專利名稱：：Glp-2模擬體、多肽、組合物、方法和用途的制作方法GLP-2沖莫擬體、多肽、組合物、方法和用途發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及哺乳動(dòng)物GLP-2多肽和模擬體，以及它們作為治療劑的用途。發(fā)明背景胰高血糖素樣肽2(GLP-2)是經(jīng)胰高血糖素原的翻譯后加工產(chǎn)生的33個(gè)氨基酸的促腸肽激素(Orskov等，F(xiàn)EBSLett.247:193-196(1989);Hartmann等，Peptides21:73-80(2000))。在哺乳動(dòng)物中，由于激素原轉(zhuǎn)化酶在腸內(nèi)分泌細(xì)胞中的細(xì)胞特異性表達(dá)，GLP-2由腸和腦中的胰高血糖素原釋放，但不由胰腺中的胰高血糖素原釋放(Dhanvantari等，Mol.Endocrinol.10:342-355(1996);Rothenberg等，Mol.Endocrinol.10:334-341(1996);Damholt等，Endocrinology140:4800-4808(1999);Hoist,TrendsEndocrinolMetab.10:229-235(1999))。使用高效液相層析和位點(diǎn)特異性GLP-2抗血清的組合分析大鼠和人血漿揭示，存在兩種主要的循環(huán)分子形式GLP-2""和GLP-23-33(Hartmann等，出處同上；Brubaker等，Endocrinol.138:4837-4843(1997);Hartmann等，J.Clin.Endocrinol.Metab.85:2884-2888(2000))。GLP-2Ws在體內(nèi)被蛋白酶二肽基肽酶IV(Dppiv)切割，二肽基肽酶IV去除前兩個(gè)殘基組氨酸和丙氨酸(HA)。產(chǎn)生的肽GLP-23—33基本上無活性。GLP-2調(diào)節(jié)胃動(dòng)力、胃酸分泌、腸己糖運(yùn)輸，并增加腸上皮的屏障功能(綜迷于Drucker,J.Clin.Endocr.Metab.86:1759-1764(2001))。其通過刺激隱窩細(xì)胞增殖以及抑制腸細(xì)胞和隱窩區(qū)凋亡顯著增加粘膜上皮的表面積。(Drucker等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:7911-7916(1996))。GLP-2降低小腸炎和大腸炎的死亡率，減少粘膜損傷、細(xì)胞因子表達(dá)和細(xì)菌敗血癥(Boushey等，Am.J.Physiol.277:E937-E947(1999);Prasad等,J.Pediatr.Surg.35:357-359(2000》。GLP-2還增強(qiáng)患有短腸綜合征(SBS)的嚙齒動(dòng)物或人的營養(yǎng)吸收和腸適應(yīng)(Jeppesen等，Gastroenterology120:806-815(2001))。GLP-2的作用由GLP-2受體(GLP-2R)轉(zhuǎn)導(dǎo)，GLP-2受體是在胃、小腸、結(jié)腸的腸內(nèi)分泌細(xì)胞以及腸神經(jīng)元和內(nèi)皮下肌成纖維細(xì)胞中表達(dá)的G蛋白偶聯(lián)受體(Munroe等，Proc.Natl.Acad.SciU.S.A.96:1569-1573(1999);Yusta等，Gastroenterology119:744-755(2000);Bjerknes等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.98:12497-12502(2001);Orskov等，Regul.Pept.124:105-112(2005))。在表達(dá)GLP-2受體的轉(zhuǎn)染幼年倉鼠腎成纖維細(xì)胞(BHK-GLP-2R細(xì)胞)中直接活化GLP-2R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)賦予對(duì)環(huán)己酰亞胺誘導(dǎo)的凋亡的抗性(Yusta等，J.Biol.Chem.275:35345-35352(2000))。GLP-2的細(xì)胞保護(hù)、修復(fù)和能量保留特性提示，GLP-2潛在地可用于治療特征在于腸粘膜上皮的損傷和/或功能異常的人類疾病。腸上皮損傷可見于包括克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎的炎性腸病(IBD)患者，以及可見于與腸中的炎性反應(yīng)有關(guān)的自身免疫病(例如乳糜瀉)患者(綜述于Hanauer,NewEnglandJ.Med.334:841-848(1996))。另外，某些化療藥物引起腸上皮的損傷，產(chǎn)生劑量限制性的毒性副作用(Oster，Oncology13:41(1999))。還報(bào)告急性胰腺炎時(shí)的腸滲透性增加(Kouris等，Am.J.Surg.181:571-575(2001))，其可能通過允許大分子進(jìn)入內(nèi)皮下區(qū)室而促發(fā)食物變態(tài)反應(yīng)(Troncone等，Allergy49:142-146(1994))。作為營養(yǎng)吸收中的重要調(diào)節(jié)激素，GLP-2還有希望治療短腸綜合征(SBS)患者(Dmcker等，出處同上；Rubin,Gastroenterol.117:261-263(1999);Nightingale,Gut45:478-479(1999》。SBS被定義為由顯著長度的小腸的形態(tài)或功能損失引起的吸收障礙(綜述于Jeppesen,丄Nutr.133:3721-3724(2003))。短腸綜合征的病因在成人和兒童之間不同在成人中，其最經(jīng)常是針對(duì)克羅恩氏病或腸系膜梗阻的手術(shù)之后的結(jié)果；而在嬰兒中，病因更通常包括壞死性小腸結(jié)腸炎、腹裂、閉鎖和腸扭轉(zhuǎn)(Platell等，WorldJ.Gastroenterol.8:13-20(2002))。替度魯肽(Teduglutide)為DPP-IV抗性的GLP-2肽類似物(其中丙氨酸-2被甘氨酸取代(A2G))，正被開發(fā)用于胃腸(GI)疾病的潛在治療，所述疾病包括SBS、克羅恩氏病和兒科GI疾病。替度魯肽還具有治療與癌癥化療相關(guān)的粘膜炎和IBD的潛力。然而，由于4齊度魯肽的分子量低，所以該肽因半衰期不足30分鐘而被快速清除。因此，需要每曰給藥來保持治療劑水平(Shin等，Curr.Opin.Endocrin.Diabetes12:63-71(2005))。因此，需要修飾的GLP-2,其將克服短半衰期，同時(shí)保持其功能，并保證易于開發(fā)和制造。炎性腸梗阻為侵入性手術(shù)或外傷性損傷之后的協(xié)調(diào)胃腸動(dòng)力的短暫損傷，仍是臨床上的大問題，延長住院期，并經(jīng)常在康復(fù)期當(dāng)中促發(fā)藥物并發(fā)癥(Holte和Kehlet,Br.J.Surg.87:1480-1493(2000》。腸梗阻的特征在于延遲的胃排空、小腸和結(jié)腸的擴(kuò)張、腹脹、失去正常推進(jìn)收縮模式和不能排空氣體或糞便，導(dǎo)致患者不適延長(腹脹、惡心、嘔吐)。在諸如老年人或心肺損傷患者的易感個(gè)體中，腸梗阻可產(chǎn)生更嚴(yán)重的并發(fā)癥，包括急性胃擴(kuò)張、心律失常、呼吸窘迫、吸入性肺炎和不能手術(shù)吻合。在嚴(yán)重情況下，長期失去GI道的正常"看家(houseke印ing)"收縮活性可促發(fā)細(xì)菌過度生長和腸屏障功能的破壞，之后細(xì)菌移位，并進(jìn)入系統(tǒng)循環(huán)(Anup和Balasubmmanian,J.Surg.Res.92:291-300(2000))。這又可導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥、敗血癥、多器官衰竭，并最終導(dǎo)致老年患者最易感的結(jié)果一死亡。即便在沒有并發(fā)癥時(shí)，正常腸功能的恢復(fù)也是患者出院的主要限制因素，炎性腸梗阻增加住院期達(dá)3-5天。因此，死亡率增加和住院期延長增加的成本可能是顯著的。促使腸梗阻發(fā)展和維持的因素包括將去甲腎上腺素釋放到腸壁中的中樞交感抑制反射的活化、抑制性體液物質(zhì)、麻醉劑和止痛劑以及炎性介導(dǎo)物(Livingston和Passaro,Dig.Dis.Sci.35:121-132(1990);Bauer等，Curr.Opin.Crit.Care8:152-157(2002》。嚙齒動(dòng)物研究的結(jié)果提示，GI道壁中的炎癥在發(fā)作和維持腸梗阻方面起核心作用。使用手術(shù)后腸梗阻的嚙齒動(dòng)物模型的研究表明，外肌層為高度免疫活性區(qū)室。一般定居于外肌層中的是大量普通白細(xì)胞(Mikkelsen,Histol.Histopathol.10:719-736(1995);Kalff等，Ann.Surg.228:652-663(1998))。其中最豐富的是定居的巨噬細(xì)胞，其形成了由食道至結(jié)腸的廣泛細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，隨時(shí)保護(hù)胃腸道免遭潛在的損傷和疾病。在腹部手術(shù)當(dāng)中的腸失調(diào)活化該巨噬細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，啟動(dòng)局部分子炎性反應(yīng)。