫。沖洗步驟期間，自柱中排出游離的p85亞單位，而在250mM咪唑下僅洗脫出異源二聚體酶復(fù)合物。經(jīng)10％SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析鎳部分的等分試樣，用SYPRORed(MolecularProbes，Inc.，Eugene，OR)染色，用STORMPhosphoImager(MolecularDynamics，Sunnyvale，CA)定量。將活性部分沉淀并直接裝入用包含50mM HEPES-KOH，pH7.5，50mM NaCl，2mM二硫蘇糖醇(DTT)的緩沖液B預(yù)先平衡的5mL高濃度(Hi-trap)肝素柱上。用50mM的緩沖液B沖洗柱，并用線性梯度的0.05-2M NaCl洗脫。在0.8M NaCl洗脫下，出現(xiàn)含有PI3K酶復(fù)合物的單峰。SDS-聚丙烯酰胺凝膠分析顯示純化后的PI3K酶部分包含1∶1化學(xué)計(jì)量的p110和p85亞單位的復(fù)合物。肝素層析法中酶復(fù)合物的蛋白質(zhì)分布與脂激酶活性的蛋白質(zhì)分布相對(duì)應(yīng)。將活性部分沉淀并在液氮下冷凍。實(shí)施例2PI3Kδ高流通量篩選(HTS)和選擇性試驗(yàn)
進(jìn)行專利化合品庫的高流通量篩選以確定PI3Kδ活性的候選抑制劑。PI3Kδ在PIP2脂肌醇環(huán)的D3’位催化將γ-[32P]ATP磷酸轉(zhuǎn)化為PIP2/PS脂質(zhì)體。該反應(yīng)依賴MgCl2，且在包含30mM EDTA的高體積摩爾濃度的磷酸鉀緩沖液(pH8.0)中猝滅。在篩選中，在庫化合物的存在或者不存在下進(jìn)行該反應(yīng)。將反應(yīng)產(chǎn)物(和所有未標(biāo)記的產(chǎn)物)轉(zhuǎn)移至96孔的預(yù)先潤濕的PVDF濾板中，過濾，并以高體積摩爾濃度的磷酸鉀沖洗。將閃爍液加入到干燥的孔中，并且將摻合后的放射性定量。
采用BIOMEK1000機(jī)器人工作站(Beckman)進(jìn)行大部分試驗(yàn)操作，并且采用Wallac液體閃爍板計(jì)數(shù)方法對(duì)所有的板讀數(shù)。
制備底物和酶的3X試驗(yàn)儲(chǔ)備液，并在儲(chǔ)液槽(trough)(用于機(jī)器人測(cè)定)或96孔的、V形底的聚丙烯板(用于人工測(cè)定)中儲(chǔ)存。在室溫下將試劑穩(wěn)定至少3小時(shí)。
HTS的3X底物包含0.6mM Na2ATP、0.10mCi/mL γ-[32P]ATP(NEN，Pittsburgh，PA)、6μM PIP2/PS脂質(zhì)體(Avanti Polar Lipids，Inc.，Atlanta，GA)在20mM HEPES中的溶液(pH7.4)。
HTS的3X酶儲(chǔ)備液包含1.8nM PI3Kδ、150μg/mL馬IgG(僅用作穩(wěn)定劑)、15mM MgCl2、3mM DTT在20mM HEPES中的溶液(pH7.4)。
將在二甲亞砜(DMSO)中的化學(xué)高流通量篩選(HTS)庫樣品(每個(gè)含有22個(gè)化合物的集合體)用二次蒸餾水稀釋至18.75μM或者37.8μM，將20μL的稀釋液放入到測(cè)定用的96孔聚丙烯板的孔中。陰性抑制劑對(duì)照組(或者陽性酶對(duì)照組)為用水稀釋的DMSO，陽性抑制劑對(duì)照組使用的LY294002的濃度足以提供50％和100％抑制作用。
向20μL沉淀的化合品庫稀釋液中加入20μL的3X底物。用20μL的3X酶啟動(dòng)反應(yīng)，于室溫中溫育10分鐘。該稀釋液在反應(yīng)體積中得到的最終濃度為200μM ATP。用150μL猝滅緩沖液(1.0M磷酸鉀(pH8.0)，30mM EDTA)終止反應(yīng)。然后將所猝滅的溶液(180μL)的一部分轉(zhuǎn)移至PVDF濾板(Millipore#MAIP NOB，連續(xù)用200μL 100％甲醇洗液、水，最后用1.0M磷酸鉀(pH8.0)洗滌緩沖液預(yù)先潤濕)。
在中等真空(2-5mmHg)下，將PVDF濾板吸出，用5×200μL的洗滌緩沖液沖洗，然后通過吸出干燥。隨后將濾膜印跡，使之完全空氣干燥，并插入Wallac計(jì)數(shù)盒，向每孔加入50μL的Ecoscint閃爍混合物。將摻入的放射性定量，分析數(shù)據(jù)，使酶陽性對(duì)照組歸一化后(在100％下設(shè)置)，確定在50％抑制率值下的曲線交叉點(diǎn)，以評(píng)價(jià)抑制劑的IC50值。
基于在測(cè)試濃度下的＜42％殘余活性，并且總的接受命中率不超過0.2％的聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)，選擇總共57個(gè)沉淀的主孔用于去卷積法(deconvolution)。在每孔22個(gè)化合物下，總共1254個(gè)化合物通過該去卷積法鑒定，并且各自在27.7μM的1X濃度下試驗(yàn)以鑒定哪一個(gè)化合物呈現(xiàn)要求的活性。從這些試驗(yàn)，選擇73個(gè)化合物并進(jìn)一步測(cè)定以建立IC50曲線。從IC50曲線結(jié)果可知，選擇34個(gè)化合物用于對(duì)PI3Kα和PI3Kβ(參見實(shí)施例11的試驗(yàn)方案)的選擇性試驗(yàn)。
從選擇性試驗(yàn)中，選取化合物3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(化合物D-000)作為相對(duì)有效和選擇性化合物。對(duì)具有有效和/或選擇性的許多類似的化合物的目錄搜尋和選擇性試驗(yàn)僅得到一個(gè)化合物，其為D-000的同時(shí)具有活性和選擇性的類似物。這個(gè)化合物購自Contract Services Corporation(目錄號(hào)7232154)，與D-000的不同之處在于用苯基代替D-000的2-氯苯基。
如上所述，PI3-激酶抑制劑LY294002(Calbiochem，La Jolla，CA)在不同的受試PI3-激酶同工型中不具有明顯的選擇性。在我們的試驗(yàn)條件下，LY294002抑制PI3-激酶所有的三種同工型，具有0.3-1μM的IC50。然而，當(dāng)化合物D-000對(duì)相同的PI3-激酶同工型試驗(yàn)時(shí)，觀察到截然不同的選擇性。具體地說，如在圖1中顯示的那樣，D-000抑制PI3K的δ同工型的活性，具有約0.3μM的IC50，而在類似的條件下，于100μM化合物的限值下它也不抑制α和β同工型的活性。這些結(jié)果表明D-000選擇性抑制PI3Kδ活性。實(shí)施例3-7
由于PI3Kδ僅在白細(xì)胞中才有明顯的表達(dá)，因此研究PI3Kδ-選擇性抑制劑對(duì)白細(xì)胞功能的作用是重要的。為此，檢測(cè)在幾種類型的白細(xì)胞中對(duì)PI3Kδ抑制作用的效果。檢測(cè)嗜中性白細(xì)胞以測(cè)定對(duì)PI3Kδ選擇性抑制作用所得的效果(實(shí)施例3，如下)。意外地發(fā)現(xiàn)選擇性抑制PI3Kδ活性似乎與抑制激活的嗜中性白細(xì)胞的一些但非全部的功能特征有明顯的關(guān)系。另外，還測(cè)試了PI3Kδ抑制對(duì)B細(xì)胞和T細(xì)胞功能的作用(實(shí)施例4-5，如下)。此外，由于PI3Kδ也在破骨細(xì)胞中表達(dá)，因此還研究了PI3Kδ抑制對(duì)這些具體的細(xì)胞的功能的影響(實(shí)施例6，如下)。實(shí)施例3PI3Kδ在嗜中性白細(xì)胞功能中的作用的鑒定
測(cè)試本發(fā)明PI3Kδ抑制劑即D-000對(duì)嗜中性白細(xì)胞功能，例如超氧化物生成、彈性蛋白酶胞吐作用、趨化性和細(xì)菌殺傷的作用。A.自人血制備嗜中性白細(xì)胞
將得自健康志愿者的肝素化血液的等分試樣(8mL)鋪展在7.3％FICOLL(Sigma，St.Louis，MO)和15.4％HYPAQUE(Sigma)的3mL墊上，在室溫下，在臺(tái)式頂離心器(Beckman)中，于900rpm下離心30分鐘。收集剛好位于FICOLL-HYPAQUE墊上的嗜中性白細(xì)胞富集的帶，并用含有0.1％明膠的Hank平衡鹽溶液(HBSS)沖洗。用0.2％NaCl低滲性溶胞作用除去殘余的紅細(xì)胞。用含有0.1％明膠的HBSS洗滌所述嗜中性白細(xì)胞制劑兩次并立即使用。B.嗜中性白細(xì)胞的超氧化物產(chǎn)生的測(cè)量
超氧化物生成是嗜中性白細(xì)胞激活的一個(gè)證明。各種激活劑加強(qiáng)經(jīng)嗜中性白細(xì)胞的超氧化物生成。通過三種不同的激動(dòng)劑TNF1α、IgG和fMLP，每種代表各自類型的激活劑，可測(cè)量PI3Kδ抑制劑D-000對(duì)超氧化物生成的作用。通過下面的修改的Green等(在增刊第12期中14.5.1-14.5.11，Curr Protocols Immunol(Colligan等編輯)(1994))描述的方法，通過監(jiān)測(cè)細(xì)胞色素C減少的情況下吸收的變化，可測(cè)量由嗜中性白細(xì)胞的超氧化物生成。在4℃下，用50μL的2m/mL人纖維蛋白原或IgG的溶液將96孔板的各個(gè)孔覆蓋過夜。用PBS洗滌這些孔，隨后向每孔加入以下試劑50μL的HBSS或超氧化物歧化酶(1mg.mL)、50μL的HBSS或TNF1α(50ng/mL)、50μL細(xì)胞色素C(2.7mg/mL)及100μL的經(jīng)純化的人嗜中性白細(xì)胞懸浮液(2×106細(xì)胞/mL)。在200rpm下將板離心2分鐘，且于550nm監(jiān)測(cè)吸收2小時(shí)。為測(cè)量所生成的超氧化物的相對(duì)量，將得自全部孔的值減去含超氧化物歧化酶的孔得到的值，并與不含有任何抑制劑的孔得到的值進(jìn)行歸一化。
如圖2所示，PI3Kδ抑制劑D-000對(duì)由TNF誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞的超氧化物生成的抑制作用按濃度依賴的方式進(jìn)行。在約3μMD-000下，經(jīng)TNF誘導(dǎo)的超氧化物生成減少至其最大值的一半。圖2也揭示D-000并不明顯抑制經(jīng)IgG誘導(dǎo)的超氧化物生成。事實(shí)上，即使在10μM下，這種PI3Kδ抑制劑對(duì)IgG誘導(dǎo)的超氧化物生成也不具有任何作用。
其次，研究了D-000對(duì)經(jīng)另一種有效的誘導(dǎo)劑，細(xì)菌肽(即甲酰化的Met-Leu-Phe(fMLP))誘導(dǎo)的超氧化物生成的作用。與TNF誘導(dǎo)的超氧化物生成一樣，D-000也抑制fMLP誘導(dǎo)的超氧化物生成(圖3)。這些結(jié)果顯示PI3Kδ抑制劑D-000能夠阻止刺激物特異性誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞的超氧化物生成，表明PI3Kδ參與了這個(gè)過程。C.嗜中性白細(xì)胞的彈性蛋白酶胞吐作用的測(cè)量
除超氧化物生成以外，激活的嗜中性白細(xì)胞也通過在炎癥期間擔(dān)負(fù)破壞組織和軟骨的幾種蛋白酶的釋放來作出響應(yīng)。可測(cè)量D-000對(duì)彈性蛋白酶胞吐作用的作用來作為蛋白酶釋放的證明。通過下面由Ossanna等(J Clin Invest,771939-1951(1986))描述的方法的改進(jìn)，可定量測(cè)定彈性蛋白酶胞吐作用。在96孔板中，于37℃下用在含0.01mg/mL細(xì)胞分裂抑素B、1.0μM疊氮化鈉(NaN3)、5μg/mL L-甲硫氨酸和1μM fMLP的PBS中的fMLP刺激經(jīng)純化的人嗜中性白細(xì)胞(0.2×106)(用DMSO或者D-000在DMSO中系列稀釋液處理)90分鐘。在溫育階段結(jié)束時(shí)，于1000rpm下將板離心5分鐘，并將90μL的上清液轉(zhuǎn)移至10μL的10mM彈性蛋白酶底物肽，MeO-suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA的溶液中，其中MeO-suc＝甲氧基-琥珀?；?；pNA＝對(duì)硝基N-酰苯胺(Calbiochem，San Diego，CA)。在96孔板讀數(shù)器中監(jiān)測(cè)410nm下的吸收2小時(shí)。為測(cè)量彈性蛋白酶胞吐作用的相對(duì)量，將所有吸收值對(duì)不含任何抑制劑的值進(jìn)行歸一化。如在圖4中顯示的，PI3Kδ抑制劑D-000明顯抑制fMLP誘導(dǎo)的彈性蛋白酶胞吐作用，并且以劑量依賴方式進(jìn)行。抑制作用為在約2-3μMD-000的濃度下的最大值的一半。D.fMLP誘導(dǎo)的人嗜中性白細(xì)胞遷移的測(cè)量
嗜中性白細(xì)胞具有通過組織遷移的特性，并且是首先到達(dá)炎癥或組織損傷部位的細(xì)胞類型之一。測(cè)量D-000對(duì)嗜中性白細(xì)胞向MLP的濃度梯度遷移的作用。遷移試驗(yàn)進(jìn)行的前一天，用重組的ICAM-1/Fc融合蛋白(Vander Vieren等，Immunity，3683-690(1995))(25μg/mL碳酸氫鹽緩沖液，pH9.3)將6孔板覆蓋，并且于4℃下放置過夜。沖洗后，將1％瓊脂糖在含有0.5％牛血清白蛋白(BSA)的RPMI-1640的溶液中加入到含有或不含有抑制劑的孔中，將這些板放入到冰箱中，接著在凝膠化的瓊脂糖上沖壓孔以得到斑板(plaque)(每孔含有1個(gè)被6個(gè)外周孔圍繞的中心孔)。
如以上描述的那樣得到人嗜中性白細(xì)胞，并再懸浮于RPMI培養(yǎng)基中，用0.5％的BSA補(bǔ)充，濃度為5×106細(xì)胞/mL。在將等體積的嗜中性白細(xì)胞懸浮液和培養(yǎng)基(用DMSO或者用受測(cè)化合物在DMSO中的一系列稀釋液)合并后，取嗜中性白細(xì)胞等分試樣到外周的孔中，而中心孔則加入fMLP(5μM)。在5％CO2存在下，將板于37℃下溫育4小時(shí)，隨后通過加入1％戊二醛在D-PBS中的溶液終止遷移。除去瓊脂糖層以后，用蒸餾水沖洗這些孔并干燥。
在Nikon DIAPHOT反相顯微鏡(1x物鏡)視頻工作站上采用NIH1.61程序進(jìn)行嗜中性白細(xì)胞遷移的分析。采用Microsoft Excel和TableCurve4(SSPS，Chicago IL)程序，可得到每一種研究條件下的遷移指數(shù)。遷移指數(shù)被定義為表示遷移的嗜中性白細(xì)胞的數(shù)目對(duì)每個(gè)細(xì)胞遷移的凈距離所作的曲線下方的面積。
如在圖5中顯示的，PI3Kδ抑制劑D-000對(duì)嗜中性白細(xì)胞遷移具有極大的作用，對(duì)這一活性的抑制是以劑量依賴的形式進(jìn)行的。在該試驗(yàn)中這種化合物抑制嗜中性白細(xì)胞遷移的EC50為約1μM?；谠谶@個(gè)試驗(yàn)中細(xì)胞的可記錄途徑的目視檢驗(yàn)，似乎所述受測(cè)化合物并不明顯影響嗜中性白細(xì)胞的總途徑長度。相對(duì)而言，所述化合物影響嗜中性白細(xì)胞取向或者方向感覺，這樣不是沿著化學(xué)引誘物梯度的軸向遷移，而是細(xì)胞以不定向的或者難以定向的方式遷移。E.嗜中性白細(xì)胞的殺菌能力的測(cè)量
已知PI3Kδ抑制劑D-000影響以上詳細(xì)描述的某些嗜中性白細(xì)胞功能，觀察化合物是否影響嗜中性白細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)菌殺傷也是重要的。按照Clark和Nauseef(第7.23.4-7.23.6頁，第2卷，增刊6，CurrProtocol Immunol(Colligan等編輯)(1994))描述的方法，研究D-000對(duì)嗜中性白細(xì)胞介導(dǎo)的金黃色葡萄球菌(Staphylocouus aureus)殺傷的作用。將經(jīng)純化的人嗜中性白細(xì)胞(5x106細(xì)胞/mL)(用DMSO或者D-000在DMSO中的一系列稀釋液處理)與自體的血清混合。洗滌過夜生長的金黃色葡萄球菌細(xì)胞，重新懸浮于HBSS中，并加入到10:1比例的血清-經(jīng)調(diào)理的嗜中性白細(xì)胞中。通過于37℃下溫育20分鐘，使嗜中性白細(xì)胞經(jīng)吞噬作用將細(xì)菌內(nèi)在化。在37℃下，由10單位/mL的溶葡萄球菌素把非內(nèi)在化的細(xì)菌殺傷5分鐘，并于37℃下旋轉(zhuǎn)全部混合物。在最長可達(dá)90分鐘的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)下，取出樣品并通過用水稀釋將嗜中性白細(xì)胞溶胞。通過在類胰蛋白酶-大豆-瓊脂板上鋪制合適的稀釋液并對(duì)過夜生長后把金黃色葡萄球菌克隆計(jì)數(shù)，可計(jì)數(shù)出活細(xì)胞菌。
如在圖6中顯示的那樣，嗜中性白細(xì)胞介導(dǎo)的金黃色葡萄球菌殺傷在用DMSO(對(duì)照組)和用D-000處理的樣品中相類似。這些結(jié)果表明PI3Kδ抑制劑并不顯著影響嗜中性白細(xì)胞殺傷金黃色葡萄球菌的能力，可見PI3Kδ沒有參與嗜中性白細(xì)胞的這一項(xiàng)功能。實(shí)施例4PI3Kδ在B淋巴細(xì)胞功能中的作用的鑒定
還研究了PI3-激酶抑制劑對(duì)B細(xì)胞功能包括經(jīng)典誘導(dǎo)(例如抗體產(chǎn)生)和特異性刺激物-誘導(dǎo)增殖的作用。A.得自外周人血的B細(xì)胞的制備和刺激
將得自健康志愿者的肝素化血(200mL)與等體積的D-PBS混合，鋪展在10×10mL FICOLL-PAQUE(Pharmacia)上，在室溫下，在1600rpm下離心30分鐘。自FICOLL/血清界面收集外周血單核細(xì)胞(PBMC)，鋪展在10mL胎牛血清(FBS)上，在800rpm下離心10分鐘以除去血小板。沖洗后，于4-8℃使細(xì)胞與DYNAL抗體Mix(B細(xì)胞盒)(Dynal Corp.，Lake Success，NY)一起溫育20分鐘。除去未結(jié)合的抗體后，于4-8℃使PBL與抗-小鼠IgG包衣的磁珠(Dynal)在溫和的振搖下混合20分鐘，隨后消除在磁珠分離器上已標(biāo)記的非-B細(xì)胞。再重復(fù)該方法一次。將B細(xì)胞重懸浮于含有10％FBS的RPMI-1640中，保存在冰上直到下一次使用。B.經(jīng)人B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生的測(cè)量
為研究抗體產(chǎn)生，將B細(xì)胞以50-75×103細(xì)胞/孔的量分配到96孔板的各含有或不含有抑制劑的孔中，向其中加入IL-2(100U/mL)和PANSORBIN(Calbiochem)金黃色葡萄球菌細(xì)胞(1∶90,000)。24-36小時(shí)后，撤除部分培養(yǎng)基，加入新鮮的培養(yǎng)基(含有或不含有抑制劑)和IL-2。在CO2溫育器中于37℃將培養(yǎng)基再溫育7天。在每種條件下取樣品(重復(fù)三次)，按ELISA的測(cè)量分析IgG和IgM。簡言之，用150ng/mL驢抗人IgG(H+L)(Jackson Immuno Research，West Grove PA)或者在碳酸氫鹽緩沖液中的2μg/mL驢抗人IgG+IgM(H+L)(JacksonImmuno Research)將IMMULON496孔板(50μL/孔)覆蓋，于4℃放置過夜。在用含有0.1％TWEEN-80(PBST)磷酸緩沖液鹽水沖洗(350μL/孔)3次后，在室溫下用在PBST(100μL/孔)中的3％羊血清阻斷1小時(shí)，加入在PBST中稀釋的B細(xì)胞的廢棄培養(yǎng)液的樣品(100μL/孔)。對(duì)IgG板的稀釋范圍是1∶500-1∶10000，對(duì)IgM板的稀釋范圍是1∶50-1∶1000。1小時(shí)后，將板暴露于生物素結(jié)合的抗人IgG(100ng/mL)或者抗人IgM(200ng/mL)(Jackson Immuno Research)30分鐘。隨后暴露于鏈霉抗生物素-HRP(1∶20000)中30分鐘，最后，于含有H2O2(1∶10000)的TMB溶液(1∶100)中暴露5分鐘，各步驟之間用PBST沖洗3次。通過H2SO4溶液終止顯色，在ELISA板讀數(shù)器上讀取板。
如在圖7中顯示的那樣，D-000明顯抑制抗體的產(chǎn)生。對(duì)IgM產(chǎn)生的影響多于對(duì)IgG產(chǎn)生的影響在約1μM下觀察到獲得對(duì)IgM產(chǎn)生的最大抑制作用的一半，而獲得對(duì)IgG產(chǎn)生的相同程度的抑制作用需約7μM。C.對(duì)細(xì)胞表面IgM刺激響應(yīng)的B細(xì)胞增殖的測(cè)量
在以上實(shí)驗(yàn)中，采用PANSORBIN刺激B細(xì)胞。還測(cè)量了當(dāng)采用抗-IgM抗體通過B細(xì)胞的表面IgM刺激這些細(xì)胞時(shí)，D-000對(duì)B細(xì)胞增殖響應(yīng)的影響。將鼠脾細(xì)胞(Balb/c)以每孔2×105的量放入到在含有10％FBS/RPMI的96孔微量滴定板的每個(gè)孔中。將在完全培養(yǎng)基中適當(dāng)稀釋的受試抑制劑加入到細(xì)胞中，并在加入刺激物前把板預(yù)溫育30-60分鐘。用受試抑制劑預(yù)溫育后，將對(duì)小鼠IgM的μ-鏈具有特異性的羊抗體的F(ab’)2制備液加入到這些孔中，使得最終濃度為25μg/mL。將板于37℃下溫育3天，并于最后4小時(shí)培養(yǎng)期內(nèi)將1μCi的[3H]-胸苷加入到每孔中。將板收獲到經(jīng)沖洗的纖維濾膜上，采用β計(jì)數(shù)器(Matrix96，Packard Instrument Co.，DownersGrove，IL)測(cè)定放射標(biāo)記物的摻入，并以每分鐘的讀數(shù)(CPM)表達(dá)。
圖8顯示D-000對(duì)抗-IgM刺激的B細(xì)胞增殖的作用。該化合物以劑量-依賴形式抑制抗-IgM刺激的B細(xì)胞增殖。在約1μM下，增殖減至其最大值的一半。
因?yàn)榛衔顳-000抑制B細(xì)胞增殖，預(yù)測(cè)這個(gè)化合物和其它的PI3Kδ抑制劑能夠抑制臨床環(huán)境中不合乎需要的B細(xì)胞增殖。例如，在B細(xì)胞惡性腫瘤中，分化的各種階段的B細(xì)胞顯示出不受調(diào)節(jié)的增殖?；谝陨巷@示的結(jié)果，可推斷PI3Kδ選擇性抑制劑能夠用來控制、限制或者抑制這類細(xì)胞的生長。實(shí)施例5PI3Kδ在T淋巴細(xì)胞功能中的作用的鑒定
可測(cè)量對(duì)CD3+CD28共同刺激產(chǎn)生響應(yīng)的T細(xì)胞增殖。按照制造商的方案(Dynal)，采用抗體包衣的磁珠，通過負(fù)選擇作用將來自健康人血的T細(xì)胞純化，并再懸浮于RPMI中。用DMSO或者D-000在DMSO中的一系列稀釋液處理細(xì)胞，并以1×105細(xì)胞/孔的量鋪展在預(yù)先用羊抗小鼠IgG覆蓋的96孔板上。然后分別以0.2ng/mL和0.2μg/mL的量將小鼠單克隆抗-CD3和抗-CD28抗體加入到每孔中。將板于37℃下溫育24小時(shí)，并加入[3H]-胸苷(1μCi/孔)。再溫育18小時(shí)后，用自動(dòng)化細(xì)胞收集器收獲細(xì)胞，沖洗并定量測(cè)定摻入的放射活性。
盡管PI3Kδ抑制劑D-000抑制抗-CD3-和抗-CD28誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖，其作用并不像其對(duì)B細(xì)胞或者對(duì)嗜中性白細(xì)胞的一些作用那樣強(qiáng)。在最高受試濃度即10μM的D-000下，未得到胸苷摻入的最大抑制作用的一半。實(shí)施例6PI3Kδ在破骨細(xì)胞功能中的作用的鑒定
為分析PI3Kδ抑制劑D-000對(duì)破骨細(xì)胞的作用，分離小鼠骨髓細(xì)胞，并在含有血清的培養(yǎng)基(含有10％熱滅活的FBS的αMEM；Sigma)中，通過用巨噬細(xì)胞集落刺激因子-1(mCSF-1)和破骨細(xì)胞配體(OPGL)處理細(xì)胞3天，將它們分化為破骨細(xì)胞。在第4天，當(dāng)破骨細(xì)胞發(fā)育時(shí)，撤除培養(yǎng)基并收獲細(xì)胞。將破骨細(xì)胞以105細(xì)胞/孔鋪于生長培養(yǎng)基(即包含1％血清和含有55μg/mLOPGL和10ng/mLmCSF-1的2％BSA的αMEM)中的牙質(zhì)條上。3小時(shí)后，將培養(yǎng)基更換為1％血清和含有或不含有骨橋蛋白(25μg/mL)及PI3K抑制劑(100nM)的1％BSA。每24小時(shí)用新鮮的骨橋蛋白和抑制劑把培養(yǎng)基更換一次。在72小時(shí)，撤除培養(yǎng)基，用水沖洗牙質(zhì)表面以除去細(xì)胞碎片并用酸性蘇木精染色。沖洗過量的染色并且采用聚焦顯微鏡定量測(cè)定紋孔深度。
如在表1中顯示的那樣，在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，PI3-激酶抑制劑對(duì)破骨細(xì)胞功能具有抑制作用。非特異性抑制劑LY294002和渥曼青霉素兩者均抑制破骨細(xì)胞活性。然而，PI3Kδ抑制劑D-000具有最大的作用，因?yàn)樵?00nM下這種化合物幾乎完全抑制破骨細(xì)胞活性。實(shí)施例7PI3Kδ在嗜堿性粒細(xì)胞功能中的作用的鑒定
采用常規(guī)組胺釋放試驗(yàn)(主要按照Miura等在J Immunol，624198-206(1999)中描述的方法)可對(duì)本發(fā)明化合物對(duì)嗜堿性粒細(xì)胞功能的作用進(jìn)行測(cè)試評(píng)價(jià)。簡言之，37℃下，用0.1nM-1,000nM范圍內(nèi)幾種濃度的受測(cè)化合物預(yù)溫育富集的嗜堿性粒細(xì)胞10分鐘。然后，加入多克隆羊抗人IgE(0.1μg/mL)或fMLP，再溫育30分鐘。采用自動(dòng)化熒光技術(shù)測(cè)量釋放到上清液中的組胺。測(cè)定如下顯示的兩個(gè)化合物
當(dāng)用抗-IgE刺激嗜堿性粒細(xì)胞時(shí)，觀察到3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(化合物D-026)以劑量-依賴的形式減少組胺的釋放。在1,000nM下組胺釋放的減少基本上為100％，具有約25nM的EC50。另一種化合物3-(2-氯苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]-嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(化合物D-999，其中嘌呤環(huán)重排)在抑制組胺釋放中較為無效。當(dāng)用fMLP刺激嗜堿性粒細(xì)胞時(shí)，兩種化合物均不產(chǎn)生任何作用。為了比較，在0.1nM和10,000nM下試驗(yàn)非選擇性PI3K抑制劑LY294002，在最高濃度下顯示幾乎達(dá)到100％的抑制組胺釋放。
這些數(shù)據(jù)表明PI3-激酶δ活性抑制劑能夠用于抑制組胺釋放，組胺為過敏反應(yīng)的誘導(dǎo)介質(zhì)之一。因?yàn)樵谠S多細(xì)胞類型中需要各種PI3-激酶的活性以用于蛋白質(zhì)運(yùn)輸、分泌和胞吐作用，以上數(shù)據(jù)表明也可通過PI3-激酶δ選擇性抑制劑干擾經(jīng)其它細(xì)胞如肥大細(xì)胞的組胺釋放?；瘜W(xué)合成實(shí)施例
以下提供本發(fā)明化合物的具體非限定性實(shí)施例。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解的是必要時(shí)可按照合成化學(xué)的一般原理采用保護(hù)基團(tuán)。在合成的最后步驟，在對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的堿性、酸性或氫解條件下，可除去這些保護(hù)基團(tuán)。通過適宜的操作和使用任何化學(xué)官能團(tuán)保護(hù)，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物(在此沒具體闡述)的合成可通過與以下闡述的方案類似的方法來實(shí)現(xiàn)。
除非另外指明，否則所有的原料得自商品供應(yīng)商且無須進(jìn)一步純化即可使用。所有的反應(yīng)和層析法流分經(jīng)250mm硅膠板上的薄層層析法(TLC)分析，用紫外(UV)光顯色或碘(I2)染色。通過快速層析法或反相高效液相色譜法純化產(chǎn)物和中間體。
以下縮寫用于合成實(shí)施例中aq(水溶液)、H2O(水)、CHCl3(氯仿)、HCl(鹽酸)、MeOH(甲醇)、NaOH(氫氧化鈉)、NaOMe(甲醇鈉)、TFA(三氟乙酸)、K2CO3(碳酸鉀)、SOCl2(亞硫酰氯)、CH2Cl2(二氯甲烷)、EtOAc(乙酸乙酯)、DMF(二甲基甲酰胺)、EtOH(乙醇)、DMSO(二甲亞砜)、NaHCO3(碳酸氫鈉)、TLC(薄層層析法)、HPLC(高效液相色譜法)、HOBT(羥基苯并三唑)、EDC(乙基二乙氨基丙基碳二亞胺)、DIEA(二異丙基乙胺)和HOAc(乙酸)。I.通用方法方法A
將亞硫酰氯加入到快速攪拌著的鄰氨基苯甲酸或苯甲酸的苯溶液中，并在回流下把混合物攪拌5-18小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)物，并用苯汽提兩次。把生成的油溶于CHCl3中并向該溶液中加入合適的苯胺。將反應(yīng)混合物加熱至回流并攪拌直到反應(yīng)完成(由TLC監(jiān)測(cè))，此時(shí)，把反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度。經(jīng)過濾除去沉淀，真空濃縮濾液。經(jīng)層析法和/或從MeOH中重結(jié)晶純化粗品產(chǎn)物，得到酰胺1a-1r。方法B
