專利名稱：菜籽低聚肽的制備方法及產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取和保健食品加工技術(shù)。具體涉及從油菜蛋白原料中制備菜籽 低聚肽(生物活性肽)的方法及產(chǎn)品，該生物活性肽又被稱為小肽、寡肽或低聚肽的級分產(chǎn)物，其分子量分布范圍為1000~800， 800~600， 60CM00, 400~200道爾頓，本發(fā)明還 涉及由上述方法制備的菜籽低聚肽產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
菜籽蛋白是一種優(yōu)質(zhì)蛋白源,其氨基酸生物效價PER值與WH0/FA0推薦值相近。然而， 由于其含有硫武、單寧、植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子，限制其只能飼用或作為肥料，而不能用于食 品。中國是油菜生產(chǎn)大國，每年僅菜籽制油后的餅粕就髙達600 700萬噸，如能將其中所 含蛋白質(zhì)加以綜合利用，開發(fā)出有益于特種人群需要的功能因子食品，必將產(chǎn)生巨大的經(jīng) 濟和社會效益。近年來，各國學(xué)者在菜籽脫毒方面的研究取得了顯著進展如雙低油菜的 育成有效的降低了有毒硫甙物及芥酸的含量；有機溶劑萃取、發(fā)酵中和、擠壓膨化等物理、 化學(xué)及生化方法，對降低菜籽中多酚、植酸等的含量均具有明顯效果。影響菜籽蛋白綜合 利用的限制性因素正逐步得到解除，其食用前景普遍看好。由于菜籽肽具有抗腫瘤、抗氧化、預(yù)防心腦血管疾病等多種功能性質(zhì)，成為目前開發(fā) 菜籽蛋白的研究熱點。有關(guān)文獻表明，菜籽肽的制備主要集中于應(yīng)用酶法水解，并通過凝 膠層析及離子交換樹脂分離純化得到各種菜籽肽級分產(chǎn)品。所存在的不足是通過上述方法 很難得到分子量為1000~200分子量為1000~800， 800~600， 600~400， 400~200道爾頓(Da) 之間的產(chǎn)品，而這些分子量區(qū)間的產(chǎn)品其生物活性為最佳又由于凝膠層析技術(shù)不利于工 業(yè)化生產(chǎn)，現(xiàn)有產(chǎn)品中含有一定量的氨基酸，在某種程度上影響了小肽生物活性的發(fā)揮。 專利申請?zhí)?00610019136文獻公開了一種菜籽肽的制備方法，所得多肽液經(jīng)活性炭吸附 脫色，離子交換樹脂脫鹽后的精制液并未實現(xiàn)很好的分級，仍為多種肽的混合液，分于^^ 分級范圍不明確；專利申請?zhí)?2133461. 7和專利申請?zhí)?2133463. 3的文獻公開了采用切 向流超濾技術(shù)和離子交換色譜法分離純化多肽的方法，通過超濾膜的選擇可以截留分子量 1000分子量為1000~800, 800~600， 600~400， 400~200道爾頓以下的活性成分，在分子量 大小上可達到低聚肽(生物活性肽)的要求，但通過超濾無法實現(xiàn)對這部分活性肽的進一 步分級，而低聚肽的活性和其結(jié)構(gòu)與分子量大小直接相關(guān)，有必要對其進一步分級純化； 采用離子交換色譜模式純化，活性峰不集中，樹脂機械強度差，易溶脹和受有機物污染， 再生操作等步驟冗長費時等技術(shù)缺陷
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，采用酶工程技術(shù)，反滲透及納濾膜分離 技術(shù)，提供一種制備菜籽低聚肽級分產(chǎn)物的方法以及利用該方法獲得的菜籽低聚肽級分產(chǎn) 物，利用該方法獲得了分子量為1000 200道爾頓的菜籽低聚肽級分產(chǎn)物。