活化的巨噬細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子(IL-6、IL-1(5、TNFa)和趨化因子(MCP-l)，它們抑制肌層中的神經(jīng)肌肉聯(lián)系，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮上的粘附分子(ICAM-1、P-選擇素)表達(dá)(Kalff等，J.Leukoc.Biol.63:683-691(1998);Josephs等,J.Surg.Res.86:50-54(1999);Kalff等,Gastroenterology117:378-387(1999);Kalff等，Gastroenterology118:316-327(2000);Wehner等，Surgery137:436-46(2005))。這又產(chǎn)生以由系統(tǒng)循環(huán)募集白細(xì)胞(單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞)為特征的細(xì)胞炎性反應(yīng)，其中在炎性細(xì)胞浸潤程度和腸梗阻嚴(yán)重性之間存在正相關(guān)(Kalff等，Surgery126:498-509(1999》。浸潤白細(xì)胞釋放額外的細(xì)胞因子以及前列腺素、一氧化氮、蛋白酶和活性氧物質(zhì)，它們進(jìn)一步促發(fā)神經(jīng)肌肉功能障礙(vonRitter等，Gastroenterology97:605-609(1989);Bielefeldt和Conklin,Dig.Dis.Sci.42:878-884(1997》。迄今為止，在臨床中幾乎沒有可用于治療炎性腸梗阻的選擇。業(yè)已表明，諸如西沙比利和新斯的明的促動(dòng)力藥改善手術(shù)后腸動(dòng)力(Shibata和Toyoda,Surg.Today28:787-791(1998》。然而，結(jié)果前后矛盾，且這些藥物的心血管副作用風(fēng)險(xiǎn)增加，這些心血管副作用就嚴(yán)重性和患者易感性而言已^^皮證實(shí)難以預(yù)測(cè)。已在動(dòng)物研究中表明8COX-2抑制劑起抗手術(shù)后小腸蠕動(dòng)異常的保護(hù)作用(Schwarz等，Gastroenterology121:1354-1371(2001)),但對(duì)結(jié)腸蠕動(dòng)異常幾乎沒有作用(Turler等，Anal.Surg.,231(1):56-66(2002))。完成了對(duì)比塞來昔布和羅非昔布的人體I期臨床試驗(yàn)(Bouras等，Neurogastroenterol.Modi.16:729-735(2004))，未發(fā)現(xiàn)哪一種藥物改善手術(shù)后動(dòng)力性。業(yè)已提議將手術(shù)后快速恢復(fù)進(jìn)食作為刺激正常激素調(diào)節(jié)的腸動(dòng)力才莫式的方法。發(fā)現(xiàn)該方法加速腸功能的恢復(fù)，而且用作腸恢復(fù)多樣才莫式方法的一部分時(shí)改善一部分患者的舒適性(Holte&Kehlet,Minerva.Anestesiol.,68(4):152-156(2002))。但是，該治療不會(huì)導(dǎo)致住院期長度顯著下降。而且，對(duì)激素模式的足夠刺激需要許多患者不能耐受的熱載量閾值。其中一種有助于延長的腸梗阻發(fā)展的最常見因素是給予鴉片類鎮(zhèn)痛劑，用于減輕手術(shù)后疼痛。鴉片類物質(zhì)通過與大腦的疼痛處理中心中的神經(jīng)元上存在的3種受體亞型中的一種或多種相互作用發(fā)揮它們的鎮(zhèn)痛作用。最新的鴉片類鎮(zhèn)痛劑如嗎啡主要通過活化p和S鴉片類受體起作用。但是，這些相同的受體還在控制腸動(dòng)力性的胃腸道中的神經(jīng)元上表達(dá)。無論存在還是不存在炎性腸梗阻，受體的活化都顯著抑制胃腸收縮功能，引起腸淤積和便秘。AdalorCorporation已使用愛維莫潘進(jìn)行了I期和II期臨床試驗(yàn)，愛維莫潘是外圍限制性和選擇性的)i-OR拮抗劑，不穿過血腦屏障。當(dāng)連同鴉片類鎮(zhèn)痛劑聯(lián)合給予時(shí)，愛維莫潘阻止鴉片類鎮(zhèn)痛劑誘導(dǎo)的腸動(dòng)力性抑制(Gonenne等，Clin.Gastroenterol.Hepatol.3:784-791(2005))。在與安慰劑相比時(shí)，發(fā)現(xiàn)愛維莫潘加速腸功能恢復(fù)，在進(jìn)行腹部手術(shù)后經(jīng)歷輕微至中等手術(shù)后腸梗阻的患者縮短了住院期(Viscusi等，Surg.Endosc.20:64-70(2006))。愛維莫潘對(duì)炎癥沒有影響。迄今為止，沒有可用于治療炎性腸梗阻的安全且可靠的治療選擇。目前可用的最有效的治療法實(shí)際上是輔助性的，或者改善鴉片類鎮(zhèn)痛法的復(fù)合效應(yīng)。它們沒有解決作為腸梗阻基礎(chǔ)病因的炎癥。因此，仍然存在明顯未被滿足的醫(yī)療需求。附圖簡(jiǎn)述圖1表明，GLP-2模擬體Pro取代變體(SEDIDNO:43和44)與U937細(xì)胞裂解物溫育后的SDS-PAGE凝膠圖像。圖2表明，用A2GGLP-2模擬體治療小鼠的粘膜刮屑的濕重劑量依賴性增加。圖3表明，在A2G-GLP-2肽治療小鼠中腸轉(zhuǎn)運(yùn)顯著加速。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過非配對(duì)StudentT檢驗(yàn)確定。圖4表明，在A2GGLP-2模擬體治療小鼠中腸轉(zhuǎn)運(yùn)顯著加速。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過非配對(duì)StudentT檢驗(yàn)確定。圖5表明，在鼠A2GGLP-2模擬體治療小鼠中與手術(shù)后炎性腸梗阻相關(guān)的胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)延遲顯著衰減。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過ANOVA后接Bonferroni事后檢驗(yàn)確定。圖6顯示了在腹部手術(shù)后具有含增加數(shù)量的髓過氧物酶(MPO)的白細(xì)胞的腸肌層整封標(biāo)本。用鼠A2GGLP-2模擬體治療顯著降低浸潤細(xì)胞的數(shù)目，而IgG2a沒有作用。圖7顯示了采用已編輯的圖6細(xì)胞計(jì)數(shù)的直方圖。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性通過ANOVA后接Bonferroni事后檢驗(yàn)確定。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面是具有通式(n)的模擬體(GLP2RAg-Lk-V2-Hg-CH2-CH3)(t)(II)其中GLP2RAg為哺乳動(dòng)物GLP-2R激動(dòng)劑，Lk為多肽或化學(xué)4定，V2為免疫球蛋白可變區(qū)C末端的一部分，Hg為免疫球蛋白可變鉸鏈區(qū)的至少一部分，CH2為免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，CH3為免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)，t獨(dú)立地為l-10的整數(shù)。本發(fā)明的另一方面是模擬體，其包含具有示于SEQIDNO:4、5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、75或77的序列的多肽。本發(fā)明的另一方面是多核普酸，其包含具有示于SEQIDNO:12、13、14、15、16、17、18、46、47、48、49、66、67、68、69、70、71、72、73、76或78的序列或互補(bǔ)序列的多核苷酸。本發(fā)明的另一方面是多核苷酸，其包含編碼示于SEQIDNO:4、5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、75或77的氨基酸序列的多核苦酸。本發(fā)明的另一方面是多肽，其包含具有示于SEQIDNO:52、54、55或74的序列的多肽。本發(fā)明的另一方面是多核普酸，其包含編碼示于SEQIDNO:52、54、55或74的氨基酸序列的多核苷酸。本發(fā)明的另一方面是減輕疾病癥狀或治療疾病的方法，所述疾病的特征在于腸粘膜上皮的損傷和/或功能障礙，所述方法包括給予其需要的患者GLP-2多肽組合物或GLP-2才莫擬體組合物。本發(fā)明的另一方面是預(yù)防炎性腸梗阻、減輕炎性腸梗阻癥狀或治療炎性腸梗阻的方法，其包括給予其需要的患者GLP-2多肽組合物或GLP-2模擬體組合物。發(fā)明詳迷在本說明書中提及的所有出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，都如同完整陳述一樣在此引入作為參考。單字母氨基酸密碼如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的一樣在本文使用。免疫球蛋白恒定區(qū)中的氨基酸殘基編號(hào)基于為野生型IgGl或IgG4Fc結(jié)構(gòu)域中的N末端氨基酸的殘基編號(hào)。本發(fā)明提供具有哺乳動(dòng)物GLP-2特性和活性的蛋白構(gòu)建體。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是模擬不同類型的免疫球蛋白分子(例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)及其任何亞類(例如IgAl、IgA2、IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)或其組合的蛋白構(gòu)建體，在后文稱為"GLP-2才莫擬體"或僅稱為"模擬體"。