向快速攪拌著的酰胺的冰乙酸懸浮液中加入氯代乙酰氯。將反應(yīng)混合物加熱至120℃，并使之在該溫度下攪拌直到反應(yīng)完成(由TLC監(jiān)測(cè))。短暫冷卻后，真空濃縮反應(yīng)混合物。經(jīng)提取、層析和/或重結(jié)晶純化粗品殘余物，得到氯化物2a-2r。方法C
在室溫下，將氯化物、氮或硫親核體(例如巰基嘌呤單水合物或腺嘌呤)和K2CO3在DMF中的混合物攪拌15-72小時(shí)。把生成的懸浮液傾入到水中，并在4℃下保持幾小時(shí)。過濾粗品固體，用水洗滌，經(jīng)層析法或重結(jié)晶純化，得到最終產(chǎn)物。實(shí)施例8中間體化合物的制備酰胺2-氨基-N-(2-氯代苯基)-4，5-二甲氧基苯甲酰胺(1a)
按照方法A，使用在苯(100mL)中的4，5-二甲氧基鄰氨基苯甲酸(5.0g，25.4mmol)和SOCl2(5.5mL，76.1mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(6.7mL，63.5mmol)和CHCl3(75mL)制備。將產(chǎn)物用NaHCO3水溶液(2×25mL)和HCl(0.5M，75mL)洗滌并在CH2Cl2中層析純化，得到4.3g的棕色泡沫(55％)。1H NMR(CDCl3)δ8.42(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)；8.32(br s，1H)；7.40(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.31(dt，J＝1.4，7.9Hz，1H)；7.05(dt，J＝1.5，7.7Hz，H)；7.03(s，1H)；6.24(s，1H)；3.88(s，3H)；3.87(s，3H).MS(ES)m/z307.0(M+).2-氨基-5-溴-N-(2-氯代苯基)苯甲酰胺(1b)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-5-溴代苯甲酸(5.0g，23.1mmol)和SOCl2(7.0mL，95.9mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(7.3mL，69.3mmol)和CHCl3(50mL)制備。將產(chǎn)物經(jīng)在CH2Cl2中兩次層析純化，得到1.48g的橙黃色固體(20％)。1H NMR(CDCl3)δ8.36(dd，J＝1.2，8.2Hz，1H)；8.20(brs，1H)；7.62(d，J＝2.1Hz，1H)； 7.42(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；7.34(dd，J＝2.2，8.8Hz，1H)；7.28-7.33(m，1H)；7.09(dt，J＝1.4，7.7Hz，1H)；6.62(d，J＝8.7Hz，1H)；5.57(brs，2H).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-4-氟苯甲酰胺(1c)
按照方法A，使用在苯(25mL)中的2-氨基-4-氟代苯甲酸(1.15g，7.41mmol)和SOCl2(1.4mL，18.5mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(1.6mL，14.8mmol)和CHCl3(25mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，然后與己烷一起研磨，得到1.02g的灰白色固體(52％)。1H NMR(CDCl3)δ12.91(brs，1H)；8.72(dd，J＝2.7，12Hz，1H)；8.34(dd，J＝6.4，9.2Hz，1H)；8.29(dd，J＝5.9，8.8Hz，1H)；7.81(dd，J＝6.2，8.8Hz，1H)；7.28(dt，J＝2.4，8.4Hz，1H)；7.21(dd，J＝2.4，9.0Hz，1H)；6.92(ddd，J＝2.4，7.3，9.1Hz，1H)；6.54(ddd，J＝2.4，7.8，8.8Hz，1H)；6.45(dd，J＝2.4，11Hz，1H)；5.93(brs，2H). MS(ES)m/z 265.0(M+)2-氨基-5-氯-N-(2-氯代苯基)苯甲酰胺(1d)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-5-氯代苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.2mL，29.2mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(2.5mL，23.3mmol)和CHCl3(50mL)制備。經(jīng)從Me0H中重結(jié)晶純化產(chǎn)物，得到1.72g的深黃色固體(52％)。1H NMR(CDCl3)δ8.37(dd，J＝1.5，8.3Hz，1H)；8.22(brs，1H)；7.48(d，J＝2.3Hz，1H)；7.42(dd，J＝1.5，8.1Hz，1H)；7.31(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；7.22(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.67 (d，J＝8.8Hz，1H)；5.56(brs，2H)2-氨基-N-(2-氯代苯基)-6-氟苯甲酰胺(1e)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的2-氨基-6-氟代苯甲酸(2.0g，12.9mmol)和SOCl2(2.3mL，32.2mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(2.7mL，25.8mmol)和CHCl3(50mL)制備。將產(chǎn)物在EtOAc/己烷中層析純化，得到2.06g的淺橙色固體(60％)。1H NMR(CDCl3)δ9.00(d，J＝17Hz，1H)；8.47(d，J＝8.3Hz，1H)；7.41(d，J＝8.0Hz，1H)；7.30(t，J＝7.9Hz，1H)；7.10-7.20(m，1H)；7.07(t，J＝7.7Hz，1H)；6.49(d，J＝8.3Hz，1H)；6.03(brs，2H).MS(ES)m/z265.0(m+).2-氨基-6-氯-N-(2-氯代苯基)苯甲酰胺(1f)
按照方法A，使用在苯(75mL)中的2-氨基-6-氯代苯甲酸(2.5g，14.6mmol)和SOCl2(2.7mL，36.4mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(3.1mL，29.1mmol)和CHCl3(75mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到1.05g的橙黃色固體(26％)。1HNMR(CDCl3)δ8.54.(d，J＝8.1Hz，1H)；8.30(brs，1H)；7.41(dd，J＝1.5，8.0Hz，1H)；7.33 (t，J＝7.8Hz，1H)；7.10(t，J＝8.1Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.6，7.8Hz，1H)；6.78(dd，J＝0.4，7.9Hz，1H)；6.63 (dd，J＝0.9，8.2Hz，1H)；4.69(brs，2H).MS(ES)m/z303.0(M+22)，281.0(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-6-甲基苯甲酰胺(1g)
按照方法A，使用在苯(75mL)中的2-氨基-6-甲基苯甲酸(2.5g，16.5mmol)和SOCl2(3.0mL，41.3mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(3.5mL，33.0mmol)和CHCl3(75mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到2.19g的棕色油(51％)。1HNMR(CDCl3)δ8.58(d，J＝8.1Hz，1H)；7.99(brs，1H)；7.40(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.34(t，J＝7.7Hz，1H)；7.11(t，J＝7.8Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.64(d，J＝7.5Hz，1H)；6.59(d，J＝8.1Hz，1H)；4.29(brs，2H)；2.45(s，3H).MS(ES)m/z 283.0(M+22).2-氨基-3-氯-N-(2-氯代苯基)苯甲酰胺(1h)
按照方法A，使用在苯(25mL)中的2-氨基-3-氯代苯甲酸(1.0g，5.82mmol)和SOCl2(1.1mL，14.6mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(1.2mL，11.7mmol)和CHCl3(25mL)制備。將產(chǎn)物從MeOH中重結(jié)晶，得到1.29g的黃色固體(78％)。1HNMR(CDCl3)δ8.43(dd，J＝1.4，8.3Hz，1H)；8.30(brs，1H)；7.47(dd，J＝1.1，8.0Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，2H)；7.33(dt，J=1.4，7.9Hz，1H)；7.09(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.68(t，J＝7.9Hz，1H)；6.13(brs，2H).MS(ES)m/z281.0 (M+).2-氨基-N-聯(lián)苯-2-基-6-氯代苯甲酰胺(1i)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯代苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.3mmol)，隨后使用2-氨基聯(lián)苯胺(4.15g，24.5mmol)和CHCl3(60mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到2.16g的泡沫狀深琥珀色殘余物(57％)。1H NMR(CDCl3)δ8.48(d，J＝8.2Hz，1H)；7.79(brs，1H)；7.34-7.46(m，6H)；7.20-7.30(m，2H)；7.00(t，J＝8.1Hz，1H)；6.63(dd，J＝0.6，7.9Hz，1H)；6.54(d，J＝8.3Hz，1H)；4.58(brs，2H).MS(ES)m/z 323.1(M+).2-氨基-6-氯-N-鄰-甲苯基苯甲酰胺(1j)
按照方法A，使用在苯(30mL)中的2-氨基-6-氯代苯甲酸(1.0g，5.83mmol)和SOCl2(1.1mL，14.6mmol)，隨后使用鄰-甲苯胺(14mL，12.8mmol)和CHCl3(30mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到840mg的油狀黃色固體(55％)。1HNMR(CDCl3)δ7.96(d，J＝7.9Hz，1H)；7.60(brs，1H)；7.23-7.30(m，2H)；7.14(t，J＝7.5Hz，1H)；7.11(t，J＝8.3Hz，1H)；6.78(d，J＝7.9Hz，1H)；6.64(d，J＝8.2Hz，1H)；4.73(brs，2H)；2.35(s，3H).MS(ES)m/z 261.0(M+).2-氨基-6-氯-N-(2-氟代苯基)苯甲酰胺(1k)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯代苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.1mmol)，隨后使用2-氟代苯胺(2.3mL，23.4mmol)和CHCl3(60mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到1.05g的黃色固體(34％)。1HNMR(CDCl3)δ8.45(t，J＝8.0Hz，1H)；8.01(brs，1H)；7.02-7.22(m，4H)；6.78(dd，J＝0.5，7.9Hz，1H)；6.64(dd，J＝0.8，8.2Hz，1H)；4.73(brs，2H).MS(ES)m/z 265.0(M+).2-氨基-6-氯-N-(2-甲氧基苯基)苯甲酰胺(1l)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的2-氨基-6-氯代苯甲酸(2.0g，11.7mmol)和SOCl2(2.1mL，29.1mmol)，隨后使用鄰-甲氧基苯胺(2.6mL，23.4mmol)和CHCl3(60mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中層析，得到2.61g的深黃色油(81％)。1H NMR(CDCl3)δ8.53(dd，J＝1.7，7.9Hz，1H)；8.39(brs，1H)；7.11(dt，J＝1.6，7.8Hz，1H)；7.09(t，J＝8.1Hz，1H)；7.02(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；6.92(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；6.62(dd，J＝0.9，8.2Hz，1H)；4.66(brs，2H)；3.87(s，3H).MS(ES)m/z 277.0(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-3-三氟甲基苯甲酰胺(1m)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的3-三氟甲基鄰氨基苯甲酸(2.0g，9.75mmol)和SOCl2(1.8mL，24.4mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(2.1mL，19.5mmol)和CHCl3(50mL)制備。將產(chǎn)物從MeOH中重結(jié)晶純化，得到2.38g的黃色結(jié)晶(78％)。1H NMR(CDCl3)δ8.40(dd，J＝1.4，8.3Hz，1H)；8.25(brs，1H)；7.71(d，J＝7.8H2，1H)；7.60(d，J＝7.8Hz，1H)；7.43(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.3，7.9Hz，1H)；7.11 dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；6.77(t，J＝7.8Hz，1H)；6.24(brs，2H).MS(ES)m/z315.0(M+).3-氨基萘-2-甲酸(2-氯代苯基)甲酰胺(1n)
按照方法A，使用在苯(50mL)中的3-氨基-2-萘甲酸(2.0g，10.7mmol)和SOCl2(1.9mL，26.7mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(2.3mL，21.4mmol)和CHCl3(50mL)制備。將產(chǎn)物從MeOH中重結(jié)晶，得到1.71g棕色固體(54％)。1H NMR(CDCl3)δ10.88(brs，1H)；9.21.(s，1H)；8.91(s，1H)；8.70(dd，J＝1.0，8.3Hz，1H)；7.95-8.01(m，1H)；7.87-7.94(m，1H)；7.60-7.68(m，2H)；7.41(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.2，7.8Hz，1H)；7.07(dt，J＝1.4，7.7Hz，1H).MS(ES)m/z297.1(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-4-硝基苯甲酰胺(1o)
按照方法A，使用在苯(150mL)中的4-硝基鄰氨基苯甲酸(5.0g，27.5mmol)和SOCl2(5.0mL，68.6mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(5.8mL，55.0mmol)和CHCl3(150mL)制備。將產(chǎn)物經(jīng)在CH2Cl2中層析，隨后從MeOH中重結(jié)晶純化，得到2.20g的棕橙色固體(31％)。1HNMR(CDCl3)δ8.41(dd，J＝1.3，8.3Hz，1H)；8.31(brs，1H)；7.67(d，J＝8.6Hz，1H)；7.57(d，J＝2.1Hz，1H)；7.52(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)；7.44(dd， J＝1.3，8.1Hz，1H)；7.35(dt，J＝1.3，7.9Hz，1H)；7.13(dt，J＝1.4，7.8Hz，1H)；5.88(brs，2H).MS(ES)m/z292.0(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-5-羥基苯甲酰胺(1p)
按照方法A，使用在苯(150mL)中的2-氨基-5-羥基苯甲酸(5.0g，32.7mmol)和SOCl2(6.0mL，81.6mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(6.9mL，65.4mmol)和CHCl3(150mL)制備。將產(chǎn)物經(jīng)在MeOH/CH2Cl2中兩次層析純化，得到990mg的棕色固體(12％)。1H NMR(MeOH-d4)δ7.92(dd，J＝1.6，8.1Hz，1H)；7.48(dd，J＝1.5，7.7Hz，1H)；7.34(dt，J＝1.5，7.7Hz，1H)；7.20(dt，J＝1.7，7.7Hz，1H)；7.16(d，J＝2.7Hz，1H)；6.83(dd，J＝2.7，8.7Hz，1H)；6.76(d，J＝8.7Hz，1H)；[6.24(brs，2H)).MS(ES)m/z263.0(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-4，5-二氟苯甲酰胺(1q)
按照方法A，使用在苯(60mL)中的4，5-二氟鄰氨基苯甲酸(2.0g，11.6mmol)和SOCl2(2.1mL，28.9mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(2.4mL，23.2mmol)和CHCl3(60mL)制備。將產(chǎn)物經(jīng)在CH2Cl2和EtOAc/己烷中兩次層析純化，得到769mg黃色固體(23％)。1H NMR(CDCl3)δ8.69-8.82(m，1H)；8.00(dd，J＝8.4，9.0Hz，1H)；7.90(dd，J＝8.9，12Hz，1H)；7.39(dd，J＝6.8，10Hz，1H)；6.53(dd，J＝6.6，12Hz，1H)；6.41(brs，2H)；5.79(brs，1H).MS(ES)m/z283.1(M+).2-氨基-N-(2-氯代苯基)-5-氟代苯甲酰胺(1r)
按照方法A，使用在苯(30mL)中的2-氨基-5-氟代苯甲酸(1.0g，6.45mmol)和SOCl2(1.2mL，16.1mmol)，隨后使用2-氯代苯胺(1.4mL，12.9mmol)和CHCl3(30mL)制備。將產(chǎn)物在CH2Cl2中研磨，得到985mg的芥末黃色固體(58％)。1H NMR(CDCl3)δ7.66(dd，J＝2.9，8.7Hz，1H)；7.52-7.55(m，1H)；7.32-7.37(m，3H)；7.09(dt，J＝3.0，8.5Hz，1H)；6.71(dd，J＝4.3，8.7Hz，1H).MS(ES)m/z305.0(M+40).實(shí)施例9中間體化合物的制備氯化物2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮(2a)
按照方法B，用在乙酸(30mL)中的1a(2.95g，9.63mmol)和氯代乙酰氯(2.3mL，28.9mmol)制備。通過從K2CO3水溶液提取并從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到1.61g的棕色晶體(46％)。1H NMR(CDCl3)δ7.59-7.66(m，2H)；7.45-7.56(m，3H)；7.20(s，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.08(d，J＝12Hz，1H)；4.04(s，3H)；4.00(s，3H).MS(ES)m/z365.0(M+).6-溴-2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2b)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1b(500mg，1.54mmol)和氯代乙酰氯(0.37mL，4.61mmol)制備。通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到490mg的灰白色固體(83％)。1H NMR(CDCl3)δ8.43(d，J＝2.3Hz，1H)；7.91(dd，J＝2.3，8.7Hz，1H)；7.67(d，J＝8.7Hz，1H)；7.60-7.65(m，1H)；7.47-7.56(m，2H)；7.52(t，J＝5.3Hz，1H)；7.47-7.56(m，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z385.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2c)
按照方法B，用在乙酸(10mL )中的1c(500mg，1.89mmol)和氯代乙酰氯(0.45mL，5.67mmol)制備。通過從K2CO3水溶液提取，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到501mg的黃色晶體(82％)。1H NMR(CDCl3)δ8.32(dd，J＝6.0，8.9Hz，1H)；7.59-7.66(m，1H)；7.50-7.55(m，3H)；7.44(dd，J＝2.4，9.4Hz，1H)；7.27(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z323.0(M+).6-氯-2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2d)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1d(500mg，1.78mmol)和氯代乙酰氯(0.42mL，5.33mmol)制備。通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到555mg的黃色固體(92％)。1H NMR(CDCl3)δ8.27(d，J＝1.9Hz，1H)；7.74-7.78(m，2H)；7.60-7.66(m，1H)；7.48-7.57(m，3H)；4.37(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z339.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2e)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1e(500mg，1.89mmol)和氯代乙酰氯(0.45mL，5.67mmol)制備。通過從K2CO3水溶液提取并從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到430mg的灰白色晶體(70％)。1H NMR(CDCl3)δ7.76(dt，J＝5.3，8.2Hz，1H)；7.56-7.65(m，2H)；7.47-7.56(m，3H)；7.16-7.25(m，1H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.07(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z323.0(M+).5-氯-2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2f)
按照方法B，用在乙酸(15mL)中的1f(1.00g，3.56mmol)和氯代乙酰氯(0.85mL，10.7mmol)制備。通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到791mg的灰白色晶體(65％)。1H NMR(CDCl3)δ7.70(s，1H)；7.68(d，J＝3.8Hz，1H)；7.61-7.65(m，1H)；7.55(dd，J＝2.7，6.4Hz，1H)；7.51(d，J＝3.1Hz，1H)；7.50(s，2H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)，4.05(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z339.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2g)
按照方法B，用在乙酸(40mL)中的1g(2.18g，8.36mmol)和氯代乙酰氯(2.0mL，25.1mmol)制備。通過在CH2Cl2和EtOAc/己烷中兩次層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到638mg的灰白色結(jié)晶固體(24％)。1H NMR(DMSO-d6)δ7.73-7.80(m，3H)；7.58-7.64(m，3H)；7.41(d，J＝7.4Hz，1H)；4.40(d，J＝12Hz，1H)，4.26(d，J＝12Hz，1H)；2.74(s，3H).MS(ES)m/z319.0(M+).8-氯-2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2h)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1h(500mg，1.78mmol)和氯代乙酰氯(0.49mL，6.13mmol)制備。通過從K2CO3水溶液中提取，隨后從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到448mg的黃色固體(74％)。1H NMR(CDCl3)δ8.23(dd，J＝1.4，8.0Hz，1H)；7.90(dd，J＝1.4，7.8Hz，1H)；7.61-7.66(m，1H)；7.51-7.55(m，3H)；7.47(t，J＝8.0Hz，1H)；4.48(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z339.0(M+).3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-氯代甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2i)
按照方法B，用在乙酸(30mL)中的1i(2.0g，6.20mmol)和氯代乙酰氯(1.5mL，18.6mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到1.44g的灰白色固體(61％)。1H NMR(CDCl3)δ7.61-7.64(m，1H)；7.58-7.59(m，1H)；7.54-7.57(m，2H)；7.52-7.53(m，1H)；7.45-7.52(m；2H)；7.24(s，5H)；3.92-4.03(m，2H).MS(ES)m/z381.0(M+).5-氯-2-氯代甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(2j)
按照方法B，用在乙酸(15mL)中的1j(750mg，2.88mmol)和氯代乙酰氯(0.69mL，8.63mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到340mg的白色固體(37％)。1H NMR(CDCl3)δ7.69(d，J＝2.1Hz，1H)；7.68(q，J＝7.4Hz，1H)；7.54(dd，J＝2.2，7.0Hz，1H)；7.35-7.47(m，3H)；7.21-7.25(m，1H)；4.27(d，J＝12Hz，1H)；4.11(d，J＝12Hz，1H)；2.18(s，3H).MS(ES)m/z319.0(M+).5-氯-2-氯代甲基-3-(2-氟代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2k)
按照方法B，用在乙酸(20mL)中的1k(1.0g，3.78mmol)和氯代乙酰氯(0.90mL，11.3mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析純化，得到484mg的淺桃紅色固體(40％)。1H NMR(CDCl3)δ7.69(s，1H)；7.68(d，J＝3.2Hz，1H)；7.56(d，J＝3.0Hz，1H)；7.54(d，J＝3.0Hz，1H)；7.40-7.47(m，1H)；7.35-7.38(m，1H)；7.27-7.32(m，1H)；4.35(d，J＝12Hz，1H)；4.18(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z323.0(M+).5-氯-2-氯代甲基-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮(2l)
