專利名稱：簡易薄層液基細胞學檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細胞學檢查方法，尤其是涉及可用于婦科體檢、宮頸癌普查及篩查人群中宮頸癌前病變的簡易薄層液基細胞學檢查方法。
背景技術(shù)：
全世界每年有50萬宮頸癌新發(fā)病例，中國占1/4并呈上升及年輕化趨勢。而宮頸癌是人體唯一可以通過篩查早期診斷，查出癌前病變(上皮內(nèi)腫瘤，intraepilialneoplasia)，100％治愈的惡性腫瘤。因此，研究出一種方法簡便，成本低廉，準確性、特異性、敏感性高的薄層液基細胞學檢查方法用于普查和體檢，具有重要的臨床意義及應(yīng)用價值。
傳統(tǒng)的普通巴氏涂片檢查有15％～20％的漏診率，由于取材和制片方法的不同，有80％的細胞可能被丟失[2]，涂片不均、細胞堆積、粘液和紅細胞的影響，造成病變細胞和病原體不能充分顯示，出現(xiàn)假陰性。而液基細胞學檢查是目前國內(nèi)外公認的陽性檢出率最高、漏診率最低、細胞涂片質(zhì)量最好、病變成分保存完全的檢查方法。但該方法所采用的設(shè)備和試劑、耗材均較昂貴，在普通醫(yī)院開展起來較難，更不適用于大批量普查和體檢。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種簡易薄層液基細胞學檢查方法，它主要是通過采用液基細胞保存液及液基細胞處理液來實現(xiàn)的。該方法步驟少、效果好、陽性檢出率高、漏診率低、成本低廉，適用于廣大基層醫(yī)院開展婦科體檢及宮頸癌普查，達到了有效篩查人群中宮頸癌前病變的目的。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下簡易薄層液基細胞學檢查方法，其特征在于包括如下步驟A、用宮頸管細胞刷及刮板采樣后，將收集到細胞的細胞刷置于加有液基細胞保存液的試管中振蕩1分鐘；B、從步驟A的試管中取出細胞刷，加入基液細胞處理液4ml振蕩1分鐘，再置于離心機中以500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘；C、取棄步驟B試管中的上清液，振蕩數(shù)秒鐘，用加樣槍吸取試管中沉淀物樣本(盡量避開絮狀物)，按同一方向涂于清潔載玻片上，并形成薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干；D、將烘干后的薄片標本用95％(v/v)的乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘；E、將步驟D固定后的標本用自來水洗滌后進行巴氏染色或HE染色。
本發(fā)明所述的液基細胞保存液為2％(v/v)的冰醋酸與1.91％～2.11％(g/v)的苯酚的混合液。
所述液基細胞保存液的配制方法為取21ml液化酚加蒸餾水1280ml配制成苯酚濃度為1.91％～2.11％(g/v)的苯酚溶液后，再加入26ml冰醋酸，即得濃度為2％(v/v)的冰醋酸和濃度為1.91％～2.11％(g/v)的苯酚混合液。
本發(fā)明所述的液基細胞處理液為0.8％～1％(v/v)的堿性乙二胺四乙酸二鈉，pH8～8.5。
所述液基細胞處理液的配制方法為取乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)1g溶于100ml蒸餾水中，再加入8％的氫氧化鈉溶液，將溶液的pH調(diào)至8～8.5即得。
本發(fā)明步驟C所形成的薄片為直徑2cm×4cm的橢圓形區(qū)域。
本發(fā)明簡易薄層液基細胞學檢查方法的理論依據(jù)1、取樣采用宮頸管細胞刷及刮板，能全面收集宮頸外口腺鱗移行區(qū)及宮頸管細胞。
2、液基細胞保存液根據(jù)子宮頸的病理、生理特點，所取樣本中可能含有粘液和紅細胞，粘液影響細胞展開和覆蓋病變細胞，紅細胞稀釋病變細胞干擾閱片。本法使用1.5％～2％(v/v)冰醋酸破壞、溶解紅細胞，快速滲透到細胞及各種病原體內(nèi)，對細胞和病原體的核蛋白起凝固作用，固定細胞核及滅活各種病原體；1.91％～2.11％(g/v)苯酚作為防腐殺菌劑，能有效地殺滅霉菌、細菌、病毒等病原體，保護工作環(huán)境及工作人員健康。因此本發(fā)明保存液巧妙地應(yīng)用了冰醋酸和苯酚只凝固核蛋白，而不會凝固細胞質(zhì)蛋白的作用，避免了上皮細胞的相互粘附堆積，有利于保存細胞固定細胞核。所制標本保存2周細胞無形態(tài)變化。
3、液基細胞處理液子宮頸粘液是一種糖蛋白，具有蛋白質(zhì)的特性，在水溶液中能緩慢溶解。使用堿性乙二胺四乙酸二鈉可解除細胞間聯(lián)結(jié)，分散細胞，溶解纖維蛋白和血紅蛋白等蛋白質(zhì)微粒，使涂片背景清晰透明、細胞分散、分布均勻。同時，該堿性溶液還起到中和保存液中的酸，使pH保持在7左右，有利于染色，保證染色效果的作用。
本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在