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是為GLP-2變體的多肽，其中所述多肽具有野生型分子的特性和活性。本發(fā)明還提供編碼GLP-2才莫擬體、多肽的核酸、包含這些核酸的載體、宿主細(xì)胞、制備和使用GLP-2才莫擬體和多肽的組合物和方法。GLP-2模擬體、多肽和組合物一般地講，本發(fā)明涉及具有通式(I)的模擬體多肽(Pep-Lk-V2-Hg-CH2-CH3)(t)(I)其中Pep為具有需要的生物特性的多肽，Lk為多肽或化學(xué)鍵，V2為免疫球蛋白可變區(qū)C末端的一部分，Hg為免疫球蛋白鉸鏈區(qū)的至少一部分，CH2為免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，CH3為免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)，t獨(dú)立地為l-10的整數(shù)。更具體地說，本發(fā)明涉及能夠在結(jié)合時(shí)活化GLP-2R的GLP-2模擬體多肽。所述多肽具有通式(II):(GLP2RAg-Lk-V2-Hg-CH2-CH3)(t)(II)其中GLP2RAg為哺乳動(dòng)物GLP-2R激動(dòng)劑，Lk為多肽或化學(xué)4定，V2為免疫球蛋白可變區(qū)C末端的一部分，Hg為免疫球蛋白鉸鏈區(qū)的至少一部分，CH2為免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，CH3為免疫球蛋白重鏈Q(jìng)i3恒定區(qū)，t獨(dú)立地為1-10的整數(shù)。本文使用的"GLP-2R激動(dòng)劑"包括在結(jié)合GLP-2R時(shí)活化GLP-2R的任何分子。GLP-2R激動(dòng)劑包括野生型哺乳動(dòng)物GLP-2和GLP-2的肽類似物。代表性的野生型GLP-2肽具有示于SEQIDNO:l的氨基酸序列。已知天然GLP-2中的某些氨基酸殘基可被其它氨基酸殘基取代，類似物保持野生型GLP-2的GLP-2R結(jié)合特性。例如，野生型人GLP-2肽的Ala2可被Ser(A2S)或Gly(A2G)取代。獲得的氨基酸序列分別示于SEQEDNO:2和3。在本發(fā)明中，已開發(fā)了用作GLP-2R激動(dòng)劑的野生型人GLP-2的新類似物。這些類似物的氨基酸序列示于以下所示的SEQIDNO:50、51、52、53、54、55、56、57和74(針對(duì)野生型GLP-2命名的突變)。這些類似物可用作才莫擬體的GLP2RAg組分。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>已觀察到GLP-2肽可自締合，造成了均一治療候選物的開發(fā)和制造問題。參見美國專利申請(qǐng)公布號(hào)20040122210Al。如在以下的實(shí)施例中所述，具有示于SEQIDNO:52、54、55和74的氨基酸序列的多肽被設(shè)計(jì)成于pH7.5為單體，具有降低的螺旋傾向性。因此，這些人GLP-2肽類似物在^t擬體構(gòu)建體中或作為棵治療肽時(shí)應(yīng)特別有用。在本發(fā)明的模擬體中，連接物部分(Lk)通過使才莫擬體具有可變的方向和結(jié)合特性而提供了結(jié)構(gòu)靈活性。代表性的連接物包括非肽化學(xué)鍵或通過肽鍵連接的l-20個(gè)氨基酸，其中所述氨基酸選自20個(gè)天然氨基酸。連接物部分可包含大部分在結(jié)構(gòu)上不受阻礙的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸，包括GS、GGGS(SEQIDNO:19)、GSGGGS(SEQIDNO:20)及其聚合物或組合。在本發(fā)明范圍內(nèi)的其它代表性連接物可長于20個(gè)殘基，并可以包括非甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸的殘基。在本發(fā)明的模擬體中，V2是免疫球蛋白可變區(qū)(例如重鏈可變區(qū))C末端結(jié)構(gòu)域的一部分。代表性的V2氨基酸序列為GTLVTVSS(SEQIDNO:21)。業(yè)已表明，O-糖基化可在V2區(qū)的兩個(gè)Tyr殘基處發(fā)生，但糖基化程度高度依賴于宿主細(xì)胞系，并還有可能受到培養(yǎng)條件影響。O-聚糖可用于阻斷聚集和蛋白水解，導(dǎo)致體內(nèi)穩(wěn)定性更大。然而，由于不均一性和較差的重現(xiàn)性，可能需要廢除O-糖基化。因此，替代的代表性V2氨基酸序列為GALVAVSS(SEQIDNO:22)。在本發(fā)明的模擬體中，Hg為免疫球蛋白可變區(qū)(例如重鏈可變區(qū))鉸鏈結(jié)構(gòu)域的一部分。代表性的Hg氨基酸序列包括EPKSCDKTHTCPPCP(SEQIDNO:23)、EPKSADKTHTCPPCP(SEQIDNO:24)、ESKYGPPCPSCP(SEQIDNO:25)、ESKYGPPCPPCP(SEQIDNO:26)和CPPCP(SEQIDNO:27)。在本發(fā)明的模擬體中，CH2為免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)。代表性的CH2氨基酸序列包括APEIXGGPSWLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(SEQIDNO:28)、APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(SEQIDNO:29)、KEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK(SEQIDNO:30)和APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAK(SEQIDNO:31)。在本發(fā)明的沖莫擬體中，CH3為免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)。代表性的CH3氨基酸序列包括固EALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:32)和MHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQIDNO:33)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明模擬體的CH3區(qū)在某些重組系統(tǒng)中表達(dá)時(shí)其C-末端氨基酸可被切除。在本發(fā)明的模擬體中，免疫球蛋白分子的FcRn清道夫受體結(jié)合位點(diǎn)保留在CH2和CH3區(qū)的接合處。因?yàn)镕cRn結(jié)合能夠?qū)⒈话嫷拿庖咔虻鞍追祷氐桨忾g隙，所以預(yù)期GLP-2才莫擬體的半衰期相對(duì)于GLP-2肽將顯著延長。在本發(fā)明模擬體的一個(gè)實(shí)施方案中，單體結(jié)構(gòu)(GLP2-Lk-V2-Hg-CH2-CH3)可非共價(jià)地或通過共價(jià)鍵(例如但不限于Cys-Cys二硫一睫)連接至其它單體。IgGl和IgG4亞類在鉸鏈區(qū)中的半胱氨酸數(shù)目不同。和IgGl亞類一樣，在IgG4鉸鏈中有兩個(gè)半胱氨酸參與重鏈之間的二硫鍵鍵合。但是，在IgGl鉸鏈中一般涉及和輕鏈二硫鍵鍵合的半胱氨酸在IgG4鉸鏈中不存在。因此，IgG4鉸鏈不如IgGl鉸鏈靈活。另外，兩種同種型介導(dǎo)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)的能力不同。CDC是存在補(bǔ)體時(shí)靶的裂解。補(bǔ)體活化途徑因補(bǔ)體系統(tǒng)的第一個(gè)組分(C1q)與復(fù)合關(guān)連抗原的分子的結(jié)合而啟動(dòng)。IgGl是補(bǔ)體級(jí)聯(lián)和隨后的CDC活性的強(qiáng)誘導(dǎo)物，而IgG4幾乎沒有補(bǔ)體誘導(dǎo)活性。ADCC是細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)Fc受體(FcR)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺傷(KK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識(shí)別靶細(xì)胞上的結(jié)合抗體，隨后引起靶細(xì)胞裂解。IgGl亞類以高親和性結(jié)合Fc受體，并有助于ADCC，而lgG4僅微弱結(jié)合。IgG4相對(duì)不能活化效應(yīng)子功能是合乎需要的，因?yàn)橛锌赡茉跊]有細(xì)胞殺傷作用的情況下將模擬體傳送至細(xì)胞。而且，在lgG4和IgGl同種型中存在FcRn清道夫受體的結(jié)合位點(diǎn)，二者具有類似的結(jié)合特征。因此，預(yù)期本發(fā)明的IgGl和lgG4模擬體的藥代動(dòng)力學(xué)是類似的。免疫球蛋白區(qū)的鉸鏈-CH2-CH3部分(Hg-CH2-CH3)也可以被廣泛修飾，以形成符合本發(fā)明的變體。例如，可去除提供沖莫擬體分子不需要的結(jié)構(gòu)特征或功能活性的一個(gè)或多個(gè)天然位點(diǎn)。這些位點(diǎn)例如可通過取代或缺失殘基、向所述位點(diǎn)插入殘基或截?cái)嗪鑫稽c(diǎn)的部分而被去除。下文討論了代表性的Hg-CH2-CH3變體。1.