按照方法B，用在乙酸(40mL)中的1l(2.6g，9.41mmol)和氯代乙酰氯(2.2mL，28.2mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到874mg的淺黃色固體(28％)。1H NMR(CDCl3)δ7.55-7.74(m，2H)；7.47-7.54(m，2H)；7.34 (dd，J＝1.7，7.8Hz，1H)；7.13(dt，J＝1.2，7.7Hz，1H)；7.08(dd，J＝1.0，8.4Hz，1H)；4.29(d，J＝12Hz，1H)；4.11(d，J＝12Hz，1H)；3.80(s，3H).MS(ES)m/z 335.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-8-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮(2m)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1m(500mg，1.59mmol)和氯代乙酰氯(0.38mL，4.77mmol)制備。通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到359mg的白色結(jié)晶固體(61％)。1H NMR(CDCl3)δ8.51(dd，J＝1.0，8.0Hz，1H)；8.14(d，J＝7.3Hz，1H)；7.65(dd，J＝2.5，5.6Hz，1H)；7.62(d，J＝3.9Hz，1H)；7.48-7.60(m，3H)；4.44(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z 373.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮(2n)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1n(500mg，1.68mmol)和氯代乙酰氯(0.40mL，5.05mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到232mg的淡棕色固體(39％)。1H NMR(CDCl3)δ8.92(s，1H)；8.29(s，1H)；8.81(d，J＝8.3，1H)；8.32(d，J＝8.3Hz，1H)；7.51-7.69(m，4H)；7.55(d，J＝5.2Hz，1H)；7.53(d，J＝3.8Hz，1H)；4.43(d，J＝12Hz，1H)，4.12(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z 355.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-7-硝基-3H-喹唑啉-4-酮(2o)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1o(500mg，1.71mmol)和氯代乙酰氯(0.41mL，5.14mmol)制備。通過從K2CO3水溶液中提取，隨后通過在CH2Cl2中兩次層析純化，得到338mg的黃色油(56％)。1H NMR(CDCL3)δ8.64(d，J＝2.2Hz，1H)；8.48(d，J＝8.8Hz，1H)；8.32(dd，J＝2.2，8.7Hz，1H)；7.66(dd，J＝2.5，6.0Hz，1H)；7.52-7.59(m，3H)；4.41(d，J＝12Hz，1H)，4.10(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z 350.o(M+).乙酸2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-6-基酯(2p)
按照方法B，用在乙酸(10mL)中的1p(670mg，2.55mmol)和氯代乙酰氯(0.61mL，7.65mmol)制備。通過在0-3％MeOH/CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到523mg乙酸酯的淺桃紅色晶體(57％)。1H NMR(CDCl3)δ8.00(d，J＝2.7Hz，1H)；7.82(d，J＝8.8Hz，1H)；7.60-7.66(m，1H)；7.56(dd，J＝2.7，8.8Hz，1H)；7.51(t，J＝4.7Hz，2H)；7.50 (s，1H)；4.38(d，J＝12Hz，1H)，4.08(d，J＝12Hz，1H)；2.36(s，3H).MS(ES)m/z 363.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-6，7-二氟-3H-喹唑啉-4-酮(2q)
按照方法B，用在乙酸(12mL)中的1q(700mg，2.48mmol)和氯代乙酰氯(0.60mL，7.43mmol)制備。通過在CH2Cl2中層析，隨后通過從異丙醇中重結(jié)晶純化，得到219mg的黃色晶體(26％)。1H NMR(CDCl3)δ8.07(dd，J＝8.5，9.7Hz，1H)；7.64(dd，J＝2.5，5.6Hz，1H)；7.60(dd，J＝3.5，11Hz，1H)；7.55(q，J＝2.9Hz，3H)；7.52(d，J＝1.9Hz，1H)；7.49-7.51(m，1H)；4.36(d，J＝12Hz，1H)，4.06(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z 341.0(M+).2-氯代甲基-3-(2-氯代苯基)-6-氟-3H-喹唑啉-4-酮(2r)
按照方法B，用在乙酸(15mL)中的1r(850mg，3.21mmol)和氯代乙酰氯(0.77mL，9.63mmol)制備。通過從K2CO3水溶液中提取，隨后通過在EtOAc/己烷中層析純化。在丙酮/己烷中第二次層析得到125mg的白色固體(12％)。1H NMR(CDCl3)δ7.95(dd，J＝2.9，8.2Hz，1H)；7.81(dd，J＝4.8，9.0Hz，1H)；7.61-7.66(m，1H)；7.57(dd，J＝2.7，8.6Hz，1H)；7.57(dd，J＝2.7，8.6Hz，1H)；7.52(dd，J＝3.2，6.9Hz，1H)；7.52(brs，2H)；4.38(d，J＝12Hz，1H)，4.08(d，J＝12Hz，1H).MS(ES)m/z 323.0(M+).實(shí)施例10PI3Kδ抑制劑化合物的制備化合物D-0012-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯代苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2a(200mg，0.546mmol)、腺嘌呤(81mg，0.601mmol)、K2CO3(83mg，0.601mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從乙醇(EtOH)中重結(jié)晶，得到164mg的駝色固體(65％)，mp281.5-282.7℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.06(s，1H)；8.04(s，1H)；7.76-7.81(m，1H)；7.70-7.76(m，1H)；7.60-7.67(m，2H)；7.45(s，1H)；7.22(s，2H)；6.90(s，1H)；5.08(d，J＝17Hz，1H)；4.91(d，J＝17Hz，1H)；3.87(s，3H)；3.87(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.9，156.2，155.4，152.9，150.0，14 9.7，149.4，143.0，141.9，133.7，132.1，131.9，131.2，13 0.8，129.3，118.4，113.6，108.4，105.8，56.5，56.1，44.7.MS(ES)m/z 464.1(M+)。對(duì)C22H18ClN7O3·0.1C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，56.47；H，3.97；Cl，7.88；N，20.76。實(shí)測(cè)值C，56.54；H，4.05；Cl，7.77；N，20.55?；衔顳-0022-(6-氨基嘌呤-鄰-基甲基)-6-溴-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2b(100mg，0.260mmol)、腺嘌呤(39mg，0.286mmol)、K2CO3(40mg，0.286mmol)和DMF(2mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到52mg的灰白色固體(41％)，mp284.2-284.7℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.24(d，J＝2.0Hz，1H)；8.05 (s，1H)；8.03(s，1H)；7.98(dd，J＝1.9，8.6Hz，1H)；7.74-7.83(m，2H)；7.59-7.68(m，2H)；7.46(d，J＝8.7Hz，1H)；7.22(s，2H)；5.12(d，J＝17Hz，1H)；4.94(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.5，156.2，152.9，152.0，150.1，145.8，141.8，138.4，133.1，132.2，131.9，131.1，130.9，130.1，129.4，128.9，122.4，120.4，118.4，45.0。MS(ES)m/z 482.0(M+)。對(duì)C20H13ClBrN7O·0.1KCl的分析理論值C，49.01；H，2.67；Cl，7.96；N，20.00。實(shí)測(cè)值C，48.82；H，2.82；Cl，8.00；N，19.79?；衔顳-0032-(6-氨基嘌呤-鄰-基甲基)-3-(2-氯代苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2c(100mg，0.310mmol)、腺嘌呤(46mg，0.340mmol)、K2CO3(47mg，0.340mmol)和DMF(1mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到57mg的駝色固體(44％)，mp 216.8-217.2℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.22(dd，J＝6.3，8.7Hz，1H)；8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.78-7.80(m，2H)；7.61-7.64(m，2H)；7.46(dt，J＝2.1，8.6Hz，1H)；7.32(d，J＝9.8Hz，1H)；7.22.(s，2H)；5.13(d，J＝17Hz，1H)；4.95(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm166.1(d，J＝253Hz)，159.6，155.8，152.5，149.7，148.6(d，J＝14Hz)，141.4，132.8，131.8，131.6，130.8，130.5，129.8(d，J＝11Hz)，129.0，118.1，117.4，116.2(d，J＝24Hz)，112.7(d，J＝22Hz)，44.6。MS(ES)m/z 422.0(M+)。對(duì)C20H13ClFN7O·0.1H2O(0.15KCl的分析理論值:C，55.25；H，3.06；Cl，9.38；N，22.55。實(shí)測(cè)值C，55.13；H，2.92；Cl，9.12；N，22.30?；衔顳-0042-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2d(100mg，0.294mmol)、腺嘌呤(44mg，0.323mmol)、K2CO3(45mg，0.323mmol)和DMF(1mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到50mg的黃色固體(39％)，mp 294.5-294.8℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.10(d，J＝2.2Hz，1H)；8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.86(dd，J＝2.4，8.8Hz，1H)；7.75-7.82(m，2H)；7.59-7.67(m，2H)；7.53(d，J＝8.7Hz，1H)；7.22 (brs，2H)；5.13(d，J＝17Hz，1H)；4.95(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.7，156.2，152.9，151.9，150.1，145.5，141.8，135.7，133.1，132.3，132.2，131.9，131.1，130.9，130.0，129.4，125.9， 122.0，118.4，44.9.MS(ES)m/z 438.0(M+).對(duì)C20H13Cl2N7O的分析理論值C，54.81；H，2.99；N，22.37。實(shí)測(cè)值C，54.72；H，2.87；N，22.18?；衔顳-0052-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯代苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2e(200mg，0.619mmol)、腺嘌呤(92mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.680mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析，得到168mg的灰白色固體(64％)，mp 159-172℃(逐漸分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.10(s，1H)；8.08(s，1H)；7.73-7.89(m，3H)；7.57-7.71(m，2H)；7.37-7.48(m，2H)；7.34(d，J＝11Hz，1H)；7.30(d，J＝8.3Hz，1H)；5.14(d，J＝17Hz，1H)；4.94(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.8(d，J＝264Hz)，157.5(d，J＝4.2Hz)，155.8，152.4，152.4，150.0，148.7，142.1，136.4(d，J＝11Hz)，133.0，132.2，132.1，131.2，130.9，129.4，123.8(d，J＝3.6Hz)，118.4，114.5(d，J＝20Hz)，110.2(d，J＝6.0Hz)，44.9.MS(ES)m/z 422.0(M+).對(duì)C20H13ClFN7O的分析理論值C，56.95；H，3.11；Cl，8.40；N，23.24。實(shí)測(cè)值C，54.62；H，3.32；Cl，9.40；N，21.29?；衔顳-0062-(6-氨基嘌呤-鄰-基甲基)-5-氯-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2f(300mg，0.883mol)、腺嘌呤(131mg，0.972mmol)、K2CO3(134mg，0.972mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析并從EtOH中重結(jié)晶，得到188mg的淺橙色晶體(49％)，mp 245.7-246.0℃(在220℃開始熔化)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.06(s，1H)；8.04(s，1H)；7.76-7.81(m，2H)；7.72(d，J＝8.0Hz，1H)；7.59-7.66(m，3H)；7.41(d，J＝8.1Hz，1H)；7.26(brs，2H)；5.11(d，J＝17Hz，1H)；4.93(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm158.5，156.2，152.9，152.2，150.1，149.2，141.8，135.4，133.3，133.2，132.1，132.0，131.2，130.9，130.4，129.4，127.3，118.4，117.7，44.9. MS(ES)m/z 438.0(M+)。對(duì)C20H13Cl2N7O·0.1C2H6O·0.05H2O的分析理論值C，54.67；H，3.11；Cl，15.98；N，22.09。實(shí)測(cè)值C，54.35；H，3.00；Cl，15.82；N，22.31。化合物D-0072-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯代苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2g(250mg，0.783mmol)、腺嘌呤(116mg，0.862mmol)、K2CO3(119mg，0.862mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到93mg的淺黃色固體(28％)，mp190.7-190.9℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(s，1H)；8.03(s，1H)；7.76-7.79(m，1H)；7.71-7.74(m，1H)；7.59-7.67(m，1H)；7.34(d，J＝7.4Hz，1H)；7.28(d，J＝8.2Hz，1H)；7.24(brs，2H)；5.07(d，J＝17Hz，1H)；4.92(d，J＝17Hz，1H)；2.73(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm161.1，156.2，152.8，150.9，150.1，148.3，141.9，141.0，134.6，133.6，132.2，131.9，131.3，130.8，130.3，129.3，125.9，119.1，118.4，44.8，22.8。MS(ES)m/z 418.1(M+)。對(duì)C21H16ClN7O·H2O的分析理論值C，57.87；H，4.16；Cl，8.13；N，22.49。實(shí)測(cè)值C，57.78；H，3.99；Cl，8.38；N，22.32。化合物D-0082-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2h(100mg，0.294mmol)、腺嘌呤(44mg，0.324mmol)、K2CO3(45mg，0.324mmol)和DMF(1mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析，得到50mg的淺黃色固體(39％)，mp273.3-273.5℃(褪色)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.11(dd，J＝1.3，8.0Hz，1H)；8.08(s，1H)；8.05(s，1H)；8.00(dd，J＝1.3，7.8Hz，1H)；7.79-7.83(m，2H)；7.63-7.66(m，2H)；7.56(t，J＝7.9Hz，1H)；7.21(brs，2H)；5.17(d，J＝17Hz，1H)；4.97(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6) ppm160.2，156.1，152.8，152.2，150.2，143.3，142.0，135.6，133.1，132.3，131.9，131.1，131.0，130.9，129.4，128.4，126.0，122.5，118.4，45.0. MS(ES)m/z438.0(M+)。對(duì)C20H13Cl2N7O·0.1CH4O·0.6H2O·0.15KCl的分析理論值C，52.09；H，3.18；N，21.15。實(shí)測(cè)值C，51.85；H，2.93；N，21.01?；衔顳-0092-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2i(400mg，1.05mmol)、腺嘌呤(155mg，1.15mmol)、K2CO3(159mg，1.15mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到344mg的白色固體(68％)，mp 299.9-300.1℃(褪色)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.08(s，1H)；7.89(s，1H)；7.58-7.73(m，5H)；7.51(d，J＝7.9Hz，1H)；7.46(d，J＝7.5Hz，2H)；7.27-7.41(m，3H)；7.14-7.27(m，3H)；5.14(d，J＝17Hz，1H)；4.82(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.6，156.2，152.8，152.5，150.0，149.0，141.7，140.2，137.7，135.0，133.3，133.2，131.8，130.7，130.1，129.8，129.5，128.8，128.6，128.4，127.1，118.4，117.6，45.3。MS(ES)m/z 480.1(M+)。對(duì)C26H18ClN7O的分析理論值C，65.07；H，3.78；Cl，7.39；N，20.43。實(shí)測(cè)值C，64.77；H，3.75；Cl，7.43；N，20.35?；衔顳-0105-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2j(200mg，0.626mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(93mg，0.546mmol)、K2CO3(95mg，0.689mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到125mg的灰白色固體(46％)，mp 213.9℃。1H NMR(DMSO-d6)δ13.53(brs，1H)；8.49(s，1H)；8.44(s，1H)；7.78(t，J＝7.9Hz，1H)；7.63(d，J＝8.2Hz，1H)；7.59(d，J＝7.7Hz，1H)；7.49(d，J＝6.9Hz，1H)；7.24-7.41(m，3H)；4.32-4.45(m，2H)；2.14(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm158.9，157.2，154.2，151.5，149.7，149.6，143.5，136.1，135.9，135.1，133.2，131.3，130.3，130.0，129.9，129.1，127.6，127.1，117.8，32.4，17.5。MS(ES)m/z 438.0(M+)。對(duì)C21H15ClN6OS的分析理論值C，58.00；H，3.48；Cl，8.15；N，19.32；S，7.37。實(shí)測(cè)值C，58.05；H，3.38；Cl，8.89；N，18.38；S，7.00?；衔顳-0115-氯-3-(2-氟代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉4-酮
按照方法C，使用中間體2k(210mg，0.650mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(122mg，0.715mmol)、K2CO3(99mg，0.715mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到240mg的灰白色固體(84％)，mp 244.0℃。1H NMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.50(s，1H)；8.45(s，1H)；7.81(t，J＝8.0Hz，1H)；7.74(t，J＝7.7Hz，1H)；7.67(d，J＝8.1Hz，1H)；7.62(d，J＝7.7Hz，1H)；7.46-7.55(m，1H)；7.29-7.42(m，2H)；4.47-4.59(m，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm158.4，157.3(d，J＝249Hz)，156.4，153.8，151.0，149.1，143.2，135.0，132.9，131.8(d，J＝8.0Hz)，130.8，129.9，126.7，125.3(d，J＝3.5Hz)，123.6(d，J＝13Hz)，117.0，116.2(d，J＝19Hz)，31.7。MS(ES)m/z 439.0(M+)。對(duì)C20H12ClFN6OS的分析理論值C，54.74；H，2.76；Cl，8.08；N，19.15；S，7.31。實(shí)測(cè)值C，54.42；H，2.88；Cl，8.08；N，18.87；S，7.08?；衔顳-0122-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟代苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2k(210mg，0.650mmol)、腺嘌呤(97mg，0.715mmol)、K2CO3(99mg，0.715mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到137mg的黃褐色固體(50％)，mp295.6-295.8℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.05(s，1H)；8.04(s，1H)；7.75(t，J＝7.6Hz，1H)；7.74(t，J＝7.9Hz，1H)；7.62-7.69(m，1H)；7.61(d，J＝7.6Hz，1H)；7.47-7.55(m，1H)；7.48(d，J＝7.8Hz，1H)；7.41(d，J＝8.0Hz，1H)；7.24(brs，2H)；5.19(d，J＝17Hz，1H)；5.03(d，J＝17Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm158.7，157.6(d，J＝250Hz)，156.2，152.8，152.4，150.0；149.2，141.8，135.4，133.3，132.5(d，J＝8.0Hz)，131.0；130.4，127.3，126.2(d，J＝3.5Hz)，123.1(d，J＝14Hz)，118.4，117.6，117.2(d，J＝19Hz)，45.1。MS(ES)m/z 422.0(M+)。對(duì)C20H13ClFN7O·0.05C2H6O的分析理論值C，56.92；H，3.16；Cl，8.36；N，23.12。實(shí)測(cè)值C，56.79；H，3.20；Cl，8.46；N，22.79?；衔顳-0133-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2i(400mg，1.05mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(196mg，1.15mmol)、K2CO3(159mg，1.15mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析，隨后從EtOH中重結(jié)晶，得到439mg的淺黃色晶體(84％)，mp 222.0-222.5℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.55(s，1H)；8.45(s，1H)；7.73(t，J＝8.0Hz，1H)；7.64(d，J＝7.7Hz，1H)；7.50-7.59(m，4H)；7.41-7.48(m，1H)；7.25-7.38(m，5H)；4.41(d，J＝16Hz，1H)；4.16(d，J＝16Hz，1H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.2，157.0，153.7，151.5，149.7，149.3，143.5，139.9，137.8，135.1，134.1，133.3，131.5，130.5，130.3，130.1，129.1，128.9，128.4，128.4，126.9，117.5，32.3。MS(ES)m/z 497.0(M+)。對(duì)C26H17ClN6OS的分析理論值C，62.84；H，3.45；Cl，7.13；N，16.91；S，6.45。實(shí)測(cè)值C，62.60；H，3.47；Cl，7.15；N，16.65；S，6.41。