專利名稱：：用于淀粉加工的酶的制作方法用于淀粉加工的酶與序列表和保藏微生物的交叉參考本申請(qǐng)包含序列表形式的信息，其附加于本申請(qǐng)，同時(shí)伴隨本申請(qǐng)也提交了其數(shù)據(jù)載體。此外，本申請(qǐng)涉及保藏的微生物。本文將數(shù)據(jù)載體的內(nèi)容和保藏的微生物完全加入作為參考。發(fā)明所屬領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含碳水化合物結(jié)合模塊("CBM")和a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域的多肽。另外，本發(fā)明涉及包含有用的a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域和/或CBM的野生型a-淀粉酶多肽，還涉及催化結(jié)構(gòu)域序列和/或CBM序列。本發(fā)明還涉及這些多肽在將淀粉降解為較小的寡糖和/或多糖片段的淀粉液化過(guò)程中的用途。發(fā)明背景已經(jīng)描述了許多將淀粉轉(zhuǎn)化為淀粉水解產(chǎn)物，如麥芽糖、葡萄糖或特種糖漿的酶和方法，所述淀粉水解產(chǎn)物或者用作甜味劑或者用作其它糖類例如果糖的前體。也可以將葡萄糖發(fā)酵為乙醇或其它發(fā)酵產(chǎn)物，如檸檬酸、谷氨酸單鈉、葡糖酸、葡糖酸鈉、葡糖酸鈣、葡糖酸鉀、葡糖酸△內(nèi)酯(gluconodeltalactone)、或者異抗壞血酸鈉、衣康酸、乳酸、葡糖酸；酮；氨基酸、谷氨酸(谷氨酸單鈉(sodiummonoglutaminate))、青霉素、四環(huán)素；酶；維生素，如核黃素、B12、p-胡蘿卜素或激素。淀粉是由葡萄糖單元的鏈組成的高分子量多聚物。其通常由約80%支鏈淀粉和20%直鏈淀粉構(gòu)成。支鏈淀粉是支鏈多糖，其中a-l,4D-葡萄糖殘基的線性鏈通過(guò)a-l,6糖苦鍵相連。直鏈淀粉是線性多糖，由通過(guò)a-l，4糖苷鍵連接在一起的D-吡喃型葡萄糖單位組成。在將淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性淀粉水解產(chǎn)物的情況下，所述淀粉被解聚。常規(guī)解聚方法由糊化步驟和兩個(gè)連續(xù)的處理步驟，即液化處理和糖化處理組成。顆粒狀淀粉由細(xì)微的顆粒組成，其在室溫下不溶于水。當(dāng)加熱水性淀粉漿時(shí)，所述顆粒膨脹并最終破裂，將淀粉分子分散到溶液中。在該"糊化"過(guò)程中，粘性急劇增加。由于典型工業(yè)方法中固體水平為30-40%,因而必須稀釋或者"液化，，淀粉以使之能夠被處理?，F(xiàn)在，此粘性的減小大多通過(guò)酶促降解而獲得。液化步驟期間，長(zhǎng)鏈淀粉被(X-淀粉酶降解為較小的分枝和線性單元(麥芽糖糊精)。典型地，液化過(guò)程在約105-110。C實(shí)施約5至10分鐘，之后在約95。C實(shí)施大約l-2小時(shí)。然后將溫度降低到60。C，添加葡糖淀粉酶(也稱為GA或AMG)或(3-淀粉酶以及任選脫支酶，如異淀粉酶或支鏈淀粉酶，并且進(jìn)行糖化過(guò)程約24至72小時(shí)。由上述討論可明顯看出傳統(tǒng)的淀粉轉(zhuǎn)化過(guò)程是非常耗能的，因?yàn)椴煌襟E期間在溫度方面有不同的需求。因此希望能夠選擇和/或設(shè)計(jì)用于所述過(guò)程的酶，以便能夠?qū)嵤┱麄€(gè)過(guò)程而無(wú)需將淀粉糊化。美國(guó)專利4，591,560、4,727,026、和4,009,074、EP專利0171218以及丹麥專利申請(qǐng)PA200300949有這樣的"生淀粉，，處理過(guò)程。本發(fā)明披露了特別為這樣的過(guò)程設(shè)計(jì)的多肽，其包含CBM的氨基酸序列和淀粉降解酶的氨基酸序列。雜合酶是WO9814601、WO007765、和PCT/US2004/020499的主題。發(fā)明概述發(fā)明人已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)通過(guò)向特定a-淀粉酶添加碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)能夠改變活性和特異性，從而增強(qiáng)不同淀粉降解過(guò)程的功效，例如，包括生的，例如非糊化淀粉和/或糊化淀粉的降解。也可以通過(guò)用另一種CBM—#代一種CBM而改變活性和特異性。這些由具有a-淀粉酶活性和主要具有針對(duì)淀粉的親合力的碳水化合物結(jié)合模塊的多肽組成的雜合體較現(xiàn)有的a-淀粉酶有優(yōu)勢(shì)，這通過(guò)選擇具有所需特性的催化結(jié)構(gòu)域來(lái)實(shí)現(xiàn)，所需特性例如pH譜、溫度譜、抗氧化性、4丐穩(wěn)定性、底物親合力或產(chǎn)物鐠，該催化結(jié)構(gòu)域能夠與碳水化合物結(jié)合模塊聯(lián)合，所述碳水化合物結(jié)合模塊具有更強(qiáng)或更弱結(jié)合親合力，所述親合力例如針對(duì)直鏈淀粉的特異性親合力、針對(duì)支鏈淀粉的特異性親合力或者針對(duì)碳水化合物中的特定結(jié)構(gòu)的親合力。因此本發(fā)明涉及相對(duì)于不含CBM的a-淀粉酶和/或相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)的淀粉酶具有改變特性的雜合體，如在低pH，例如，在低于4的pH，如在3.5時(shí)具有增強(qiáng)的穩(wěn)定性和/或活性，在低pH甚至在缺乏葡糖淀粉酶的情況下或者在低葡糖淀粉酶水平時(shí)具有針對(duì)顆粒狀淀粉的增強(qiáng)活性和/或顆粒狀淀粉降解增強(qiáng)，和/或具有改變的產(chǎn)物譜。由于這些多肽的優(yōu)越的水解活性，整個(gè)淀粉轉(zhuǎn)化處理能夠無(wú)需糊化淀粉的完全或部分糊化的淀粉。因此第一個(gè)方面本發(fā)明提供包含含有催化模塊的第一個(gè)氨基酸序列和含有碳水化合物結(jié)合模塊的第二個(gè)氨基酸序列的多肽，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性，其中所述第二個(gè)氨基酸序列與選自下組的任一氨基酸序列具有至少60%的同源性SEQIDNO:52、SEQIDNO:76、SEQIDNO:78、SEQIDNO:80、SEQIDNO:82、SEQIDNO:84、SEQIDNO:86、SEQIDNO:88、SEQIDNO:90、SEQIDNO:92、SEQIDNO:94、SEQIDNO:96、SEQIDNO:98、SEQIDNO:109、SEQIDNO:137、SEQIDNO:139、SEQIDNO:141和SEQIDNO:143。第二個(gè)方面本發(fā)明提供具有a-淀粉酶活性的多肽，其選自下組(a)具有與選自下組的成熟多肽的氨基酸有至少75%同源性的氨基酸序列的多肽SEQIDNO:14中的氨基酸l-441、SEQIDNO:18中的氨基酸1-471、SEQIDNO:20中的氨基酸l-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸l-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸l-477、SEQIDNO:42中的氨基酸l-449、SEQIDNO:115中的氨基酸l-442、SEQIDNO:l17中的氨基酸1-441、SEQIDNO:125中的氨基酸l-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-626、SEQIDNO:161中的氨基酸24-630、SEQIDNO:163中的氨基酸27-602、SEQIDNO:165中的氨基酸21-643、SEQIDNO:167中的氨基酸29-566、SEQIDNO:169中的氨基酸22-613、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO:173中的氨基酸21-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-773、SEQIDNO:177中的氨基酸22-586、SEQIDNO:179中的氨基酸20-582，(b)由核苷酸序列編碼的多肽，所述核苷酸序列(i)在至少低嚴(yán)緊條件下與SEQIDNO:13中的核苦酸1-1326、SEQIDNO:17中的核苷酸1-1413、SEQIDNO:19中的核苷酸1-1350、SEQIDNO:21中的核香酸1-1338、SEQIDNO:25中的核苷酸1-1494、SEQIDNO:27中的核香酸52-1539、SEQIDNO:29中的核芬酸1-1521、SEQIDNO:31中的核苷酸1-1443、SEQIDNO:33中的核芬酸1-1485、SEQIDNO:37中的核苷酸1-1431、SEQIDNO:41中的核香酸1-1347、SEQIDNO:l14中的核香酸1-1326、SEQIDNO:116中的核苦酸1-1323、SEQIDNO:124中的核苷酸1-1431、SEQIDNO:130中的核苦酸1-1338、SEQIDNO:156中的核苷酸121-1443、SEQIDNO:158中的核芬酸64-1878、SEQIDNO:160中的核芬酸70-1890、SEQIDNO:162中的核苷酸79-1806、SEQIDNO:164中的核芬酸61-1929、SEQIDNO:166中的核香酸85-1701、SEQIDNO:168中的核芬酸64-1842、SEQIDNO:170中的核香酸61-1389、SEQIDNO:172中的核香酸61-1764、SEQIDNO:174中的核芬酸61-2322、SEQIDNO:176中的核芬酸64-1761、SEQIDNO:178中的核苷酸58-1749雜交，或者(ii)在至少中等嚴(yán)緊條件下與在SEQIDNO:13中核苷酸l-1326、SEQIDNO:17中核苦酸l-1413、SEQIDNO:19中核香酸1-1350、SEQIDNO:21中核苷酸l-1338、SEQIDNO:25中核苷酸1-1494、SEQIDNO:27中核苦酸52-1539、SEQIDNO:29中核苦酸l-1521、SEQIDNO:31中核苷酸l-1443、SEQIDNO:33中核苷酸1-1485、SEQIDNO:37中核芬酸l-1431、SEQIDNO:41中核苷酸1-1347、SEQIDNO:114中核苷酸1-1326、SEQIDNO:116中核苷酸l-1323、SEQIDNO:124中核苷酸1-1431、SEQIDNO:130中核苷酸1-1338、SEQIDNO:156中核苷酸121-1443、SEQIDNO:158中核普酸64-1878、SEQIDNO:160中核苦酸70-1890、SEQIDNO:162中核香酸79-1806、SEQIDNO:164中核苷酸61-1929、SEQIDNO:166中核芬酸85-1701、SEQIDNO:168中核苷酸64-1842、SEQIDNO:170中核苷酸61-1389、SEQIDNO:172中核苷酸61-1764、SEQIDNO:174中核苦酸61-2322、SEQIDNO:176中核苷酸64-1761、SEQIDNO:178中核苷酸58-1749所示多核苷酸中包含的cDNA序列雜交，或者(iii),(i)或(ii)的互補(bǔ)鏈；和(c)在選自下組的氨基酸序列中包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸的保守性替換、缺失、和/或插入的變體SEQIDNO:14中的氨基酸l-441、SEQIDNO:18中的氨基酸l-471、SEQIDNO:20中的氨基酸1-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸l-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸l-477、SEQIDNO:42中的氨基酸1-449、SEQIDNO:115中的氨基酸1-442、SEQIDNO:l17中的氨基酸1-441、SEQIDNO:125中的氨基酸l-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-626、SEQIDNO:161中的氨基酸24-630、SEQIDNO:163中的氨基酸27-602、SEQIDNO:165中的氨基酸21-643、SEQIDNO:167中的氨基酸29-566、SEQIDNO:169中的氨基酸22-613、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO:173中的氨基酸21-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-773、SEQIDNO:177中的氨基酸22-586和SEQIDNO:179中的氨基酸20-582。第二個(gè)方面本發(fā)明提供具有碳水化合物結(jié)合親合力的多肽，選自下組(a)i)包含與選自下組的序列具有至少60。/。同源性的氨基酸序列的多肽SEQIDNO:159的氨基酸529-626、SEQIDNO:161的氨基酸533-630、SEQIDNO:163的氨基酸508-602、SEQIDNO:165的氨基酸540-643、SEQIDNO:167的氨基酸502-566、SEQIDNO:169的氨基酸513-613、SEQIDNO:173的492-587、SEQIDNO:175的氨基酸30-287、SEQIDNO:177的氨基酸487-586、和SEQIDNO:179的氨基酸482-582;(b)由在低嚴(yán)緊條件下與多核苷酸探針雜交的核苷酸序列所編碼的多肽，所述多核苷酸探針選自下組(i)選自下組的序列的互補(bǔ)鏈SEQIDNO:158中的核苷酸1585-1878、SEQIDNO:160中的核苷酸1597-1890、SEQIDNO:162中的核苷酸1522-1806、SEQIDNO:164中的核苷酸1618-1929、SEQIDNO:166中的核苷酸1504-1701、SEQIDNO:168中的核苷酸1537-1842、SEQIDNO:172中的核苦酸1474-1764、SEQIDNO:174中的核苷酸61-861、SEQIDNO:176中的核苷酸1459-1761、和SEQIDNO:178中的核苷酸1444-1749，(c)(a)或(b)的具有碳水化合物結(jié)合親合力的片段。在其它方面本發(fā)明提供第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽用于糖化、用于包括發(fā)酵的過(guò)程中、用于淀粉轉(zhuǎn)化過(guò)程中、用于生產(chǎn)寡糖的過(guò)程例如生產(chǎn)麥芽糖糊精或葡萄糖和/或果糖糖漿的過(guò)程中、用于生產(chǎn)燃料或飲用乙醇、用于生產(chǎn)飲料、和/或用于生產(chǎn)有機(jī)化合物如檸檬酸、抗壞血酸、賴氨酸、谷氨酸的發(fā)酵方法中的用途。又一方面本發(fā)明提供包含第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽的組合物。另一方面本發(fā)明提供糖化淀粉的方法，其中用第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽處理淀粉。