涉及二硫鍵形成的位點(diǎn)可通過缺失或被本發(fā)明模擬體中的其它氨基酸取代而被去除。典型地，存在于這些基序中的半胱氨酸殘基被去除或取代。這些位點(diǎn)的去除可避免與生產(chǎn)模擬體的宿主細(xì)胞中存在的其它含半胱氨酸的蛋白二硫鍵鍵合，或者避免基于IgG4的構(gòu)建體中的重鏈內(nèi)二硫鍵鍵合，同時(shí)仍允許非共價(jià)保持在一起的二聚化CH3-CH2-鉸鏈結(jié)構(gòu)域存在。大部分IgG型抗體，例如IgGl，是由兩個(gè)相同重(H)鏈和兩個(gè)相同輕(L)鏈組成的同二聚化分子，通?？s寫為H2L2。因此，這些分子就抗原結(jié)合而言一般是2價(jià)的，即IgG分子的兩個(gè)抗原結(jié)合(Fab)臂具有相同的結(jié)合特異性。IgG4同種型重鏈在它們能夠形成重鏈間或重鏈內(nèi)二辟d建的鉸鏈區(qū)中包含CPSC(SEQIDNO:34)基序，即CPSC基序中的兩個(gè)Cys殘基可與其它H鏈中的對(duì)應(yīng)Cys殘基二硫鍵鍵合(之間)，或者給定CPSC基序中的兩個(gè)Cys殘基彼此可以二硫鍵鍵合(之內(nèi))。據(jù)信體內(nèi)異構(gòu)酶能夠?qū)gG4分子的重鏈間鍵轉(zhuǎn)變?yōu)橹劓渻?nèi)鍵，反之亦然(Aalberse和Schuurman，Immunology105,9-19(2002》。因此，因?yàn)槟切㊣gG4分子中的HL對(duì)與鉸鏈區(qū)中的重鏈內(nèi)鍵彼此不共價(jià)結(jié)合，所以它們可解離為HL單體，然后HL單體與來自其它IgG4分子的HL單體再結(jié)合，形成雙特異性的異二聚化IgG4分子。在雙特異性IgG抗體中，抗體分子的兩個(gè)Fab的不同之處在于它們結(jié)合的表位。用Pro取代IgG4鉸鏈區(qū)中的Ser228產(chǎn)生"IgGl樣行為"，即所述分子在重鏈之間形成穩(wěn)定的二硫鍵，因此對(duì)與其它IgG4分子的HL交換不敏感。2.可修飾H-Ch2-Ch3,以產(chǎn)生與選定宿主細(xì)胞更匹配的本發(fā)明模擬體。例如，當(dāng)本發(fā)明的模擬體在細(xì)菌細(xì)胞如大腸桿菌中重組表達(dá)時(shí)，鉸鏈中的Pro-Ala序列可一皮去除，以防止大腸桿菌酶脯氨酸亞氨基肽酶消化。3.—部分鉸鏈區(qū)可缺失或被本發(fā)明模擬體中的其它氨基酸取代，以防止在選定宿主細(xì)胞中表達(dá)的產(chǎn)物中的不均一性。4.本發(fā)明模擬體中的一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)可被去除。通常被糖基化的殘基(例如Asn)可賦予模擬體Fc依賴性的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞裂解活性。這樣的殘基可缺失或被不糖基化的殘基如Ala取代。5.在本發(fā)明的模擬體中參與和補(bǔ)體的相互作用的位點(diǎn)如Clq結(jié)合位點(diǎn)被去除。6.在本發(fā)明才莫擬體中影響與非FcRn補(bǔ)救受體的Fc受體結(jié)合的位點(diǎn)可去除。例如，在本發(fā)明模擬體中涉及ADCC活性的Fc受體可被去除。例如，IgGl鉸鏈區(qū)中Leu234/Leu235突變?yōu)長234A/L235A或IgG4鉸鏈區(qū)中Phe234/Leu235突變?yōu)镻234A/L235A使FcR結(jié)合最小化，減弱了免疫球蛋白介導(dǎo)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性和ADCC的能力。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是式(II)的GLP-2模擬體，其中Hg-CH2-CH3來自IgG4亞類，并含有Ser228Pro(S228P)取代和P234A/L235A突變。在GLP-2肽序列中具有這些突變以及A2S和A2G的代表性GLP-2才莫擬體的完整多肽序列分別示于SEQIDNO:4和5。這些序列包含模擬體構(gòu)建體的所有結(jié)構(gòu)域，即GLP2RAg-Lk-V2-Hg-CH2-CH3結(jié)構(gòu)域。預(yù)期這些才莫擬體構(gòu)建體是均一且穩(wěn)定的群，不觸發(fā)FcR介導(dǎo)的效應(yīng)子功能。本文所示的取代和突變是代表性的；在本發(fā)明范圍內(nèi)的Hg-CH2-CH3結(jié)構(gòu)域可包括其它取代、突變和/或缺失?；贏2G的、具有可變連接物長度的其它代表性的本發(fā)明GLP-2模擬體的部分多肽序列示于SEQIDNO:6、7、8、9、lO和ll。這些序列顯示了除CH2和CH3結(jié)構(gòu)域以外的所有結(jié)構(gòu)域。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，CH2和CH3結(jié)構(gòu)域應(yīng)包含在功能性模擬體中。基于具有SEQIDNO:50、51、52、53、54、55、56和57所示的分多肽序列分別示于SEQIDNO:58、59、60、61、62、63、64和65。這些序列顯示了除CH2和CH3結(jié)構(gòu)域以外的所有結(jié)構(gòu)域。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，Ch2和Ch3結(jié)構(gòu)域應(yīng)包含在功能性模擬體中。本發(fā)明包括能夠在結(jié)合時(shí)活化GLP-2R的GLP-2模擬體。本發(fā)明的模擬體可以廣泛范圍的親和力結(jié)合GLP-2R。GLP-2模擬體對(duì)GLP-2R的親和力可使用任何合適的方法經(jīng)試驗(yàn)確定，例如使用Biacore或KinExA設(shè)備的方法、ELISA和竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定。本發(fā)明的GLP-2模擬體和多肽可用于治療以腸粘膜上皮炎癥、損傷和/或功能障礙為特征的疾病或癥狀。由于GLP-2作為中樞飽感因子的作用，所以其在骨形成和保持以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)的疾病中的作用也是顯著的?？墒褂帽景l(fā)明的GLP-2沖莫擬體或多肽治療的疾病或癥狀包括但不限于GI疾病，包括SBS、炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、結(jié)腸炎、胰腺炎、回腸炎、炎性腸梗阻(手術(shù)后的和其它病因的)、與癌癥化療和/或放療相關(guān)的粘膜炎、由完全腸胃外營養(yǎng)或局部缺血引起的腸萎縮癥、骨相關(guān)疾病如骨質(zhì)疏松癥、包括肥胖在內(nèi)的營養(yǎng)相關(guān)疾病以及兒科GI疾病，包括在新生嬰兒中由于壞死性小腸結(jié)腸炎引起的腸衰竭。本發(fā)明的GLP-2;f莫擬體或多肽還可以用于預(yù)防炎性腸梗阻、減輕炎性腸梗阻的癥狀和治療炎性腸梗阻。因此，本發(fā)明的另一方面是包含至少一種本發(fā)明的GLP-2模擬體或多肽和本領(lǐng)域已知的藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。所述載體或稀釋劑可為溶液劑、懸浮劑、乳濁劑、膠體或粉末。本發(fā)明的GLP-2模擬體或多肽被配制為治療或預(yù)防有效量的藥物組合物。術(shù)語"有效量"一般指有效治療必需的模擬體或多肽的量，有效治療即尋求治療的癥狀或疾病的部分或完全緩解。用于降低上述癥狀或疾病的發(fā)作可能性的預(yù)防性治療包含在有效治療的定義中。所述組合物可任選地包含至少一種可用于治療本文所討論病癥的其它化合物、蛋白或組合物。例如，可與谷胺酰胺或其它營養(yǎng)補(bǔ)充物組合使用的本發(fā)明模擬體或多肽涉及增加體重、幫助腸恢復(fù)或改善營養(yǎng)吸收。此外，還設(shè)想了與抗炎劑的組合。本文和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"與...…組合"是指所述藥劑可在混合物中一起給予哺乳動(dòng)物，或作為單個(gè)藥劑同時(shí)給予哺乳動(dòng)物，或作為單個(gè)藥劑按照任何順序序貫給予哺乳動(dòng)物。核蘇，.....載體和細(xì)胞系本發(fā)明的另一方面是分離的核酸分子，其包含編碼本發(fā)明的至少一種GLP-2模擬體或多肽的多核芬酸、與所述多核香酸互補(bǔ)或與所述多核苷酸具有顯著同一性。本發(fā)明的其它方面包括含有編碼本發(fā)明的至少一種GLP-2才莫擬體或多肽的核酸分子的重組載體以及能夠表達(dá)所述核酸分子的細(xì)胞系和生物體。核酸、表達(dá)載體和細(xì)胞系一般可用于生產(chǎn)本發(fā)明的才莫擬體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸組合物編碼的多肽具有與SEQIDNO:4、5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、74、75和77中的任一個(gè)相同或基本同源的氨基酸序列。編碼示于SEQIDNO:5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、75和77的多肽序列的代表性核酸序列分別示于SEQIDNO:12、13、14、15、16、17、18、46、47、48、49、66、67、68、69、70、71、72、73、76和78。還提供了上述核酸的等位基因變體。典型地，在用于制備本發(fā)明的GLP-2模擬體或多肽的表達(dá)載體中使用本發(fā)明的核酸。