化合物D-0145-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2l(250mg，0.746mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(140mg，0.821mmol)、K2CO3(113mg，0.821mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到254mg的灰白色固體(76％)，mp 237.0℃(分解；在154.6℃褪色)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.53(brs，1H)；8.52(s，1H)；8.45(s，1H)；7.78(t，J＝7.9Hz，1H)；7.64(d，J＝8.0Hz，1H)；7.59(d，J＝7.7Hz，1H)；7.48(d，J＝7.3Hz，1H)；7.42(t，J＝7.7Hz，1H)；7.15(d，J＝8.2Hz，1H)；7.03(t，J＝7.5Hz，1H)；4.45(s，2H)；3.76(s，3H).13C NMR(DMSO-d6) ppm158.9，157.1，154.8，154.7，151.5，149.6，143.6，135.1，133.2，131.3，130.4，130.0，127.0，124.8，121.2，117.8，112.7，56.1，32.0。MS(ES)m/z 451.0(M+)。對(duì)C21H15ClN6O2S·0.15C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，55.43；H，3.47；Cl，8.07；N，18.21；S，6.95。實(shí)測(cè)值C，55.49；H，3.68；Cl，7.95；N，17.82；S，6.82。化合物D-0153-(2-氯代苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2e(200mg，0.619mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.681mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到152mg的白色固體(56％)，mp 222.7-223.8℃(褪色)。1HNMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；7.89(dt，J＝5.6，8.1Hz，1H)；7.76(dd，J＝1.6，7.3Hz，1H)；7.67(d，J＝7.4Hz，1H)；7.56(d，J＝8.1Hz，1H)；7.47(t，J＝7.1Hz，1H)，7.41-7.53(m，2H)；7.37(dd，J＝8.7，11Hz，1H)；4.38-4.52(m，2H).13C NMR(DMSO-d6) ppm160.9(d，J＝264Hz)，157.6，156.8，154.1，151.5，149.6，149.0，143.6，136.4(d，J＝11Hz)，133.9，132.2，131.7，131.6，130.5，130.2，128.8，123.6，114.4(d，J＝20Hz)，110.2，32.0。MS(ES)m/z 439.0(M+)。對(duì)C20H12ClFN6OS·0.5C2H6O的分析理論值C，54.61；H，3.27；Cl，7.68；N，18.19；S，6.94。實(shí)測(cè)值C，54.37；H，3.26；Cl，7.89；N，18.26；S，6.55?；衔顳-0163-(2-氯代苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2a(200mg，0.546mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(102mg，0.601mmol)、K2CO3(83mg，0.601mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到172mg的灰白色固體(65％)，mp 160-180℃(逐漸分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.55(brs，1H)；8.49(s，1H)；8.44(s，1H)；7.72(d，J＝6.9Hz，1H)；7.66(d，J＝6.9Hz，1H)7.38-7.54(m，3H)；7.22(s，1H)；4.36-4.52(m，2H)；3.94(s，3H)；3.89(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.1，155.4，151.5，151.1，149.4，143.2，134.6，132.3，131.6，131.5，130.4，128.7，113.6，108.4，105.8，56.5，56.1，32.0.MS(ES)m/z 481.1(M+)。對(duì)C22H17ClN6O3S·0.5C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，54.41；H，3.97；Cl，7.33；N，16.55；S，6.32。實(shí)測(cè)值C，54.43；H，3.94；Cl，7.69；N，16.69；S，6.52?；衔顳-0176-溴-3-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2b(200mg，0.519mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(97mg，0.570mmol)、K2CO3(79mg，0.572mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到123mg的灰白色固體(47％)，mp 212-242℃(逐漸分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.07(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.24(d，J＝2.3Hz，1H)；8.06(dd，J＝2.3，8.7Hz，1H)；7.76(dd，J＝1.9，7.4Hz，1H)；7.70(d，J＝8.7Hz，1H)；7.66(d，J＝8.1Hz，1H)；7.51(dd，J＝2.1，7.9Hz，1H)；7.46(dd，J＝1.9，7.9Hz，1H)；4.47(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.7，156.8，153.6，151.5，146.1，143.6，138.5，134.0，132.1，131.8，131.5，130.5，130.2，129.9，128.9，128.8，122.2，120.3，32.0. MS(ES)m/z499.0(M+)。對(duì)C20H12ClBrN6OS·0.2C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，47.79；H，2.59；N，16.39；S，6.25。實(shí)測(cè)值C，47.56；H，2.54；N，16.25；S，6.58。化合物D-0183-(2-氯代苯基)-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2m(200mg，0.536mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(100mg，0.588mmol)、K2CO3(82mg，0.593mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到148mg的白色固體(56％)，mp 218.5-219.4℃。1H NMR(DMSO-d6)δ13.52(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.43(d，J＝6.0Hz，1H)；8.26(d，J＝7.5Hz，1H)；7.84(dd，J＝2.5，6.7Hz，1H)；7.70-7.75(m，2H)；7.51-7.59(m，2H)；4.40-4.55(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.0，157.2，154.2，151.4，149.6，144.4，143.4，133.8，133.0(q，J＝5.1Hz)，132.0，131.9，131.6，131.4，130.6，129.0，127.3，125.2(q，J＝30Hz)，123.6(q，J＝273Hz)，121.8，32.6.MS(ES)m/z489.0(M+)。對(duì)C21H12ClF3N6OS的分析理論值C，51.59；H，2.47；Cl，7.25；N，17.19；S，6.56。實(shí)測(cè)值C，51.51；H，2.55；Cl，7.37；N，17.05；S，6.38?；衔顳-0193-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2n(200mg，0.563mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(105mg，0.619mmol)、K2CO3(86mg，0.619mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到128mg深黃色固體(48％)，mp 247.8-254.4℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.90(s，1H)；8.50(s，1H)；8.46(s，1H)；8.34(s，1H)；8.27(d，J＝8.2Hz，1H)；8.16(d，J＝8.2Hz，1H)；7.81(dd，J＝1.6，7.3Hz，1H)；7.70(t，J＝7.5Hz，1H)；7.61-7.74(m，2H)；7.49(t，J＝7.5Hz，1H)；7.44-7.53(m，1H)；4.44-4.56(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm161.3，151.6，151.5，143.9，142.2，136.7，134.4，132.5，131.8，131.6，130.5，129.7，129.3，128.8，128.6，128.3，128.3，127.1，125.2，119.5，32.4. MS(ES)m/z 471.0(M+)。對(duì)C24H15ClN6OS·0.2C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，60.57；H，3.37；Cl，7.69；N，17.37；S，6.63。實(shí)測(cè)值C，60.24；H，3.46；Cl，7.50；N，17.34；S，6.69?；衔顳-0206-氯-3-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2d(200mg，0.587mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(110mg，0.646mmol)、K2CO3(90mg，0.651mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到113mg的黃色晶體(42％)，mp 237.1-238.2℃(分解)。1H NMR(DMSOd6)δ13.55(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.11(s，1H)；7.94(d，J＝8.3Hz，1H)；7.78(d，J＝8.1Hz，2H)；7.66(d，J＝6.7Hz，1H)；7.48-7.56(m，2H)；4.48(s，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm159.8，156.8，153.5，151.5，149.6，145.8，143.6，135.7，134.0，132.2，132.1，131.7，131.5，130.5，130.2，129.8，128.8，125.8，121.9，32.0。MS(ES)m/z 455.0(M+)。對(duì)C20H12Cl2N6OS·0.1C2H6O·0.6H2O·0.15KCl的分析理論值C，50.34；H，2.89；Cl，15.82；N，17.44；S，6.65。實(shí)測(cè)值C，50.02；H，2.63；Cl，15.51；N，17.39；S，6.81?；衔顳-0218-氯-3-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2h(200mg，0.589mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(124mg，0.726mmol)、K2CO3(100mg，0.726mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到202mg的白色固體(75％)，mp 211.9-212.7℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.54(brs，1H)；8.47(s，1H)；8.44(s，1H)；8.12(d，J＝7.9Hz，1H)；8.07(d，J＝7.6Hz，1H)；7.78(d，J＝7.5Hz，1H)；7.67(d，J＝7.1Hz，1H)；7.58(t，J＝7.9Hz，1H)；7.42-7.54(m，2H)；4.52(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.3，156.9，153.9，151.5，149.7，143.5，135.7，134.0，132.1，131.8，131.4，131.1，130.5，130.3，128.9，128.3，126.1，122.4，32.5。MS(ES)m/z 455.0(M+)。對(duì)C20H12Cl2N6OS的分析理論值C，52.76；H，2.66；Cl，15.57；N，18.46；S，7.04。實(shí)測(cè)值C，52.65；H，2.79；Cl，15.32；N，18.47；S，7.18。化合物D-0223-(2-氯代苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2c(200mg，0.619mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(95mg，0.687mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到143mg的白色晶體(53％)，mp 151.4-154.2℃(褪色)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.55(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；8.23(dd，J＝6.3，8.7Hz，1H)；7.77(dd，J＝1.7，7.4Hz，1H)；7.64(d，J＝7.4Hz，1H)；7.57(d，J＝9.8Hz，1H)；7.45-7.52(m，3H)；4.48(s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm169.0(d，J＝253Hz)，162.6，159.3，157.0，154.0，152.2，151.7(d，J＝13Hz)，146.1，136.5，134.7，134.2，134.0，133.0，132.6(d，J＝11Hz)，131.3，120.2，118.9(d，J＝24Hz)，115.3(d，J＝22Hz)，34.6.MS(ES)m/z439.0(M+)。對(duì)C20H12ClFN6OS·0.4C2H6O·0.4H2O·0.15KCl的分析理論值C，52.52；H，3.22；Cl，8.57；N，17.67。實(shí)測(cè)值C，52.25；H，3.11；Cl，8.20；N，17.69?；衔顳-0233-(2-氯代苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2o(216mg，0.617mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(116mg，0.681mmol)、K2CO3(94mg，0.680mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到212mg的黃色晶體(74％)，mp 218.0-218.3℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.49(s，1H)；8.42(s，1H)； 8.38-8.45(m，2H)；8.31(d，J＝8.4Hz，1H)；7.81(d，J＝6.5Hz，1H)；7.68(d，J＝6.7Hz，1H)；7.43-7.58(m，2H)；4.53.(s，2H).13CNMR(DMSO-d6)ppm157.7，154.4，153.3，149.8，149.3，147.6，145.2，141.4，131.5，129.8，129.7，129.2，128.4，127.1，126.7，122.7，120.3，119.4，29.9。MS(ES)m/z 466.0(M+)。對(duì)C20H12ClN7O3S·0.4C2H6O·0.05KCl的分析理論值C，51.19；H，2.97；Cl，7.63；N，20.09；S，6.57。實(shí)測(cè)值C，51.27；H，2.88；Cl，7.40；N，20.04；S，6.52?；衔顳-0243-(2-氯代苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2p(200mg，0.552mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(117mg，0.685mmol)、K2CO3(95mg，0.687mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到182mg所需產(chǎn)物和乙?；苌锏幕旌衔锏陌咨腆w。將一份該物料(120mg)懸浮于MeOH(2mL)和NaHCO3水溶液(飽和的，1mL)的混合物中并快速攪拌4小時(shí)。真空濃縮混合物，懸浮于H2O(10mL)中，并在4℃下貯存過夜。收集白色固體并干燥，103mg(66％)，mp 186-214℃(逐漸分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.48(s，1H)；8.45(s，1H)；7.71(d，J＝6.8Hz，1H)；7.62-7.64(m，2H)；7.43-7.51(m，2H)；7.40-7.43(m，1H)；7.35(d，J＝8.8H2，1H)；4.39-4.52(m，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.6，157.1，156.2，151.4，150.8，149.3，144.1，140.2，134.5，132.2，131.6，131.4，130.4，129.3，128.7，124.8，121.7，109.8，32.0.MS(ES)m/z 437.0(M+).對(duì)(2C20H13ClN6O2S·0.1C2H6O·6H2O的分析理論值C，49.68；H，3.88；Cl，7.26；N，17.21；S，6.57。實(shí)測(cè)值C，49.43；H，3.62；Cl，7.32；N，17.07；S，6.58?；衔顳-0255-氯-3-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2f(300mg，0.883mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(165mg，0.972mmol)、K2CO3(134mg，0.972mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到341mg淺橙色晶體(85％)，mp 233.7-234.4℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.58(brs，1H)；8.50(s，1H；8.47(s，1H)；7.77-7.85(m，2H)；7.68(d，J＝8.1Hz，2H)；7.65(d，J＝7.7Hz，1H)；7.41-7.56(m，2H)；4.45(d，J＝1.2Hz，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm158.7，156.8，153.8，151.5，149.6，149.5，143.5，135.4，134.1，133.3，132.2，131.6，131.6，130.5，130.2，128.8，127.1，117.6，32.0.MS(ES)m/z 455.0(M+)。對(duì)C20H12Cl2N6OS·C2H6O·0.3 H2的分析理論值C，52.14；H，3.70；Cl，13.99；N，16.58；S，6.33。實(shí)測(cè)值C，52.07；H，3.37；Cl，13.40；N，16.65；S，6.42?；衔顳-0263-(2-氯代苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2g(300mg，0.940mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(176mg，1.03mmol)、K2CO3(142mg，1.03mmol)和DMF(5mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到324mg的白色晶體(79％)，mp 227.8-230.1℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.57(brs，1H)；8.49(s，1H)；8.47(s，1H)；7.69-7.78(m，2H)；7.66(d，J＝7.3Hz，1H)；7.55(d，J＝7.9Hz，1H)；7.39-7.52(m，2H)；7.36(d，J＝6.9Hz，1H)；4.38-4.50(m，2H)；2.74(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm161.2，156.3，152.4，151.5，148.6，1143.9，141.0，134.6，134.5，132.3，131.7，131.4，130.4，130.2，128.7，125.7，119.0，32.0，22.8。MS(ES)m/z 435.0(M+)。對(duì)C21H15ClN6OS·0.65C2H6O·0.1H2O的分析理論值C，57.40；H，4.13；Cl，7.60；N，18.01；S，6.87。實(shí)測(cè)值C，57.11；H，3.96；Cl，7.45；N，17.79；S，6.90?；衔顳-0273-(2-氯代苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2q(200mg，0.586mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(110mg，0.645mmol)、K2CO3(89mg，0.645mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到143mg的淺黃色晶體(53％)，mp 207.8℃(褪色；在136℃熔化)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.57(brs，1H)；8.49(s，1H)；8.46(s，1H)；8.11(t，J＝9.4Hz，1H)；7.88(dd，J＝7.3，11Hz，1H)；7.77(dd，J＝1.7，7.3Hz，1H)；7.67 (d，J＝7.4Hz，1H)；7.42-7.55 (m，2H)；4.48 (s，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm159.5 (d，J＝2.5Hz)，154.6 (dd，J＝14，255Hz)，154.0(d，J＝1.5Hz)，151.5，149.3(dd，J＝114，250Hz)，145.1(d，J＝12Hz)，143.9，133.9，132.1，131.8，131.4，130.5，128.9，118.0(d，J＝4.9Hz)，115.8(d，J＝18Hz)，114.6(d，J＝20Hz)，32.0.MS(ES)m/z457.0(M+)。對(duì)C20H11ClF2N6OS的分析理論值C，52.58；H，2.43；Cl，7.76；N，18.40；S，7.02。實(shí)測(cè)值C，51.81；H，2.37；Cl，7.49；N，18.04；S，7.55?；衔顳-0283-(2-氯代苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用中間體2r(118mg，0.365mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(68mg，0.402mmol)、K2CO3(56mg，0.402mmol)和DMF(2mL)制備。將粗品產(chǎn)物從EtOH中重結(jié)晶，得到103mg的灰白色晶體(64％)，mp 232.8-233.0℃(褪色)。1H NMR(DMSO-d6)δ13.56(brs，1H)；8.48(s，1H)；8.44(s，1H)；7.81-7.86(m，3H)；7.76(d，J＝7.5Hz，1H)；7.67(d，J＝7.5Hz，1H)；7.40-7.54(m，2H)；4.48(brs，2H).13C NMR(DMSO-d6)ppm160.8(d，J＝247Hz)，160.2(d，J＝3.3Hz)，156.9，152.3(d，J＝1.9Hz)，151.5，149.7，144.0，143.6，134.1，132.1，131.7，131.5，130.5，130.4，130.2，128.8，124.0(d，J＝24Hz)，122.0(d，J＝8.7Hz)，111.7(d，J＝24Hz)，32.0. MS(ES)m/z 439.0(M+).對(duì)C20H12ClFN6OS·0.2C2H6O·0.1H2O的分析理論值C，54.46；H，3.00；Cl，7.88；N，18.68。實(shí)測(cè)值C，54.09；H，2.73；Cl，7.80；N，18.77。化合物D-0292-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
將亞硫酰氯(2.2mL，30mmol)加入到攪拌著的2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)的苯(50mL)溶液中，將混合物加熱回流18小時(shí)。冷卻后，真空除去溶劑并用苯(25mL)汽提兩次。把殘余物溶于CHCl3(50mL)中，用2-異丙基苯胺(2.83mL，20mmol)處理。然后在回流下將漿狀物加熱3小時(shí)。此時(shí)，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反應(yīng)完成。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物傾倒至4cm硅膠柱上并用20％EtOAc/己烷沖洗。合并含有產(chǎn)物的流分并真空濃縮。把殘余物溶于HOAc(50mL)中，用氯代乙酰氯(1.6mL，20mmol)處理，將混合物加熱回流18小時(shí)。冷卻反應(yīng)物并真空濃縮。通過與甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。將殘余物溶于甲苯(10mL)中并倒入4cm硅膠柱中，用20％EtOAc/己烷沖洗。經(jīng)LCMS(MS(ES)m/z 327(M+))鑒定含有產(chǎn)物的流分并真空濃縮，得到為白色泡沫的975mg(30％)。將該白色泡沫氯化物(450mg，1.36mmol)溶于DMF(10mL)中，用腺嘌呤(275mg，2.04mmol)和K2CO3(281mg，2.04mmol)處理，在室溫下把混合物攪拌過夜。然后將懸浮液傾入到200mL水中，在室溫下攪拌30分鐘，然后在冰箱中冷卻30分鐘。經(jīng)真空過濾收集生成的固體并從EtOH中重結(jié)晶，得到285mg(49％)的灰白色固體，mp 258.0-258.2℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.19(s，1H)，8.09(s，1H)，7.60(m，3H)，7.45(m，2H)，7.23(m，3H)，5.11(d，J＝17.5Hz，1H)，4.71(d，J＝17.5Hz，1H)，2.68(s，3H)，2.73(q，J＝6.9Hz，1H)，1.34(d，J＝6.8Hz，3H)，1.13(d，J＝6.8Hz，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm161.9，156.2，152.8，151.6，150.1，148.4，146.1，142.2，140.8，134.3，133.7，130.6，130.0，129.0，127.7，127.6，125.8，119.2，118.4，44.8，28.3，24.4，23.3，22.9.MS(ES)m/z426.4(M+)。對(duì)C24H23N7O的分析理論值C，67.75；H，5.45；N，23.04。實(shí)測(cè)值C，67.60；H，5.45；N，22.82。化合物D-0302-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