又一方面本發(fā)明提供一種方法，包括a)將淀粉與包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽接觸，所述多肽例如，第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽；b)將所述淀粉與所述多肽一起保溫；c)發(fā)酵生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物，d)任選回收發(fā)酵產(chǎn)物，其中具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以小于0.5AGU/gDS淀粉底物的量存在，并且其中步驟a、b、c、和/或d可以分開(kāi)或同時(shí)進(jìn)行。另一方面本發(fā)明提供一種方法，包括a)將淀粉底物與經(jīng)轉(zhuǎn)化以表達(dá)多肽的酵母細(xì)胞接觸，所述多肽包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊，例如，第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽；b)將所述淀粉底物與所述酵母一起保存；c)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇；d)任選回收乙醇，其中步驟a)、b)、和c)分開(kāi)或同時(shí)進(jìn)行。在優(yōu)選實(shí)施方案中包括在至少90%w/w的所述淀粉底物足以轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵糖的時(shí)間和溫度下與所述酵母一起保存所述底物。又一方面本發(fā)明提供通過(guò)發(fā)酵由含淀粉材料生產(chǎn)乙醇的方法，所述方法包括(i)用包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽液化所述含淀粉材料，例如，第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽；(ii)糖化所獲得的液化醪(mash);(iii)在發(fā)酵生物存在下發(fā)酵步驟(ii)中獲得的材料并任選包括回收乙醇。在更多方面本發(fā)明提供編碼根據(jù)第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽的DNA序列，包含所述DNA序列的DNA構(gòu)建體，攜帶所述DNA構(gòu)建體的重組表達(dá)載體，用所述DNA構(gòu)建體或所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞，其為微生物，特別是細(xì)菌或真菌細(xì)胞、酵母或植物細(xì)胞。發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)"顆粒狀淀粉"理解為生的(raw)未煮熟的淀粉，即，尚未進(jìn)行糊化的淀粉。淀粉以微小的不溶于水的顆粒在植物中形成。這些顆粒以低于起始糊化溫度的溫度保存在淀粉中。當(dāng)放進(jìn)冷水中時(shí)，顆?？梢晕丈倭恳后w。一直到50。C至70。C時(shí)溶脹都是可逆的，可逆性程度取決于特定淀粉。溫度更高時(shí)，稱為糊化的不可逆溶脹開(kāi)始。術(shù)語(yǔ)"起始糊化溫度，，理解為淀粉開(kāi)始糊化的最低溫度。在水中加熱的淀粉在50。C與75°C之間開(kāi)始糊化，糊化的精確溫度取決于特定的淀粉，熟練技術(shù)人員能夠很容易地測(cè)定。因此，起始糊化溫度根據(jù)植物物種、植物物種的特定品種以及生長(zhǎng)條件可以有所不同。在本發(fā)明的上下文中，給定的淀粉的起始糊化溫度指用GorinsteinS.andLii.C.,Starch/St她e,Vol.44(12)pp.461-466(1992)所述方法測(cè)定時(shí)，5%的淀粉顆粒中雙折射喪失時(shí)的溫度。術(shù)語(yǔ)"可溶性淀粉水解產(chǎn)物"理解為本發(fā)明方法的可溶性產(chǎn)物，可以包含單糖、二糖、和寡糖，如葡萄糖、麥芽糖、麥芽糖糊精、環(huán)糊精及這些的任意混合物。優(yōu)選地，顆粒狀淀粉的干燥固體的至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97°/。或至少98%;故轉(zhuǎn)化為可溶性淀粉水解產(chǎn)物。術(shù)語(yǔ)多肽"同源性"理解為兩個(gè)序列之間的同一性程度，其表明第一個(gè)序列由第二個(gè)序列衍生。可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的計(jì)算機(jī)程序的方式如GCG程序包中提供的GAP(威斯康星(Wisconsin)程序包的程序手冊(cè)，第8版，1994年8月，GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,威斯康星,USA53711)適當(dāng)?shù)販y(cè)定同源性(Needleman,S.B.andWunsch,C.D.，(1970)'JournalofMolecularBiology,48,443-453)。氨基酸序列比較采用以下的設(shè)置缺口構(gòu)建罰分3.0，缺口延伸罰分O.l。用于同源性測(cè)定的有關(guān)氨基酸序列部分是成熟多肽，即不含信號(hào)肽。用于測(cè)定核苷酸探針與同源DNA或RNA序列在低、中、或高嚴(yán)緊性下雜交的合適的實(shí)驗(yàn)條件包括將包含待雜交DNA片段或RNA的濾器預(yù)浸在5xSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉，Sambrooketal.1989)中10min,濾器在5xSSC、5xDenhardt，s溶液(Sambrooketal.1989)、0.5%SDS和100微克/ml變性的超聲處理鮭精DNA(Sambrooketal.1989)的溶液中預(yù)雜交，之后在包含濃度為10ng/ml的隨才幾引物的(Feinberg，A.P.andVogelstein，B.(1983)Ana1.Biochem.132:6-13)、32p畫(huà)dCTP標(biāo)記的(比活〉1x109cpm^效克)4罙針的相同溶液中于約45。C雜交12小時(shí)。然后所述濾器在2xSSC、0.5%SDS中于約55。C(低嚴(yán)緊性)，更優(yōu)選于約60。C(中等嚴(yán)緊性)，再優(yōu)選于約65。C(中等/高嚴(yán)緊性)，更為優(yōu)選于約70。C(高嚴(yán)緊性)，甚至更優(yōu)選于約75。C(極高嚴(yán)緊性)下洗兩次。用x-射線膠片檢測(cè)在這些條件下與所述寡核苷酸探針雜交的分子。多肽本發(fā)明的多肽可以是雜合酶，或者所述多肽可以是已經(jīng)包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的野生型酶。本發(fā)明的多肽也可以是這種野生型酶的變體。雜合體可以通過(guò)編碼第一個(gè)氨基酸序列的第一個(gè)DNA序列與編碼第二個(gè)氨基酸序列的第二個(gè)DNA序列的融合來(lái)生產(chǎn)，或者雜合體可以基于有關(guān)合適的CBM、接頭和催化結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列的知識(shí)作為完全合成的基因來(lái)生產(chǎn)。本文術(shù)語(yǔ)"雜合酶"或"雜合多肽"用于表征本發(fā)明包含含有至少一個(gè)催化模塊的第一個(gè)氨基酸序列和含有包含至少一個(gè)碳水化合物結(jié)合模塊的第二個(gè)氨基酸序列的那些多肽，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性，其中第一個(gè)和第二個(gè)氨基酸序列來(lái)自不同的來(lái)源。術(shù)語(yǔ)"來(lái)源"理解為例如，但不限于親本酶，例如淀粉酶或葡糖淀粉酶，或包含合適的催化模塊和/或合適的CBM和/或合適的接頭的其它催化活性。酶分類編號(hào)(EC編號(hào))依照國(guó)際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合會(huì)命名委員會(huì)的j,薦(Recommendations(1992)oftheNomenclatureCommitteeofthe1992)。本文提到的多肽包括包含a-淀粉酶(EC3.2丄1)的氨基酸序列的多肽種類，所述a-淀粉酶的氨基酸序列連接(即，共價(jià)結(jié)合)于包含碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)的氨基酸序列。含CBM的雜合酶，以及其制備和純化的詳細(xì)描述是本領(lǐng)域已知的[參見(jiàn)，例如，WO90/00609、WO94/24158和WO95/16782，以及Greenwoodetal.BiotechnologyandBioengineering44(1994)pp.1295-1305]。例如可以通過(guò)將DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞中，并培養(yǎng)所轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞以表達(dá)融合基因而制備它們，所述DNA構(gòu)建體至少包含在具有或沒(méi)有接頭情況下連接于編碼感興趣的多肽的DNA序列的編碼碳水化合物結(jié)合模塊的DNA片段。本發(fā)明多肽中的CBM可以位于多肽C-末端、N-末端或內(nèi)部。一個(gè)實(shí)施方案中所述多肽可以包含超過(guò)一個(gè)的CBM，例如，兩個(gè)CBM;—個(gè)位于C-末端，另一個(gè)位于N-末端，或者兩個(gè)CBMs—前一后位于C-末端、N-末端或內(nèi)部。然而，同樣考慮具有超過(guò)兩個(gè)CBM的多肽。本發(fā)明的OC-淀粉酶本發(fā)明涉及可用作CBM、接頭和/或催化模塊的供體(親本淀粉酶)的a-淀粉酶多肽。本發(fā)明的多肽可以是野生型a-淀粉酶(EC3.2.1.l)或者所述多肽也可以是這種野生型酶的變體。另外本發(fā)明的多肽可以是這種酶的片段，例如，催化結(jié)構(gòu)域，即具有a-淀粉酶活性但CBM存在于野生型酶中時(shí)與其分開(kāi)的片段，或者例如CBM，即具有碳水化合物結(jié)合模塊的片段。它也可以是包含這種a-淀粉酶的片段的雜合酶，例如包含源于本發(fā)明的a-淀粉酶的催化結(jié)構(gòu)域、接頭和/或CBM。另外，本發(fā)明的多肽可以是這種酶的片段，例如，仍然包含功能性催化結(jié)構(gòu)域以及如果存在于所述野生型酶中的CBM的片段，或者，例如，野生型酶的片段，該野生型酶不包含CBM，并且其中所述片段包含功能性催化結(jié)構(gòu)域。a-淀粉酶本發(fā)明涉及包含碳水化合物結(jié)合模塊("CBM")和具有a-淀粉酶活性的新的多肽。這些多肽可以源于任何生物，優(yōu)選真菌或細(xì)菌起源的那些。本發(fā)明的a-淀粉酶包括可由選自下列屬中的物種獲得的a-淀粉酶犁頭霉屬(J^S7'ofej!)、4支頂孑包霉屬(^cre/wo"/MW)、4偉毛殼菌屬(Co"/。c/z"eto)、革蓋菌屬(Co〃'o/m力、CV7ptos/0W0/2s7、、Z)/c/zoto附oc/aWMm、刺殼雙毛菌屬(D/"e附a5/or/M附)、色二孑包菌屬(Z)z)/。(i/a)、鐮刀菌屬(Fwsan,w附)、津占帚霉屬(G7z'oc/"(i/畫(huà))、Afa/6ra"c/zea、亞灰樹(shù)花菌屬(她r^7ws)、叢赤殼菌(7Ve"en'a)、青霉屬(戶ew'c/〃/wm)、才艮毛霉屬(//H'2W7wcor)、韋刃革菌屬(5Verewm)、4連霉菌屬OSVrepfomyces)、Sw6w/^/ora、共頭審屬(5ywcep/za/asfrMm)、77zam/"<i/Mm、77zw/woasci^、p者:^s絲孑包菌屬(277erwom^yce51)、4全菌屬(rrawefes)、7>/c/zo//7aea和fe&an'a。a-淀粉酶可以源于表1所列出的任何屬、種或序列。優(yōu)選所述a-淀粉酶源于選自下組的任何物種疏綿狀嗜熱絲孢菌(T7ze,，om;;c^/朋Mg/"asw力，特別是具有SEQIDNO:14中氨基酸1-441的多肽；Afa仏ra"c/zea屬的菌種(Ma/6ra"c/2ea),特別是具有SEQIDNO:18中的氨基酸1-471的多肽；微小根毛霉(朋/zomwcw/ms/〃w)，特別是具有SEQIDNO:20中的氨基酸1-450的多肽；D/c/zotomoc/aWwm/7eMe/""e/，特別是具有SEQIDNO:22中的氨基酸1-445的多肽；韌革菌的菌種(&ere"wW.)，特別是具有SEQIDNO:26中的氨基酸1-498的多肽；栓菌屬的菌種(rraweteH/7.)，特別是具有SEQIDNO:28中的氨基酸18-513的多肽；鮭貝革蓋菌(Con'o/wcwmom),特別是具有SEQIDNO:30中的氨基酸1-507的多肽；刺殼雙毛菌屬的菌種(Z)/"e"7aw0n'Mm)，特別是具有SEQIDNO:32中的氨基酸1-481的多肽；Co^to^oWc^/s的菌種，特別是具有SEQIDNO:34中的氨基酸1-495的多肽；色二孢菌屬的菌種(D^/Wa)，特別是具有SEQIDNO:38中的氨基酸1-477的多肽；粘帚霉屬的菌種(G//oc/aWMmsp.)，特別是具有SEQIDNO:42中的氨基酸1-449的多肽；叢赤殼菌屬的菌種(A^c/n'aw.)，特別是具有SEQIDNO:115中的氨基酸1-442的多肽;鐮刀菌屬的菌種(Fwa〃'wm乎)，特別是具有SEQIDNO:117中的氨基酸1-441的多肽；嗜熱子嚢菌(77ze/7woa"w冊(cè)ra""cw力，特別是具有SEQIDNO:125中的氨基酸1-477的多肽；777aw/"^wme/egara，特別是具有SEQIDNO:131中的氨基酸1-446的多肽；冠毛犁頭霉04Z^'A'flcWWato)，特別是具有SEQIDNO:157中的氨基酸41-481的多肽；枝頂孢霉屬的菌種(Jcremom'ww平)，特別是具有SEQIDNO:159中的氨基酸22-626的多肽；錐毛殼菌屬的菌種(Ow/oc/weto),特別是具有SEQIDNO:161中的氨基酸24-630的多肽；巨多孔菌(Afen^/wg/ga"Zew力，特別是具有SEQIDNO:163中的氨基酸27-602的多肽；青霉屬的菌種(尸em'"'肌wm平)，特別是具有SEQIDNO:165中的氨基酸21-643的多肽；淤泥鏈霉菌OS^印tom少cw//mow")，特別是具有SEQIDNO:167中的氨基酸29-566的多肽；^6wfc;ora/racwrrato,特別是具有SEQIDNO:169中的氨基酸22-613的多月太；總卄犬共頭霉(5^wcep/2a/aWrMwracewwwm),4爭(zhēng)另ll是具有SEQIDNO:171中的氨基酸21-463的多肽；皺褶栓菌(rrametescwrwgato),特別是具有SEQIDNO:173中的氨基酸21-587的多肽；7Hc/70//2aeasaccato，特別是具有SEQIDNO:175中的氨基酸30-773的多肽；J^/^n'an^n'cosa,特別是具有SEQIDNO:177中的氨基酸22-586的多肽和P^sar/a^%r"/，特別是具有SEQIDNO:179中的氨基酸20-582的多肽。