在本發(fā)明范圍內(nèi)的載體提供了真核生物表達(dá)必需的元件，包括病毒啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的載體，例如CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的載體，例如pcDNA3.1、pCEP4以及它們的衍生物、桿狀病毒表達(dá)載體、果蠅表達(dá)載體和由哺乳動(dòng)物基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的表達(dá)載體，例如人Ig基因啟動(dòng)子。其它實(shí)例包括原核生物表達(dá)載體，例如T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的載體如pET41、乳糖啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的載體和阿拉伯糖基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的載體。本發(fā)明還涉及表達(dá)本發(fā)明的GLP-2對(duì)莫擬體或多肽的細(xì)胞系。宿主細(xì)胞可為原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。代表性的真核細(xì)胞為哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如但不限于COS-l、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、HepG2、653、SP2/0、NS0、293、HeLa細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞或其任何衍生物。最優(yōu)選地，宿主細(xì)胞為HEK293、NS0、SP2/0或CHO細(xì)胞。本發(fā)明的細(xì)胞系可穩(wěn)定表達(dá)至少一種GLP-2;f莫擬體。所述細(xì)胞系可通過本領(lǐng)域眾所周知的穩(wěn)定或瞬時(shí)的轉(zhuǎn)染方法產(chǎn)生。本發(fā)明還提供表達(dá)至少一種GLP-2模擬體或多肽的方法，其包括在其中GLP-2才莫擬體或多肽以可檢測(cè)的量或可回收的量表達(dá)的條件下培養(yǎng)細(xì)胞系。本發(fā)明還提供產(chǎn)生至少一種GLP-2^t擬體或多肽的方法，包括在體外或原位條件下翻譯編碼GLP-2才莫擬體或多肽的核酸，使得GLP-2才莫擬體或多肽以可檢測(cè)量或可回收量表達(dá)。本發(fā)明還包括通過以上方法生產(chǎn)的GLP-2模擬體或多肽。GLP-2模擬體可通過眾所周知的方法回收和純化，包括但不限于A蛋白純化、硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水作用層析、親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。反向高效液相層析(RP-HPLC)也可以用于純化。或者，本發(fā)明的GLP-2衍生多肽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的化學(xué)合成技術(shù)制備。通過重組或化學(xué)方法生產(chǎn)的本發(fā)明多肽可通過本領(lǐng)域眾所周知的方法回收和純化。使用方法GLP-2模擬體或多肽尤其可用作研究試劑和治療劑。一方面，本20發(fā)明涉及改變GLP-2生物活性的方法，包括向其需要的哺乳動(dòng)物提供至少一種GLP-2^^莫擬體或多肽。GLP-2才莫擬體或多肽可通過GLP-2R活化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)。具體地說，GLP-2模擬體或多肽可用作GLP-2R的激動(dòng)劑。術(shù)語"激動(dòng)劑"在最廣義上使用，包括能夠直接或間接地、部分或完整地活化、增加或促進(jìn)GLP-2R的一種或多種生物活性的分子。本發(fā)明還提供減弱至少一種GLP-2相關(guān)病癥或疾病的癥狀或治療至少一種GLP-2相關(guān)病癥或疾病的方法，包括給予其需要的患者治療有效量的至少一種GLP-2模擬體或多肽藥物組合物。適于使用本發(fā)明方法治療的病癥和疾病包括但不限于GI疾病，包括SBS、克羅恩氏病和兒科GI疾病、與癌癥化療相關(guān)的粘膜炎、IBD、炎性腸梗阻和上述的其它疾病禾o病癥。GLP-2優(yōu)先與主要存在于腸神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和含有GLP-2的腸內(nèi)分泌細(xì)胞上的GLP畫2R相互作用(Guan等，Gastroenterology130:150-164(2006))。GLP-2的其中一種主要功能是促進(jìn)絨毛隱窩中的柱狀細(xì)胞增殖，在絨毛隱窩中，GLP-2增強(qiáng)上皮細(xì)胞更新和粘膜傷口愈合(Bulut等，Regul.Pept.121:137-43(2004))，增強(qiáng)粘膜屏障功能(Benjamin等，Gut47:112-119(2000))，并抑制細(xì)胞經(jīng)由凋亡死亡(Brubaker和Dmcker,Endocrinology145:2653-2659(2004))。業(yè)已表明這些作用是神經(jīng)依賴性的，因?yàn)镚LP-2R在隱窩柱狀上皮細(xì)胞中不表達(dá)(Bjerknes和Cheng,Pro"Natl,Acad.Sci.U.S.A.98:12497-12502(2001))。腸神經(jīng)元上存在GLP-2R提示，GLP-2可改變動(dòng)力性以及在腸炎癥中起作用的神經(jīng)-免疫相互作用。因此，本發(fā)明還提供預(yù)防炎性腸梗阻、減輕炎性腸梗阻的癥狀或治療炎性腸梗阻的方法，包括給予其需要的患者GLP-2多肽組合物或GLP-2模擬體組合物。本文使用的"炎性腸梗阻"可為胃腸道的任何部分的腸梗阻，例如胃、小腸和/或結(jié)腸。另外，"炎性腸梗阻"可由引起腸梗阻的任何因素引起，例如手術(shù)，包括腹部手術(shù)，例如移植手術(shù)或非移植手術(shù)的腹部手術(shù)；腸手術(shù)，例如腸切除；以及整形手術(shù)；外傷性損傷，例如跌倒、車禍、個(gè)人傷害或由外傷性損傷引起的任何后遺癥，例如肢體骨折、肋骨骨折、脊骨骨折、胸部病變、局部缺血、腹膜后血腫；腹膜內(nèi)炎癥，例如腹腔感染、急性闌尾炎、膽嚢炎、胰腺炎、輸尿管絞痛、基礎(chǔ)性肺炎；心肌梗塞；代謝紊亂；或任何其組合。如上所述，GLP-2模擬體或多肽藥物組合物包含有效量的至少一種GLP-2模擬體或多肽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。針對(duì)給定治療的有效量，無論是治療性的還是預(yù)防性的，一般都取決于許多不同的因素，包括給藥方法、目標(biāo)部位和給予的其它藥物。因此，治療劑量需要逐步調(diào)整，以使安全性和有效性最佳。本發(fā)明的方法任選地還可以包含連同用于治療以上列出疾病的標(biāo)準(zhǔn)療法的共給予或聯(lián)合療法。給予的方式可為任何適宜的途徑，以將藥學(xué)上有效量的本發(fā)明GLP-2模擬體或多肽傳遞給宿主。例如，GLP-2模擬體或多肽可經(jīng)胃腸外給予傳送，例如皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)或鼻內(nèi)給予，或本領(lǐng)域已知的任何其它方法。參考以下實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅闡述本發(fā)明的各個(gè)方面，無意限制本發(fā)明。實(shí)施例1GLP-2模擬體在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的克隆、表達(dá)和純化編碼A2SGLP-2的核酸序列以2步PCR擴(kuò)增產(chǎn)生。第一輪擴(kuò)增使用正向引物GATGAACACCATTCTTG-3'(SEQIDNO:37)和反向引物TTATCAAGAATGGTGTTCATCTC-3'(SEQIDNO:38)進(jìn)行。解鏈溫度、退火溫度和延伸溫度分別設(shè)定為96°C、48。C和72。C。進(jìn)行3輪反應(yīng)。對(duì)于第二輪擴(kuò)增，正向引物包含NotI限制酶識(shí)別位點(diǎn)，反向引物包含BamHI位點(diǎn)。正向引物的序列為5'畫TTTGCGGCCGCCCAAAGTATACAGGCG-3'(SEQIDNO:39),反向引物為5'-AAAGGATCCGTCAGTGATTTTGGTCTGAATCAACCAG畫3'(SEQIDNO:40)。解鏈溫度、退火溫度和延伸溫度分別設(shè)定為96°C、48°C和60。C。進(jìn)行30輪反應(yīng)。以相同的方法產(chǎn)生編碼A2GGLP-2的核酸序列，只是在第一輪擴(kuò)增中使用的正向引物為5'-CCAAAGTATACAGGCGCATGGCGATGGTTCTTTCTCTGATGAGATGAACACCATTCTTG-3'(SEQIDNO:41)。使用標(biāo)準(zhǔn)克隆方法，將擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物(A2S和A2GGLP-2)克隆入CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的人IgG4ACH1、Ser至Pro、Ala/Ala表達(dá)載體的Notl/BamHI位點(diǎn)中。