將亞硫酰氯(2.2mL，30mmol)加入到攪拌著的2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)在苯(50mL)中的溶液中，將混合物加熱回流18小時(shí)。冷卻后，真空除去溶劑并用苯(25mL)汽提兩次。把殘余物溶于CHCl3(50mL)中，用鄰-甲苯胺(2.13mL，20mmol)處理。然后將漿狀物加熱回流3小時(shí)。此時(shí)，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反應(yīng)完成。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物倒入4cm硅膠柱中并用20％EtOAc/己烷沖洗。合并含有產(chǎn)物的流分并真空濃縮。把殘余物溶于HOAc(50mL)中，用氯代乙酰氯(1.6mL，20mmol)處理且在回流下將混合物加熱18小時(shí)。冷卻反應(yīng)物并真空濃縮。通過與甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。將殘余物溶于甲苯(10mL)中并倒入4cm硅膠柱中，用20％EtOAc/己烷沖洗。經(jīng)LCMS[MS(ES)m/z 299(M+))鑒定含有產(chǎn)物的流分，真空濃縮得到476mg的白色泡沫(16％)。將該白色泡沫狀氯化物(470mg，1.57mmol)溶于DMF(10mL)中并用腺嘌呤(423mg，3.14mmol)和K2CO3(433mg，3.14mmol)處理，在室溫下攪拌混合物過夜。然后將懸浮液傾入到200mL H2O中，在室溫下攪拌30分鐘，然后在冰箱中冷卻30分鐘。經(jīng)真空過濾收集生成的固體并從EtOH中重結(jié)晶，得到123mg(20％)的灰白色固體，mp 281.5-282.7℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6)δ8.07(s，1H)；8.05(s，1H)；7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.48(m，4H)，7.25(m，3H)，5.09 (d，J＝17.4Hz，1H)，4.76(d，J＝17.4Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.18(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm161.3，156.2，152.8，151.4，150.0，148.5，142.2，140.9，136.1，135.4，134.3，131.7，130.1，130.0，129.0，128.0，125.8，119.2，118.5，44.8， 22.9，17.4.MS(ES)m/z 398.2(M+)。對(duì)C22H19N7O的分析理論值C，66.49；H，4.82；N，24.67。實(shí)測(cè)值C，66.29；H，4.78；N，24.72。化合物D-0313-(2-氟代苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
將亞硫酰氯(2.2mL，30mmol)加入到攪拌著的2-氨基-6-甲基苯甲酸(1.51g，10mmol)的苯(50mL)溶液中，將混合物加熱回流18小時(shí)。冷卻后，真空除去溶劑并用苯(25mL)汽提兩次。把殘余物溶于CHCl3(50mL)中并用2-氟苯胺(1.93mL，20mmol)處理。然后將漿狀物加熱回流3小時(shí)。此時(shí)，TLC(50％EtOAc/己烷)表明反應(yīng)完成。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物傾倒至4cm硅膠柱中并用20％EtOAc/己烷沖洗。合并含有產(chǎn)物的流分并真空濃縮。把殘余物溶于HOAc(50mL)中，用氯代乙酰氯(1.6mL，20mmol)處理，將混合物加熱回流18小時(shí)。冷卻反應(yīng)物并真空濃縮。通過與甲苯(25mL)共沸三次除去剩余的HOAc。將殘余物溶于甲苯(10mL)中并倒入4cm硅膠柱中，用20％EtOAc/己烷沖洗。經(jīng)LCMS[MS(ES)m/z 303(M+))鑒定含有產(chǎn)物的流分并真空濃縮，得到1.12g(37％)的白色泡沫。將該白色泡沫狀氯化物(455mg，1.50mmol)溶于DMF(10mL)中，用6-巰基嘌呤一水合物(510mg，3.0mmol)和K2CO3(414mg，3.0mmol)處理，在室溫下攪拌混合物過夜。然后將懸浮液傾入到200mL水中，在室溫下攪拌30分鐘，然后在冰箱中冷卻30分鐘。經(jīng)真空過濾收集生成的固體并從EtOH中重結(jié)晶，得到487mg(77％)的灰白色固體，mp 151.9-152.2℃。1HNMR(DMSO-d6)δ8.48(s，1H0，8.44(s，1H)，7.70(m，2H)，7.48(m，2H)，7.33(m，3H)，4.55(d，J＝15.1Hz，1H)，4.48(d，J＝15.1Hz，1H)，2.73(s，3H).13CNMR(DMSO-d6)ppm161.3，157.8(d，J＝249.1Hz)，156.9，152.8，151.5，149.6，148.6，1436，140.9，134.7，131.9(d，J＝8.0Hz)，131.4，130.2，，125.6(d，J＝3.6Hz)，125.5，124.4(d，J＝13.5Hz)，118.8，116.6(d，J＝19.6Hz)，56.4，22.9.MS(ES)m/z419.5(M+)。對(duì)C21H15FN6OS·0.15C2H6O的分析理論值C，60.14；H，3.77；F，4.47；N，19.76；S，7.54。實(shí)測(cè)值C，59.89；H，3.88；F，4.42；N，19.42；S，7.23。化合物D-0322-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用2j(200mg，0.626mmol)、腺嘌呤(93mg，0.689mmol)、K2CO3(95mg，0.689mmol)和DMF(3mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析，得到101mg的灰白色固體(39％)，mp262.0-266.5℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.08(s，1H)；8.07(s，1H)；7.70(t，J＝8.0Hz，1H)；7.58(dd，J＝0.6，7.9Hz，1H)；7.43-7.57(m，4H)；7.36(dd，J＝0.7，8.0Hz，1H)；7.26(brs，2H)；5.12(d，J＝18Hz，1H)；4.78(d，J＝18Hz，1H)；2.20(s，3H).13C NMR(DMSO-d6)ppm158.7，156.2，152.9，152.7，150.0，149.4，142.1，136.1，135.1，135.0，133.2，131.8，130.3，130.1，128.9，128.1，127.2，118.5，117.9，44.9，17.4。MS(ES)m/z 418.1(M+)。對(duì)C21H16ClN7O·0.1H2O·0.05KCl的分析理論值C，59.57；H，3.86；Cl，8.79；N，23.16。實(shí)測(cè)值C，59.65；H，3.80；Cl，8.70；N，22.80?；衔顳-0332-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
按照方法C，使用2l(250mg，0.746mmol)、腺嘌呤(111mg，0.821mmol)、K2CO3(113mg，0.821mmol)和DMF(4mL)制備。將粗品產(chǎn)物在MeOH/CH2Cl2中層析并從EtOH中重結(jié)晶，得到124mg的棕色固體(38％)，mp 257.0-257.1℃。1H NMR(DMSO-d6)δ8.06(s，1H)；8.01(s，1H)；7.71(t，J＝8.0Hz，1H)；7.57(dd，J＝0.9，7.9Hz，1H)；7.52-7.59(m，1H)；7.50(dd，J＝1.6，7.8Hz，1H)；7.38.(dd，J＝1.1，8.2Hz，1H)；7.27(dd，J＝0.6，8.3Hz，1H)；7.24(brs，2H)；7.17(dt，J＝0.9，7.6Hz，1H)；5.07 (d，J＝17Hz，1H)；4.97(d，J=17Hz，1H)；3.79(s，3H).13CNMR(DMSO-d6)ppm158.8，156.2，1.54.7，153.2，152.8，150.1，149.3，142.0，135.1，133.2，131.8，130.1，130.1，127.2，123.8，121.6，118.4，117.9，113.1，56.2，44.8。MS(ES)m/z 434.0(M+)。對(duì)C21H16ClN7O2·0.5H2O·0.04 KCl的分析理論值C，56.57；H，3.84；Cl，8.27；N，21.99。實(shí)測(cè)值C，56.29；H，3.75；Cl，8.21；N，21.61。
主要按照以上描述的方法制備以下化合物，用于進(jìn)一步闡明本發(fā)明化合物的具體實(shí)施方案3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-034)3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-035)3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-036)3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-037)3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-038)3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽(D-039)3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-040)3-(3-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-041)2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮(D-042)3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-043)3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽(D-044)[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯(D-045)3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-046)3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-047)2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-048)2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(D-049)2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮(D-050)2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽(D-051)3-(4-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-052)通過以下合成方法制備本發(fā)明的其它化合物。通過以上描述的方法A制備以下中間體。
3aR＝環(huán)丙基
3bR＝環(huán)丙基甲基
3cR＝苯乙基
3dR＝環(huán)戊基
3eR＝3-(2-氯)吡啶基
3fR＝4-(2-甲基)苯甲酸
3gR＝4-硝基芐基
3hR＝環(huán)己基
3iR＝E-(2-苯基)環(huán)丙基
在以下實(shí)驗(yàn)部分中討論具有以下核心結(jié)構(gòu)的本發(fā)明的其它化合物(D-053至D-070)。所有按照方法C制備。
核心結(jié)構(gòu)
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-053)
按照方法C，使用3a(100mg，0.4mmol)、2-氨基-6-巰基嘌呤(80mg，0.48mmol)和K2CO3(77mg，0.56mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ7.89(d，J＝0.9Hz，1H)；7.54(t，J＝7.4Hz，1H)；7.34(d，J＝8.1Hz，1H)；7.19(d，J＝7.2Hz，1H)；6.28(s，2H)；4.94(s，2H)；2.70(s，3H)；1.24(d，J＝6.5Hz，2H)；0.91(s，2H).MS(ES)m/z 380(M+H)，190.3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-054)
按照方法C，使用3b(300mg，1.14mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(214mg，1.26mmol)和K2CO3(189mg，1.37mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨，隨后從MeOH中重結(jié)晶純化。1H NMR(DMSO-d6)δ13.60(brs，1H)；8.72(s，1H)；8.48(s，1H)；7.63(t，J＝7.8Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，1H)；7.28(d，J＝7.3Hz，1H)；5.01(s，2H)；4.11(d，J＝6.8Hz，2H)；2.78(s，3H)；1.35(五重峰，J＝6.2Hz，1H)；0.44-0.59(m，4H)。MS(ES)m/z 379(M+H)，325。2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-055)
按照方法C，使用3b(300mg，1.14mmol)、腺嘌呤(170mg，1.26mmol)和K2CO3(189mg，1.37mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨，隨后從MeOH中重結(jié)晶純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.21(s，1H)；8.10(s，1H)；7.52(t，J＝7.7Hz，1H)；7.18-7.31(m，3H)；7.06(d，J＝8.1Hz，1H)；5.68(s，2H)；4.14(d，J＝6.8Hz，2H)；2.77(s，3H)；1.34(五重峰，J＝6.4Hz，1H)；0.45-0.60(m，4H)。MS(ES)m/z 362(M+H)，308。2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-056)
按照方法C，使用3b(280mg，1.1mmol)、2-氨基-6-巰基嘌呤(200mg，1.2mmol)和K2CO3(180mg，1.3mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ12.70(brs，1H)；7.95(s，1H)；7.64(t，J＝7.8Hz，1H)；7.44(d，J＝7.9Hz，1H)；7.28(d，J＝7.4Hz，1H)；6.41(s，2H)；4.91(s，2H)；4.05(d，J＝6.8Hz，2H)；2.78(s，3H)；1.26-1.43(m，1H)；0.36-0.56(m，4H).MS(ES)m/z 394(M+H)，340.5-甲基-3-苯乙基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-057)
按照方法C，使用3c(750mg，2.4mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(442mg，2.6mmol)和K2CO3(398mg，2.9mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ13.61(s，1H)；8.71(s，1H)；8.48(s，1H)；7.65(t，J＝7.7Hz，1H)；7.44(d，J＝7.9Hz，1H)；7.16-7.35(m，6H)；4.89(s，2H)；4.29(br t，J＝7.9Hz，2H)；3.08(br t，J＝7.8Hz，2H)；2.81(s，3H).MS(ES)m/z 429(M+H)，105.2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-苯乙基-3H-喹唑啉-4-酮(D-058)
按照方法C，使用3c(750mg，2.4mmol)、2-氨基-6-巰基嘌呤(435mg，2.6mmol)和K2CO3(398mg，2.9mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ12.61(s，1H)；7.95(s，1H)；7.65(t，J＝7.7Hz，1H)；7.45(d，J＝7.9Hz，1H)；7.14-7.32(m，6H)；6.44(s，2H)；4.81(s，2H)；4.24(brt，J＝7.9Hz，2H)；3.04(brt，J＝7.8Hz，2H)；2.81(s，3H).MS(ES)m/z 444(M+H)，340.3-環(huán)戊基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-059)
按照方法C，使用3d(100mg，0.36mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(73mg，0.43mmol)和K2CO3(100mg，0.72mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中重結(jié)晶純化。1H NMR(DMSO-d6)δ13.62(brs，1H)；8.77(s，1H)；8.48(s，1H)；7.62(t，J＝7.7Hz，1H)；7.42(d，J＝7.8Hz，2H)；7.26(d，J＝7.4Hz，1H)；5.03(s，2H)；4.80(五重峰，J＝8.0Hz，1H)；2.76(s，3H)；2.12-2.31(m，2H)；1.79-2.04(m，4H)；1.44-1.58(m，2H)。MS(ES)m/z 393(M+H)，325。2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)戊基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-060)
按照方法C，使用3d(100mg，0.36mmol)、腺嘌呤(58mg，0.43mmol)和K2CO3(100mg，0.72mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中重結(jié)晶純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.15(s，1H)； 8.11(s，1H)；7.52(t，J＝7.7Hz，1H)；7.16-7.31(m，3H)；7.10(d，J＝8.0Hz，2H)；5.68(s，2H)；4.78(五重峰，J＝8.3Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.09-2.32(m，2H)；1.86-2.04(m，2H)；1.68-1.86(m，2H)；1.43-1.67(m，2H)。MS(ES)m/z376(M+H)，308，154。3-(2-氯-吡啶-3-基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-061)
按照方法C，使用3e(500mg，1.6mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(289mg，1.7mmol)和K2CO3(262mg，1.9mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。MS(ES)m/z 436(M+H)，200。2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯-吡啶-3-基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-062)
按照方法C，使用3e(500mg，1.6mmol)、腺嘌呤(230mg，1.7mmol)和K2CO3(262mg，1.9mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.59(dd，J＝1.7，4.8Hz，1H)；8.22(dd，J＝1.7，7.8Hz，1H)8.025(s，1H)；8.017(s，1H)；7.60-7.72(m，2H)；7.35(t，J＝8.2Hz，2H)；7.22(s，2H)；5.12(d，J＝17.0Hz，1H)；5.02(d，J＝17.0Hz，1H)；2.72(s，3H)。MS(ES)m/z 419(M+H)。3-甲基-4-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸(D-063)
按照方法C，使用3f(400mg，1.17mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(219mg，1.29mmol)和K2CO3(226mg，1.64mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中重結(jié)晶純化。1H NMR(DMSO-d6)δ13.54(brs，1H)；8.44(s，1H)；8.42(s，1H)；7.80(s，2H)；7.71(t，J＝7.7Hz，1H)；7.59(d，J＝8.6Hz，1H)；7.52(d，J＝7.9Hz，1H)；7.34(d，J＝7.4Hz，1H)；4.46(d，J＝15.4Hz，1H)；4.34(d，J＝15.7Hz，1H)；3.17(d，J＝4.4Hz，1H)；2.73(s，3H)；2.17(s，3H).MS(ES)m/z 459(M+H).3-環(huán)丙基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-064)
按照方法C，使用3a(100mg，0.40mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(90mg，0.53mmol)和K2CO3(97mg，0.7mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.69(d，J＝0.8Hz，1H)；8.47(s，1H)；7.57(d，J＝7.9Hz，1H)；7.37(d，J＝8.1Hz，1H)；7.23(d，J＝7.3Hz，1H)；5.08(s，2H)；3.06-3.18(m，1H)；2.74(s，3H)；1.14-1.36(m，2H)；0.92-1.06(m，2H).2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-065)
按照方法C，使用3a(100mg，0.40mmol)、嘌呤腺(94mg，0.7mmol)和k2CO3(121mg，0.88mmol)制備。將產(chǎn)物通過從H2O中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.19(d，J＝0.9Hz，1H)；8.09(d，J＝1.0Hz，1H)；7.48(t，J＝7.8Hz，1H)；7.13-7.29(m，3H)；7.04.(d，J＝8.1Hz，1H)；5.74(s，2H)；3.00-3.13(m，1H)；2.73(s，3H)；1.18-1.38(m，2H)；0.94-1.09(m，2H).5-甲基-3-(4-硝基-芐基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-066)
按照方法C，使用3g(200mg，0.58mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(148mg，0.87mmol)和K2CO3(160mg，1.16mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中研磨純化。1HNMR(DMSO-d6)δ13.44(brs，1H)；8.50(s，1H)；8.31(s，1H)；8.03(d，J＝8.6Hz，2H)；7.58(t，J＝7.9Hz，1H)；7.37(d，J＝8.3Hz，3H)；7.22(d，J＝7.5Hz，1H)；5.44(s，2H)；4.70(s，2H)；2.66(s，3H).MS(ES)m/z 460(M+H).3-環(huán)己基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-067)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(97mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ13.66(br s，1H)；8.82(s，1H)；8.50(s，1H)；7.62(t，J＝7.7Hz，1H)；7.42(d，J＝8.0Hz，1H)；7.26(d，J＝7.3Hz，1H)；5.01(s，2H)；4.11(br s，1H)；2.75(s，3H)；2.38-2.65(m，2H)；1.58-1.90(m，4H)；1.37-1.57(m，1H)；0.71-1.26(m，3H)。MS(ES)m/z 407(M+H)，325。2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-068)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、嘌呤腺(77mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)制備。將產(chǎn)物通過從MeOH中研磨純化。1H NMR(DMSO-d6)δ8.15(s，2H)；7.54(t，J＝7.9Hz，1H)；7.06-7.35(m，4H)；5.65(s，2H)；4.09(br s，1H)；2.73(s，3H)；1.41-1.90(m，6H)；0.99-1.34(m，4H).MS(ES)m/z 390(M+H)，308.2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮(D-069)
按照方法C，使用3h(150mg，0.52mmol)、2-氨基-6-巰基嘌呤(95mg，0.57mmol)和K2CO3(86mg，0.62mmol)制備。將產(chǎn)物通過反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220)純化。MS(ES)m/z422(M+H)，340，170。5-甲基-3-(E-2-苯基-環(huán)丙基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-070)
按照方法C，使用3i和6-巰基嘌呤一水合物制備。將產(chǎn)物通過反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220)純化。MS(ES)m/z 441。
以下為本發(fā)明另外的化合物以及化合物D-071至D-118的合成途徑。
方法D將酰胺4a或4b、FMOC-甘氨酰氯和冰乙酸的混合物加熱至120℃下1-4小時(shí)。把生成的混合物真空濃縮并經(jīng)快速層析法純化，得到保護(hù)的環(huán)胺。將該物料與在THF中的10當(dāng)量的辛硫醇和催化量的DBU合并，在環(huán)境溫度下攪拌，直到經(jīng)LCMS表明原料完全消耗。將反應(yīng)物直接傾入到快速層析柱(用CH2Cl2平衡)，并用0-5％MeOH/CH2Cl2洗脫，得到游離胺，5a或5b。以類似方法，采用(±)FMOC-丙氨酰氯替代FMOC-甘氨酰氯可制備化合物5c。
方法E將等摩爾量的5a或5b、適當(dāng)?shù)?-氯代嘌呤和DIEA與EtOH在小管形瓶中合并且加熱至80℃。經(jīng)LCMS定期監(jiān)測(cè)反應(yīng)并如所述純化。
方法F將酰胺4b、乙酰氧基乙酰氯和冰乙酸的混合物加熱至120℃并攪拌2小時(shí)。過濾經(jīng)冷卻的反應(yīng)物并用CH2Cl2洗滌固體，得到為白色固體的環(huán)合的乙酸酯。將該物料與K2CO3的甲醇水溶液合并且攪拌1小時(shí)，然后真空濃縮。將生成的固體從H2O中研磨，得到6a的白色固體。
3-(2-氯代苯基)-5-氟-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)-甲基]-3H-喹唑啉-4-酮(D-072)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5b(50mg，0.165mmol)和6-氯代嘌呤(26mg，0.165mmol)制備。5天后，經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化反應(yīng)物。1H NMR(DMSO-d6)δ12.99(brs，1H)；8.14(brs，1H)；8.12(s，1H)；7.85(dt，J＝5.7，8.1Hz.，1H)；7.68-7.79(m，3H)；7.57(t，J＝6.2Hz.，1H)；7.57(d，J＝7.7Hz.，1H)；7.50(d，J＝8.1Hz.，1H)；7.35(dd，J＝8.4，10.7Hz.，1H)；4.15-4.55(m，2H).MS(ES)m/z 422(M+H)，211.