還優(yōu)選與前述多肽中的任一個(gè)的成熟肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或者甚至至少98%同源性的a-淀粉酶氨基酸序列。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述a-淀粉酶氨基酸序列具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)4立點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)4立點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)4立點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)1個(gè)位點(diǎn)不同于前述氨基酸序列中的任一個(gè)的氨基酸序列。還優(yōu)選由DNA序列編碼的a-淀粉酶氨基酸序列，所述DNA序列與選自下組的多核苷酸的任一序列具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或者甚至至少98%同源性，所述多核香酸序列表示為SEQIDNO:l、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:110、SEQIDNO:112、SEQIDNO:114、SEQIDNO:116、SEQIDNO:118、SEQIDNO:120、SEQIDNO:122、SEQIDNO:124、SEQIDNO:126、SEQIDNO:128、SEQIDNO:130、SEQIDNO:132、SEQIDNO:134、SEQIDNO:154和SEQIDNO:156、SEQIDNO:13、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:37、SEQIDNO:41、SEQIDNO:114、SEQIDNO:116、SEQIDNO:124、SEQIDNO:130、SEQIDNO:156、SEQIDNO:158、SEQIDNO:160、SEQIDNO:162、SEQIDNO:164、SEQIDNO:166、SEQIDNO:168、SEQIDNO:170、SEQIDNO:172、SEQIDNO:174、SEQIDNO:176和SEQIDNO:178。更優(yōu)選的是由在低、中等、中等/高、高和/或極高嚴(yán)緊性下與前述a-淀粉酶DNA序列中的任一個(gè)雜交的DNA序列所編碼的任何a-淀粉酶氨基酸序列。還優(yōu)選編碼a-淀粉酶氨基酸序列且與前述a-淀4分酶DNA序列中的任一個(gè)具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%、或者甚至100%同源性的DNA序列。a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明涉及源于包含碳水化合物結(jié)合模塊("CBM")且具有a-淀粉酶活性的多肽的催化結(jié)構(gòu)域，如源于選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:38、SEQIDNO:42、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:125、SEQIDNO:131、SEQIDNO:157、SEQIDNO:159、SEQIDNO:161、SEQIDNO:163、SEQIDNO:165、SEQIDNO:167、SEQIDNO:169、SEQIDNO:171、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:177和SEQIDNO:179所示的a-淀粉酶的多肽的催化結(jié)構(gòu)域。SEQIDNO:14中的氨基酸1-441、SEQIDNO:18中的氨基酸1-471、SEQIDNO:20中的氨基酸1-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸1-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸1-477、SEQIDNO:42中的氨基酸1-449、SEQIDNO:115中的氨基酸1-442、SEQIDNO:117中的氨基酸1-441、SEQIDNO:125中的氨基酸1-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-502、SEQIDNO:161中的氨基酸24-499、SEQIDNO:163中的氨基酸27-492、SEQIDNO:165中的氨基酸21-496、SEQIDNO:167中的氨基酸29-501、SEQIDNO:169中的氨基酸22-487、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO:173中的氨基酸21-477、SEQIDNO:175中的氨基酸288-773、SEQIDNO:177中的氨基酸22-471和SEQIDNO:179中的氨基酸20-470所示的催化結(jié)構(gòu)域是優(yōu)選的。與前述催化結(jié)構(gòu)域序列中的任一個(gè)具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的催化結(jié)構(gòu)域序列也是優(yōu)選的。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述催化結(jié)構(gòu)域序列具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)1個(gè)位點(diǎn)與前述催化結(jié)構(gòu)域序列中的任一個(gè)有所不同的氨基酸序列。還優(yōu)選由與選自下組的多核苷酸的任何序列具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的DNA序列所編碼的催化結(jié)構(gòu)域氨基酸序列，所述多核苷酸如SEQIDNO:13中的核苷酸1-1326、SEQIDNO:17中的核苷酸1-1413、SEQIDNO:19中的核苷酸1-1350、SEQIDNO:21中的核芬酸1-1338、SEQIDNO:25中的核芬酸1-1494、SEQIDNO:27中的核苷酸52-1539、SEQIDNO:29中的核苦酸1-1521、SEQIDNO:31中的核苦酸1-1443、SEQIDNO:33中的核芬酸1-1485、SEQIDNO:37中的核苷酸1-1431、SEQIDNO:41中的核苷酸1-1347、SEQIDNO:114中的核苷酸1-1326、SEQIDNO:116中的核苦酸1-1323、SEQIDNO:124中的核苦酸1-1431、SEQIDNO:130中的核苷酸1-1338、SEQIDNO:156中的核苷酸121-1443、SEQIDNO:158中的核苷酸64-1506、SEQIDNO:160中的核苷酸70-1497、SEQIDNO:162中的核香酸79-1476、SEQIDNO:164中的核苷酸61-1488、SEQIDNO:166中的核香酸85-1503、SEQIDNO:168中的核苷酸64-1461、SEQIDNO:170中的核苷酸61-1389、SEQIDNO:172中的核芬酸61-1431、SEQIDNO:174中的核苦酸862-2322、SEQIDNO:176中的核苷酸64-1413和SEQIDNO:178中的核苷酸58—1410所示。更優(yōu)選的是由在低、中等、中等/高、高和/或極高嚴(yán)緊性下與前述DNA序列中的任一個(gè)雜交的DNA序列所編碼的任何催化結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。還優(yōu)選編碼催化結(jié)構(gòu)域氨基酸序列并且與前述催化結(jié)構(gòu)域DNA序列中的任一個(gè)具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%、或者甚至100%同源性的DNA序列。4fe頭序列在一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明涉及源于包含碳水化合物結(jié)合模塊("CBM，，)且具有a-淀粉酶活性的多肽的接頭序列。優(yōu)選選自下組的接頭氨基酸序列如SEQIDNO:159中的氨基酸503-528、SEQIDNO:161中的氨基酸500-532、SEQIDNO:163中的氨基酸493-507、SEQIDNO:165中的氨基酸497-539、SEQIDNO:169中的氨基酸488-512、SEQIDNO:173中的氨基酸478-491、SEQIDNO:177中的氨基酸472-486和SEQIDNO:179中的氨基酸471-481所示的接頭氨基酸序列。還優(yōu)選與前述接頭序列中的任一個(gè)具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的接頭氨基酸序列。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述接頭序列具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)l個(gè)位點(diǎn)與前述接頭序列中任一個(gè)有所不同的氨基酸序列。碳水化合物結(jié)合模塊在一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明涉及源于包含碳水化合物結(jié)合模塊("CBM")且具有a-淀粉酶活性的多肽的CBM,所述CBM源于選自SEQIDNO:14、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:38、SEQIDNO:42、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:125、SEQIDNO:131、SEQIDNO:157、SEQIDNO:159、SEQIDNO:161、SEQIDNO:163、SEQIDNO:165、SEQIDNO:167、SEQIDNO:169、SEQIDNO:171、SEQIDNO:173、SEQIDNO:175、SEQIDNO:177和SEQIDNO:179所示的ot-淀粉酶的多肽。優(yōu)選選自下組序列的CBM氨基酸序列具有SEQIDNO:159中的氨基酸529-626、SEQIDNO:161中的氨基酸533-630、SEQIDNO:163中的氨基酸508-602、SEQIDNO:165中的氨基酸540-643、SEQIDNO:167中的氨基酸502-566、SEQIDNO:169中的氨基酸513-613、SEQIDNO:173中的氨基酸492-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-287、SEQIDNO:177中的氨基酸487-586和SEQIDNO:179中的氨基酸482-582的序列。還優(yōu)選與前述CBM氨基酸序列中的任一個(gè)具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的CBM氨基酸序列。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述CBM序列具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)1個(gè)位點(diǎn)不同于前述CBM序列中的任一個(gè)的氨基酸序列。還優(yōu)選由與選自下組的多核苷酸的任何序列具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少卯％或者甚至至少95%同源性的DNA序列所編碼的CBM氨基酸序列，所述多核苷酸如SEQIDNO:158中的核苦酸1585-1878、SEQIDNO:160中的核苷酸1597-18卯、SEQIDNO:162中的核苷酸1522-1806、SEQIDNO:164中的核香酸1618-1929、SEQIDNO:166中的核苷酸1504-1701、SEQIDNO:168中的核苷酸1537-1842、SEQIDNO:172中的核苷酸1474-1764、SEQIDNO:174中的核香酸61-861、SEQIDNO:176中的核苷酸1459-1761和SEQIDNO:178中的核芬酸1444-1749、SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:110、SEQIDNO:112、SEQIDNO:114、SEQIDNO:116、SEQIDNO:118、SEQIDNO:120、SEQIDNO:122、SEQIDNO:124、SEQIDNO:126、SEQIDNO:128、SEQIDNO:130、SEQIDNO:132、SEQIDNO:134、SEQIDNO:154和SEQIDNO:156所示。更優(yōu)選的是由在低、中等、中等/高、高和/或極高嚴(yán)緊性下與前述CBMDNA序列中的任一個(gè)的互補(bǔ)DNA序列雜交的DNA序列所編碼的任何CBM氨基酸序列。還優(yōu)選編碼CBM氨基酸序列且與前述CBMDNA序列中任一個(gè)具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%、或者甚至100%同源性的DNA序列。SEQIDNO:166中的核苷酸1504-1701和SEQIDNO:174中的核苷酸61-861所示DNA序列以及所編碼的氨基酸序列除了CBM之外還包含接頭序列。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>0所述序列既包含CBM也包含接頭a-淀粉酶多肽可以應(yīng)用于淀粉降解過(guò)程中和/或用作雜合多肽的催化結(jié)構(gòu)域和/或CBM的供體。本發(fā)明優(yōu)選的多肽，例如，雜合多肽，包括含有催化模塊的第一個(gè)氨基酸序列和含有碳水化合物結(jié)合模塊的第二個(gè)氨基酸序列，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性，其中所述第二個(gè)氨基酸序列與選自下組的任何氨基酸序列具有至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、如至少95。/。同源性SEQIDNO:159中的氨基酸529-626、SEQIDNO:161中的氨基酸533-630、SEQIDNO:163中的氨基酸508-602、SEQIDNO:165中的氨基酸540-643、SEQIDNO:167中的氨基酸502-566、SEQIDNO:169中的氨基酸513-613、SEQIDNO:173中的氨基酸492-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-287、SEQIDNO:177中的氨基酸487-586和SEQIDNO:179中的氨基酸482-582。