一種菜籽低聚肽的制備方法它是由下列步驟制備獲得的(1) 將含蛋白質(zhì)的油菜籽原料或初步從油菜籽中提取蛋白的材料樣品按照常規(guī)方法 磨碎，過60~80目標(biāo)準(zhǔn)篩，作為處理樣品備用；(2) 稱取步驟(1)中的處理樣品100重量份，加水1000-2000重量份，在2 3L反 應(yīng)釜中20 251C浸泡l~2h，得到浸泡液；(3) 將歩驟(2)的浸泡液用1"4mol丄"NaOH溶液調(diào)pH值至9 12,加入1 5重量 份堿性蛋白酶，在30 50TC條件下酶解l~5h,得到酶解液；(4) 將步驟(3)的酶解液用1 4mol七"HCl溶液調(diào)pH值至5 7,在9(M00匸條件 下滅酶5 10min，得到水解液；(5) 將步驟(4)的水解液置4000rmin"下離心得上清液l，用l一mol七"HCl溶液 調(diào)該上清液1的pH值至2~4，在3(K50X:條件下加入0.5~1.5重量份活性炭，脫色l~3h, 得到水解液；(6) 將歩驟(5)經(jīng)脫色后的水解液在4000rmin"下離心，過濾得上清液2，使脫色 后的上清液2的分子量小'于1000道爾頓的組分占水解蛋白總量的70%以上；(7) 選用可截留分子量為1000~800, 800~600， 600~400， 400-200道爾頓的中空纖 維納濾復(fù)合膜對所述的步驟(6)的上清液2進行分級，得到分子量為1000~800， 800~600， 600~400, 400~200道爾頓的級分液，操作條件是壓力為0.6~0.8MPa，反應(yīng)溫度為25~40 x:,控制進料溶液濃度低于5%;(8) 將步驟(7)中各級分液用真空冷凍干燥器(采用真空冷凍干燥器，購自德國阿 爾法公司，儀器型號l-4LD，按照儀器操作說明書進行)處理，得到分子量為1000~800， 800~600, 600~400, 400~200道爾頓的菜籽低聚肽級分產(chǎn)物；(9) 將步驟(7)經(jīng)截留分子量為1000~800, 800~6Q0, 600~400， 400~200道爾頓的 納濾膜的終極透過液在操作壓力300 370psi、反應(yīng)溫度為25 351C、溶液pH值為4 7條 件下，經(jīng)聚酰胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使用；本發(fā)明具有如下優(yōu)點 (1)通過納濾技術(shù)獲得了分子量在1000分子量為1000~800, 800~600， 600~400， 400~200道爾頓以下的菜籽級分低聚肽，400~200分子量為1000~800， 800~600， 600~400, 400~200道爾頓級分肽的分子量分布，是目前世界上分子量段最低的小肽群，具有極強的
生物活性和多樣性。(2) 本發(fā)明采用納濾技術(shù)的特點是可以通過不同分子量截留范圍的納濾膜組合，獲 得多種分子量分布范圍的低聚肽產(chǎn)物，有利于具有整體協(xié)同作用的功能性新產(chǎn)品的開發(fā)， 方法簡單易行。(3) 菜籽蛋白酶解及酶解液分離純化均是在50"以下反應(yīng)溫度完成的，且滅酶時間 短，有利于最大程度的保持菜籽低聚肽的活性。(4) 本發(fā)明菜籽蛋白酶解液的水解度(DH)控制在10~15%之間。這一水解度范圍的 疏水性氨基酸多居于蛋白質(zhì)(或肽)的C、 N端部，弱化了酶解液苦味的形成，不必采用 添加風(fēng)味酶等去苦手段，降低了生產(chǎn)成本。


附圖l:是本發(fā)明菜籽低聚肽的制備工藝流程。附圖2:是表征脫色上清液中分子量分布狀況的凝膠過濾色譜圖。
具體實施方式
以下通過具體實施例對本發(fā)明進一步說明，所舉實施例不是對本發(fā)明保護的限制，只 是對本發(fā)明的更詳細(xì)描述，相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以對該發(fā)明的某些內(nèi)容做出非本質(zhì) 性的調(diào)整和改進。實施例l:以脫毒菜籽粕為原料制備低聚肽按照本說明書前面的《發(fā)明內(nèi)容》描述的工藝步驟和技術(shù)參數(shù)，稱取經(jīng)磨碎、過60目標(biāo)準(zhǔn)篩的脫毒菜籽粕(脫毒菜籽粕的制備參見趙海伶等，菜籽餅粕脫毒工藝參數(shù)的研究，中國油脂，2003， 28(12): 23~27)100kg,加清水2000kg，在3L反應(yīng)釜中20~25匸浸 泡2h，得到浸泡液，用4mol七^NaOH溶液調(diào)pH值至11,加入5kg堿性蛋白酶2709 ("蜜 蜂"牌，購自北京東華強盛生物技術(shù)有限公司)，在反應(yīng)溫度50'C下酶解4h，用lmol丄"HCl 溶液調(diào)pH值至5，在9(TC下滅酶10min，得到酶解液，將該酶解液置4000r'mirT1下離心得 上清液1,用lmol丄"HCl溶液調(diào)上清液1的pH值至4，在50C條件下加入1.5kg活性炭 脫色3小時，4000rmin"下離心、過濾得上清液2。