A2S和A2GGLP-2IgG4模擬體在HEK293E細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)，并使用A蛋白親和層析按照標(biāo)準(zhǔn)方法由條件培養(yǎng)基純化。由A蛋白親和柱洗脫的物質(zhì)還經(jīng)過大小排阻柱，用于進(jìn)一步純化。純化的A2S和A2GGLP-2模擬體通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和偶合靜態(tài)光散射分析(SEC-SLS)的大小排阻層析進(jìn)行分析。在還原和非還原變性條件下純化的模擬體在SDS-PAGE上的遷移在預(yù)期的范圍內(nèi)。通過SEC-SLS分析表明，具有約123KD分子量的蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)于模擬體的二聚體。因?yàn)镚LP-2模擬體作為單體在SDS-PAGE凝膠上遷移，所以二聚化是經(jīng)由非共價(jià)作用。cAMP表達(dá)測(cè)定為了評(píng)價(jià)GLP-2模擬體的體外活性，開發(fā)了cAMP表達(dá)測(cè)定。為實(shí)現(xiàn)此目標(biāo)，通過轉(zhuǎn)染HEK293E細(xì)胞產(chǎn)生表達(dá)突變的人GLP-2R的克隆細(xì)胞系。突變的人GLP-2R與野生型人GLP-2R(SEQIDNO:35)的不同之處在于C末端胞內(nèi)區(qū)中的3個(gè)氨基酸位置(SEQIDNO:36)。GLP-2肽刺激該細(xì)胞系中的cAMP表達(dá)，刺激是特異性的，因?yàn)閷?duì)照肽不刺激cAMP表達(dá)。比較A2S和A2GIgG4GLP-2模擬體與對(duì)應(yīng)的GLP-2肽(A2S和A2G)在重組細(xì)胞系中刺激cAMP表達(dá)的能力。簡(jiǎn)而言之，將細(xì)胞與個(gè)體GLP-2才莫擬體或GLP-2肽溫育30分鐘。cAMP表達(dá)使用cAMPDirectScreenSystem(目錄號(hào)CSD200，AppliedBiosystems,Bedford,MA)定量。A2S和A2G肽的ECso分別為0.5nM和0.8nM;A2S和A2G模擬體的ECso分別為2.2nM和3.8nM。因此，在該測(cè)定中GLP-2模擬體的功效比所述肽低約4倍。實(shí)施例3GLP-2模擬體變體為研究GLP-2模擬體上連接物長度的作用，產(chǎn)生具有多種連接物長度的不同構(gòu)建體。核心區(qū)的序列示于以下的表l。這些變體在HEK293細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)，通過SDS-PAGE純化和分析。SEC-SLS分析表明，除了一個(gè)峰對(duì)應(yīng)于模擬體的二聚體以外，具有65-70kDa的分子量的峰對(duì)應(yīng)于模擬體的單體。觀察到連接物長度越長，單體群的比例越高。在實(shí)施例2描述的cAMP表達(dá)測(cè)定中測(cè)試連接物長度和V2區(qū)變體。數(shù)據(jù)證實(shí)，依據(jù)ECso檢測(cè)的GLP-2模擬體活性與連接物長度正相關(guān)，即具有較長連接物的模擬體具有較高活性(表1)。表1.核心氨基酸序列和具有可變連接物長度的GLP-2模擬體的EC50<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>U937細(xì)胞裂解物溫育達(dá)0、12或24小時(shí)。此后，GLP-2模擬體變體使用A蛋白珠純化，并在SDS-PAGE凝膠上解析。如圖1所示，與A2GGLP-2模擬體(SEQIDNO:5)相比，Pro取代變體(SEQIDNO:43或44)在24小時(shí)的測(cè)試時(shí)間段內(nèi)幾乎沒有降解。總之，Pro取代變體在體外更抗蛋白水解。實(shí)施例4GLP-2模擬體刺激小腸中的粘膜重量增加為證實(shí)GLP-2模擬體的體內(nèi)活性，用GLP-2模擬體注射CD1小鼠，評(píng)價(jià)小腸中的終點(diǎn)。簡(jiǎn)而言之，每日皮下注射給予雌性CD1小鼠A2GGLP-2肽(SEQIDNO:3)、A2GGLP-2IgG4模擬體(SEQIDNO:5)或?qū)φ漳M體，共計(jì)10天。此后，麻醉小鼠，取出小腸，用鹽水沖洗，如下所述處理。具體地說，收集4cm部分(l)緊接幽門的遠(yuǎn)端(十二指腸)，(2)Treitz韌帶的前2cm遠(yuǎn)端(空腸)，和(3)緊接盲腸的近端(回腸)。由Treitz韌帶的約6cm遠(yuǎn)端至盲腸的4cm近端的剩余小腸用于制備粘膜刮屑。由剩余物的近和遠(yuǎn)末端去除等距離，直至留下15cm部分，剩余物被縱向切開，淋洗，并使用玻璃顯微鏡載玻片的短端去除粘膜層。檢測(cè)完整腸段和粘膜的濕重。由不同小鼠的空腸和回腸之間的15cm腸段獲得的粘膜刮屑的重量示于圖2。對(duì)于注射A2GGLP-2模擬體的小鼠，觀察到粘膜濕重劑量依賴性增加。與對(duì)照模擬體相比，于0.8和8mg/kg(分別為0.26和2.6nmol)的增加是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(分別為pO.0001和p<0.0004)。在注射2.5mg/kg(13.3nmol)A2GGLP-2肽的小鼠中也觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著增加(p0.0001)。相比之下，A2GGLP-2模擬體以比A2GGLP-2肽低50倍的劑量(基于體積摩爾)在體內(nèi)有效。實(shí)施例526GLP-2模擬體的藥代動(dòng)力學(xué)為檢測(cè)GLP-2模擬體的藥代動(dòng)力學(xué)，CD1小鼠靜脈內(nèi)或皮下給藥3mg/kg的A2GGLP-2模擬體(SEQIDNO:5)。于不同時(shí)間點(diǎn)將血液收集入含蛋白酶抑制劑的檸檬酸鹽緩沖液中，以最小化離體降解的可能性，并通過離心分離血漿。使用時(shí)間分辨熒光(TRF)測(cè)定檢測(cè)活性模擬體?；钚阅M體反映出所述肽的完整N末端仍連接至^^擬體的Fc區(qū)?；赥RF試驗(yàn)，在小鼠中計(jì)算的A2GGLP-2^t擬體的半衰期為26.5小時(shí)。相比之下，在人中報(bào)告的GLP-2肽的半衰期為7.2±2分鐘(Hartmann等，J.Clin.Endocrinol.Metab.85:2884-2888(2000》。因此，A2GGLP-2模擬體的半衰期比GLP-2肽的半衰期高200多倍。在類似的試驗(yàn)中，靜脈內(nèi)給藥獼猴1mg/kg的A2GGLP-2沖莫擬體?；赥RF數(shù)據(jù)，在獼猴中計(jì)算的A2GGLP-2沖莫擬體的半衰期為4.8天。實(shí)施例6GLP-2才莫擬體的藥效動(dòng)力學(xué)基于GLP-2模擬體的延長的藥代動(dòng)力學(xué)，預(yù)期GLP-2模擬體具有較長的響應(yīng)時(shí)程。為評(píng)價(jià)A2GGLP-2模擬體的藥效動(dòng)力學(xué)，每曰一次、每隔一天一次、每周一次或僅在研究開始時(shí)一次給藥小鼠。為控制動(dòng)物處理，在小鼠不接受A2GGLP-2模擬體的日子給它們注射陰性對(duì)照模擬體，即沒有GLP-2肽的模擬體免疫球蛋白骨架。A2GGLP-2^:莫擬體和陰性對(duì)照的劑量對(duì)所有組別都是4mg/kg(1.3nmol/kg)。研究時(shí)程為11天，組織如在實(shí)施例4中所述處理。與對(duì)照模擬體相比，每周一次給藥A2GGLP-2模擬體的小鼠具有顯著增加的粘膜重量。在每天一次或每隔一天一次給予A2GGLP-2模擬體時(shí)差異更顯著。對(duì)小腸部分的濕重觀察到類似的模式。對(duì)除單次給藥試驗(yàn)之外的所有方案，在十二指腸和空腸中均觀察到超過對(duì)照模擬體的顯著重量增加。.實(shí)—燕斂.7GLP-2中的突變防止肽二聚化野生型GLP-2肽(SEQIDNO:l)以高濃度二聚化。例如，在PBS(pH7.5)中，GLP-2于0.4mg/mL作為單體存在，但是于2mg/mL為單體(約20%)和可逆地自締合的二聚體(約80。/。)的混合物(未顯示數(shù)據(jù))。自締合對(duì)開發(fā)和制造均一治療劑提出了挑戰(zhàn)。設(shè)計(jì)保留野生型GLP-2生物活性并于高濃度作為單體存在的肽類似物(SEQIDNO:52、54、55和74)。合成GLP-2(A2G、L17Q)(SEQIDNO:54)和GLP-2(A2G、N16G、L17Q)(SEQIDNO:55)，并純化至>95%純度。在類似物表征中納入肽GLP-2(SEQIDNO:l)、GLP-2(A2G)(SEQIDNO:3)和GLP-1(SEQIDNO:79)作為對(duì)照。肽的溶液分子量通過SEC-SLS檢測(cè)。簡(jiǎn)而言之，0.4-2.0mg/mL的肽的PBS溶液(pH7.5)經(jīng)Superdex肽柱分級(jí)分離(AmershamPharmacm)。洗脫峰通過690nm的靜態(tài)光散射監(jiān)測(cè)，溶液分子量于UV280nm使用Astra軟件包(WyattInc.)測(cè)定。GLP-1在1mg/ml作為單峰洗脫，分子量在預(yù)期的單體大小之內(nèi)。GLP-2和GLP-2(A2G)顯示出類似的重疊二聚體和單體峰分布。類似物肽GLP-2(A2G、L17Q)和GLP-2(A2G、N16G、L17Q)作為單峰洗脫，分子量與主要的單體肽一致。