更優(yōu)選多肽，例如，雜合多肽，其中所述第一個(gè)氨基酸序列與選自下組的任何氨基酸序列具有至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少卯％、如至少95%同源性SEQIDNO:14中的氨基酸1-441、SEQIDNO:18中的氨基酸l-471、SEQIDNO:20中的氨基酸1-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸1-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸1-477、SEQIDNO:42中的氨基酸1-449、SEQIDNO:115中的氨基酸1-442、SEQIDNO:117中的氨基酸l-441、SEQIDNO:125中的氨基酸1-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸161中的氨基酸165中的氨基酸169中的氨基酸173中的氨基酸177中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-502、SEQIDNO24-499、SEQIDNO:163中的氨基酸27-492、SEQIDNO21-496、SEQIDNO:167中的氨基酸29-501、SEQIDNO22-487、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO21-477、SEQIDNO:175中的氨基酸288-773、SEQIDNO22-471和SEQIDNO:179中的氨基酸20-470。還優(yōu)選多肽，例如，雜合多肽，其中接頭序列存在于所述第一個(gè)和所述第二個(gè)氨基酸序列之間的位置，所述接頭序列與選自下組的任何氨基酸序列具有至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、如至少95%同源性SEQIDNO:159中的氨基酸503-528、SEQIDNO:161中的氨基酸500-532、SEQIDNO:163中的氨基酸493-507、SEQIDNO:165中的氨基酸497-539、SEQIDNO:169中的氨基酸488-512、SEQIDNO:173中的氨基酸478-491、SEQIDNO:177中的氨基酸472-486和SEQIDNO:179中的氨基酸471-481。a-淀粉酶序列適于構(gòu)建本發(fā)明的類型的多肽的催化結(jié)構(gòu)域，即，a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(特別是酸穩(wěn)定的ct-淀粉酶)可以源于任何生物，優(yōu)選真菌或細(xì)菌起源的那些。優(yōu)選所述a-淀粉酶為野生型酶。更優(yōu)選所述a-淀粉酶是包含氨基酸修飾的變體a-淀粉酶，所述氨基酸修飾導(dǎo)致增強(qiáng)的活性、低pH和/或高pH下增強(qiáng)的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、針對(duì)鈣損耗的增強(qiáng)的穩(wěn)定性、和/或溫度提升時(shí)增強(qiáng)的穩(wěn)定性。用于本發(fā)明的雜合體的相關(guān)a-淀粉酶包括可獲得自選自以下列出的物種的a-淀粉酶犁頭霉、枝頂孢霉、曲霉(A^erg/〃M力、錐毛殼菌、錐毛殼菌、Oj^tospon'o/w/s、D/c/zotomoc/acZ/Mm、刺殼7叢赤殼菌、青霉菌、尸/2朋erac/zaete、根毛霉、根霉CR/7&o/w)、鏈霉菌、6^Z)w/^/ona、共頭霉、772aw/m'(i/M7、TTzenwoosrws、口耆熱絲孑包菌、才全菌、7Hc/7o;/7aea和Ka/raWa。a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域也可以來(lái)源于細(xì)菌，例如，芽孢桿菌(Bflc/〃m》。優(yōu)選所選擇的a-淀粉酶氨基酸序列來(lái)源于選自下組的任何物種冠毛犁頭霉、枝頂孢霉屬的菌種、黑曲霉04^erg/〃wm'ger)、白曲霉(j^erg/〃^Arawac/n'/)、米曲霉(As^erg/〃^c^yzae)、錐毛殼菌屬的菌種、錐毛殼菌屬的菌種、Oj^^os/on'o/w^屬6々菌種>Z)/c/zo/owoc/fl(iz'M附/&s^e/W"ez'、殺寸殼乂又毛菌屬的菌種、色二孢菌屬的菌種、鐮刀菌屬的菌種、粘帚霉屬的菌種、A^/6ra"c/7eo屬的菌種、巨多孔菌、叢赤殼菌屬的菌種、叢赤殼菌屬的菌種、青霉眉j的菌種、黃孑包原毛平革菌(尸/7awerac/2fl"ec/wysos^on'ww)、孩i小才艮毛霉、米才艮審(W/n'zopwsor_yza!e)、韋刃革菌屬的菌種、iSVre/,omyc&s1T7zflmz'm.Awme/egara、嗜熱子嚢菌、77zer"wa5c^屬的菌種、疏綿狀嗜熱絲孑包菌、S皮福7才全菌、#全菌屬的菌種、7Hc/zo//7aeasacca/a、fe/saWanz6r/cosfl、優(yōu)選所述雜合體包含選自表1或2所列a-淀粉酶催化模塊的a-淀粉酶氨基酸序列。最優(yōu)選所述雜合體包含a-淀粉酶氨基酸序列，所述a-淀粉酶氨基酸序列選自來(lái)自黑曲霉(SEQIDNO:2)、米曲霉(SEQIDNO:4和SEQIDNO:6)、7Wc/2op/z(3easacc(2to(SEQIDNO:8)、/Sm&w/—orapracwrrato(SEQIDNO:10)、rWWc細(xì)(SEQIDNO:12)、疏綿狀嗜熱絲孢菌(SEQIDNO:14)、枝頂孢霉屬的菌種(SEQIDNO:16)、M"/Z>r""c/2^屬的菌種(SEQIDNO:18)、微小根毛霉(SEQIDNO:20)、Dzc/2otomoc/ac/,'wm/ze^e/""ez(SEQIDNO:22)、巨多孔菌(SEQIDNO:24)、韌革菌屬的菌種AMYl179(SEQIDNO:26)、栓菌屬的菌種(SEQIDNO:28)、鮭貝革蓋菌(Cw/o/mcemw力(SEQIDNO:30)、刺殼雙毛菌屬的菌種(SEQIDNO:32)、C0^to^0n'0;7w、屬的菌種(SEQIDNO:34)、錐毛殼菌屬的菌種(SEQIDNO:36)、色二孢菌屬的菌種(SEQIDNO:38)、叢赤殼菌屬的菌種(SEQIDNO:40)、粘帚霉屬的菌種(SEQIDNO:42)、Srepto附j(luò)ceyZ/zerwoc3A3weov/o/acew5(SEQIDNO:44)、77zermo屬的菌種II(SEQIDNO:111)、錐毛殼菌屬的菌種(SEQIDNO:、淤泥纟連霉菌、5^6wfc/orapracwvflto、總狀共頭霉、113)、叢赤殼菌屬的菌種(SEQIDNO:115)、鐮刀菌屬的菌種(SEQIDNO:117)、皺褶栓菌(SEQIDNO:119)、青霉屬的菌種(SEQIDNO:121)、Ka/ran'ay/aW/z'(SEQIDNO:123)、r/2erwoa5cMsawnaw"'ac"s(SEQIDNO:125)、黃孑包原毛平革菌(SEQIDNO:127)、米根霉(SEQIDNO:129)、77wm/mWwme/egara(SEQIDNO:131)、冠毛犁頭霉(SEQIDNO:133)、總狀共頭霉(SEQIDNO:135)和淤泥鏈霉菌(SEQIDNO:155)的a-淀粉酶。本發(fā)明還優(yōu)選包含a-淀粉酶氨基酸序列的雜合體，所述a-淀粉酶氨基酸序列與選自下組的任何序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%的同源性SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135和SEQIDNO:155。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中所述雜合酶具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)1個(gè)4立點(diǎn)不同于選自下組的氨基酸序列的a-淀粉酶序列SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135和SEQIDNO:155。還優(yōu)選包含a-淀粉酶氨基酸序列的雜合體，所述a-淀粉酶氨基酸序列由與選自下組的4壬4可序列具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%的同源性SEQIDNO:l、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:110、SEQIDNO:112、SEQIDNO:114、SEQIDNO:116、SEQIDNO:118、SEQIDNO:120、SEQIDNO:122、SEQIDNO:124、SEQIDNO:126、SEQIDNO:128、SEQIDNO:130、SEQIDNO:132、SEQIDNO:134和SEQIDNO:154。更優(yōu)選包含a-淀粉酶的雜合體，所述a-淀粉酶由在低、中等、中等/編碼SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO:29、SEQIDNO:31、SEQIDNO:33、SEQIDNO:35、SEQIDNO:37、SEQIDNO:39、SEQIDNO:41、SEQIDNO:43、SEQIDNO:110、SEQIDNO:112、SEQIDNO:114、SEQIDNO:116、SEQIDNO:118、SEQIDNO:120、SEQIDNO:122、SEQIDNO:124、SEQIDNO:126、SEQIDNO:128、SEQIDNO:130、SEQIDNO:132、SEQIDNO:134和SEQIDNO:154。接頭序列接頭序列可以是任何合適的接頭序列，例如，來(lái)源于a-淀粉酶或葡糖淀粉酶的接頭序列。所述接頭可以為鍵，或者是包含約2至約IOO個(gè)碳原子，特別是2到40個(gè)碳原子的短的連接基團(tuán)。然而，所述接頭優(yōu)選為約2至約100個(gè)氨基酸殘基的序列，更優(yōu)選4至40個(gè)氨基酸殘基，例如6到15個(gè)氨基酸殘基。霉、錐毛殼菌、錐毛殼菌、亞灰樹(shù)花菌(Menj^'/m)、厚孑包孔菌(Pac/y^ytos戶ra)、青霉菌、6"m6/—ora、檢菌、7Hc/zo/9/wea、P^/san'a、阿太菌(^/^/&)、曲霉菌、栓菌和樁菇(丄ewco;a;c/〃w)。所述接頭也可以來(lái)源于細(xì)菌，例如來(lái)自芽孢桿菌菌種的菌抹。更優(yōu)選所述接頭來(lái)源于選自下組的物種枝頂孢霉屬的菌種、錐毛殼菌屬的菌種、錐毛殼菌屬的菌種、巨多孔菌、青審屬的菌種、5^6//5pora/ravwrrato、缺才習(xí)才全菌、7Hc/w//zaeasaccato、P^&ar/arw厶n'ccwa、P^Ayan'os/aW/、白曲霉、黑曲霉、羅耳阿太菌(JAe//ara^7'/)、大白沖莊茲(丄ewco/(3ja-〃Mg7'ga"/w力、纟氏質(zhì)大纟丈々牟孑包(尸ac/y^ytos/ora/opa少racea)、銀,環(huán)一全菌(7h3metesc/wgw/a^7)禾口5ac/〃wsyavoZ/zer附MS。優(yōu)選所述雜合體包含選自表1或2中所列接頭的接頭氨基酸序列。更優(yōu)選所述接頭是來(lái)自選自下組的葡糖淀粉酶的接頭紙質(zhì)大紋飾孢(SEQIDNO:46)、瓣環(huán)栓菌(SEQIDNO:48)、大白樁菇(SEQIDNO:50)、羅耳阿太菌(SEQIDNO:68)、白曲霉(SEQIDNO:70)、黑曲霉(SEQIDNO:72)，或者是來(lái)自選自下組的a-淀粉酶的接頭Si^fe/wra/ravwn^to(SEQIDNO:54)、raZ)Wcora(SEQIDNO:56)、枝頂孢霉屬的菌種(SEQIDNO:58)、巨多孔菌(SEQIDNO:60)、Bac/〃w"avo/Zzermz^SEQIDNO:62、SEQIDNO:64或SEQIDNO:66)、錐毛殼菌屬的菌種AM603(SEQIDNO:74)、錐毛殼菌屬的菌種(SEQIDNO:145)、皺褶栓菌(SEQIDNO:147)、Fa/紹n'o^a""(SEQIDNO:149)、青霉菌屬的菌種(SEQIDNO:151)、7Hc/zo//7aearaccato(SEQIDNO:52)。本發(fā)明還優(yōu)選與選自下組的任一序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的任何接頭氨基酸序列SEQIDNO:46、SEQIDNO:48、SEQIDNO:50、SEQIDNO:52、SEQIDNO:54、SEQIDNO:56、SEQIDNO:58、SEQIDNO:60、SEQIDNO:62、SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:68、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:74、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149和SEQIDNO:151。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中所述雜合酶具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)l個(gè)位點(diǎn)不同于選自下組的氨基酸序列的接頭序列SEQIDNO:46、SEQIDNO:48、SEQIDNO:50、SEQIDNO:52、SEQIDNO:54、SEQIDNO:56、SEQIDNO:58、SEQIDNO:60、SEQIDNO:62、SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:68、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:74、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149和SEQIDNO:151。還優(yōu)選包含接頭序列的雜合體，所述接頭序列由與選自下組的任一序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的DNA序列所編碼SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:53、SEQIDNO:55、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67、SEQIDNO:69、SEQIDNO:71、SEQIDNO:73、SEQIDNO:144、SEQIDNO:146、SEQIDNO:148、和SEQIDNO:150。更優(yōu)選包含接頭序列的雜合體，所述接頭序列由高、中等或者低嚴(yán)緊性下與選自下組的任一DNA序列雜交的DNA序列所編碼SEQIDNO:45、SEQIDNO:47、SEQIDNO:49、SEQIDNO:51、SEQIDNO:53、SEQIDNO:55、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:63、SEQIDNO:65、SEQIDNO:67、SEQIDNO:69、SEQIDNO:71、SEQIDNO:73、SEQIDNO:144、SEQIDNO:146、SEQIDNO:148、和SEQIDNO:150。在優(yōu)選實(shí)施方案中使用起源于CBM來(lái)源的接頭，例如，當(dāng)使用來(lái)自羅耳阿太菌葡糖淀粉酶的CBM時(shí)，同樣將來(lái)自羅耳阿太菌葡糖淀粉酶的接頭序列用于所述雜合體。碳水化合物結(jié)合模塊碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)，或者通常稱作碳水化合物結(jié)合結(jié)構(gòu)域(CBM)，指優(yōu)先結(jié)合多糖或寡糖(碳水化合物)、經(jīng)常——但不必然排他性地一一結(jié)合其水不溶性(包括晶體)形式的多肽氨基酸序列。