專利名稱：一株鏈霉菌及利用其生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，尤其涉及一株鏈霉菌及利用該株鏈霉菌生物 轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法。
背景技術(shù)：
香蘭素，又名香草醛、香莢蘭素，英文名為vanillin,分子式為C8H803，分子量為 152.14。香蘭素外觀為白色至微黃色針狀結(jié)晶或粉末，呈香莢蘭豆特有的香氣，微甜，在 潮濕的空氣中緩慢氧化為香蘭酸。沸點(diǎn)為284 285。C，相對密度為1.056，微溶于水，易 溶于乙醇、乙醚、氯仿、冰醋酸、二硫化碳和吡啶等有機(jī)溶劑。
香蘭素是世界上產(chǎn)量最大、用途最廣的香料之一，被譽(yù)為"香料之王"，廣泛應(yīng)用于 巧克力、冰激凌、糖果等食品以及香煙、飲料和高檔化妝品中。它不僅可以用作增香劑 和定香劑，還可在食品中用作防腐劑、保鮮劑和抗氧化劑。在化學(xué)工業(yè)中，香蘭素可抑 制潤滑劑發(fā)泡，用作鍍鋅槽的增白劑、鋅電鍍的活性劑。香蘭素也是重要的醫(yī)藥合成中 間體，用作生產(chǎn)L-多巴、L-甲基多巴和罌粟堿的基礎(chǔ)原料。目前世界市場上香蘭素的需 求為每年1.5萬噸，且以每年10%的速度增長。
目前常用的香蘭素生產(chǎn)方法是植物原料提取法和化學(xué)合成法。香蘭素是天然香莢蘭 的主要成分，其在香莢蘭豆中的含量約為15 20克/千克。香莢蘭在種植過程中需要對 花朵進(jìn)行人工授粉，勞動(dòng)強(qiáng)度大，難以進(jìn)行大規(guī)模栽種，從植物原料提取不能滿足曰益 增長的天然香蘭素市場需求，其年產(chǎn)量僅為2000噸左右。目前市場上絕大多數(shù)的香蘭素 產(chǎn)品是通過化學(xué)合成的，常用的合成底物包括丁香酚、木質(zhì)素、乙醛酸、黃樟素和愈創(chuàng) 木酚等。國內(nèi)常用的是釆用愈創(chuàng)木酚和烏洛托品反應(yīng)的亞硝化工藝，該方法線路長，分 離過程復(fù)雜，收率低，環(huán)境污染嚴(yán)重，原料消耗高，國外早已被淘汰。國外主要采用愈 創(chuàng)木酚和乙醛酸縮合工藝，該工藝設(shè)備簡單，產(chǎn)率較高，但還處于研究階段，未能應(yīng)用 于工業(yè)化生產(chǎn)?？傮w來說，化學(xué)合成法工藝成熟，產(chǎn)物純度高，原料來源廣泛，但存在 嚴(yán)重的缺陷，比如環(huán)境污染嚴(yán)重，產(chǎn)品香氣單一，易摻雜質(zhì)，合成香蘭素的安全性也受 到質(zhì)疑。
隨著生活水平的提高，人們對天然綠色產(chǎn)品的需求也越來越高。與化學(xué)合成相比， 生物法合成香蘭素具有反應(yīng)條件溫和，副產(chǎn)物少，提取步驟簡單，生產(chǎn)清潔，環(huán)境污染 低，產(chǎn)品安全可靠等優(yōu)點(diǎn)，正日益受到人們的重視。美國FDA規(guī)定，天然香料必須是由 來自于植物或動(dòng)物的原料通過物理，酶法或微生物加工過程得到的產(chǎn)品。在這種背景下， 應(yīng)用各種廉價(jià)的天然原料通過生物技術(shù)生產(chǎn)香蘭素成為研究的一個(gè)熱點(diǎn)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)， 芽孢桿菌、鏈霉菌、假單胞菌和沙雷氏菌等微生物能利用轉(zhuǎn)化多種底物生成香蘭素，這 些底物包括阿魏酸、木質(zhì)素、香蘭酸、丁香酚和異丁香酚等等，其中研究得較為深入的 是阿魏酸和丁香酚。但以丁香酚為底物的生產(chǎn)工藝，產(chǎn)物香蘭素濃度很低，目前還達(dá)不 到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。
——據(jù)報(bào)道能轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的微生物很多，產(chǎn)量多在10克/升以下。產(chǎn)量最高 的兩株菌是Rabenhorst (1996)報(bào)道的S^ptomyc^ setom'f ATCC39116和A.Muheim(1998) 報(bào)道的^^co/ato戸"sp. HR167，香蘭素濃度分別達(dá)到12克/升和11.5克/升。由于香蘭 素在10克/升以上就可以結(jié)晶，以上兩種已經(jīng)接近產(chǎn)業(yè)化的水平。但應(yīng)用這兩個(gè)菌株生 產(chǎn)香蘭素時(shí)培養(yǎng)基成分較為復(fù)雜，生產(chǎn)成本較高，副產(chǎn)物較多包括香蘭酸、香蘭醇和愈 創(chuàng)木酚等，給產(chǎn)品的分離提取帶來了相當(dāng)?shù)睦щy。

發(fā)明內(nèi)容
針對目前市場對天然綠色產(chǎn)品的需要，以及生物法生產(chǎn)香蘭素得率較低、副產(chǎn)物多、 生產(chǎn)成本高等問題，本發(fā)明提供了一株鏈霉菌，該菌株名為S&e;7tomj;cessp.V-l，于2006 年7月12日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCM 206065，其特征是 氣生菌絲亮黃色、基內(nèi)菌絲淺黃色，基內(nèi)菌絲無橫隔、不斷裂，孢子橢圓形、表面光滑， 可利用葡萄糖、木糖、果糖、蔗糖，不能液化明膠，不產(chǎn)硫化氫，該菌株的16S rDNA 序列與多株鏈霉菌的16S rDNA序列相似性達(dá)到97 98% 。
利用該株鏈霉菌6^印tomj;cM sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法，其涉及的 詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S^/;to/^cessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)10 30小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入5 15克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)12 24小時(shí)。在補(bǔ)加高濃度阿魏酸連續(xù)培養(yǎng)過程中，振蕩 培養(yǎng)12小時(shí)后加入2% 12% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DMll，當(dāng)阿魏酸濃度低于2 克/升時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)至55 小時(shí)。
其中，步驟(3)中所述的菌體培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選是18 28小時(shí)。
其中，步驟(4)中所述的加入的阿魏酸濃度優(yōu)選為5 15克/升。
其中，步驟(4)中所述的轉(zhuǎn)化時(shí)間優(yōu)選是10 20小時(shí)。
其中，步驟(4)中所述的大孔吸附樹脂加入量優(yōu)選為是5% 10%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培
養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化
鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種
子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素
使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯
化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115。C條件下滅菌20分鐘。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是使用鏈霉菌S/r印to/^ces sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方 法反應(yīng)條件溫和，環(huán)境污染小，產(chǎn)物濃度高，副產(chǎn)物少，生產(chǎn)周期短，成本低，提取步 驟簡單，生產(chǎn)清潔，產(chǎn)品環(huán)境友好，安全可靠，解決了長期以來采用植物原料提取法和 化學(xué)合成法遇到的多種難題，具有很大的應(yīng)用前景。


附圖1為鏈霉菌Sfr卬to;^c^ sp. V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的過程中阿魏酸和香蘭 素的變化曲線。
附圖2為鏈霉菌Srrepto/^ces sp. V-l在補(bǔ)加高濃度阿魏酸連續(xù)轉(zhuǎn)化生產(chǎn)香蘭素的過 程中阿魏酸和香蘭素的變化曲線。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:鏈霉菌S&^tow^yces sp. V-l的篩選