測(cè)試肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)使用0.2mg/mL肽的PBS溶液測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，一式三份以1nm間隔于25。C在0.1cm光程池中收集CD光譜。二級(jí)結(jié)構(gòu)通過使用CD光譜軟件(CDSpectraDeconvolution軟件2.1)擬合CD光譜確定。所有的測(cè)試肽都包含對(duì)應(yīng)于存在的ot螺旋的峰。但是，在類似物肽GLP-2(A2G、L17Q)和GLP-2(A2G、N16G、L17Q)中的螺旋含量為約17%,類似于GLP-1的螺旋含量，低于GLP-2和GLP-2(A2G)的螺旋含量(表3)。表3.在GLP肽中螺旋和無規(guī)巻曲結(jié)構(gòu)的百分率<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>另外，已知三氟乙醇(TFE)在肽中誘導(dǎo)螺旋形成(Soennichsen等，Biochemistry31:8791(1992))。因此，使用TFE進(jìn)行螺旋傾向性分析。簡(jiǎn)而言之，以含0%、1%、5%、15%、33。/?；?0。/。TFE的PBS(pH7.5)將測(cè)試肽稀釋至0.2mg/mL。收集CD光譜，在數(shù)據(jù)平均、扣除緩沖液和曲線平滑后產(chǎn)生CD作圖。螺旋傾向性值由222nm的平均殘基橢圓率(MRE)對(duì)TFE。/。作圖獲得。于222nm實(shí)現(xiàn)CD光譜50%轉(zhuǎn)變的TFE濃度用作螺旋傾向性的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明，GLP-2和GLP-2(A2G)顯示出較大的螺旋傾向性，轉(zhuǎn)變?yōu)樽畲舐菪盘?hào)需要約16%的TFE。相比之下，GLP-1具有較低的螺旋傾向性，螺旋轉(zhuǎn)變需要>20%的TFE。顯然，類似物肽GLP-2(A2G、L17Q)和GLP-2(A2G、N16G、L17Q)的螺旋轉(zhuǎn)變均需要〉20。/。的TFE，與GLP-1的相似性比GLP-2更緊密。因此，L17Q取代降低了GLP-2肽的螺旋形成潛力。實(shí)施例8GLP-2中的突變防止模擬體二聚化編碼具有A2G、L17Q(SEQIDNO:75)和A2G、N16G、L17Q(SEQIDNO:77)的GLP-2沖莫擬體類似物的核酸序列使用Stratagene的QuickChangeXL試劑盒產(chǎn)生。這些模擬體變體在HEK293E細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)，并按照實(shí)施例1中所描述的步驟純化?；赟EC-SLS分析，GLP-2(A2G、N16G、L17Q)模擬體表現(xiàn)出與單體一致的分子量，而GLP-2(A2G、L17Q)模擬體表現(xiàn)出反映單體和二聚體混合物的分子量。實(shí)施例9GLP-2類似物模擬體的體外活性以cAMP表達(dá)測(cè)定檢測(cè)GLP-2類似物的體外活性。該測(cè)定基于AppliedBiosystems的cAMPDirectScreenSysstem，4吏用在HEK293E細(xì)胞中表達(dá)突變huGLP-2R的細(xì)胞系。將0.01nM至1.0|liM濃度范圍的肽在含0.5%BSA的PBS中的溶液加入至懸浮在96孔才反中的約50,000個(gè)細(xì)胞中。于37。C溫育30分鐘后，按照生產(chǎn)商的方法(AppliedBiosystems發(fā)光方案cAMP-ScreenDirectSystem)加入裂解纟爰沖液，之后加入發(fā)光試劑(AppliedBiosystems)。使用T叩Count液體閃爍分析儀(PerkinElmer)定量發(fā)光，數(shù)據(jù)使用Softmax軟件(MolecularDevicesCorporation)處理。得自cAMP水平對(duì)肽濃度作圖的EC-50值列于以下的表5。表5:得自cAMP對(duì)肽濃度作圖的GLP-2肽的EC-50值結(jié)構(gòu)Wt-GLP-2GLP-2(A2G)GLP-2(A2G、雇G、L17Q)GLP-2(A2G、L17Q)cAMP體外ECso值(nM)1.61.93.55.2數(shù)據(jù)表明，相對(duì)于野生型GLP-2,GLP-2(A2G、n16g、l17q#GLP-2(a2g、的活性分別僅低至2倍和3倍。實(shí)施例10A2G-GLP-2肽加速上GI轉(zhuǎn)運(yùn)為測(cè)試A2G-GLP-2對(duì)正常小鼠中上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的作用，將小鼠隨機(jī)分為2組(每個(gè)測(cè)試組14只動(dòng)物)。連續(xù)10天每組每日接受一次A2G-GLP-2肽(50jtig/小鼠)或磷酸緩沖鹽水溶媒的皮下注射(總體積200ml)。在研究當(dāng)日，使用胭脂紅染料技術(shù)檢測(cè)上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)。將0.25ml30混合入0.5%(重量/體積)甲基纖維素中的6%(重量/體積)胭脂蟲洋紅粉溶液的試驗(yàn)餐通過18號(hào)彎曲銅管胃內(nèi)給予喂飼小鼠。在口服給予測(cè)試餐后，將小鼠放回到它們的居住籠中。在給予標(biāo)記餐后20分鐘，通過頸推脫臼使小鼠快速安樂死，由遠(yuǎn)端結(jié)腸開始直至胃幽門切下完整的胃腸道。將切除的腸器官縱向平行于直線米尺放置，小心避免拉伸腸器官。檢測(cè)胭脂紅染料前沿經(jīng)由小腸移動(dòng)的直線距離以及小腸的總長度。上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)表示為在20分鐘測(cè)試期內(nèi)脂紅染料前沿移動(dòng)行程除以整個(gè)小腸長度的百分率位移小腸％=[染料前沿經(jīng)由小腸的移動(dòng)距離(cm)/完整小腸長度(cm)x100]。如在圖3中所示，A2G-GLP-2治療導(dǎo)致上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)加速。實(shí)施例11GLP-2模擬體加速上GI轉(zhuǎn)運(yùn)為測(cè)試GLP-2模擬體對(duì)正常小鼠中上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的作用，將小鼠隨機(jī)分為2組(每組4只動(dòng)物)。每組在檢測(cè)胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)之前4天接受單次注射的A2GGLP-2模擬體(SEQIDNO:5)(4mg/kg)或IgG4陰性對(duì)照。在研究當(dāng)日，使用FITC-葡聚糖法檢測(cè)上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)。該方法既提供胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的檢測(cè)結(jié)果，又提供測(cè)試餐沿著胃腸道的分布模式的顯示。通過18號(hào)彎曲飼管胃內(nèi)給予150mlFITC-葡聚糖溶液(5mg/ml綴合熒光素-異^l氰酸酯的70,000分子量葡聚糖在0.5%甲基纖維素/去離子水中的溶液)喂飼小鼠測(cè)試餐。在口服給予FITC-葡聚糖測(cè)試餐之后，將小鼠放回到它們的居住籠中。已表明30分鐘的測(cè)試期是檢測(cè)加速轉(zhuǎn)運(yùn)的最佳時(shí)程，而45分鐘測(cè)試期對(duì)檢測(cè)延遲轉(zhuǎn)運(yùn)最佳。在適宜的測(cè)試期后，通過二氧化碳接觸處死小鼠。取出由食管下端括約肌至末端結(jié)腸的完整胃腸道。沿著腸系膜緣打開腸段。將胃的組織和內(nèi)腔內(nèi)容物、10段相等的小腸、盲腸和3段相等的結(jié)腸置于含1mlPBS的單個(gè)Eppendorf管中。在臺(tái)式渦旋器上劇烈混合組織，固體物質(zhì)通過離心沉淀。一式兩份在96孔焚光讀板器上讀取澄清上清液的等份試樣，以定量每個(gè)腸段的熒光信號(hào)大小。這些值用于計(jì)算幾何中心(GC)，其被定義為沿著胃腸道的熒光信號(hào)的加權(quán)平均分布GC-i:(每段的總熒光信號(hào)的百分率x段數(shù))/100。依據(jù)1-15的分級(jí)，較高的值代表較快的轉(zhuǎn)運(yùn)速率。如圖4所示，1劑GLP-2模擬體治療導(dǎo)致上胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)加速。模擬體誘導(dǎo)的FITC-葡聚糖分布模式的遷移示于上圖。胃中的標(biāo)記降低，大量標(biāo)記向更遠(yuǎn)的小腸段全面遷移。在下圖中計(jì)算用于統(tǒng)計(jì)學(xué)比較的GC。正常小鼠在30分鐘測(cè)試時(shí)間段后表現(xiàn)出G06，其未被采用IgG4骨架的治療改變。采用GLP-2模擬體的治療將GC增加至7.5。實(shí)施例12GLP-2模擬體減弱與手術(shù)后炎性腸梗阻相關(guān)的GI動(dòng)力性受損由于人IgG4在小鼠中的免疫原性，在以下試驗(yàn)中使用鼠GLP-2模擬體，即在鼠igG2a骨架中的人A2G-GLP2肽(SEQIDNO:80)。為測(cè)試GLP-2模擬體對(duì)與手術(shù)后炎性腸梗阻相關(guān)的GI動(dòng)力性受損的作用，將小鼠隨機(jī)分為3組(每組8只動(dòng)物)，并用2mg/kg鼠A2G-GLP-2模擬體、IgG2a或PBS治療。