源于淀粉降解酶的CBM通常稱為淀粉結(jié)合模塊(starch-bindingmodule)或者SBM(可以存在于特定的分解淀粉的酶，如特定的葡糖淀粉酶(GA)中的，或者存在于酶如環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶中的，或者存在于a-淀粉酶中的CBM)。同樣，CBM的其它亞類將包含，例如，纖維素結(jié)合模塊(來(lái)自纖維素分解酶的CBM)、幾丁質(zhì)結(jié)合模塊(典型地存在于幾丁質(zhì)酶中的CBM)、木聚糖結(jié)合模塊(典型地存在于木聚糖酶中的CBM)、甘露聚糖結(jié)合模塊(典型地存在于甘露聚糖酶中的CBM)。SBM通常稱為SBD(StarchBindingDomain)(淀4分結(jié)合結(jié)構(gòu)，或)。發(fā)現(xiàn)CBM是由兩種或多種多肽氨基酸序列區(qū)域組成的大型多肽或蛋白質(zhì)的主要部分，尤其是在典型地包含催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)的水解性酶(水解酶)中，其中所述催化模塊含有底物水解的活性位點(diǎn)，碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)用于結(jié)合所討論的碳水化合物底物。這些酶可能包含超過(guò)一個(gè)催化模塊和一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)CBM并且任選進(jìn)一步包含將一個(gè)或多個(gè)CBM與一個(gè)或多個(gè)催化模塊連接在一起的一個(gè)或多個(gè)多肽氨基酸序列，后一類型的區(qū)域通常被稱為"接頭"。包含CBM的水解性酶的例子一一其中一些以上已經(jīng)提到一一是纖維素酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰酯酶和幾丁質(zhì)酶。也在藻類，例如，在紅藻尸w//zyra/M^wrea中發(fā)現(xiàn)了非水解性多糖結(jié)合蛋白形式的CBM。在其中存在CBM的蛋白質(zhì)/多肽(例如，酶，典型地水解性酶)中，CBM可以位于N或C末端或者位于內(nèi)部位置。構(gòu)成CBM本身的多肽或蛋白質(zhì)(例如，水解性酶)的部分由超過(guò)約30個(gè)并少于約250個(gè)氨基酸殘基組成。本發(fā)明上下文中"碳水化合物結(jié)合模塊家族20"或CBM-20模塊定義為大約100個(gè)氨基酸的序列，其與圖1中由Joergensenetal.(1997)于Biotechnol.Lett.19:1027-1031中披露的多肽的碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)有至少45%的同源性。所述CBM包含多肽的最后102個(gè)氨基酸，即自氨基酸582至氨基酸683的子序列。應(yīng)用于本說(shuō)明書(shū)中的糖香水解酶家族的編號(hào)遵循在URL:htt。:〃afmb.cnrs-mrs.fr/cazy/CAZY/index.html上的Coutinho，P.M.&Henrissat,B.(1999)C4Z少-G3r6o/y^in^e-y4"/veJ5Vz戸eyserver，或可替換地遵循Coutinho,P.M.&Henrissat，B.1999;Themodularstructureofcellulasesandothercarbohydrate-activeenzymes:anintegrateddatabaseapproach.在〃Gewe"cs,Woc/7ew/*_yo/CW/w/oseZ)egraci加'o/7〃,K.Ohmiya,K.Hayashi，K.Sakka，Y.Kobayashi，S.KaritaandT.Kimuraeds.，UniPublishersCo.,Tokyo,pp.15-23中，和Bourne,Y.&Henrissat,B.2001;Glycosidehydrolasesandglycosyltransferases:familiesandfunctionalmodules,Cz^re"ZC!p/m.ow)5Vrac/wra/i^o/ogy11:593-600的思想。包含適合用于本發(fā)明上下文的CBM的酶的例子為a-淀粉酶、產(chǎn)麥芽糖a-淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰酯酶和幾丁質(zhì)酶。與本發(fā)明有關(guān)的感興趣的更多CBM包括衍生自葡糖淀粉酶(EC3.2.1.3)或環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(CGTase)(EC2.4.1.19)的CBM。衍生自真菌、細(xì)菌或植物來(lái)源的CBM通常將適合用于本發(fā)明的雜合體中。優(yōu)選真菌起源的CBM。就此而論，適合于分離有關(guān)基因的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。優(yōu)選包含碳水化合物結(jié)合模塊家族20、21或25的CBM的雜合體。適合于本發(fā)明的碳水化合物結(jié)合模塊家族20的CBM可以源于泡盛曲霉O^perg"/^avramon.)(SWISSPROTQ12537)、白曲霉(SWISSPROTP23176)、黑曲霉(SWISSPROTP04064)、米曲霉(SWISSPROTP36914)的葡糖淀粉酶，源于白曲霉(EMBL:#—AB008370)、構(gòu)巢曲霉(^^/wg/〃ww/^/"ra)(NCBIAAF17100.1)的a-淀粉酶，源于蠟狀芽孢桿菌08ad〃Mceww力(SWISSPROTP36924)的P-淀粉酶，或者源于環(huán)狀芽孢桿菌(Bac/〃wc/rcw/ara)(SWISSPROTP43379)的CGTases。優(yōu)選來(lái)自白曲霉(EMBL:#_AB008370)a-淀粉酶的CBM以及與白曲霉(EMBL:存—AB008370)a-淀粉酶的CBM有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的CBM。更優(yōu)選的CBM包括葡糖淀粉酶CBM，來(lái)自//omocom^屬的菌種，^口來(lái)自/forwocomirew'"ae(同義詞為雜酚油(Creosote)真菌，或爿mor/3/joAecan^腦e)，如SWISSPROT:Q03045的CBM、來(lái)自香恭屬(Z^w"ww/a)的菌種，^口來(lái)自香蒜香恭(W/"aA:emw^raow))，如SPTREMBL:Q9P4C5的CBM,來(lái)自脈孢菌屬的菌種，如來(lái)自粗糙鏈孢霉(A^/ra^oracmwa),如SWISSPROT:P14804的CBM，來(lái)自籃4夫菌屬的菌種(！Ta/arawyces^p.)，如來(lái)自絲衣霉>1犬籃訝犬菌(Ta/aram_yces/^s^oc/z/omyd/o/iies),來(lái)自屬的菌種(Geasw"/z/aj!口來(lái)自Geaym"/n,aqy//w<i/-a5pora、來(lái)自屬的菌種(Scwz-ay5/.),^口來(lái)自Scon'ay57o"g/osa、來(lái)自正青霉屬的菌種(五w/em'"'〃/Mmsp.)，^口來(lái)自五wpem'c/〃/w附/w^vv/g"、來(lái)自曲霉屬的菌種，如來(lái)自日本曲霉(^^e/^7/M"apom'cw),來(lái)自青霉屬的菌種，如來(lái)自戶em'c/〃/wmcf.miczynskii、來(lái)自屬的菌種(777j^awo//zora)，以及來(lái)自腐殖菌屬的菌種(//M/m'co/a)，如來(lái)自灰腐質(zhì)霉高溫變種(//ww/co/"gW化avar.T7zermo/t/ea),如SPTREMBL:Q12623的CBM。優(yōu)選所述雜合體包含源于選自下組的任一科或物種的CBM:枝頂孢霉屬、曲霉屬、阿太菌、雄毛殼菌屬、C7，to/oWo戸^、D,c/20/o附oc/aA'應(yīng)、刺殼雙毛菌屬、色二孢菌屬、粘帚霉屬、樁菇、ikfa/6raMc/zea、亞灰樹(shù)花菌、叢赤殼菌屬、厚孢孔菌、青霉菌、根毛霉屬、微小根毛霉、鏈霉菌、Sw^/,^ora、嗜熱絲孢菌、#全菌屬、7Hc/2op/zaefl^ccato以及K7&ar/a。CBM也可以來(lái)源于植物例如玉米(例如，Zeamays)或者來(lái)源于細(xì)菌例如芽孢桿菌。更優(yōu)選所述雜合體包含來(lái)源于選自下組的任何物種的CBM:枝頂孢霉屬的菌種、白曲霉、黑曲霉、米曲霉、羅耳阿太菌、Bac"/w/7avW/zerwms、錐毛殼菌屬的菌種、03^tos/or/o/w7、屬的菌種(CVy/,o^spor/o/w/s^p.)、D/c/zotomoc/ad/ww/zes^e/""e/、刺殼雙毛菌屬的菌種、色二孢菌屬的菌種、粘帚霉屬的菌種、大白樁蒜、7Wa/Zrawc/2ea屬的菌種(A^f/6ra"c/ea)、巨多孔菌、叢赤殼菌屬的菌種、紙質(zhì)大紋飾孢、青霉菌屬的菌種、微小根毛霉、le/PtomycesZ/7e環(huán)0cyawe0v/0/aceMS、於泥鏈審菌、Sw6w/—ora/ravwrvato、疏綿狀嗜熱絲孑包菌、瓣環(huán)栓菌、皺褶栓菌、7Hc/w/7/zaeasaccato、^z/san'a/^n'cc^a、！^/saWos/aWz'和玉米。優(yōu)選所述雜合體包含選自表1或2中所列CBM的CBM氨基酸序列。最優(yōu)選所述雜合體包含來(lái)自選自下組的葡糖淀粉酶的CBM:紙質(zhì)大紋飾孢(SEQIDNO:76)、瓣環(huán)栓菌(SEQIDNO:78)、大白樁菇(SEQIDNO:80)、羅耳阿太菌(SEQIDNO:92)、白曲霉(SEQIDNO:94)、黑曲霉(SEQIDNO:96),或者來(lái)自選自下組的a-淀粉酶的CBM:7Hc/7o//zeraea^crata(SEQIDNO:52)、5"wW一ora/7'ovwrvato(SEQIDNO:82)、J^/s腦'araZWcaya(SEQIDNO:84)、枝頂孢霉屬的菌種(SEQIDNO:86)、巨多孔菌(SEQIDNO:88)、Bac"/船//m^/^mw(SEQIDNO:90)、錐毛殼菌屬的菌種(SEQIDNO:98)、玉米(SEQIDNO:109)、錐毛殼菌屬的菌種(SEQIDNO:137)、皺褶栓菌(SEQIDNO:139)、Ka/^no^ar"/(SEQIDNO:141)和青霉菌屬的菌種(SEQIDNO:143)。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中所述雜合酶具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)1個(gè)位點(diǎn)上不同于選自下組的氨基酸序列的CBM序列SEQIDNO:52、SEQIDNO:76、SEQIDNO:78、SEQIDNO:80、SEQIDNO:82、SEQIDNO:84、SEQIDNO:86、SEQIDNO:88、SEQIDNO:90、SEQIDNO:92、SEQIDNO:94、SEQIDNO:96、SEQIDNO:98、SEQIDNO:109、SEQIDNO:137、SEQIDNO:139、SEQIDNO:141和SEQIDNO:143。還優(yōu)選由與選自下組的任何序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的DNA序列編碼的任何CBM:SEQIDNO:75、SEQIDNO:77、SEQIDNO:79、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85、SEQIDNO:87、SEQIDNO:89、SEQIDNO:91、SEQIDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:97、SEQIDNO:108、SEQIDNO:136、SEQIDNO:140、SEQIDNO:142。更優(yōu)選由與選自下組的任何DNA序列在高、中等或低嚴(yán)緊性下雜交的DNA序列所編碼的任何CBM:SEQIDNO:75、SEQIDNO:77、SEQIDNO:79、SEQIDNO:81、SEQIDNO:83、SEQIDNO:85、SEQIDNO:87、SEQIDNO:89、SEQIDNO:91、SEQIDNO:93、SEQIDNO:95、SEQIDNO:97、SEQIDNO:108、SEQIDNO:136、SEQIDNO:38、SEQIDNO:140和SEQIDNO:142。碳水化合物結(jié)合模塊家族20、21或25的更多適合的CBM可以在URL:http:〃afmb.cnrs-mrs.fr/cazv/CAZY/index.html)找到。一旦鑒定了作為cDNA或者作為染色體DNA的編碼底物結(jié)合(碳水化合物結(jié)合)區(qū)域的核苷酸序列，可以將其之后以各種方式操作以將其融合到編碼感興趣的多肽的DNA序列。然后用或不用接頭連接編碼碳水化合物結(jié)合氨基酸序列的DNA片段和編碼感興趣多肽的DNA。然后可以以各種方式操作所獲得的連接的DNA以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。特定實(shí)施方案在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含來(lái)源于羅耳阿太菌、紙質(zhì)大玟飾孢、^&an'an^n'cora或巨多孔菌的CBM。優(yōu)選包含選自下組的CBM氨基酸序列的任何多肽羅耳阿太菌葡糖淀粉酶(SEQIDNO:92)、紙質(zhì)大紋飾孢葡糖淀粉酶(SEQIDNO:76)、Fa/sar/arM6n'ccwaa-淀粉酶(SEQIDNO:84)和巨多孔菌a-淀粉酶(SEQIDNO:88)。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含來(lái)源于米曲霉酸性a-淀粉酶的a-淀粉酶序列(SEQIDNO:4)，優(yōu)選其中所述米曲霉氨基酸序列包含選自下組的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代A128P、K138V、S141N、Q143A、D144S、Y155W、E156D、D157N、N244E、M246L、G446D、D448S和N450D。最優(yōu)選所述多肽包含具有SEQIDNO:6所示氨基酸序列的催化結(jié)構(gòu)域。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽進(jìn)一步包含來(lái)源于羅耳阿太菌的CBM，優(yōu)選所述多肽進(jìn)一步包含具有SEQIDNO:92所示氨基酸序列的CBM。最優(yōu)選所述多肽具有SEQIDNO:100所示氨基酸序列，或者所述多肽具有與前述氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的氨基@吏序列。還優(yōu)選由與SEQIDNO:99所示DNA序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的DNA序列所編碼的任何多肽。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含來(lái)源于微小根毛霉a-淀粉酶的催化模塊和/或來(lái)源于羅耳阿太菌的CBM。