取果樹周圍的土壤，稱取5克溶于100毫升生理鹽水，充分混勻后取10毫升加入50 毫升GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)后加入質(zhì)量體積比 為1%的阿魏酸，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)，重復(fù)這一過程3 5次。將培養(yǎng)的菌液 稀釋1,000，000倍涂布固體培養(yǎng)基上，在3(TC條件下靜置培養(yǎng)20小時(shí)。選取長出的單菌 落接種50毫升的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)24小時(shí)后加入1%質(zhì)量體積比的阿魏酸， 120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)，篩選能夠轉(zhuǎn)化阿魏酸生成香蘭素菌株，最終獲得一株降解 能力較好、能大量積累香蘭素的菌株，即鏈霉菌S^/^/n;;cessp.V-l，該菌株于2006年 7月12日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCM206065。
該菌株其生菌絲亮黃色、基內(nèi)菌絲淺黃色，基內(nèi)菌絲無橫隔、不斷裂，孢子橢圓形、 表面光滑，可利用葡萄糖、木糖、果糖、蔗糖，不能液化明膠，不產(chǎn)硫化氫，所述^印to/^ces sp. V-l菌株的16S rDNA與多株鏈霉菌的16S rDNA序列相似性達(dá)到97 98% 。
在上述篩選轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的菌株的方法中，使用的固體培養(yǎng)基配方為葡 萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化鈉5克/升，瓊 脂16克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115卩條件下滅菌20分鐘。
在上述篩選轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的菌株的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素使 用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯化 鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例2:
鏈霉菌&^ptom_yCM sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)18小時(shí)后加入5克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。20小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌&r卬tomj;cM sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì) 步驟如下
(l)斜面培養(yǎng)將&z"eptom^^sp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件下，靜
置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)18小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入5克/升的阿魏酸，3(TC條 件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到1.5克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為38.3%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115。C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例3:
鏈霉菌S/repto/^ces sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)28小時(shí)后加入5克/升阿魏酸，在30'C條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。20小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的S伊印towyc^sp.V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將S/repto/^cessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件下，靜 置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)28小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入5克/升的阿魏酸，3(TC條 件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到1.6克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為40.8%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115。C條件下滅菌20分鐘。 實(shí)施例4:
鏈霉菌&wPtom_yCeS sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入5克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。20小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌Sfr卬to/^c^sp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S/r印to/^CM sp. V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在30。C條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入5克/升的阿魏酸，3(TC條 件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到2.0克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為51.1%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115"C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 U5r條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例5:
鏈霉菌S/r印to/^cw sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸，在30'C條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。20小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌&wptoA^cessp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S^印tom^MSp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在30。C條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在30。C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色
譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到5.0克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為63.8%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培
養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化
鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種
子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素
使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯
化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例6:
鏈霉菌S/r印to/nyc^ sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入15克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。20小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌S/re;^/^c^sp. V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌Sfr卬tomycessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在30。C條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入15克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到6.5克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為55.3%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例7:
鏈霉菌&re_pf0/n>;CM sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。17小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌S/repto/^cessp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下 (l)斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S^eptomKMsp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中，
在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)17小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到5.75克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為73.4%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115。C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例8:
鏈霉菌S/r印tomK" sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸，在30'C條件下120轉(zhuǎn)/分鐘 振蕩培養(yǎng)。15小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。
本實(shí)施例的鏈霉菌S/r印to/nKessp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S&印《o7^cessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在30'C條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，3(TC 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)15小時(shí)。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到4.6克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為58.7%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115。C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例9:
鏈霉菌5"/reptomj;cM sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘振 蕩培養(yǎng)12小時(shí)后補(bǔ)加5%大孔吸附樹脂DM11 (濕重/體積)，當(dāng)阿魏酸濃度低于2克/升 時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。55小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。 本實(shí)施例的鏈霉菌S/re/7tom少cMsp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌S&印to附y(tǒng)cessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，補(bǔ)加5% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DMll，當(dāng) 阿魏酸濃度低于2克/升時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到16.5克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為46.8%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115t:條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例10:
鏈霉菌S/r印to/7^cM sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸，在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘振 蕩培養(yǎng)12小時(shí)后補(bǔ)加8% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DM11,當(dāng)阿魏酸濃度低于2克/升 時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。55小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。 本實(shí)施例的鏈霉菌^repto/^c^sp.V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌^r印to/^cessp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在3(TC條件
下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中，
在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，3(TC 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)12小時(shí)后補(bǔ)加8% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DMll，當(dāng)
阿魏酸濃度低于2克/升時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。
(5)香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到19.2克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為54.5%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。
實(shí)施例11:
鏈霉菌S/r印to/^cM sp. V-l菌體在種子培養(yǎng)24小時(shí)后以體積百分比6%接種量接入 GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中,菌體培養(yǎng)24小時(shí)后加入10克/升阿魏酸,在3(TC條件下120轉(zhuǎn)/分鐘振 蕩培養(yǎng)12小時(shí)后補(bǔ)加10% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DM11,當(dāng)阿魏酸濃度低于2克/升 時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。55小時(shí)后取樣測定香蘭素濃度。 本實(shí)施例的鏈霉菌S&印tom^^sp. V-l轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素，其涉及的詳細(xì)步驟如下
(1) 斜面培養(yǎng)將鏈霉菌^ftr印to/^c^sp.V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上，在30'C條件 下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；
(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液；