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-(2-氯代苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮(D-074)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5b(50mg，0.165mmol)和2-氨基-6-氯代嘌呤(28mg，0.165mmol)制備。5天后，經(jīng)HPLC(C18Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化反應(yīng)物。1H NMR(DMSO-d6)δ12.13(brs，1H)；7.86(dt，J＝5.6，8.2Hz.，1H)；7.76-7.83(m，2H)；7.68(brs，1H)；7.61(t，J＝5.7Hz.，1H)；7.61(d，J＝7.2Hz.，1H)；7.53(d，J＝8.2Hz.，1H)；7.35(dd，J＝8.2，10.9Hz.，1H)；5.66(brs，2H)；4.16-4.50(m，1H)；4.09(q，J＝5.3Hz.，2H).MS(ES)m/z 437(M+H)，219.
5-甲基-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-071)
按照方法E，使用6-氯代嘌呤(11mg，0.072mmol)和5a(20mg，0.072mmol)制備。5天后，將反應(yīng)物用水猝滅并過濾生成的懸浮液。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化該固體。1H NMR (DMSO-d6)δ12.98(br s，1H)；8.14(br s，1H)；8.10(s，1H)；7.58-7.79(m，2H)；7.37-7.48(m，4H)；7.26-7.36(m，2H)；3.93-4.39(m，2H)；2.75(s，3H)；2.18(s，3H).MS(ES)m/z 398(M+H)，199.
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-073)
按照方法E，使用在3mL EtOH中的5a(189mg，0.677mmol)和2-氨基-6-氯代嘌呤(115mg，0.677mmol)制備。3天后，過濾反應(yīng)物以除去過量的嘌呤并經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化濾液，得到7mg產(chǎn)物的TFA鹽。1HNMR(DMSO-d6)δ8.88(brs，1H)；8.21(s，1H)；7.71(t，J＝7.7Hz.，1H)；7.45-7.56(m，2H)；7.38-7.44(m，3H)；7.35(d，J＝7.5Hz.，1H)；7.30(brs，1H)；4.40(dd，J＝4.5，17.5Hz.，1H)；4.27(dd，J＝5.3，17.4Hz.，1H)；2.75(s，3H)；2.09(s，3H).MS(ES)m/z 413(M+H)，207，163.
2-[(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-076)
按照方法E，使用在1mL EtOH中的5a(20mg，0.072mmol)和2-氟-6-氯代嘌呤(16mg，0.094mmol)制備。18小時(shí)后，經(jīng)HPLC(C18Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)并隨后從EtOH中重結(jié)晶純化反應(yīng)物，得到14mg產(chǎn)物的黃色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ13.12(brs，1H)；8.40(brs，1H)；8.15(s，1H)；7.66(t，J＝7.7Hz，1H)；7.35-7.49(m，4H)；7.31(d，J＝7.2Hz.，1H)；4.00-4.22(m，2H)；3.17(s，1H)；2.74(s，3H)；2.18(s，3H).MS(ES)m/z 416(M+H)，208.
(2-氯代苯基)-二甲氨基-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-075)
將D-015(100mg，0.228mmol)與在DMF(2mL)中的氫氧化鋁(28-30％，1mL)合并并加熱至80℃。2天后，經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化反應(yīng)物，得到產(chǎn)物的黃色固體，～2mg。1H NMR(DMSO-d6)δ13.52(brs，1H)；8.46(s，1H)；8.42(s，1H)；7.69(dd，J＝2.1，7.3Hz，1H)；7.62(dd，J＝1.6，7.6Hz.，1H)；7.61(t，J＝8.0Hz.，1H)；7.37-7.48(m，2H)；7.05(d，J＝7.9Hz.，1H)；6.96(d，J＝7.8Hz.，1H)；4.32-4.45(m，2H)；2.80(s，6H).MS(ES)m/z464 (M+H)，232.
5-(2-芐氧基乙氧基)-3-(2-氯代苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-078)
向2-芐氧基乙醇(0.3mL)在DMF(1.0mL)中的溶液中加入NaH(50mg，2.08mmol)。攪拌5分鐘后，取出0.5mL加入到IC-87185(50mg，0.114mmol)的無水DMF(0.75mL)溶液中。把反應(yīng)物加熱至50℃并攪拌3天。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化，得到產(chǎn)物的不均勻固體，150μg。MS(ES)m/z 571(M+H)，481。
6-氨基嘌呤-9-甲酸3-(2-氯代苯基)-5-氟-4-氧代-3，4二氫-喹唑啉-2-基甲酯(D-079)
在0℃下，向3b(20mg，0.066mmol)的CH2Cl2(500μL)溶液中先后加入光氣(2M/甲苯，36μL，0.072mmol)、腺嘌呤(10mg，0.072mmol)和DIEA(25μL，0.145mmol)。使反應(yīng)物達(dá)到環(huán)境溫度并攪拌8天。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化，得到為產(chǎn)物的混合物。1H NMR (DMSO-d6)δ11.04(brs，1H)；8.61(s，1H)；8.40(s，1H)；7.85-7.95(m，1H)；7.76(dd，J＝5.4，9.6Hz，1H)；7.70-7.78(m，1H)；7.52-7.63(m，3H)；7.38(dt，J＝8.3，10.6Hz，1H)；4.76-4.89(m，2H)。MS(ES)m/z466(M+H)，331，305。
N-[3-(2-氯代苯基)-5-氟-4-氧代-3，4二氫-喹唑啉-2-基甲基]-2-(9H-嘌呤-6-基硫基)乙酰胺(D-077)
將(9H-嘌呤-6-基硫基)-乙酸(63mg，0.296mmol)、5b(108mg，0.355mmol)、EDC(68mg，0.355mmol)、HOBT(48mg，0.355mmol)、DIEA(62μL，0.355mmol)和DMF(1mL)在燒瓶中合并并在環(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)。用EtOAc(20mL)稀釋反應(yīng)物并用稀鹽水(2x13mL)洗滌。真空濃縮有機(jī)相并在5％MeOH/CH2Cl2中層析，得到91mg產(chǎn)物的粘稠桃紅色泡沫。1H NMR(DMSO-d6)δ12.88(br s，1H)；8.72(s，1H)；8.62(t，J＝5.0Hz，1H)；8.49(s，1H)；7.88(dt，J＝5.6，8.2Hz，1H)；7.73-7.78(m，1H)；7.67-7.72(m，1H)；7.57-7.65(m，2H)；7.38(d，J＝8.1Hz.，1H)；7.36(dd，J＝8，3，11.1Hz.，1H)；4.11-4.24(m，2H)；3.96(dd，J＝5.0，17.4Hz，1H)；3.78(dd，J＝5.2，17.4Hz，1H)。MS(ES)m/z 496(M+H)，248。
2-[1-(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-080)
按照方法E，使用在1.2mL EtOH中的5c(50mg，0.17mmol)和2-氟-6-氯代嘌呤(35mg，0.204mmol)制備。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化，得到兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體的白色固體。其中一種的數(shù)據(jù)為1H NMR(DMSO-d6)δ8.48(br d，J＝6.4Hz，1H)；8.17(s，1H)；7.69(t，J＝7.8Hz，1H)；7.53(d，J＝7.8Hz，1H)；7.44(d，J＝7.8Hz，2H)；7.33(d，J＝7.2Hz，2H)；7.07(br t，J＝7.2Hz，1H)；4.80(brt，J＝6.8Hz，1H)；2.74(s，3H)；2.09(s，3H)；1.38(d，J＝6.7Hz，3H).MS(ES)m/z 430 (M+H)，215.
5-甲基-2-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-081)
按照方法E，使用在1.2mL EtOH中的5c(50mg，0.17mmol)和6-氯代嘌呤(32mg，0.204mmol)制備。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6x250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化，得到為黃色固體的兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體。其中一種的數(shù)據(jù)為1HNMR(DMSO-d6)δ8.39(brs，1H)；8.34(s，1H)；8.18(s，1H)；7.71(t，J＝7.7Hz，1H)；7.56(d，J＝7.9Hz，1H)；7.49(d，J＝6.9Hz，1H)；7.28-7.43(m，3H)；7.20(br s，1H)；5.06(br s，1H)；2.73(s，3H)；2.04(s，3H)；1.51(d，J＝6.6Hz，3H).MS(ES)m/z 412(M+H)，206.
如在方法C中概述的那樣，使用在DMF(0.25mL)中的2-氯代甲基-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H喹唑啉-4-酮(10mg)、適宜的親核體XH(20mg，過量)和碳酸鉀(10mg)，制備以下本發(fā)明化合物(D-082至D-109)。在室溫下，將反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，用水猝滅，經(jīng)過濾收集粗品固體產(chǎn)物并空氣干燥。把粗品物料溶于0.5mL的DMSO中并經(jīng)反相HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適宜的流分，得到最終產(chǎn)物。2-(6-二甲氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-082)
產(chǎn)量8.1mg。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.13(s，1H)，8.11(s，1H)，7.60(t，J＝7.8Hz，1H)，7.54-7.38(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.20(d，J＝8.1Hz，1H)，5.11(d，J＝17.4Hz，1H)，4.76(d，J＝17.4Hz，1H)，3.33(s，6H)，2.73(s，3H)，2.20(s，3H).LRMS(ES pos.) m/z＝426 (M+1).5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氫-嘌呤-7-基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-083)
產(chǎn)量3.3mg。1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)δ12.06(s，1H)，8.12(s，1H)，7.60(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.38(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.15(d，J＝7.9Hz，1H)，5.26(d，J＝17.4Hz，1H)，4.94(d，J＝17.4Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.32(s，3H)，2.24(s，3H).根據(jù)由于羰基的作用而使亞甲基質(zhì)子位移出現(xiàn)在低場(chǎng)，可推定是在嘌呤N7位上烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1)。5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氫-嘌呤-9-基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-084)
從相同的反應(yīng)混合物中純化出D-083。產(chǎn)量3.6mg。1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)12.17(s，1H)，7.96(s，1H)，7.63(t，J＝7.8Hz，1H)，7.57-7.39(m，4H)，7.32(d，J＝7.4Hz，1H)，7.26(d，J＝8.1Hz，1H)，5.08(d，J＝17.2Hz，1H)，4.70(d，J＝17.2Hz，1H)，2.73(5，3H)，2.27(s，3H)，2.17(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1).2-(氨基-二甲氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-085)
產(chǎn)量6.7mg。1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)δ7.66(s，1H0，7.61(d，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.40(m，4H)，7.32-7.26(m，2H)，6.74(s，2H)，4.94(d，J＝17.2Hz，1H)，4.63(d，J＝17.2Hz，1H)，4.63(d，J＝17.2Hz，1H)，2.97(s，6H)，2.73(s，3H)，2.17(s，3H)，2.08(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝441(M+1).2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-086)
產(chǎn)量9.5mg。1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)δ12.54(s，1H)，7.89(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，7.43(t，J＝3.9Hz，1H)，7.34＝7.26(m，4H)，6.16(s，2H)，4.32(AB四重峰，JAB＝14.8Hz，Δn＝23.7)，2.74(s，3H)，2.09(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝430(M+1)。2-(4-氨基-1，3，5-三嗪-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-087)
產(chǎn)量5.8mg。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.10(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.48-7.26(m，6H)，4.08(s，2H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝391(M+1). 5-甲基-2-(7-甲基-7H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-088)
產(chǎn)量3.1mg。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.52(s，1H)，8.49(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.8Hz，1H)，7.45(d，J＝7.1Hz，1H)，7.35-7.20(m，4H)，4.41(AB四重峰，JAB＝15.3Hz，Δν＝19.2Hz)；4.08(s，3H)；2.73(s，3H)；2.12(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝406(M+1)。5-甲基-2-(2-氧代-1，2-二氫-嘧啶-4-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-089)
產(chǎn)量2.4mg。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ11.49(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.60(brt，J＝6.0Hz，1H)，7.53-7.48(m，2H)，7.46-7.28(m，4H)，6.31(d，J＝6.7Hz，1H)，4.05(s，2H)，2.73(s，3H)，2.12(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝391(M+1).5-甲基-2-嘌呤-7-基甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-090)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ9.04(s，1H)，8.97(s，1H)，8.48(s，1H)，7.65-7.54(m，2H)，7.53-7.39(m，3H)，7.31(d，J＝7.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，5.31(d，J＝17.6Hz，1H)，5.16(d，J＝17.6Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H).
通過嘌呤6-位質(zhì)子與嘌呤和喹唑啉基團(tuán)之間的連接基團(tuán)的亞甲基質(zhì)子之間的NOE增強(qiáng)(核極化效應(yīng)增強(qiáng))確定在嘌呤的N7位上烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝383(M+1)。5-甲基-2-嘌呤-9-基甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-091)
來自產(chǎn)生D-090的相同的反應(yīng)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ9.17(s，1H)，8.86(s，1H)，8.55(s，1H)，7.59(t，J-7.8Hz，1H)，7.55-7.42(m，4H)，7.30(d，J＝7.4Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，5.26(d，J＝17.5Hz，1H)，4.92(d，J＝17.5Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.19(s，3H).
由于不存在嘌呤6-位質(zhì)子與連接基團(tuán)的亞甲基質(zhì)子之間的NOE增強(qiáng)，表明在N9位上烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝383(M+1)。5-甲基-2-(9-甲基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-092)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.52(s，1H)，8.42(s，1H)，7.69(t，J＝7.7Hz，1H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(d，J＝7.6Hz，1H)，7.36-7.27(m，4H)，4.38(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝21.0Hz)；3.80(s，3H)；2.73(s，3H)；2.12(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝429(M+1)。2-(2，6-二氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-093)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.70(t，J＝7.7Hz，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.27(m，5H)，6.22(brs，1H)，5.80(brs，1H)，3.99(AB四重峰，JAB＝14.6Hz，Δν＝26.9Hz，2H)，2.73(s，3H)，2.08(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝405(M+1)。5-甲基-2-(5-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-094)
1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)δ8.57(s，1H)，7.73(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.35(m，4H)，7.18(s，1H)，4.27(s，2H)，2.74(s，3H0，2.55(s，3H)，2.08(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝429(M+1).5-甲基-2-(2-甲基硫基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-095)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.30(s，1H)，8.29(s，1H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.54(d，J＝7.8Hz，1H)，7.47 9d，J＝6.3Hz，1H)，7.38-7.26(m，4H)，4.34(AB四重峰，JAB＝16.1Hz，Δν＝23.6Hz，2H)，2.74(s，3H)，2.32(s，3H)，2.10(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝461(M+1)。2-(2-羥基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-096)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.08(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(brd，J＝t.8Hz，2H)，7.33-7.50(m，4H)，4.28(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝21.3Hz，2H)，2.74(s，3H)，2.12(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝431(M+1)。5-甲基-2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-097)
1H NMR(300MHz d6-DMSO)δ7.69 t，J＝7.8Hz，1H)，7.46-7.37(m，5H)，7.32(d，J＝7.3Hz，1H)，7.20(d，J＝1.0Hz，1H)，6.48(d，J＝1.0Hz)，3.83(AB四重峰，JAB＝15.0Hz，Δν＝18.8Hz，1H)，3.55(s，3H)，2.73(s，3H)，2.09(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝364(M+1)。5-甲基-3-鄰-甲苯基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-098)
1H NMR (300MHz，d6-DMSO)δ13.98(s，1H)，8.47(s，1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.49(d，J＝7.9Hz，1H)，7.44-7.31(m，5H)，4.04(AB四重峰，JAB＝15.5Hz，Δν＝19.1Hz，1H)，2.74(s，3H，2.10(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝364(M+1)。2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-099)
LRMS(ES pos.)432(M+1)。2-(6-氨基嘌呤-7-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-100)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.19(s，3H)，7.66(t，J＝7.8Hz，1H)，7.59-7.43(m，5H)，7.34 9d，J＝7.4Hz，1H)，7.23(d，J＝8.0Hz，1H)，6.90(s，2H)，5.21(AB四重峰，JAB＝17.4Hz，Δν＝22.1Hz，2H)，2.72(s，3H)，1.93(s，3H)。通過以下質(zhì)子之間的NOE增強(qiáng)證實(shí)在嘌呤N7位上烷基化1)環(huán)外的胺和亞甲基質(zhì)子；2)環(huán)外的胺和甲苯甲酰甲基質(zhì)子。LRMS(ES pos.)m/z＝398(M+1)。2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-101)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.43(brs，1H)，8.19(s，1H)，8.10(brs，1H)，7.62(t，J＝7.8Hz，1H)，7.49-7.28(m，5H)，7.22(d，J＝8.1Hz，1H)，5.49(d，J＝17.0Hz，1H)，5.19(d，J＝17.0Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.11(s，3H).與D-030的nmr光譜類似確定在嘌呤N7位上烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝399(M+1)。2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-102)
來自與D-101相同的反應(yīng)混合物。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.27(s，1H)，8.20(brs，1H)，8.05(brs.1H)，7.70(t，J＝7.8Hz，1H)，7.47-7.26(m，6H)，5.61(AB四重峰，JAB＝16.0Hz，Δν＝20.7Hz，2H)，2.75(s，3H)，1.98(s，3H)。與D-100的nmr光譜類似確定在嘌呤N7位上烷基化。LRMS(ES pos.)m/z＝399(M+1)。2-(6-氨基-9H-嘌呤-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-103)
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ12.62(s，1H)，7.93(s，1H)，7.69(t，J＝7.7Hz，1H)，7.51(d，J＝8.1Hz，1H)，7.42(dd，J＝7.6，1.7Hz，1H)，7.35-7.15(m，6H)，4.12(AB四重峰，JAB＝14.5Hz，Δν＝18.2Hz，2H)，2.73(s，3H，2.10(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝430(M+1)。2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-104)
1H NMR(300 MHz，d6-DMSO)δ7.70(T，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44-7.31(m，5H)，6.69(brs，1H)，5.83，(brs，2H)，5.61(s，1H)，4.03(d，J＝14.6Hz，1H)，3.95(d，J＝14.6Hz，1H)，3.22-3.11(m，2H)，2.73(s，3H)，2.08(s，3H)，1.06(t，J＝7.1Hz，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝433(M+1).2-(3-氨基-5-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-105)
產(chǎn)量5.0mg。1H NMR(300 MHz，d6-MeOH)δ7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.55-7.37(m，4H)，7.35-7.27(m，2H)，4.77(d，J＝17.1Hz，1H)，4.60(d，J＝17.1Hz，1H)，2.80(s，3H)，2.43(s，3H)，2.14(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z ＝393(M+1).2-(5-氨基-3-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-106)
產(chǎn)量0.6mg。從與D-105相同的反應(yīng)混合物中純化得到。1H NMR(300 MHz，d4-MeOH)δ7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50-7.24(m，6H)，4.83(d，J＝16.5Hz，1H)，4.70(d，J＝16.5Hz，1H)，2.79(s，3H)，2.47(s，3H)，2.14(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝393(M+1).5-甲基-2-(6-甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-107)
產(chǎn)量5.0mg。1H NMR(300 MHz，d4-MeOH)δ8.17(s，1H)，8.03(s，1H)，7.54-7.43(m 4H)，7.31-7.23(m，2H)，5.14(d，J＝17.5Hz，1H)，4.90(d，J＝17.5Hz，1H)，3.14(brs，3H)，2.79(s，3H)，2.22(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝412(M+1).2-(6-芐基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-108)
產(chǎn)量6.7mg。1H NMR (300MHz，d4-MeOH)δ8.13(s，1H)，8.04(s，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51-7.21(m，11H)，5.15(d，J＝17.5Hz，1H)，4.91(d，J＝17.5Hz，1H)，4.83(s，2H，在H2O峰下)，2.79(s，3H)，2.22(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝488(M+1)。2-(2，6-二氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-109)
將所有反應(yīng)物的量增加至兩倍。產(chǎn)量14mg。1H NMR (300MHz，d6-DMSO)δ8.53(brs，2H)，8.01(s，1H)，7.64(t，J＝7.8Hz，1H)，7.53-7.40(m，4H)，7.33(d，J＝7.4Hz，1H)，7.27 9d，J＝7.9Hz，1H)，4.96(d，J＝17.5Hz，1H)，4.64(d，J＝17.5Hz，1H)，2.74(s，3H)，2.17(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝413(M+1).