加水調(diào)整上清液2濃度為4%，啟動高 壓泵，將料液打入截留分子量1000分子量為1000~800, 800~600, 600-400， 400-200道 爾頓的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行處理。操作壓力為0.8MPa，溫度為35'C，進料流量 為1500L/h，透過液流量120Uh條件下，經(jīng)120min循環(huán)，檢測透過液濃度為2.5。/。，停 止操作。收集透過液，如上述操作條件下，將透過液依次經(jīng)過800Da、 600Da、 400Da、 200Da 的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行分級，在各濃縮液濃度達45%時停止操作，并收集各部分 濃縮液，得到分子量分布在1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da的低聚肽級 分液，各級分液蛋白含量分別占酶水解液蛋白總量的5%、 10%、 15%、 30%以上。各級 分液經(jīng)真空冷凍干燥器(真空冷凍干燥器，購自德國阿爾法公司，儀器型號卜4LD，按 照儀器操作說明書操作)處理，得到分子量分別為1000~800、 800~600、 600-400和400~200 四種菜籽低聚肽級分產(chǎn)物。經(jīng)200道爾頓納濾膜的透過液在操作壓力為360psi、反應(yīng)溫度 為35X:、溶液pH值為4的條件下，經(jīng)聚酰胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使 用。在本實施例中，油菜籽蛋白水解度為10~15%，脫色上清液中分子量小于1000Da的成 分占水解蛋白總量的70%以上。所得各級分低聚肽液冷凍干燥后外觀色澤呈淺黃色.粉末 狀，指標(biāo)蛋白質(zhì)含量(NX6,25計，干基)％>95, pH值4 7,多酚含量。/。0.5，植酸含量 %<0.2，硫甙不得檢出，游離氨基酸％<1。實施例2:以脫毒菜籽餅為原料制備低聚肽按照實施例l的工藝步驟，稱取經(jīng)磨碎、過70目標(biāo)準(zhǔn)篩的脫毒菜籽餅(趙海伶等，菜籽餅粕脫毒工藝參數(shù)的研究，中國油脂，2003, 28(12): 23~27)150kg,加清水2000kg, 在3L反應(yīng)釜中20 25"浸泡2h,用3mol丄"NaOH溶液調(diào)pH值至10，加入3kg堿性蛋 白酶2709 ("蜜蜂"牌，購自北京東華強盛生物技術(shù)有限公司)，在溫度45'C條件下酶解 3.5h，得到酶解液，用2mol七"HCl溶液調(diào)該酶解液pH值至4.5，在90'C條件下滅酶 10min, 4000r'min"下離心得上清液1 。用2mol丄"HCl溶液調(diào)上清液1的pH值至4，在45 r條件下加入2kg活性炭脫色2,5h， 4000rmin"下離心、過濾得上清液2。加水調(diào)整上清 液濃度為3.5%,啟動高壓泵，將料液打入截留分子量1000Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件 進行處理。在操作壓力0.7MPa，溫度3(TC,進料流量1200L/h，透過液流量100Uh條件 下，經(jīng)150min循環(huán)，檢測透過液濃度為3.(^，停止操作。收集透過液，如上述操作條件 下，將透過液依次經(jīng)過800Da、 600Da、 400Da、 200Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行分 級，在各濃縮液濃度達40%時停止操作，并收集各部分濃縮液，得到分子量分布在 1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da的低聚肽級分液，各級分液蛋白含量分 別占酶水解液蛋白總量的5%、 15。/^、 15。％、 25%以上。按實施例1介紹的真空冷凍千燥 方法對各級分液進行處理，得到1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200De四種菜 籽低聚肽級分產(chǎn)物。經(jīng)200Da納濾膜的透過液在操作壓力370psi、溫度35'C、溶液pH值 5條件下，經(jīng)聚酰胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使用。在本實施例中，油菜 籽蛋白水解度為11~14%，脫色上清液中分子量小于lOOODa的成分占水解蛋白總量的75% 以上。所得各級分低聚肽液冷凍干燥后外觀色澤呈淺黃色，粉末狀，指標(biāo)蛋白質(zhì)含量(N X6,25計，干基)°/。>97， pH值3.5^.5，多酚含量％<0.4，植酸含量％<0.1，硫武不得檢 出，游離氨基酸％<0.5。