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽具有SEQIDNO:101所示的氨基酸序列或者所述多肽具有與前述任一個(gè)氨基酸序列擁有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的氨基酸序列。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含來(lái)源于巨多孔菌a-淀粉酶的催化模塊和/或來(lái)源于羅耳阿太菌的CBM。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽具有SEQIDNO:102所示的氨基酸序列或者所述多肽具有與前述氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性的氨基酸序列。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽具有在不超過(guò)10個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)9個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)8個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)7個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)6個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)5個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)4個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)3個(gè)位點(diǎn)、不超過(guò)2個(gè)位點(diǎn)、或者甚至不超過(guò)1個(gè)位點(diǎn)不同于SEQIDNO:100、SEQIDNO:101和SEQIDNO:102所示任何氨基酸序列的氨基酸序列。還優(yōu)選由DNA序列編碼的任何多肽，所述DNA序列與編碼SEQIDNO:100、SEQIDNO:101和SEQIDNO:102所示任何氨基酸序列的任何DNA序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或者甚至至少95%同源性。更優(yōu)選由在高、中等或低嚴(yán)緊性下與編碼SEQIDNO:100、SEQIDNO:101和SEQIDNO:102所示任一氨基酸序列的任何DNA序列雜交的DNA序列所編碼的任何CBM。本發(fā)明多肽的其它優(yōu)選實(shí)施方案如實(shí)施例部分表3、4、5和6所示。還優(yōu)選與表1至7所示多肽的任何氨基酸序列具有至少70%、更優(yōu)選至少80%以及甚至更優(yōu)選至少90%同源性的任何多肽。更優(yōu)選由在低、中等、或高嚴(yán)緊性下與編碼表1至7所示多肽的任何氨基酸序列的DNA序列雜交的DNA序列所編碼的任何多肽。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與米曲霉催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:6)具有至少75%同源性的催化結(jié)構(gòu)域和與選自下組的CBM具有至少75%同源性的CBM:SEQIDNO:82、SEQIDNO:84、SEQIDNO:86、SEQIDNO:76、SEQIDNO:78、SEQIDNO:80、SEQIDNO:88、SEQIDNO:52、SEQIDNO:92、SEQIDNO:52、和SEQIDNO:90。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含米曲霉催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:6)和選自下組的CBM:SEQIDNO:82、SEQIDNO:84、SEQIDNO:86、SEQIDNO:76、SEQIDNO:78、SEQIDNO:80、SEQIDNO:88、SEQIDNO:52、SEQIDNO:92、SEQIDNO:52、和SEQIDNO:90。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM(SEQIDNO:92)具有至少75%同源性的CBM和與選自下組的催化結(jié)構(gòu)域具有至少75%同源性的催化結(jié)構(gòu)域SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:155、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:121、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133和SEQIDNO:135。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM(SEQIDNO:92)和選自下組的催化結(jié)構(gòu)域SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:155、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:121、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133和SEQIDNO:135。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與SEQIDNO:145中的紙質(zhì)大紋飾孢葡糖淀粉酶CBM具有至少75%同源性的CBM和與選自下組的CBM具有至少75。/。同源性的催化結(jié)構(gòu)域SEQIDNO:16中的枝頂孢霉屬的菌種的a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:20中的微小根毛霉a-淀粉酶CBM和SEQIDNO:24中的巨多孔菌a-淀粉酶CBM。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:145中的紙質(zhì)大紋飾孢葡糖淀粉酶CBM和選自下組的CBM:SEQIDNO:16中的枝頂孢霉屬的菌種的a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:20中的微小根毛霉a-淀粉酶CBM和SEQIDNO:24中的巨多孔菌a-淀粉酶CBM。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與微小根毛霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:20)具有至少75%同源性的催化結(jié)構(gòu)域和與選自下組的CBM具有至少75%同源性的CBM:SEQIDNO:94中的白曲霉葡糖淀粉酶CBM和SEQIDNO:96中的黑曲霉葡糖淀粉酶CBM。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含微小根毛霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:20)和選自下組的CBM:SEQIDNO:94中的白曲霉葡糖淀粉酶CBM和SEQIDNO:96中的黑曲霉葡糖淀粉酶CBM。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與巨多孔菌a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:24)具有至少75%同源性的催化結(jié)構(gòu)域和與選自下組的CBM具有至少75%同源性的CBM:SEQIDNO:145中的紙質(zhì)大紋飾孢葡糖淀粉酶CBM、SEQIDNO:84中的Ka/raWaraZWcosaa-淀粉酶CBM和SEQIDNO:109中的玉米CBM。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含巨多孔菌a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:24)和選自下組的CBM:SEQIDNO:145中的紙質(zhì)大紋飾孢葡糖淀粉酶、SEQIDNO:84中的n^n'casaa-淀粉酶CBM和SEQIDNO:109中的玉米CBM。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含與微小根毛霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:20)具有至少75%同源性的催化結(jié)構(gòu)域和與選自下組的CBM具有至少75%同源性的CBM:SEQIDNO:92中的羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM和SEQIDNO:109中的玉米CBM、SEQIDNO:113中的錐毛殼菌屬的菌種的a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:119中的皺褶栓菌a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:123中的K^an'a^aW/a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:121中的青霉屬的菌種的a-淀粉酶CBM和SEQIDNO:88中的巨多孔菌a-淀粉酶CBM。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽包含微小根毛霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:20)和選自下組的CBM:SEQIDNO:92中的羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM和SEQIDNO:109中的玉米CBM、SEQIDNO:113中的錐毛殼菌屬的菌種的a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:119中的皺褶栓菌a-淀粉酶CBM、SEQIDNO:123中的Ka/^r^^aW"a-淀斗分酶CBM、SEQIDNO:121中的青霉屬的菌種的a-淀粉酶CBM和SEQIDNO:88中的巨多孔菌a-淀粉酶CBM。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中所述多肽選自下組V001、V002、V003、V004、V005、V006、V007、V008、V009、VOIO、VOll、V012、V013、V014、V015、V016、V017、V018、V019、V021、V022、V023、V024、V025、V026、V027、V028、V029、V030、V031、V032、V033、V034、V035、V036、V037、V038、V039、V040、V041、V042、V043、V047、V048、V049、V050、V051、V052、V054、V055、V057、V059、V060、V061、V063、V064、V065、V066、V067、V068和V069。表達(dá)載體本發(fā)明還涉及重組表達(dá)載體，其可以包含編碼多肽的DNA序列、啟動(dòng)子、信號(hào)肽序列和轉(zhuǎn)錄與翻譯停止信號(hào)。可以將上述各種DNA和控制序列連接在一起以制備重組表達(dá)載體，其可以包括一個(gè)或多個(gè)方便的限制性位點(diǎn)以允許編碼所述多肽的DNA序列在這些位點(diǎn)的插入或^^換?；蛘?，可以通過(guò)將包含所述序列的DNA序列或DNA構(gòu)建體插入到合適的載體中用于表達(dá)。在構(gòu)建表達(dá)載體過(guò)程中，所述編碼序列位于載體中，以便將所述編碼序列可操作地與合適的控制序列連接在一起，用于表達(dá)和可能的分泌。所述重組表達(dá)載體可以是任何載體(例如，質(zhì)粒或病毒)，能夠方便地將其用于重組DNA過(guò)程并能夠引起所述DNA序列的表達(dá)。載體的選擇典型地依賴于所述載體與該載體所要導(dǎo)入的宿主細(xì)胞的兼容性。所述載體可以是線性的或者是封閉環(huán)形的質(zhì)粒。所述載體可以是自主復(fù)制載體，即，作為染色體外實(shí)體存在的載體，其復(fù)制獨(dú)立于染色體復(fù)制，例如，質(zhì)粒、染色體外組件、微型染色體、粘粒(cosmid)或人工染色體。所述載體可以包含用于確保自我復(fù)制的任何方式?；蛘撸鲚d體可以是當(dāng)導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中時(shí)，整合到基因組中并與其整合進(jìn)入的一個(gè)或多個(gè)染色體一起復(fù)制的載體。所述載體系統(tǒng)可以是包含所要導(dǎo)入到宿主細(xì)胞的基因組中的全部DNA的單個(gè)載體或質(zhì)?；騼蓚€(gè)或多個(gè)載體或質(zhì)粒，或轉(zhuǎn)座子。標(biāo)記本發(fā)明的載體優(yōu)選包含一種或多種可選擇標(biāo)記，其允許容易地選擇轉(zhuǎn)化的細(xì)胞?？蛇x擇的標(biāo)記是基因，其產(chǎn)物提供抗菌劑或病毒抗性、重金屬抗性、原養(yǎng)型至營(yíng)養(yǎng)缺陷型，等等。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的可選擇標(biāo)記的例子可以選自包括但不限于m^/S(乙酰胺酶)、arg風(fēng)鳥(niǎo)氨酸氨曱酰基轉(zhuǎn)移酶)、6ar(草銨膦乙?；D(zhuǎn)移酶)、g5(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶)、w'""(硝酸還原酶)、；,G(乳清苷-5，-磷酸脫羧酶)、sC(硫酸腺苦酰轉(zhuǎn)移酶(sulfateadenyltransferase))、^pC(鄰氨基苯曱酸合酶)、和草丁膦抗性標(biāo)記、以及來(lái)自其它物種的等價(jià)物的組。優(yōu)選用于曲霉細(xì)胞的是構(gòu)巢曲霉或米曲霉的am^S和標(biāo)記以及吸水鏈霉菌(&re;tow;;c"/^gra5cop/cw"的kw標(biāo)記。此外，可以通過(guò)共轉(zhuǎn)化完成選4奪，例如WO91/17243中所述，其中所述可選擇標(biāo)記在獨(dú)立的載體上。本發(fā)明的載體優(yōu)選包含允許所述載體穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞基因組中或者允許所述載體在細(xì)胞中獨(dú)立于細(xì)胞基因組而自主復(fù)制的一個(gè)或多個(gè)元件。當(dāng)引入到宿主細(xì)胞中時(shí)本發(fā)明的載體可以整合到宿主細(xì)胞基因組中。為了整合，所述載體可能依賴編碼感興趣多肽的DNA序列或用于使載體通過(guò)同源或非同源重組穩(wěn)定整合到基因組中的任何其它載體元件。