1小時(shí)后，對(duì)小鼠進(jìn)行剖腹手術(shù)和小腸操作。簡(jiǎn)而言之，通過吸入異氟烷麻醉雄性CD-1小鼠，并做手術(shù)準(zhǔn)備。腹部備皮，用消毒液處理。然后給動(dòng)物蓋上手術(shù)巾。經(jīng)中線剖腹術(shù)打開腹部，從腹中取出完整小腸放在無菌手術(shù)巾上。然后使用兩個(gè)濕潤的無菌棉簽沿著由Treitz韌帶至回盲部的小腸長度輕柔地按壓小腸。然后將小腸放回到腹腔，縫合切口。此后，將小鼠放回到它們的居住籠中。第4組的8只動(dòng)物用作空白對(duì)照。在手術(shù)后48小時(shí)，所有小鼠都接受口服的FITC-葡聚糖測(cè)試餐。在口服喂銅后45分鐘測(cè)定胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)。如在圖5中所示，空白對(duì)照表現(xiàn)出正常的45分鐘轉(zhuǎn)運(yùn)(GC-8.2)。腹部手術(shù)在PBS治療動(dòng)物中導(dǎo)致胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)顯著延遲。用IgG2a治療對(duì)手術(shù)誘發(fā)的轉(zhuǎn)運(yùn)延遲沒有作用，而用鼠A2G-GLP-2模擬體治療導(dǎo)致轉(zhuǎn)運(yùn)顯著改善。實(shí)施例13GLP-2才莫擬體減弱與手術(shù)后炎性腸梗阻相關(guān)的細(xì)胞炎癥為測(cè)試GLP-2才莫擬體對(duì)細(xì)胞炎癥的作用，如在實(shí)施例12中所述誘發(fā)手術(shù)后炎性腸梗阻。對(duì)手術(shù)后48小時(shí)由小鼠的中段小腸收集的組織進(jìn)行髄過氧物酶組織化學(xué)。簡(jiǎn)而言之，由在實(shí)施例12中描述的離心管收集中段小腸的區(qū)段。如下制備肌肉層的整封標(biāo)本將所述組織塊(tissueflat)釘在襯有Sylgarcf的培養(yǎng)皿中，并將組織拉伸至其長度的2倍和其寬度的1.5倍。通過精細(xì)解剖取出粘膜。然后用100%乙醇固定肌層整封標(biāo)本達(dá)1小時(shí)，用PBS洗滌3次，在含0.1%過氧化氫和1mg/mlHanker-Yates試劑的PBS中溫育20分鐘。在用PBS第二次洗滌之后，在玻璃載玻片上制作整封標(biāo)本，蓋片，并用光學(xué)顯微鏡目測(cè)。計(jì)數(shù)6-8個(gè)鄰接的200X光學(xué)視野中含髓過氧化物酶的白細(xì)胞，計(jì)算并記錄平均細(xì)胞計(jì)數(shù)。使用Hanker-Yates試劑對(duì)髓過氧化物酶(MPO)活性染色的代表性腸肌層整封標(biāo)本示于圖6。黑點(diǎn)代表浸潤小腸肌肉層的MPO陽性白細(xì)胞。在由空白小鼠收集的組織中幾乎沒有發(fā)現(xiàn)MPO陽性細(xì)胞。在進(jìn)行小腸手術(shù)操作之前，在用PBS治療的小鼠中發(fā)現(xiàn)浸潤白細(xì)胞數(shù)顯著增加。用IgG2a治療對(duì)浸潤細(xì)胞數(shù)沒有影響。相比之下，用鼠A2G-GLP-2才莫擬體治療顯著減少了浸潤細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)匯編于圖7,用于統(tǒng)計(jì)學(xué)比較?，F(xiàn)在已完整描述了本發(fā)明，對(duì)本領(lǐng)域一般技術(shù)人員顯而易見的是，在不偏離隨附權(quán)利要求的精神或范圍的情況下，可對(duì)本發(fā)明實(shí)施許多變更和》務(wù)改。權(quán)利要求1.一種式(II)的模擬體(GLP2RAg-Lk-V2-Hg-CH2-CH3)(t)(II)其中GLP2RAg為哺乳動(dòng)物GLP-2R激動(dòng)劑，Lk為多肽或化學(xué)鍵，V2為免疫球蛋白可變區(qū)C末端的一部分，Hg至少為免疫球蛋白可變鉸鏈區(qū)的一部分，CH2為免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，CH3為免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)，t獨(dú)立地為1-10的整數(shù)。2.權(quán)利要求1的模擬體，其中GLP2RAg具有SEQIDNO:2、3、50、51、52、53、54、55、56、57或74的氨基酸序列。3.權(quán)利要求1的才莫擬體，其中Hg、CH2和CH3屬于IgGl亞類。4.權(quán)利要求3的才莫擬體，其中Hg的Cys220被Ala取代，而CH2的Leu234和Leu235突變?yōu)锳la234和Ala235。5.權(quán)利要求1的才莫擬體，其中Hg屬于IgG4亞類，CH2和CH3屬于IgGl亞類。6.權(quán)利要求1的才莫擬體，其中Hg、CH2和CH3屬于IgG4亞類。7.權(quán)利要求6的模擬體，其中Hg的Ser228被Pro取代，而CH2的Phe234和Leu235突變?yōu)锳la234和Ala235。8.權(quán)利要求1的模擬體，其中所述模擬體結(jié)合GLP-2受體。9.一種模擬體，所述模擬體包含具有示于SEQIDNO:4、5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、75或77的序列的多肽。10.—種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的模擬體。11.一種多核苷酸，所述多核苷酸包含具有示于SEQIDNO:12、13、14、15、16、17、18、46、47、48、49、66、67、68、69、70、71、72、73、76或78的序列或互補(bǔ)序列的多核普酸。12.—種多核苷酸，所述多核普酸包含編碼示于SEQIDNO:4、5、6、7、8、9、10、11、42、43、44、45、58、59、60、61、62、63、64、65、75或77的氨基酸序列的多核香酸。13.—種載體，所述載體包含權(quán)利要求11或12的多核苷酸。14.一種細(xì)胞系，所述細(xì)胞系表達(dá)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的模擬體。15.—種細(xì)胞系，所述細(xì)胞系包含權(quán)利要求13的載體。16.權(quán)利要求15的細(xì)胞系，其中所述細(xì)胞系為HEK293、NSO、SP2/0或CHO細(xì)胞。17.—種生產(chǎn)多肽的方法，所述方法包括培養(yǎng)權(quán)利要求16的細(xì)胞系并純化表達(dá)的多肽的步驟。18.—種藥物組合物，所述藥物組合物包含有效量的至少一種權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的模擬體和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。19.一種改變哺乳動(dòng)物的GLP-2生物活性的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物^:又利要求18的藥物組合物。20.—種減輕至少一種GLP-2相關(guān)病癥或障礙的癥狀或治療至少一種GLP-2相關(guān)病癥或障礙的方法，所述方法包括給予其需要的患者權(quán)利要求18的藥物組合物。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述GLP-2相關(guān)病癥或障礙為胃腸疾病、骨相關(guān)疾病或營養(yǎng)相關(guān)疾病。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述胃腸疾病為短腸綜合征、炎性腸病、克羅恩氏疾病、結(jié)腸炎、胰腺炎、回腸炎、粘膜炎或腸萎縮癥。23.權(quán)利要求21的方法，其中所述胃腸疾病為兒科胃腸疾病。24.權(quán)利要求21的方法，其中所述骨相關(guān)疾病為骨質(zhì)疏松癥。25.權(quán)利要求21的方法，其中所述營養(yǎng)相關(guān)疾病為肥胖癥。26.—種預(yù)防炎性腸梗阻、減輕炎性腸梗阻的癥狀或治療炎性腸梗阻的方法，所述方法包括給予其需要的患者權(quán)利要求18的藥物組合物。27.—種多肽，所述多肽包含具有示于SEQIDNO:52、54、55或74的序列的多肽。28.—種藥物組合物，所述藥物組合物包含有效量的權(quán)利要求27的多肽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。29.—種改變哺乳動(dòng)物的GLP-2生物活性的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物權(quán)利要求28的藥物組合物。30.—種減輕至少一種GLP-2相關(guān)病癥或障礙的癥狀或治療至少一種GLP-2相關(guān)病癥或障礙的方法，所述方法包括給予其需要的患者權(quán)利要求28的藥物組合物。31.—種預(yù)防炎性腸梗阻、減輕炎性腸梗阻的癥狀或治療炎性腸梗阻的方法，所述方法包括給予其需要的患者權(quán)利要求28的藥物組合物。全文摘要公開了哺乳動(dòng)物GLP-2模擬體、多肽和核酸。還公開了使用所述模擬體和多肽治療GLP-2相關(guān)疾病的方法。文檔編號(hào)C12N5/06GK101331224SQ200680047664公開日2008年12月24日申請(qǐng)日期2006年10月24日優(yōu)先權(quán)日2005年10月24日發(fā)明者A·E·巴克,B·A·穆爾,J·M·帕爾默,K·奧內(nèi)爾,K·皮查,S·薩古,T·尼斯波爾申請(qǐng)人:森托科爾公司