從以下中間體E-1至E-3制備以下通式結(jié)構(gòu)的化合物D-110至D-115。
中間體E-15-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3，1-苯并噁嗪-4-酮
步驟1.在115℃下，于密閉的管形瓶中，將6-甲基鄰氨基苯甲酸(2g，13.2mmol)在氯代乙酰氯(12mL，大量過量)中的懸浮液攪拌30分鐘。把生成的溶液冷卻至室溫并用乙醚(～5mL)處理。在4℃下冷卻過夜后，經(jīng)過濾收集生成的黃褐色沉淀，用乙醚洗滌，真空干燥，得到氯代中間體(1.39g，50％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.67(t，J＝7.8Hz，1H)，7.46(d，J＝7.9Hz，1H)，7.35(d，J＝7.6Hz，1H)，4.39(s，2H)，2.81(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝210，(M+1).
步驟2.在室溫下，將氯代中間體(50mg，0.25mmol)、6-巰基嘌呤一水合物(43mg，0.25mmol)和碳酸鉀(25mg，0.25mmol)在干燥DMF(0.5mL)中的混合物攪拌30分鐘。把混合物傾入到乙酸乙酯(20mL)中，把所有的不溶性物料濾除并棄去。真空濃縮濾液以除去所有的乙酸乙酯，用乙醚處理殘余物，得到淡橙色沉淀。經(jīng)過濾收集沉淀，用乙醚洗滌，真空干燥，得到中間體E-1(41mg，51％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ8.64(s，1H)，8.39(s，1H)，7.73(t，J＝7.8Hz，1H)，7.44-7.37(m，2H)，4.69(s，2H)，2.69(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝326(M+1).中間體E-2
用氮?dú)獯祾?-硝基-N-乙酰苯胺(1.0g，5.6mmol)的EtOH溶液，用Pd(OH)2(20％重量裝載在C上，200mg，催化劑)處理，在H2(20磅/平方英寸)下振搖2小時(shí)。通過0.22um纖維素乙酸酯膜(Coming)過濾除去催化劑，真空濃縮濾液，得到白色晶體產(chǎn)物(800mg，96％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ9.12(s，1H)，7.14(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)，6.88(dt，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.70(dd，J＝8.0，1.3Hz，1H)，6.52(dt，J＝7.5 ；1.4Hz，1H)，4.85(br s，2H)，2.03(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝151(M+1).
將2-氟-硝基苯(1.41g，10mmol)和NaHCO3在EtOH(20mL)中的混合物用(N，N，N’-三甲基)-1，2-二氨基乙烷(1.1g，11mmol)處理并在80℃下攪拌16小時(shí)。真空除去溶劑，用0.1MNaOH(120mL)處理殘余物，用乙酸乙酯(2x50mL)提取混合物。合并有機(jī)層，用20mL的水(1x)和鹽水(2x)洗滌，用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到橙色液體(2.2g，100％；ESMSm/z＝224，M+1)。
將該中間體溶于EtOH中，用氮?dú)獯祾呷芤海肞d(OH)2(20％重量裝載在C上，180mg，催化劑)處理，在H2(50磅/平方英寸)下振搖2小時(shí)。通過0.22um纖維素乙酸酯膜(Corning)過濾除去催化劑，真空濃縮濾液，得到紅色液體產(chǎn)物E-3(1.8g，95％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.64(s，1H)，7.03(dd，J＝8.3，1.4Hz，1H)，6.91(ddd，J＝7.6，7.2，1.4Hz，1H)，6.73-6.67(m，2H)，4.20(brs，2H)，2.95(t，J＝6.7Hz，2H)，2.68(s，3H)，2.41(t，J＝6.7Hz，1H)，2.26(s，6H).LRMS(ES pos.)m/z＝194(M+1).
如下制備化合物D-110至D-1155-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰-甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮(D-110)
在100℃下，于密閉的管形瓶中，將中間體E-1(40mg)和鄰-甲苯胺(0.3mL，大量過量)的混合物溫?zé)?6小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，用1NHCl(2mL)和乙醚(2mL)處理，經(jīng)過濾收集生成的灰色沉淀，用乙醚洗滌，空氣干燥(19mg粗品)。把粗品固體溶于0.5mL DMSO中并經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6x250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣?，得到最終產(chǎn)物的白色固體(4mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.52(s，1H)，8.47(s，1H)，8.43(s，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.46-7/43(m，1H)，7.37-7.25(m，4H)，4.37(AB四重峰，JAB＝15.4Hz，Δν＝22.4Hz，2H)，2.74(s，3H)，2.12(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝415(M+1)。3-異丁基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-111)
在120℃下，于密閉的管形瓶中，將中間體E-1(40mg)和異丁基胺(0.4mL，大量過量)的混合物溫?zé)?6小時(shí)。使過量的異丁基胺蒸發(fā)，將殘余物溶于1mL DMSO中并分兩次經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6x250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣?，得到最終產(chǎn)物的白色固體(4mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.75(brs，1H)，8.73(s，1H)，8.50(s，1H)，7.63(t，J＝7.7Hz，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28(d，J＝7.3Hz，1H)，4.96(s，2H)，4.00(d，J＝7.5Hz，2H)，2.77(s，3H)，2.30-2.15(m，1H)，0.98(d，J＝6.7Hz，1H).LRMS(ES pos.)m/z＝381(M+1).N-{2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯基}-乙酰胺(D-112)
在使用空氣加熱槍的密閉的管形瓶中，將中間體E-1(80mg，0.25mmol)和中間體E-2(75mg，0.5mmol，2當(dāng)量)的混合物溫?zé)嶂钡饺廴?。將反?yīng)混合物與乙醚一起研磨并經(jīng)過濾收集固體。把粗品物料溶于1mL DMSO中并分兩次經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6x250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牟糠郑玫阶罱K產(chǎn)物的白色固體。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.52(s，1H)，9.52(s，1H)，8.48(s，3H)，8.42(s，3H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69(t，J＝7.8Hz，1H)，7.51(d，J＝7.9Hz，1H)，7.45-7.37(m，2H)，7.31(d，J＝7.3Hz，1H)，7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，4.38(s，2H)，2.74(s，3H)，1.93(s，3H).LRMS (ES pos.) m/z＝458(M+1).5-甲基-3-(E-2-甲基-環(huán)己基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-113)
在100℃下，在密閉的環(huán)境中，將中間體E-1(80mg，0.25mmol)和反式-2-甲基-1-氨基環(huán)己烷(0.25mL，大量過量)的混合物溫?zé)?6小時(shí)。將反應(yīng)混合物與乙醚一起研磨并經(jīng)過濾收集固體。把粗品物料溶于0.5mL DMSO中并經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣?，得到最終產(chǎn)物的白色固體(1.5mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.5(brs，1H)，8.82(s，1H)，8.51(s，1H)，7.63(t，J＝7.7Hz，1H)，7.43(d，J＝7.9Hz，1H)，7.27(d，J＝7.4Hz，1H)，5.11(d，J＝14.5Hz，1H)，3.78-3.69(m，1H)，2.73(s，3H)，2.55-2.40(m，3H)，1.88-1.46(m，4H)，1.31-1.11(m，1H)，0.90-0.65(m，1H)，0.74(d，J＝6.7Hz，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝421(M+1).2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸(D-114)
在100℃下，于密閉的管形瓶中，將中間體E-1(80mg，0.25mmol)和鄰氨基苯甲酸甲酯(0.25mL，大量過量)的混合物溫?zé)?6小時(shí)。將反應(yīng)混合物與乙醚一起研磨并經(jīng)過濾收集固體。把粗品物料溶于0.5mL DMSO中并經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牟糠?，得到最終產(chǎn)物的白色固體(8mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.51(s，1H)，8.51(s，1H)，8.42(s，1H)，8.11(dd，J＝7.4，1.1Hz，1H)，7.88(dt，J＝7.7，1.4Hz，1H)，7.70(d，J＝8.0Hz，1H)，7.57(t，J＝7.2Hz，1H)，7.49-7.35(m，3H)，4.58(d，J＝15.5Hz，1H)，4.35(d，J＝15.5Hz，1H)，2.44(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝445(M+1).3-{2-[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-苯基}-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫烷基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-115)
在100℃下，于密閉的管形瓶中，將中間體E-1(40mg，0.25mmol)、中間體E-3(0.2mL，大量過量)的混合物溫?zé)?6小時(shí)。將反應(yīng)混合物與乙醚研磨一起并經(jīng)過濾收集固體。把粗品物料溶于1mLDMSO中并分兩次經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牟糠?，得到最終產(chǎn)物的TFA鹽(11mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.4(brs，1H)，9.27(s，1H)，8.52(s，1H)，8.44(s，1H)，7.72(t，J＝7.8Hz，1H)，7.53(d，J＝7.9Hz，1H)，7.40-7.33(m，4H)，7.10-7.04(m，1H)，4.42(s，3H)，3.5(m，2H)，3.23-3.03(m，3H)，2.75(s，3H)，2.68-2.56(m，8H).LRMS(ES pos.)m/z＝501(M+1).
如下制備化合物D-116至D-118
3-(2-氯代苯基)-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-116)(R＝Me，X＝O)
在50℃下，于密閉的管形瓶中，將D-015(25mg)在0.5MNaOMe(2mL的MeOH溶液；大量過量)中的混合物攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(5mL)處理，并經(jīng)過濾收集生成的沉淀，用水洗滌，空氣干燥。把粗品物料溶于0.5mL DMSO中并經(jīng)HPLC(C18Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣郑玫阶罱K產(chǎn)物的白色固體(5.3mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.52(s，1H)，8.48(s，1H)，8.44(brs，1H)，7.77(t，J＝8.2Hz，1H)，7.71-7.60(m，2H)，7.51-7.34(m，2H)，7.23(d，J＝8.2Hz，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，4.39(AB四重峰，JAB＝5.2Hz，Δν＝23.2Hz，2H)，3.85(s，3H)。LRMS(ES pos.)m/z＝451(M+1)。3-(2-氯代苯基)-5-(2-嗎啉-4-基-乙氨基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-117)
在50℃下，將D-015(25mg)和4-(氨基乙-2-基)-嗎啉(650mg，大量過量)的混合物攪拌16小時(shí)。經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化粗品反應(yīng)混合物。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣郑玫阶罱K產(chǎn)物。1H NMR(300MHz，d6-丙酮)δ8.57(brs，1H)，8.47(s，1H)，8.37(s，1H)，7.72(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.57(t，J＝8.1Hz，1H)，7.49(dt，J＝7.7，1.6Hz，1H)，7.40(dt，J＝7.7，1.5Hz，1H)，6.86(d，J＝7.4Hz，1H)，6.82(d，J＝8.3Hz，1H)，4.55(d，J＝15.0Hz，1H)，4.42(d，J＝15.1Hz，1H)，4.05-3.90(m，4H)，3.90(t，J＝6.9Hz，2H)，3.75-3.4(m，4H)，3.54(t，J＝6.9Hz，2H).LRMS(ES pos.)m/z＝549(M+1)。3-芐基-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮(D-118)
在50℃下，于密閉的管形瓶中，將D-043(25mg)在0.5MNaOMe(2mL的MeOH溶液；大量過量)中的混合物攪拌16小時(shí)。用1NHCl(1mL)處理反應(yīng)混合物并將該溶液的等分式樣(0.5mL每份)經(jīng)HPLC(C18 Luna柱，4.6×250mm，4.7mL/分鐘，15分鐘內(nèi)為10-75％乙腈/水，在18分鐘時(shí)為100％乙腈，檢測(cè)器設(shè)置在220λ)純化。真空濃縮適當(dāng)?shù)牧鞣?，得到最終產(chǎn)物的白色固體(6.6mg)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ13.57(s，1H)，8.60(s，1H)，8.45(s，1H)，7.72(t，J＝8.1Hz，1H)，7.42-7.30(m，2H)，7.30-7.19(m，3H)，7.15(d，J＝8.0Hz，1H)，7.06(d，J＝8.3Hz，1H)，5.43(s，2H)，4.80(s，2H)，3.87(s，3H).LRMS(ES pos.)m/z＝431(M+1)?；衔顳-999(對(duì)比物)3-(2-氯代苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
除了在最后步驟中采用4-巰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶替代巰基嘌呤，其余基本按照所述方法合成類似的化合物3-(2-氯代苯基)-2-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮。實(shí)施例11PI3K效力和選擇性的生化試驗(yàn)A.采用20μM ATP的生化試驗(yàn)
采用以上實(shí)施例2中描述的方法，測(cè)試本發(fā)明的化合物對(duì)PI3Kδ的抑制活性和效力，和對(duì)PI3Kδ和其它I型PI3K同工酶的相對(duì)選擇性。在表2中，給出PI3Kα(“Alpha”)、PI3Kβ(“Beta”)、PI3Kγ(“Gamma”)和PI3Kδ(“Delta”)的IC50值(μM)。為闡明所述化合物的選擇性，分別給出化合物對(duì)PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kγ相對(duì)于PI3Kδ的IC50值的比率，以“Alpha/Delta比率”、“Beta/Delta比率”和“Gamma/Delta”比率表示。
除采用100μL Ecoscint進(jìn)行放射標(biāo)記檢測(cè)外，按照與實(shí)施例2相同的選擇性試驗(yàn)方案進(jìn)行初步選擇性試驗(yàn)。隨后采用除包含0.05mCi/mLγ[32P]ATP和3mM PIP2外，其余相同的3X底物儲(chǔ)備液進(jìn)行下面的選擇性試驗(yàn)。隨后的選擇性試驗(yàn)也采用除包含3nM的任何給定的PI3K同工酶外，其余相同的3X酶儲(chǔ)備液。
對(duì)于所有的選擇性試驗(yàn)，將受測(cè)化合物稱重并溶于在100％DMSO(依它們各自的溶解度而定)中的10-50mM儲(chǔ)備液中，于-20℃下貯存。將化合物解凍(至室溫或者37℃)，在水中稀釋至300μM，由此制備3-倍稀釋液的系列水溶液。從這些稀釋液中提取20μL加入到試驗(yàn)孔中，在其旁側(cè)為水空白樣，這些作為酶(陽性)對(duì)照組和無酶(背景)對(duì)照組。試驗(yàn)的其余部分基本按照在實(shí)施例2中的選擇性試驗(yàn)方案進(jìn)行。
對(duì)于在試驗(yàn)中采用最大濃度(即100μM)的那些情況，并不抑制至少50％的酶活性，該表列舉了在該濃度下(即在100μM下)保留的活性百分?jǐn)?shù)。在這些情況下，不能計(jì)算化合物的真實(shí)的活性比率，這是因?yàn)槿鄙偎枰囊粋€(gè)IC50值。然而，為深入了解這些化合物的特征，采用100μM替代缺失的值來計(jì)算假設(shè)的活性比率。在這樣的情況下，選擇性比率必須事實(shí)上大于假設(shè)值，采用大于(＞)符號(hào)來標(biāo)明。1)化合物D-121為3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
B.采用200μM ATP的生化試驗(yàn)
在以上部分A中，采用20μM ATP測(cè)定本發(fā)明的化合物以建立它們對(duì)PI3K的α、β、γ和δ同工型的抑制作用的IC50。實(shí)施進(jìn)一步的篩選以確定這四種PI3K同工型在最終濃度為200μM ATP、比細(xì)胞中正常的ATP生理濃度高10-倍以上以及基本上接近該濃度時(shí)的抑制作用的IC50。這個(gè)選擇性方案除3X儲(chǔ)備液ATP濃度為600μM外，其余與以上描述的一致。得自該試驗(yàn)的數(shù)據(jù)總結(jié)于以下表3中。所觀察到的對(duì)ATP濃度的敏感性表明這些PI3Kδ抑制劑化合物作為ATP的競(jìng)爭(zhēng)劑。實(shí)施例12PI3Kδ活性抑制劑的基于細(xì)胞的試驗(yàn)數(shù)據(jù)
采用以上實(shí)施例3-5中描述的方法，測(cè)定本發(fā)明的化合物在受激的B和T細(xì)胞增殖、嗜中性白細(xì)胞(PMN)的遷移和嗜中性白細(xì)胞(PMN)的彈性蛋白酶釋放的試驗(yàn)中的抑制活性和效力。得自這些試驗(yàn)的數(shù)據(jù)總結(jié)在以下表4中。在表4中，所顯示的值為化合物的有效濃度(EC50；μM)。當(dāng)沒有值被給出時(shí)，表明沒有實(shí)施試驗(yàn)。實(shí)施例13PI3Kδ抑制劑在癌細(xì)胞中的活性的試驗(yàn)
通過對(duì)所述化合物中的一種對(duì)包括KU812、RWLeu4、K562和MEG-01在內(nèi)的一組Chronic Myeloid Leukemia(CML)細(xì)胞系進(jìn)行測(cè)定，評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物在癌細(xì)胞增殖中的作用。
如下測(cè)定化合物(D-000，溶于DMSO)的抑制活性。將受測(cè)化合物以一系列濃度(0.001μM-20μM)加入到含有細(xì)胞(1000-5000細(xì)胞/孔)的96孔微量滴定板中。于37℃下將所述板溫育5天，在此期間，不含有受測(cè)化合物的對(duì)照組培養(yǎng)基能夠經(jīng)歷至少兩個(gè)細(xì)胞分化周期。在第3、4和5天加入[3H]-胸苷，分別混合18小時(shí)可測(cè)量細(xì)胞生長。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至濾膜，沖洗并采用Matrix96β讀數(shù)器(Packard)進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)。如下計(jì)算細(xì)胞生長的百分比
由導(dǎo)致放射性值比不含有抑制劑的對(duì)照組觀察到放射性值低50％的受測(cè)化合物的濃度確定在這些實(shí)驗(yàn)中的EC50值。D-000化合物呈現(xiàn)抑制活性，對(duì)KU812和RWLeu4系具有約2μM的EC50。在K562和MEG-01細(xì)胞系中未發(fā)現(xiàn)所述化合物呈現(xiàn)作用。
本發(fā)明的PI3Kδ抑制劑顯示出能抑制CML細(xì)胞的生長，因此能夠用于治療良性或惡性腫瘤。迄今已證實(shí)PI3Kδ表達(dá)大多在血源細(xì)胞中進(jìn)行。然而，其能夠存在于更廣泛的增殖細(xì)胞中。因此，在白血病和實(shí)體腫瘤兩者中或在非腫瘤源的增殖中，可使用本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)腫瘤退化和預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移的形成。另外，可單獨(dú)和與其它的藥學(xué)活性化合物組合或者與作為敏感劑的放射作用聯(lián)合使用所述化合物。實(shí)施例14在小鼠氣囊灌洗法中彈性蛋白酶胞吐作用的測(cè)量
測(cè)定D-030對(duì)動(dòng)物模型內(nèi)白細(xì)胞內(nèi)流和嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶胞吐作用的作用。6天氣囊模型為體內(nèi)炎癥模型，在組織上類似于關(guān)節(jié)滑膜。由單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞有機(jī)組合形成的內(nèi)膜與滑膜腔極其類似。所述模型代表慢性疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的“急性”模型。這個(gè)模型用于在炎性刺激物的影響下藥物阻斷細(xì)胞內(nèi)流進(jìn)入氣囊的體內(nèi)評(píng)價(jià)。
如下進(jìn)行該試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將各組的大鼠剃去毛發(fā)，并在每只鼠的背部皮下注射10ml的空氣，形成氣囊。第3天，再次注射10ml的空氣。第6天，在TNF活化前6小時(shí)，給一組大鼠(n＝6)口服D-030(在PEG 400媒介物中，100mg/kg)，而給另一組(n=12)只是口服媒介物。給藥后6小時(shí)后，兩組動(dòng)物的氣囊均接受了2.5ng的TNF。給藥后12小時(shí)后，用鹽水洗滌氣囊，分析得到的灌洗流體中白細(xì)胞數(shù)量和嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶活性。另外，將血抽出以測(cè)定血液循環(huán)中D-030的水平。結(jié)果如下接受D-030 12小時(shí)后的大鼠在血液循環(huán)中含有平均8.7μM的化合物，并且與媒介物對(duì)照組相比在灌洗流體總白細(xì)胞減少了82％。具體白細(xì)胞數(shù)目的減少如下嗜中性白細(xì)胞(90％)、嗜酸性粒細(xì)胞(66％)和淋巴細(xì)胞(70％)。嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶的量顯示經(jīng)過D-030處理的大鼠與媒介物對(duì)照組的比較具有稍微降低(15％)的彈性蛋白酶水平。
在另一個(gè)試驗(yàn)中，采用剪刀將小鼠背部的區(qū)域減去毛發(fā)，通過皮下注射3ml空氣產(chǎn)生氣囊。第3天，重復(fù)空氣注射。第6天，在TNF-α(0.5ng，在1ml PBS中)，或僅用PBS活化前1小時(shí)和活化后2小時(shí)，向所述動(dòng)物給服D-030(32mg/kg，在LABRAFIL中)或僅是LABRAFIL。PBS為磷酸鹽緩沖的鹽水。TNF活化后4小時(shí)，將動(dòng)物麻醉，用2mL含有2mM EDTA的0.9％鹽水灌洗氣囊。在微型離心器中于14,000rpm下將灌洗液離心。按照以上描述的方法，將50微升的上清液用于測(cè)量彈性蛋白酶胞吐作用。
如圖9所示，與PBS活化的動(dòng)物比較，TNF活化誘導(dǎo)高水平的彈性蛋白酶胞吐作用。然而，當(dāng)用D-030處理TNF活化的動(dòng)物時(shí)，在氣囊灌洗液中觀察到彈性蛋白酶活性顯著減少。
在本說明書中引用的全部出版物和專利文件均通過引用它們公開的全部內(nèi)容而結(jié)合到本文中來。
雖然為了清楚說明和易于理解的目的，已具體參考某些優(yōu)選的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作出描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然會(huì)意識(shí)到在如下的權(quán)利要求書定義的本發(fā)明范圍內(nèi)可作出進(jìn)一步的變化和修改。因此，除了那些在權(quán)利要求書中特別指出的外，本發(fā)明不受任何的限定。
權(quán)利要求
1.一種干擾白細(xì)胞功能的方法，所述方法包括使白細(xì)胞與在基于細(xì)胞的測(cè)定中相對(duì)于所述白細(xì)胞內(nèi)的其它的I型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)同工型來說選擇性抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物接觸。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述白細(xì)胞包括選自嗜中性白細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的細(xì)胞。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述白細(xì)胞包括嗜中性白細(xì)胞，并且其中所述方法包括干擾至少一種選自受激超氧化物釋放、受激胞吐作用和趨化性遷移的嗜中性白細(xì)胞功能。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述嗜中性白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬作用或者對(duì)細(xì)菌的殺傷基本上不受干擾。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述白細(xì)胞包括B淋巴細(xì)胞，并且所述方法包括干擾所述B淋巴細(xì)胞的增殖或者所述B淋巴細(xì)胞的抗體的產(chǎn)生。
6.權(quán)利要求6的方法，其中所述方法包括干擾所述T淋巴細(xì)胞的增殖。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述白細(xì)胞包括嗜堿性粒細(xì)胞，并且其中所述方法包括干擾嗜堿性粒細(xì)胞釋放組胺。
8.權(quán)利要求1的方法，其中在基于細(xì)胞的測(cè)定中，所述化合物對(duì)抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于對(duì)其它I型PI3K同工型的選擇性的約10倍。
9.權(quán)利要求8的方法，其中在基于細(xì)胞的測(cè)定中，所述化合物對(duì)抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于對(duì)其它I型PI3K同工型的選擇性的約20倍。
10.權(quán)利要求9的方法，其中在生化試驗(yàn)中，所述化合物對(duì)抑制PI3Kδ的選擇性至少相當(dāng)于對(duì)其它I型PI3K同工型的選擇性的約50倍。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物具有以下結(jié)構(gòu)
其中Y不存在或選自S和NH；
R7選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；
R8選自H、OCH3和鹵素；
或者R7和R8與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)；
R9選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)，和
q為1或2；
前提是R7和R8中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-二甲氧基，且R9不為4-氯代苯基。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述化合物選自
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-y-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-(2，4-二甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-異丙基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
13.一種干擾白細(xì)胞功能的方法，所述方法包括使白細(xì)胞與以足以抑制在所述白細(xì)胞內(nèi)的磷脂酰肌醇3-激酶δ活性的量的具有以下結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物接觸