實施例3:以菜籽濃縮蛋白為原料制備低聚肽稱取過70目篩的菜籽濃縮蛋白(王海英、吳謀成、曾曉波，丙酮浸提法制取菜籽濃縮蛋白，中國糧油學(xué)報，2001， 16(4): 10 13)100kg,加入清水1500kg，在3L反應(yīng)釜中室 溫20~25"浸泡1. 5h，用2mol丄"NaOH溶液調(diào)pH值至10,加入3kg木瓜蛋白酶(廣西南 寧杰沃利生物制品有限公司)，在溫度45TC條件下酶解3h,用2mol丄"HCl溶液調(diào)pH值至 6,在95X:條件下滅酶8min， AOOOrmin-1下離心得上清液。用lmol丄"HCl溶液調(diào)上清液pH 值至3，在45"條件下加入1.0kg活性炭脫色2h， 4000rmin"下離心、過濾得上清液。加 水調(diào)整上清液濃度為5%,啟動高壓泵，將料液打入截留分子量1000Da的中空纖維納濾復(fù) 合膜組件進行處理。在操作壓力0.7MPa,溫度30C進料流量1800L/h,透過液流量110L/h 條件下，經(jīng)150min循環(huán)，檢測透過液濃度為3.0%,?！啦僮?。收集透過液，如上述操作 條件下，將透過液依次經(jīng)過800Da、 600Da、 400Da、 200Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進 行分級，在各濃縮液濃度達40%時停止操作，并收集各部分濃縮液，得到分子量分布在 1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da的低聚肽級分液，各級分液蛋白含量分 別占酶水解液蛋白總量的5%、 10。％、 15%、 30%以上。按實施例1介紹的真空冷凍千燥 方法對各級分液進行處理，得到1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da四種菜 籽低聚肽級分產(chǎn)鉤。經(jīng)200Da納濾膜的透過液在操作壓力350psi、溫度30"、溶液pH值 5條件下，經(jīng)聚酰胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使用。在本實施例中，油菜 籽蛋白水解度為10~13%，脫色上清液中分子量小于1000Da的成分占水解蛋白總量的70% 以上。所得各級分低聚肽液冷凍干燥后外觀色澤呈淺黃色，粉末狀，指標(biāo)蛋白質(zhì)含量(N X6.25計，干基)％》％， pH值"，多酚含量％<0.3,植酸含量％<0.15，硫甙不得檢出， 游離氨基酸為％<0.8。實施例4:以菜籽清蛋白為原料制備低聚肽稱取過80目標(biāo)準(zhǔn)篩的菜籽清蛋白粉(薛照輝、吳謀成、尹經(jīng)章、阮征，脫脂華雜3號菜籽餅粕分離蛋白的制備及其特征，食品科學(xué)，2004， 25(4): 25~28)100kg,加入清水 1000kg，在2L反應(yīng)釜中20~25"浸泡lh，用4mol丄"NaOH溶液調(diào)pH值至10.5，加入2kg 胃蛋白酶(購自重慶奧力生物制藥有限公司)、lkg胰蛋白酶(購自重慶奧力生物制藥有限公 司)，在溫度301C條件下酶解2h，用4mol丄"HCl溶液調(diào)pH值至6.8，在IOO'C條件下滅酶 5min， AOOOrmiif1下離心得上清液1。用4mol丄"HCl溶液調(diào)上清液1的pH值至2.8，在30 "C條件下加入0,5kg活性炭脫色lh， 4000rmin"下離心、過濾得上清液2。加水調(diào)整上清 液2濃度為3.5%，啟動高壓泵，將料液打入截留分子量1000Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行處理。