或者，所述載體可以包含額外的DNA序列，所述額外的DNA序列用于通過(guò)同源重組定向整合到宿主細(xì)胞的基因組中。所述額外的DNA序列使所述載體能夠在一個(gè)或多個(gè)染色體中的一個(gè)或多個(gè)精確位置整合到宿主細(xì)胞基因組中。為了增加整合于精確位置的可能性，所述整合組件應(yīng)當(dāng)優(yōu)選包含足夠數(shù)目的DNA,如100至1,500個(gè)堿基對(duì)，優(yōu)選400至1，500個(gè)堿基對(duì)，最優(yōu)選800至1,500個(gè)堿基對(duì)，其與相應(yīng)的靶序列高度同源，以增加同源重組的概率。所述整合元件可以是任何與宿主細(xì)胞基因組中的靶序列同源的序列。另外，所述整合組件可以是非編碼或編碼DNA序列。另一方面，所述載體可以通過(guò)非同源重組整合到宿主細(xì)胞的基因組中。這些DNA序列可以是任何與宿主細(xì)胞基因組中的靶序列同源的序列，另外，這些DNA序列可以是非編碼或編碼序列。為了自主復(fù)制，所述載體可以進(jìn)一步包含復(fù)制原點(diǎn)，所述復(fù)制原點(diǎn)使所述載體能夠在所討論的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制?？梢允褂肳O00/24883中公開(kāi)的AMA1質(zhì)粒載體的附加型復(fù)制?？梢詫⒊^(guò)一個(gè)拷貝的編碼感興趣多肽的DNA序列插入到宿主細(xì)胞中以增加DNA序列的表達(dá)。可以通過(guò)使用本領(lǐng)域熟知的方法將序列的至少定擴(kuò)增。用于連接上述元件以構(gòu)建本發(fā)明的重組表達(dá)載體的方法對(duì)本領(lǐng)域熟練^支術(shù)人員來(lái)i兌是熟^口的(參見(jiàn)，例Jt口，Sambrooketal，1989,MolecularCloning,ALaboratoryManual,2ndedition,ColdSpringHarbor,NewYork)。宿主細(xì)胞本發(fā)明的宿主細(xì)胞(其包含DNA構(gòu)建體或包含含有編碼所述多肽的DNA序列的表達(dá)載體)在多肽(例如，雜合酶、野生型酶或遺傳修飾的野生型酶)的重組生產(chǎn)中有利地用作宿主細(xì)胞?？梢杂帽磉_(dá)載體轉(zhuǎn)化所述細(xì)胞?；蛘撸梢苑奖愕赝ㄟ^(guò)將DNA構(gòu)建體(以一個(gè)或多個(gè)拷貝)整合在宿主染色體中，用編碼所述多肽(例如，雜合酶、野生型酶或遺傳修飾的野生型酶)的本發(fā)明的DNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)化所述細(xì)胞。DNA構(gòu)建體向宿主染色體中的整合可以依照傳統(tǒng)方法，例如，通過(guò)同源或異源重組進(jìn)行。所述宿主細(xì)胞可以是任何合適的原核或真核細(xì)胞，例如，細(xì)菌細(xì)胞、絲狀真菌細(xì)胞、酵母、植物細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述宿主細(xì)胞是由以下子嚢菌G^comycoto)類代表的絲狀真菌，包括例如，脈孑包菌(iVeMmy/om)、正青霉(￡w/ewW〃/Mm)(=青霉)、棵胞殼(五men'ce〃a)(二曲霉)、散嚢菌(五Mra"wm)^曲霉)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述絲狀真菌包括真菌亞門CEMmycoto)和卵菌亞門(0omycoto)的所有絲y犬真菌。口Hawksworthea/./"，ATwwo/^/z5&Z^'sD/c"owa/^q/"77zeFwwg/,8thedition,1995,CABInternational,UniversityPress,Cambridge,UK所定義的)。所述絲狀真菌以由幾丁質(zhì)、纖維素、葡聚糖、脫乙酰殼多糖、甘露聚糖、和其它復(fù)合多糖組成的營(yíng)養(yǎng)菌絲體為特征。通過(guò)菌絲延伸進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)并且碳分解代謝是嚴(yán)格需氧的。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述絲狀真菌宿主細(xì)胞是包括但不限于選自下組的細(xì)胞的物種的細(xì)胞曲霉屬物種，優(yōu)選米曲霉、黑曲霉、泡盛曲霉、白曲霉的菌抹，或芽孢桿菌屬菌抹、或鐮刀霉屬菌^^朱，如尖孢鐮刀菌(FMsor/Mmox_y5/oWwm)、禾谷鐮刀菌(J^i"an'MWgn3w/"earMW)(更石角切J:也表述為玉蜀泰赤霉(GWZ^ere〃aze—,之前稱為)S)9/7am'azeae，與粉紅赤霉(G^力Zere〃arogww)牙口4分纟工赤霉禾谷變種(G7Z^gre〃arosewmf.sp.cerea,/力同義)、或石危色鐮刀菌ra/;/7weM柳X更確切；也稱為C7/Z^ere〃a5a附/wc/ww、斗分纟工錄孑包(FM5an、wraseMm)、禾口4分纟工錄孑包禾谷變種(FwS(aWMmrc^ewmvar.gramzV2earMW)同義)、禾谷嫌刀審(尸Msar/wmcerea/z、X與i^Msarz'Mwc7-oo^vve〃ewse同義)、或尸t^an.wmvewe/7o;MW6々菌^朱。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述絲狀真菌宿主細(xì)胞是曲霉屬物種，優(yōu)選米曲霉或黑曲霉的菌林的細(xì)胞。所述絲狀真菌宿主細(xì)胞可以是野生型絲狀真菌宿主細(xì)胞或變異的、突變的或遺傳修飾的絲狀真菌宿主細(xì)胞。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中所述宿主細(xì)胞是蛋白酶缺陷的或蛋白酶負(fù)性菌抹。還特別考慮曲霉屬菌抹，如黑曲霉菌抹，其經(jīng)遺傳修飾破壞或減小了葡糖淀粉酶、酸穩(wěn)定的a-淀粉酶、ot-l,6轉(zhuǎn)葡糖苷酶、和蛋白酶活性的表達(dá)。絲狀真菌宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化絲狀真菌宿主細(xì)胞可以通過(guò)涉及本領(lǐng)域已知方式的原生質(zhì)體形成、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、和細(xì)胞壁再生的方法來(lái)轉(zhuǎn)化。EP238023、EP184438、和Yeltona/.1984,f/ze7Va"owa/y4ca<iem_yo/5We"cest/S/481:1470-1474中描述了轉(zhuǎn)化曲霉屬宿主細(xì)胞的合適的方法。MalardierWa/.1989,78:147-156或U.S.專利6,060,305描述了轉(zhuǎn)化鐮刀霉物種的合適的方法。分離和克隆編碼親本a-淀粉酶的DNA序列用于分離或克隆編碼感興趣多肽的DNA序列的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的，包括從基因組DNA分離、從cDNA制備、或其組合。從這樣的基因組DNA克隆本發(fā)明的DNA序列可能例如，利用熟知的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)或表達(dá)文庫(kù)的抗體篩選以檢測(cè)具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的DNA片段來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)，例如,Innise/a/"1990,尸C7.'爿GW<ietoM"/70(isAcademicPress,NewYork?？梢允褂闷渌腄NA擴(kuò)增方法如連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、連接激活的轉(zhuǎn)錄(LAT)和基于DNA序列的擴(kuò)增(NASBA)?？梢岳帽绢I(lǐng)域熟知的多種方法從生產(chǎn)所述a-淀粉酶的任何細(xì)胞或微生物分離編碼親本a-淀粉酶的DNA序列。首先，應(yīng)當(dāng)利用來(lái)自生產(chǎn)所要研究的a-淀粉酶的生物的染色體DNA或信使RNA構(gòu)建基因組DNA和/或cDNA文庫(kù)。然后，如果所述a-淀粉酶的氨基S吏序列是已知的，那么可以合成標(biāo)記的寡核苦酸探針并用于從基因組文庫(kù)鑒定編碼a-淀粉酶的克隆，所述基因組文庫(kù)從所討論的生物制備?；蛘?，采用極低至極高嚴(yán)緊性的雜交和洗滌條件，可以將包含與另一個(gè)已知的a-淀粉酶基因同源的序列的標(biāo)記寡核苷酸探針用作探針，以鑒定編碼a-淀粉酶的克隆。鑒定編碼a-淀粉酶的克隆的另一種方法將涉及將基因組DNA的片段插入到表達(dá)載體如質(zhì)粒中，用所得基因組DNA文庫(kù)轉(zhuǎn)化a-淀粉酶陰性細(xì)菌，然后用轉(zhuǎn)化的細(xì)菌在含有a-淀粉酶的底物(即，麥芽糖)的瓊脂上劃平板，從而允許鑒定表達(dá)a-淀粉酶的克隆。歹寸，例^口，S丄.Beaucage和M.H.Caruthers,(1981)，TetrahedronLetters22,p.1859-1869所述的phosphoroamidite法，或者M(jìn)atthesetal.(1984),EMBOJ.3，p.801-805描述的方法。在phosphoroamidite法中，例如在自動(dòng)DNA合成儀中合成寡核苷酸，純化，退火，連接，并克隆入合適的載體。最后，所述DNA序列可以是基因組和合成混合來(lái)源、合成和cDNA混合來(lái)源或者基因組和cDNA混合來(lái)源，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)通過(guò)連接合成的、基因組或cDNA來(lái)源的片段(合適的話，對(duì)應(yīng)于整個(gè)DNA序列的不同部分的片段)而制備。所述DNA序列也可以用特異性引物通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)制備，例如美國(guó)專利4,683,202或R.K.Saikietal.(1988)，Science239，1988,pp.487-491中所述。分離的DNA序列本發(fā)明特別涉及包含編碼多肽(例如雜合酶、野生型酶或遺傳修飾的野生型酶)的DNA序列的分離的DNA序列，所述多肽包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊的氨基酸序列和碳水化合物結(jié)合模塊的氨基酸序列，其中所述催化模塊是真菌起源的。本文所用術(shù)語(yǔ)"分離的DNA序列"涉及基本上不含其它DNA序列的DNA序列，例如，通過(guò)瓊脂糖電泳測(cè)定時(shí)至少約20%純的，優(yōu)選至少約40%純的，更優(yōu)選至少約60%純的，更加優(yōu)選至少約80%純的，最優(yōu)選至少約90%純的。例如，分離的DNA序列可以通過(guò)用于遺傳工程的標(biāo)準(zhǔn)克隆方法獲得，所述方法將DNA序列從其天然位置重定位到它將要在那里復(fù)制的不同位點(diǎn)。所述克隆方法可能涉及切除和分離所需的包含編碼感興趣多肽的DNA序列的DNA片段、將所述片段插入到載體分子中、將所述重組載體摻入到所述DNA序列的多拷貝或克隆將在其中復(fù)制的宿主細(xì)胞中。可以通過(guò)多種方法操作分離的DNA序列以提供感興趣多肽的表達(dá)。取決于所述表達(dá)載體，在其插入到載體中之前，對(duì)所述DNA序列的操作可能是需要或必需的。利用重組DNA方法修飾DNA序列的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。DNA構(gòu)建體本發(fā)明特別涉及包含編碼多肽的DNA序列的DNA構(gòu)建體，所述多肽為例如雜合酶或野生型酶，其中所述雜合酶包含含有催化模塊的第一個(gè)氨基酸序列和含有碳水化合物結(jié)合模塊的第二個(gè)氨基酸序列，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性，或者其中所述野生型酶包含含有催化模塊的第一個(gè)氨基酸序列和含有碳水化合物結(jié)合模塊的第二個(gè)氨基酸序列，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性。本文中"DNA構(gòu)建體"定義為單鏈或雙《連DNA分子，其由天然發(fā)生的基因分離，或者經(jīng)修飾而包含了DNA片段，所述DNA片段以自然界中不存在的方式組合和并列放置。當(dāng)DNA構(gòu)建體包含本發(fā)明的編碼序列表達(dá)所需的所有控制序列時(shí)，術(shù)語(yǔ)DNA構(gòu)建體與術(shù)語(yǔ)表達(dá)盒是同義的。定點(diǎn)誘變一旦分離了編碼親本a-淀粉酶的DNA序列，且確定了所需的突變位點(diǎn)，可以利用合成的寡核香酸引入突變。這些寡核苷酸包含位于所需突變位點(diǎn)側(cè)翼的核苷酸序列。在特定方法中，在攜帶a-淀粉酶基因的載體中構(gòu)建作為ct-淀粉酶編碼序列的DNA的單鏈缺口。然后將攜帶所需突變的合成核苷酸與單鏈DNA的同源部分退火。然后用DNA聚合酶I(Klenow片段)填充剩余的缺口，利用T4連接酶連接所述構(gòu)建體。該方法的特定實(shí)施例描述于Morinagaetal.(1984)，Biotechnology2，p.646-639。美國(guó)專利4,760,025公開(kāi)了通過(guò)表達(dá)盒的^:小改變來(lái)引入編碼多個(gè)突變的寡核芬酸。然而，可以通過(guò)Morinaga法在任何一個(gè)時(shí)間引入更多種類的突變，因?yàn)榭梢砸氩煌L(zhǎng)度的許多寡核苷酸。另一種將突變引入到編碼a-淀粉酶的DNA序列中的方法描述于NelsonandLong，(1989)，AnalyticalBiochemistry180,p.147-151。其涉及包含所需突變的PCR片段的3步生產(chǎn)，其中將化學(xué)合成的DNA鏈用作PCR反應(yīng)中的其中一個(gè)引物來(lái)引入所需的突變?？梢酝ㄟ^(guò)用限制性內(nèi)切酶裂解并將其重新插入到表達(dá)質(zhì)粒中而從PCR生產(chǎn)的片段分離攜帶所述突變的DNA片段。定域隨機(jī)誘變隨機(jī)誘變可以有利地局限于所討論的親本a-淀粉酶的一部分。例如，當(dāng)已經(jīng)鑒定出酶的特定區(qū)域?qū)τ诿傅闹付ㄌ匦詠?lái)說(shuō)特別重要、并且預(yù)期被修飾時(shí)會(huì)產(chǎn)生具有改善特性的變異時(shí)，這可能是有利的。正常情況下，當(dāng)已經(jīng)闡明了親本酶的三級(jí)結(jié)構(gòu)并且其與酶的功能相關(guān)時(shí)，可以鑒定這些區(qū)域。使用如上所述的PCR引致的誘變技術(shù)或任何本領(lǐng)域已知的其它合適的技術(shù)方便地實(shí)施定域或區(qū)域特異性隨機(jī)誘變?；蛘?，可以分離編碼所要修飾的DNA序列的一部分的DNA序列，例如通過(guò)插入到合適的載體中，隨后可以使用以上討論的任何誘變方法對(duì)所述部分進(jìn)4亍誘變。