1、采用宮頸管細胞刷及刮板，能夠最大限度地在宮頸外口、腺鱗移行區(qū)及宮頸管部位準確全面地取中病變細胞，并完全地保留標本，防止丟失。
2、細胞在液基中，經(jīng)振蕩器充分振蕩，病變細胞均勻分布，隨機取樣涂片，提高病變細胞的檢出率。
3、在制片過程中巧妙地應(yīng)用了冰醋酸和苯酚只凝固核蛋白，而對細胞蛋白質(zhì)不凝固的作用，不會導致上皮細胞相互粘附堆積，不凝固粘液，不需要作繁瑣的處理，能保證細胞形態(tài)完好，不變性，細胞展開良好，粘液和紅細胞能有效祛除，涂片背景清潔干凈，便于輕松閱片，易于識別病變細胞，從而提高病變細胞的陽性檢出率，減少漏診。
4、本發(fā)明成本低廉，方法簡便，易于普及推廣，適用于基層醫(yī)院開展細胞學檢查。
具體實施例方式
實施例1方法步驟1、婦科醫(yī)師使用刮板刮取樣本洗入液基細胞保存液中，同時使用宮頸管細胞刷，插入宮頸管外口，按順時針旋轉(zhuǎn)7～10圈后取出，將細胞刷插入加有4ml液基細胞保存液的試管中不取出，送檢。液基細胞學保存液為2％(V/V)的冰醋酸與2％(g/V)的苯酚混合溶液。
2、病理醫(yī)師將盛標本的試管置震蕩器上振蕩1分鐘，充分洗滌后棄取細胞刷，加入4ml 1％的堿性乙二胺四乙酸二鈉水溶液)，振蕩1分鐘，500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘，取棄上清液，用加樣槍吸取沉淀物樣本，吸取時盡量避開絮狀物，按同一方向涂于清潔載玻片上，涂成直徑2cm×4cm的橢圓形區(qū)域。即涂成肉眼可見的半透明稍微混濁的薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干。再用95％乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘，自來水洗數(shù)次后巴氏染色或HE染色。
實施例2對比試驗經(jīng)數(shù)百例臨床研究，其敏感性為91.6％，陰性預測值達到98.7％。陽性檢出率高于普通巴氏涂片(p＜0.05)因此適用于大批量婦科普查、體檢和基層醫(yī)院的細胞學檢查，其低廉的收費可降低患者負擔。見表1、表2。
表1 209例簡易液基細胞學檢查結(jié)果與普通巴氏涂片檢查結(jié)果比較

表2 涂片質(zhì)量比較

權(quán)利要求
1.簡易薄層液基細胞學檢查方法，其特征在于包括如下步驟A、用宮頸管細胞刷及刮板采樣后，將收集到細胞的細胞刷置于加有液基細胞保存液的試管中振蕩1分鐘；B、從步驟A的試管中取出細胞刷，加入基液細胞處理液振蕩1分鐘，再置于離心機中以500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘；C、取棄步驟B試管中的上清液，用加樣槍吸取試管中沉淀物樣本，按同一方向涂于清潔載玻片上，并形成薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干；D、將烘干后的薄片標本用95％的乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘；E、將步驟D固定后的標本用自來水洗滌后進行巴氏染色或HE染色。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的簡易薄層液基細胞學檢查方法，其特征在于所述的液基細胞保存液為2％的冰醋酸與1.91％～2.11％的苯酚的混合液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的簡易薄層液基細胞學檢查方法，其特征在于所述液基細胞保存液的配制方法為取21ml液化酚加蒸餾水1280ml配制成苯酚濃度為1.91％～2.11％的苯酚溶液后，再加入26ml冰醋酸，即得濃度為2％的冰醋酸和濃度為1.91％～2.11％的苯酚混合液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的簡易薄層液基細胞學檢查方法，其特征在于所述的液基細胞處理液為0.8％～1％、pH8～8.5的堿性乙二胺四乙酸二鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適用于婦科體檢、宮頸癌普查及篩查人群中宮頸癌前病變的簡易薄層液基細胞學檢查方法，步驟包括用宮頸管細胞刷及刮板收集樣本、樣本置于液基細胞保存液中、加入基液細胞處理液、振蕩、離心分離、取棄上清液、加樣槍吸取沉淀物樣本、涂片、薄片烘干、95％的乙醇浸泡或噴霧固定、洗滌、染色。本發(fā)明方法簡便、步驟少、陽性檢出率高、漏診率低、成本低廉，能有效清除子宮頸細胞學檢查標本中的紅細胞、粘液等干擾成分，制片效果優(yōu)良。
文檔編號C12Q1/02GK1967196SQ20061002185
公開日2007年5月23日 申請日期2006年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月14日
發(fā)明者邱瑞成 申請人:綿竹市人民醫(yī)院