在操作壓力為0.65MPa，溫度25TC，進料流量2000L/h,透過液流量150L/h 條件下，經(jīng)100min循環(huán)，檢測透過液濃度為2.0%，停止操作。收集透過液，如上述操作 條件下，將透過液依次經(jīng)過800Da、 600Da、 400Da、 200Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進 行分級，在各濃縮液濃度達35。^時停止操作，并收集各部分濃縮液，得到分子量分布在 1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da的低聚肽級分液，各級分液蛋白含量分 別占酶水解液蛋白總量的5%、 5%、 20%、 25%以上。按實施例1介紹的真空冷凍干燥方 法對各級分液進行處理，得到分子量為1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da 的低聚肽級分液四種菜籽低聚肽級分產(chǎn)物。經(jīng)200Da納濾膜的透過液在操作壓力350psi、 溫度25匸、溶液pH值6條件下，經(jīng)聚酰胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使用。 在本實施例中，油菜籽蛋白水解度為13~15%，脫色上清液中分子量小于1000Da的成分占 水解蛋白總量的80%以上。所得各級分低聚肽液冷凍干燥后外觀色澤呈淺黃色，粉末狀， 指標(biāo)蛋白質(zhì)含量(NX6.25計，干基)％>95， pH值3"^6,多酚含量％<0.4，植酸含量％<0.2, 硫甙不得檢出，游離氨基酸％<0.6。實施例5:以菜籽濃縮蛋白及菜籽分離蛋白為原料制備低聚肽稱取經(jīng)磨碎，過60目標(biāo)準(zhǔn)篩的脫毒菜籽粕、過70目標(biāo)準(zhǔn)篩的脫毒菜籽餅(趙海伶、.李學(xué)剛、何國菊，菜籽餅粕脫毒工藝參數(shù)的研究，中國油脂，2003， 28(12): 23~27)各 50kg，攪拌、混合，加入清水2000kg，在3L反應(yīng)釜中20 25"浸泡1.5h，得到浸泡液， 將該浸泡液用lmol丄"NaOH溶液調(diào)pH值至11，加入5kg2709堿性蛋白酶("蜜蜂"牌， 北京東華強盛生物技術(shù)有限公司)，在溫度45TC條件下酶解1.5h，得到酶解液，用 2mol七"HCl溶液調(diào)酶解液的pH值至6.5，在IOO"條件下滅酶5min, 4000rmin"下離心得 上清液1 。用2mol丄"HCl溶液調(diào)上清液1的pH值至2.5，在25'C條件下加入0.8kg活性 炭脫色0,5h， 4000rmin"下離心、過濾得上清液2。加水調(diào)整上清液2濃度為3.0%，啟動 髙壓泵，將料液打入截留分子量1000Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行處理。在操作壓 力0.60MPa，溫度25"，進料流量1500L/h，透過液流量120L/h條件下，經(jīng)90min循環(huán)， 檢測透過液濃度為1.5%,停止操作。收集透過液，如上述操作條件下，將透過液依次經(jīng) 過800Da、 600Da、 400Da、 200Da的中空纖維納濾復(fù)合膜組件進行分級，在各濃縮液濃度 達50%時停止操作，并收集各部分濃縮液，得到分子量分布在1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da的低聚肽級分液，各級分液蛋白含量分別占酶水解液蛋白總量的5 %、 10。％、 20%、 35%以上。按實施例l介紹的真空冷凍干燥方法對各級分液進行處理.， 得到分子量為1000~800Da、 800~600Da、 600~400Da、 400~200Da四種菜籽低聚肽級分產(chǎn)物。
經(jīng)200Da納濾膜的透過液在操作壓力370psi、溫度2500、溶液pH值6.5條件下，經(jīng)聚酰 胺反滲透膜組件除雜凈化，作為過程水循環(huán)使用。在本實施例中，油菜籽蛋白水解度為 12~14%，脫色上清液中分子量小于1000Da的成分占水解蛋白總量的75n/。以上。所得各級 分低聚肽液冷凍千燥后外觀色澤呈淺黃色，粉末狀，指標(biāo)蛋白質(zhì)含量(NX6,25計，干基) %>95, pH值5 7,多酚含量％<0.5,植酸含量％<0.1,硫甙不得檢出，游離氨基酸％<1。