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(=O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基-NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-3亞烷基芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基；
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述化合物選自
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-o-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-o-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-o-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-氟苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)丙基甲基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-苯乙基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-苯乙基-3H-喹唑啉-4-酮
3-環(huán)戊基甲基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)戊基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯吡啶-3-基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
3-甲基-4-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸
3-環(huán)丙基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)丙基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-(4-硝基芐基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-環(huán)己基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-環(huán)己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-環(huán)己基-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-(E-2-苯基環(huán)丙基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)甲基-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-[(9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氨基-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-[(2-氟-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基]-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
(2-氯苯基)-二甲氨基-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
5-(2-芐氧基乙氧基)-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
6-氨基嘌呤-9-甲酸3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-2-基甲酯
N-[3-(2-氯苯基)-5-氟-4-氧代-3，4-二氫-喹唑啉-2-基甲基]-2-(9H-嘌呤-6-基硫基)-乙酰胺
2-[1-(2-氟-9H--嘌呤-6-基氨基)乙基]-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-[1-(9H-嘌呤-6-基氨基)乙基]-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-二甲氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氫-嘌呤-7-基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基-6-氧代-1，6-二氫-嘌呤-9-基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(氨基-二甲氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(4-氨基-1，3，5-三嗪-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(7-甲基-7H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-氧代-1，2-二氫-嘧啶-4-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-嘌呤-7-基甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-嘌呤-9-基甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(9-甲基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2，6-二氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(5-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(2-甲基硫基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-羥基-9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(1-甲基-1H-咪唑-2-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-3-鄰甲苯基-2-(1H-[1，2，4]三唑-3-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-6-氯-嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基嘌呤-7-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(7-氨基-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-氨基-9H-嘌呤-2-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2-氨基-6-乙基氨基-嘧啶-4-基硫基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(3-氨基-5-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(5-氨基-3-甲基硫基-1，2，4-三唑-1-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(6-甲基氨基嘌呤-9-基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(6-芐基氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
2-(2，6-二氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮
3-異丁基-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
N-{2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯基}-乙酰胺
5-甲基-3-(E-2-甲基-環(huán)己基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
2-[5-甲基-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]-苯甲酸
3-{2-[(2-二甲氨基乙基)甲基氨基]苯基}-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-(2-氯苯基)-5-(2-嗎啉-4-基-乙氨基)-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮
3-芐基-5-甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮。
15.一種緩解由白細(xì)胞中PI3Kδ活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)癥狀的方法，所述方法包括給予需要治療的動(dòng)物治療有效量的、在基于細(xì)胞的測(cè)定中相對(duì)于所述白細(xì)胞內(nèi)的其它的I型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)同工型來說選擇性抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ(PI3Kδ)活性的化合物。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述醫(yī)學(xué)癥狀具有不符合需要的選自受激超氧化物釋放、受激胞吐作用和趨化性遷移的嗜中性白細(xì)胞功能的特征。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述嗜中性白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬作用或者對(duì)細(xì)菌的殺傷基本上不受干擾。
18.一種干擾破骨細(xì)胞功能的方法，所述方法包括使破骨細(xì)胞與在基于細(xì)胞的測(cè)定中相對(duì)于所述破骨細(xì)胞內(nèi)的其它的I型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)同工型來說選擇性抑制PI3Kδ活性的化合物接觸。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物具有以下結(jié)構(gòu)
其中Y不存在或選自S和NH；
R7選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；
R8選自H、OCH3和鹵素；
或者R7和R8與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)；
R9選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)；
q為1或2；
前提是R7和R8中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-甲氧基，且進(jìn)一步的前提是R9不為4-氯代苯基。
20.權(quán)利要求18的方法，其中所述化合物包含結(jié)合于骨的部分。
21.一種在需要治療的動(dòng)物體內(nèi)緩解骨重吸收疾病的方法，所述所述方法包括給予所述動(dòng)物治療有效量的、在基于細(xì)胞的測(cè)定中相對(duì)于所述動(dòng)物的破骨細(xì)胞內(nèi)的其它的I型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)同工型來說選擇性抑制PI3Kδ活性的化合物。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述骨重吸收疾病為骨質(zhì)疏松癥。
23.一種抑制慢性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞的生長或增殖的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與在基于細(xì)胞的測(cè)定中相對(duì)于所述癌細(xì)胞內(nèi)的其它的I型磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)同工型來說選擇性抑制PI3Kδ活性的化合物接觸。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物具有以下結(jié)構(gòu)
其中R7選自H、鹵素、OH、OCH3、CH3和CF3；
R8選自H、OCH3和鹵素；
或者R7和R8與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)；
R9選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、乙酸乙酯和嗎啉基；
X為NH或S；和
前提是R7和R8中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-二甲氧基，且進(jìn)一步的前提是R9不為4-氯代苯基。
25.一種抑制磷脂酰肌醇3-激酶δ多肽的激酶活性的方法，所述方法包括使多肽與具有以下結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物接觸
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(＝O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亞烷基-芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基-OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)鹵基、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基；
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代。
26.權(quán)利要求25的方法，其中R1選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；和
R3選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)C2H5和嗎啉基；
其中R1和R2中至少一個(gè)不為6-鹵基或6，7-二甲氧基，且R3不為4-氯代苯基。
27.一種化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)
其中Y不存在或選自S和NH；
R4選自H、鹵素、NO2、OH、OCH3、CH3和CF3；
R5選自H、OCH3和鹵基；
或者R4和R5與喹唑啉環(huán)系統(tǒng)的C-6和C-7一起形成任選包含1個(gè)或者多個(gè)O、N或S原子的5-或6-元芳環(huán)；
R6選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷氧基苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；
Rd獨(dú)立選自NH2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、OH、NH(C1-3烷基)、N(C1-3烷基)2、NH(C1-3亞烷基苯基)，和
q為1或2；
前提是當(dāng)R6為苯基或2-氯代苯基時(shí)，R4和R5中至少一個(gè)不為H。
28.權(quán)利要求27的化合物，所述化合物選自；
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-8-三氟甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-(2-二甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-硝基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-6-溴-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-6，7-二甲氧基-3H-喹唑啉-4-酮；
6-溴-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-苯并[g]喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-甲氧基苯基)-3H-喹唑啉-4-酮。
29.權(quán)利要求27的化合物，其中R4選自H、鹵基、OH、OCH3、CH3和CF3；
R6選自C1-C6烷基、苯基、鹵代苯基、烷基苯基、聯(lián)苯基、芐基、吡啶基、4-甲基哌嗪基、C(＝O)OC2H5和嗎啉基；其中(a)R4和R5獨(dú)立不為6-鹵基或6，7-二甲氧基；
(b)R6不為4-氯代苯基；和
(c)當(dāng)R6為苯基或2-氯代苯基且X為S時(shí)，R4和R5中至少一個(gè)不為H。
30.權(quán)利要求28的化合物，所述化合物選自
3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲基)-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氟苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氟苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2，6-二氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
5-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-甲基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-丁基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-7-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-嗎啉-4-基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
8-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-6，7-二氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
6-氯-3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(3-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3-吡啶-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(2-氯苯基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-三氟甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
3-芐基-5-氟-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
3-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮，乙酸鹽；
3-(2-氯苯基)-6-羥基-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
[5-氟-4-氧代-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-4H-喹唑啉-3-基]乙酸乙酯；
3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-2-(9H-嘌呤-6-基-硫基甲基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-異丙基苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-甲基-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-聯(lián)苯-2-基-5-氯-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氟苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氟苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-8-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-(2-氯苯基)-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-甲基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-芐基-5-氟-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-丁基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-嗎啉-4-基-3H-喹唑啉-4-酮；
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-3-(2-氯苯基)-7-氟-3H-喹唑啉-4-酮；和
2-(6-氨基嘌呤-9-基甲基)-5-氯-3-鄰甲苯基-3H-喹唑啉-4-酮。
31.一種化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式
其中A為任選取代的包含至少兩個(gè)氮原子的單環(huán)或雙環(huán)系統(tǒng)，并且所述系統(tǒng)中至少一個(gè)環(huán)為芳環(huán)；
X選自CHRb、CH2CHRb和CH＝C(Rb)；
Y不存在或選自S、SO、SO2、NH、O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O和NHC(＝O)CH2S；
R1和R2獨(dú)立選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、鹵基、NHC(＝O)C1-3亞烷基N(Ra)2、NO2、ORa、OCF3、N(Ra)2、CN、OC(＝O)Ra、C(＝O)Ra、C(＝O)ORa、芳基ORb、Het、NRaC(＝O)C1-3亞烷基C(＝O)ORa、芳基OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)Ra、C1-4亞烷基C(＝O)ORa、OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa、C(＝O)-NRaSO2Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、C2-6亞鏈烯基N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基CH(ORb)CH2N(Ra)2、OC1-4亞烷基Het、OC2-4亞烷基ORa、OC2-4亞烷基NRaC(＝O)ORa、NRaC1-4亞烷基N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、NRaC(＝O)N(Ra)2、N(SO2C1-4烷基)2、NRa(SO2C1-4烷基)、SO2N(Ra)2、OSO2CF3、C1-3亞烷基芳基、C1-4亞烷基Het、C1-6亞烷基ORb、C1-3亞烷基N(Ra)2、C(＝O)N(Ra)2、NHC(＝O)C1-C3亞烷基-芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、芳基-OC1-3亞烷基N(Ra)2、芳基OC(＝O)ORb、NHC(＝O)C1-3亞烷基C3-8雜環(huán)烷基、NHC(＝O)C1-3亞烷基Het、OC1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORb、C(＝O)C1-4亞烷基Het和NHC(＝O)鹵代C1-6烷基；
或者R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)的3-或4-元亞烷基或者亞鏈烯基鏈成分，任選包含至少一個(gè)雜原子；
R3選自任選取代的氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C2-6鏈烯基、C1-3亞烷基芳基、芳基C1-3烷基、C(＝O)Ra、芳基、雜芳基、C(＝O)ORa、C(＝O)N(Ra)2、C(＝S)N(Ra)2、SO2Ra、SO2N(Ra)2、S(＝O)Ra、S(＝O)N(Ra)2、C(＝O)NRaC1-4亞烷基ORa、C(＝O)NRaC1-4亞烷基Het、C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、任選被一個(gè)或者多個(gè)鹵基、SO2N(Ra)2、N(Ra)2、C(＝O)ORa、NRaSO2CF3、CN、NO2、C(＝O)Ra、ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2和OC1-4亞烷基N(Ra)2取代的C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基雜芳基、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra、C1-4亞烷基OC1-4亞烷基ORa、C1-4亞烷基N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)ORa和C1-4亞烷基OC1-4亞烷基C(＝O)ORa；
Ra選自氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C1-3亞烷基N(Ra)2、芳基、芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基、雜芳基、雜芳基C1-3烷基和C1-3亞烷基雜芳基；
或者兩個(gè)Ra基團(tuán)一起形成5-或6-元環(huán)，任選包含至少1個(gè)雜原子；
Rb選自氫、C1-6烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-3烷基、雜芳基C1-3烷基、C1-3亞烷基芳基和C1-3亞烷基雜芳基；
Het為飽和、部分飽和或完全不飽和的5-或6-元雜環(huán)，包含至少1個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，且任選被C1-4烷基或C(＝O)ORa取代；
前提是如果X-Y為CH2S，則R3不為
并且如果X-Y為CH2S，則R3不為-CH2CH(OH)CH2OH取代的苯基。
32.權(quán)利要求31的化合物，其中X選自CH2、CH2CH2、CH＝CH、CH(CH3)、CH2CH(CH3)和C(CH3)2。
33.權(quán)利要求31的化合物，其中Y不存在或選自S和NH。
34.權(quán)利要求31的化合物，其中所述A環(huán)系統(tǒng)選自咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、pyridizinyl、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、嘌呤基、噌啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮雜萘基、蝶啶基、1H-吲唑基和苯并咪唑基。
35.權(quán)利要求31的化合物，其中所述A環(huán)系統(tǒng)選自
36.權(quán)利要求31的化合物，其中所述A環(huán)系統(tǒng)被1-3個(gè)選自以下的取代基取代N(Ra)2、鹵基、C1-3烷基、S(C1-3烷基)、ORa，鹵基和
37.權(quán)利要求31的化合物，其中所述A環(huán)系統(tǒng)被1-3個(gè)選自以下的取代基取代NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、NHCH2C6H5、NH(C2H5)、Cl、F、CH3、SCH3、OH和
38.權(quán)利要求31的化合物，其中所述R1和R2獨(dú)立選自氫、ORa、鹵基、C1-6烷基、CF3、NO2、N(Ra)2、NRaC1-3亞烷基N(Ra)2和OC1-3亞烷基ORa，具體的取代基包括但不限于H、OCH3、Cl、Br、F、CH3、CF3、NO2、OH、N(CH3)2，
和O(CH2)2OCH2C6H5。
39.權(quán)利要求31的化合物，其中R1和R2一起形成5-或6-元環(huán)。
40.權(quán)利要求31的化合物，其中R3選自C1-6烷基、芳基、雜芳基、C3-8環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C(＝O)ORa、C1-4亞烷基Het、C1-4亞烷基環(huán)烷基、C1-4亞烷基芳基、C1-4亞烷基C(＝O)C1-4亞烷基芳基、C1- 4亞烷基C(＝O)ORa、C1-4亞烷基C(＝O)N(Ra)2、C1-4亞烷基C(＝O)Het、C1-4亞烷基N(Ra)2和C1-4亞烷基NRaC(＝O)Ra。
41.權(quán)利要求31的化合物，其中R3選自O(shè)Ra、C1-6烷基、芳基、雜芳基、NO2、N(Ra)2、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)OC2H5、CH2CH(CH3)2，
42.權(quán)利要求31的化合物，其中R3被選自以下的取代基取代鹵基、ORa、C1-6烷基、芳基、雜芳基、NO2、N(Ra)2、NRaSO2CF3、NRaC(＝O)Ra、C(＝O)ORa、SO2N(Ra)2、CN、C(＝O)Ra、C1-4亞烷基N(Ra)2、OC1-4亞烷基N(Ra)2和N(Ra)C1-4亞烷基N(Ra)2。
43.權(quán)利要求31的化合物，其中R3被選自以下的取代基取代Cl、F、CH3、CH(CH3)2、OCH3、C6H5、NO2、NH2、NHC(＝O)CH3、CO2H和N(CH3)CH2CH2N(CH3)2。
全文摘要
公開了抑制磷脂酰肌醇3－激酶δ同工型(PI3Kδ)活性的方法，和治療其中PI3Kδ在白細(xì)胞功能中起作用的疾病(如免疫和炎癥的病癥)的方法。這些方法優(yōu)選使用選擇性抑制PI3Kδ，而不明顯抑制其它的PI3Kδ同工型活性的活性藥物。提供了抑制PI3Kδ活性的化合物，包括選擇性抑制PI3Kδ活性的化合物。還提供了使用PI3Kδ抑制化合物以抑制癌細(xì)胞生長或者增殖的方法。因此，本發(fā)明提供采用PI3Kδ抑制化合物抑制PI3Kδ介導(dǎo)的體外和體內(nèi)過程的方法。
文檔編號(hào)C07D473/00GK1440408SQ0181165
公開日2003年9月3日 申請(qǐng)日期2001年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月25日
發(fā)明者C·薩胡, K·迪克, J·特雷伯格, C·G·索維爾, E·A·凱西基, A·奧利弗 申請(qǐng)人:艾科斯有限公司