(3) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用步驟(2)所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比6%的接種量 接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在30'C條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)；
(4) 轉(zhuǎn)化使用步驟(3)所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10克/升的阿魏酸，30°C 條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)12小時(shí)后補(bǔ)加10% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DMll， 當(dāng)阿魏酸濃度低于2克/升時(shí)以每次5克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升。
(5) 香蘭素濃度檢測轉(zhuǎn)化樣品經(jīng)分析純乙酸丁酯萃取后使用瓦里安3380氣相色 譜儀檢測香蘭素濃度，最終香蘭素濃度達(dá)到17.5克/升，摩爾轉(zhuǎn)化率為49.6%。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，種子培養(yǎng)使用的液體種子培 養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽汁10克/升，氯化 鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘。固體斜面培養(yǎng)基配方為在液體種 子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
在上述利用該鏈霉菌轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的方法中，菌株轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素 使用的GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/升，硫酸鎂0.8克/升，氯 化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115X:條件下滅菌20分鐘。
權(quán)利要求
1.一株鏈霉菌(Streptomyces sp.V-1)，該菌株名為Streptomyces sp.V-1，于2006年7月12日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC M 206065，其特征是氣生菌絲亮黃色、基內(nèi)菌絲淺黃色，基內(nèi)菌絲無橫隔、不斷裂，孢子橢圓形、表面光滑，可利用葡萄糖、木糖、果糖、蔗糖，不能液化明膠，不產(chǎn)硫化氫，該菌株的16S rDNA序列與多株鏈霉菌的16S rDNA序列相似性達(dá)到97～98％。
2. 如權(quán)利要求1所述的鏈霉菌ftr印to^yca sp. V-l ，其培養(yǎng)步驟為(1) 斜面培養(yǎng)將&r印tomyc^ sp. V-l接種固體斜面培養(yǎng)基上或使用液體種子培養(yǎng) 基，在3(TC條件下，靜置培養(yǎng)24小時(shí)；(2) 制備種子培養(yǎng)液用步驟(1)所得的斜面培養(yǎng)物，接種到液體種子培養(yǎng)基中， 在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)24小時(shí)，制得種子培養(yǎng)液。
3. 如權(quán)利要求2所述的鏈霉菌^^7tom^^ sp. V-l,其特征在于所述種子培養(yǎng)使用的 液體種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖10克/升，酵母粉5克/升，蛋白胨10克/升，麥芽 汁10克/升，氯化鈉5克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。 115'C條件下滅菌20分鐘，固體斜面 培養(yǎng)基配方為在液體種子培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加質(zhì)量體積比1.6%的瓊脂。
4. 利用如權(quán)利要求1或2所述的鏈霉菌5VreptoA^c^ sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭 素的方法，其特征在于用所述S/r印to/n3;c^ sp. V-1菌株以GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基生產(chǎn)香 蘭素，其步驟為(l)轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)使用上述權(quán)利要求2的步驟所得的種子培養(yǎng)液，按體積百分比 6X的接種量接入GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中，在3(TC條件下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)10 30 小時(shí)；(2)轉(zhuǎn)化使用上步所得的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液，加入5 15克/升的阿魏酸，3(TC條件 下，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)12 24小時(shí)。
5. 如權(quán)利要求4所述的利用鏈霉菌^^^owjcM sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的 方法，其特征在于其中步驟(2)在補(bǔ)加高濃度阿魏酸連續(xù)培養(yǎng)過程中，振蕩培養(yǎng) 12小時(shí)后加入2% 12% (濕重/體積)大孔吸附樹脂DMll。
6. 如權(quán)利要求4所述的利用鏈霉菌^r印tomyc^ sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的 方法，其特征在于其中步驟(2)當(dāng)所加入的阿魏酸濃度低于2克/升時(shí)以每次5 克/升的速率補(bǔ)加阿魏酸至終濃度為45克/升，120轉(zhuǎn)/分鐘振蕩培養(yǎng)至55小時(shí)。
7. 如權(quán)利要求4所述的利用鏈霉菌5^eptom少c^ sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的 方法，其特征在于所述GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖15克/升，酵母粉8克/ 升，硫酸鎂0.8克/升，氯化鈉2克/升，調(diào)節(jié)pH至7.2。
8. 如權(quán)利要求4所述的利用鏈霉菌^^ptom少w sp. V-l生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)香蘭素的 方法，其特征在于用所述^"卬towyc^sp.V-l 5菌株以GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基生產(chǎn)香蘭 素，在補(bǔ)加高濃度阿魏酸連續(xù)培養(yǎng)過程中加入5 10% (濕重/體積)大孔吸附樹脂 DMll。
全文摘要
一株鏈霉菌及利用該鏈霉菌生物轉(zhuǎn)化阿魏酸生產(chǎn)高濃度香蘭素的方法。該菌株名為Streptomyces sp.V-1，已于2006年7月12日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏號為CCTCC M 206065，利用該菌株以GY轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化阿魏酸可得到高濃度香蘭素發(fā)酵液，在阿魏酸補(bǔ)料轉(zhuǎn)化過程中加入大孔吸附樹脂DM11時(shí)香蘭素濃度可大幅提高。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是環(huán)境污染小，產(chǎn)物濃度高，副產(chǎn)物少，生產(chǎn)周期短，成本低，提取步驟簡單，生產(chǎn)清潔，產(chǎn)品環(huán)境友好，安全可靠，解決了長期以來采用植物原料提取法和化學(xué)合成法遇到的多種難題，具有很大的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N1/20GK101165168SQ20061011738
公開日2008年4月23日 申請日期2006年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月20日
發(fā)明者華棟梁, 宋理富, 張兆斌, 曾義勇, 毅 杜, 山 林, 霖 甘, 平 許, 洪 陳, 馬翠卿, 魏中浩 申請人:上海愛普香料有限公司;上海凱信生物科技有限公司