權(quán)利要求
1、一種菜籽低聚肽的制備方法，特征在于，它包括以下步驟將含蛋白質(zhì)的油菜籽原料或初步提取蛋白的材料磨碎，過60～80目標(biāo)準(zhǔn)篩備用，得到處理樣品；取所述的處理樣品100重量份，加水1000～2000重量份，在反應(yīng)釜中于20～25℃下，浸泡1～2h，用1～4mol·L-1NaOH溶液調(diào)pH值至9～12，加入1～5重量份堿性蛋白酶，在30～50℃條件下酶解1～5h，得到酶解液，將該酶解液用1～4mol·L-1HCl溶液調(diào)pH值至5～7，在90～100℃條件下滅酶5～10min，得到水解液，將該水解液置4000r·min-1下離心得上清液1，用1～4mol·L-1HCl溶液調(diào)該上清液1的pH值至2～4，在30～50℃條件下加入0.5～1.5重量份活性炭脫色1～3h，4000r·min-1下離心，過濾得上清液2；采用納濾分級方法，分別用截留分子量為1000～800，800～600，600～400，400～200道爾頓的中空纖維納濾復(fù)合膜組件，對所述的上清液2進行分級，得到菜籽低聚肽級分液，對各級分液進行真空濃縮和冷凍干燥得到分子量為1000～800，800～600，600～400和400～200道爾頓的菜籽低聚肽級分產(chǎn)物；采用反滲透處理凈化納濾分級的終極透過液，得到過程循環(huán)水，其中納濾分級的工藝條件是操作壓力為0.6～0.8MPa，反應(yīng)溫度為25～40℃，控制進料溶液濃度低于5％，所述的反滲透處理的工藝條件是操作壓力300～370psi，反應(yīng)溫度為25～35℃，調(diào)溶液的pH值至4～7。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的含蛋白質(zhì)的油菜籽原料或初步 提取蛋白的材料選自脫毒處理的油菜籽餅或油菜籽粕，油菜籽濃縮蛋白或/和油菜籽分離蛋白 中的任--種或是上述油菜籽餅和油菜籽粕的組合，或是油菜籽濃縮蛋白和油菜籽分離蛋白的 組合。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的堿性蛋白酶選自胃蛋白酶、胰 蛋白酶、木瓜朊酶或/和毒菌蛋白酶中的其中一種或其組合。
4、 權(quán)利要求1-3任一項所述方法制備得到的油菜籽低聚肽級分產(chǎn)物。
5、 權(quán)利要求4所述的油菜籽低聚肽級分產(chǎn)物，其分子量為1000~800， 800~600， 600-400, 和400~200道爾頓。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取領(lǐng)域。涉及從油菜蛋白原料中制備菜籽低聚肽的方法及產(chǎn)品。步驟是將原料磨碎過60～80目篩，取樣品100重量份，加水1000～2000重量份，在20～25℃反應(yīng)釜中，浸泡1～2h，用1～4mol·L^-1NaOH溶液調(diào)pH值至9～12，加1～5重量份堿性蛋白酶，30～50℃酶解1～5h，用1～4mol·L^-1HCl調(diào)酶解液pH至5～7，在90～100℃下滅酶5～10min，得到水解液，將該水解液置4000r·min^-1下離心得上清液1，用1～4mol·L^-1HCl溶液調(diào)上清液1的pH至2～4，在30～50℃下加0.5～1.5重量份活性炭脫色1～3h，4000r·min^-1下離心，過濾得上清液2；采用納濾分級方法對級分液真空冷凍干燥，得到分子量為1000～800，800～600，600～400和400～200道爾頓的菜籽低聚肽級分產(chǎn)物，采用反滲透處理終極透過液，得到過程循環(huán)水。本發(fā)明制備的菜子低聚肽可作為保健品的原料用于進一步開發(fā)。
文檔編號C12P21/02GK101153311SQ20071005338
公開日2008年4月2日 申請日期2007年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日
發(fā)明者吳謀成, 肖志剛, 袁俊華 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)