雜合體或野生型酶的變體含有碳水化合物結(jié)合模塊("CBM")和a-淀粉酶催化模塊的野生型或雜合酶在淀粉降解方法中的性能可以通過(guò)蛋白質(zhì)工程改善，如通過(guò)定點(diǎn)誘變(site-directedmutagenesis)、通過(guò)定域隨機(jī)誘變(localizedrandommutagenesis),通過(guò)以合成方法制備親本野生型酶或親本雜合酶的新的變體、或者通過(guò)任何其它合適的蛋白質(zhì)工程技術(shù)?？梢岳脗鹘y(tǒng)的蛋白質(zhì)工程技術(shù)生產(chǎn)所述變體。多肽在宿主細(xì)胞中的表達(dá)可以將要引入到宿主細(xì)胞DNA中的核苷酸序列整合在核酸構(gòu)建體中，所述核酸構(gòu)建體包含可操作地連接到一個(gè)或多個(gè)控制序列的核苷酸序列，所述控制序列引導(dǎo)編碼序列在與控制序列相容的條件下在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)?？梢酝ㄟ^(guò)多種方法操作編碼多肽的核苷酸序列以便多肽表達(dá)。取決于所述表達(dá)載體，在所述核苷酸序列被插入到載體中之前，對(duì)其操作可能是需要或必需的。利用重組DNA方法修飾核苷酸序列的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。所述控制序列可以是合適的啟動(dòng)子序列，啟動(dòng)子序列是被宿主細(xì)胞識(shí)別以表達(dá)核苦酸序列的核苦酸序列。所述啟動(dòng)子序列包含轉(zhuǎn)錄控制序列，其介導(dǎo)多肽的表達(dá)。所述啟動(dòng)子可以是在所選擇的宿主細(xì)胞中顯示轉(zhuǎn)錄活性的任何核苷酸序列，包括突變的、截短的、和雜合的啟動(dòng)子，可以由編碼與宿主細(xì)胞同源或不同源的胞外或胞內(nèi)多肽的基因獲得。引導(dǎo)本發(fā)明的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)錄，尤其是在細(xì)菌宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄的合適的啟動(dòng)子的例子是從大腸桿菌乳糖操縱子、天藍(lán)色鏈霉菌(&r印tow少ceycoe"co/o。瓊脂糖酶基因(&gv4)、枯草芽孢桿菌果聚糖蔗糖酶(levansucrase)基因0aci)、地衣芽孢桿菌CBac/〃M//c/zem/own》a-淀粉酶基因(am;;丄)、嗜熱月旨肪芽孢#干菌(S"c/〃i/j■ytoara/Zze/Two/^z'/w)產(chǎn)麥芽4唐淀4分酶(maltogenicamylase)基因(amj^M)、角年淀并分芽孑包4干菌(^ac/〃MSa^y/o/z々wey^c/era)a-;定4分酶基因(awyg)、地衣芽孢桿菌青霉素酶基因、枯草芽孢桿菌x_y"和矽/S基因、和原核生物P-內(nèi)酰胺酶基因獲得的啟動(dòng)子(Villa-Kamaroffetal.,1978，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA75:3727-3731),以及toe啟動(dòng)子(DeBoeretal.，1983，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA80:21-25)。更多啟動(dòng)子描述于ScientificAmerican,1980，242:74-94中的"Usefulproteinsfromrecombinantbacteria";和Sambrooketal"1989,同上中。用于引導(dǎo)本發(fā)明的核酸構(gòu)建體在絲狀真菌宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄的合適的啟動(dòng)子的例子是由米曲霉TAKA淀粉酶、米黑根毛霉(i/^omwcw""'e/ze/)天冬氨酸蛋白酶、黑曲霉中性a-淀粉酶、黑曲霉酸穩(wěn)定的a-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(g/aj)、米黑根毛霉脂肪酶、米曲霉堿性蛋白酶、米曲霉磷酸丙糖異構(gòu)酶、構(gòu)巢曲霉乙酰胺酶、和尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶(WO96/00787)的基因獲得的啟動(dòng)子，以及NA24pi啟動(dòng)子(來(lái)自黑曲霉中性a-淀粉酶和米曲霉磷酸丙糖異構(gòu)酶的基因的啟動(dòng)子的雜合體)、及其突變的、截短的、和雜合的啟動(dòng)子。在酵母宿主中，有用的啟動(dòng)子由酉良酒酵母(Sacc/2aramyc&scerevz'whe)烯醇化酶(ENO-l)、釀酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、釀酒酵母乙醇脫氫酶/甘油醛-3-磷酸脫氫酶(ADH2/GAP)、和釀酒酵母3-磷酸甘油酸激酶的基因獲得。Romanosetal.,1992,Yeast8:423-488描述了其它可用于酵母宿主細(xì)胞的啟動(dòng)子。由宿主細(xì)胞所識(shí)別以終止轉(zhuǎn)錄。所述終止子序列可操作地連接到編碼多肽的核苷酸序列的3'末端。任何在所選擇的宿主細(xì)胞中有功能的終止子都可以用于本發(fā)明。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選的終止子自米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、構(gòu)巢曲霉鄰氨基苯曱酸合酶、黑曲霉a-葡萄糖苷酶、和尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶的基因獲得。用于酵母宿主細(xì)胞的優(yōu)選的終止子自釀酒酵母烯醇化酶、釀酒酵母細(xì)胞色素C(CYCl)、和釀酒酵母甘油醛-3-磷酸脫氫酶的基因獲得。Romanosetal.,1992,同上描述了用于酵母宿主細(xì)胞的其它有用的終止子。所述控制序列也可以是合適的前導(dǎo)序列，所述前導(dǎo)序列是對(duì)于由宿主細(xì)胞進(jìn)行的翻譯來(lái)說(shuō)是重要的mRNA的非翻譯區(qū)域。所述前導(dǎo)序列可操作地連接到編碼多肽的核苷酸序列的5'末端。任何在所選擇的宿主細(xì)胞中有功能的終止子都可以用于本發(fā)明。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選的前導(dǎo)序列由米曲霉TAKA淀粉酶和構(gòu)巢曲霉磷酸丙糖異構(gòu)酶的基因獲得。用于酵母宿主細(xì)胞的合適的前導(dǎo)序列由釀酒酵母烯醇化酶(ENO-l)、西良酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、S良酒酵母a-因子、和釀酒酵母乙醇脫氫酶/甘油醛-3-磷酸脫氫酶(ADH2/GAP)的基因獲得。所述控制序列還可以是多聚腺苷酸化序列，多聚腺苷酸化序列可操作地連接到核苷酸序列的3'末端，當(dāng)轉(zhuǎn)錄時(shí)，其由宿主細(xì)胞所識(shí)別，作為向轉(zhuǎn)錄的mRNA添加多聚腺香殘基的信號(hào)。任何在所選擇的宿主細(xì)胞中有功能的多聚腺苦酸化序列都可以用于本發(fā)明。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的優(yōu)選的多聚腺芬酸化序列由米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、構(gòu)巢曲霉鄰氨基苯曱酸合酶、尖孢鐮刀菌胰蛋白酶樣蛋白酶、和黑曲霉a-葡萄糖苷酶的基因獲得。GuoandShe腿n，1995,Mo/簡(jiǎn)/arC函/ar腸/ogy15:5983-5990描述了可用于酵母宿主細(xì)胞的多聚腺苷酸化序列。所述控制序列也可以是編碼連接到多肽氨基末端的氨基酸序列和將所編碼的多肽引導(dǎo)到細(xì)胞的分泌途徑中的信號(hào)肽編碼區(qū)。核苷酸序列的編碼序列的5'末端本身可以包含信號(hào)肽編碼區(qū)，其在翻譯閱讀框中與編碼分泌多肽的編碼區(qū)片段天然相連。或者，編碼序列的5'端可以包含對(duì)編碼序列來(lái)說(shuō)為外源的信號(hào)肽編碼區(qū)。所述編碼序列天然地不包含信號(hào)肽編碼區(qū)時(shí)，可能需要外源信號(hào)肽編碼區(qū)。或者，外源信號(hào)肽編碼區(qū)可以簡(jiǎn)單地替換天然的信號(hào)肽編碼區(qū)以增強(qiáng)多肽的分泌。然而，任何將所表達(dá)的多肽引導(dǎo)到所選宿主細(xì)胞的分泌途徑的信號(hào)肽編碼區(qū)都可以用于本發(fā)明。對(duì)細(xì)菌宿主細(xì)胞有效的信號(hào)肽編碼區(qū)是由芽孢桿菌NCIB11837產(chǎn)麥芽糖淀粉酶、嗜熱脂肪芽孢桿菌a-淀粉酶、地衣芽孢桿菌枯草蛋白酶、地衣芽孢桿菌(3-內(nèi)酰胺酶、嗜熱脂肪芽孢桿菌中性蛋白酶(w^r、，nS、，rM)、和枯草芽孢桿菌,W的基因獲得的信號(hào)肽編碼區(qū)。SimonenandPalva，1993,Af/craWo/og/ca/ZeWev^57:109-137描述了更多的信號(hào)肽。對(duì)絲狀真菌宿主細(xì)胞有效的信號(hào)肽編碼區(qū)是由米曲霉TAKA淀粉酶、黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、特異腐歹直零(7/wm/co/azVwo/ews)纟千鄉(xiāng)1^素酵、禾口柔毛腐質(zhì)審(Z/Mm/co/a/awwg/"ose)脂肪酶的基因獲得的信號(hào)肽編碼區(qū)。對(duì)酵母宿主細(xì)胞有用的信號(hào)肽由釀酒酵母ot-因子和釀酒酵母轉(zhuǎn)化酶基因獲得。Romanosetal.,1992,同上描述了其它有用的信號(hào)肽編碼區(qū)。所迷控制序列還可以是編碼位于多肽氨基末端的氨基酸序列的前肽編碼區(qū)。所得多肽#皮稱為酶原(proenzyme)或前多肽(propolypeptide)(在一些場(chǎng)合稱為酶原(zymogen))。前多肽通常是無(wú)活性的，能夠通過(guò)來(lái)自前多肽的前肽的催化或自體催化裂解轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒旎钚远嚯?。前肽編碼區(qū)可以由枯草芽孢桿菌堿性蛋白酶(a/7r五)、枯草芽孢桿菌中性蛋白酶("pKO、釀酒酵母a-因子、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、和嗜熱毀絲霉(A^ce/z'o/似/2oraAwmop/7a)漆酶(WO95/33836)的基因獲得。信號(hào)肽和前肽區(qū)域都存在于多肽的氨基末端時(shí)，前肽區(qū)域位于緊挨多肽的氨基末端的位置，信號(hào)肽區(qū)域位于緊挨前肽區(qū)域的氨基末端的位置。添加相對(duì)于宿主細(xì)胞的生長(zhǎng)允許調(diào)節(jié)多肽表達(dá)的調(diào)節(jié)序列也可能是需要的。調(diào)節(jié)系統(tǒng)的例子是導(dǎo)致基因的表達(dá)響應(yīng)化學(xué)或物理刺激物包括調(diào)節(jié)化合物的存在而打開(kāi)或關(guān)閉的那些。原核系統(tǒng)中的調(diào)節(jié)系統(tǒng)包括/ac、toc、和";？操縱子系統(tǒng)。在酵母中，可以使用ADH2系統(tǒng)或GAL1系統(tǒng)。在絲狀真菌中，TAKAa-淀粉酶啟動(dòng)子、黑曲霉葡糖淀粉酶啟動(dòng)子、和米曲霉葡糖淀粉酶啟動(dòng)子可以用作調(diào)節(jié)序列。其它調(diào)節(jié)序列的例子是允許基因擴(kuò)增的那些。在真核系統(tǒng)中，這些包括在曱氨蝶呤存在下擴(kuò)增的二氫葉酸還原酶基因、和伴隨重金屬而擴(kuò)增的金屬硫蛋白基因。在這些例子中，編碼多肽的核苷酸序列與調(diào)節(jié)序列可操作相連?？梢詫⑸鲜龆喾N核苦酸和控制序列連接在一起以制備重組表達(dá)載體，其可以包括一個(gè)或多個(gè)方便的限制性位點(diǎn)以允許編碼所述多肽的核苷酸序列在這些位點(diǎn)的插入或取代?；蛘撸梢酝ㄟ^(guò)將包含所述序列的核苷酸序在構(gòu)建表達(dá)載體過(guò)程中，將所述編碼序列置于載體中，以便將所述編碼序列可操作地與合適的控制序列連接在一起用于表達(dá)。所述重組表達(dá)載體可以是任何載體(例如，質(zhì)粒或病毒)，能夠方便地將其用于重組DNA過(guò)程并能夠引起所述核苷酸序列的表達(dá)。載體的選擇典型地依賴于所述載體與該載體所要導(dǎo)入的宿主細(xì)胞的兼容性。所述載體可以是線性的或者是封閉環(huán)形的質(zhì)粒。所述載體可以是自主復(fù)制載體，即，作為染色體外實(shí)體存在的載體，其復(fù)制獨(dú)立于染色體復(fù)制，例如，質(zhì)粒、染色體外元件、微型染色體、或人工染色體。所述載體可以包含用于確保自我復(fù)制的任何方式。或者，所述載體可以是當(dāng)導(dǎo)入到宿主細(xì)胞中時(shí)，整合到基因組中并與其整合進(jìn)入的一個(gè)或多個(gè)染色體一起復(fù)制的載體。另外，可以使用包含要導(dǎo)入宿主細(xì)胞基因組中的全部DNA的單個(gè)載體或者質(zhì)?；蛘邇蓚€(gè)或多個(gè)載體或質(zhì)粒，或轉(zhuǎn)座子。本發(fā)明的載體優(yōu)選包含一種或多種可選擇標(biāo)記，其允許很容易地選擇轉(zhuǎn)化的細(xì)胞?？蛇x擇的標(biāo)記是基因，其產(chǎn)物提供抗菌劑或病毒抗性、重金屬抗性、原養(yǎng)型至營(yíng)養(yǎng)缺陷型，等等。用于酵母宿主細(xì)胞的合適標(biāo)記是ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、和URA3。用于絲狀真菌宿主細(xì)胞的可選4奪標(biāo)記包括但不限于flm^S(乙酰胺酶)、arg風(fēng)鳥(niǎo)氨酸氨曱?；D(zhuǎn)移酶)、Z^r(草銨膦乙?；D(zhuǎn)移酶)、/7ygS(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶)、m'aD(賄酸還原酶)、/7,G(乳清苷-5，-磷酸脫羧酶)、^C(硫酸腺普酰轉(zhuǎn)移酶)、/vC(鄰氨基苯曱酸合酶)、及其等價(jià)物。優(yōu)選用于曲霉細(xì)胞的是構(gòu)巢曲霉或米曲霉的am必和/,G基因以及吸水鏈霉菌的6ar基因。本發(fā)明的載體優(yōu)選包含允許所述載體穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞基因組中或者允許所迷載體在細(xì)胞中獨(dú)立于基因組而自主復(fù)制的一個(gè)或多個(gè)元件。為了整合到宿主細(xì)胞基因組中，所述載體可能依賴編碼多肽的核苷酸序列或用于載體通過(guò)同源或非同源重組穩(wěn)定整合到基因組中的任何其它載體元件?；蛘?，所述載體可以包含額外的核苷酸序列，所述額外的核苷酸序列用于指導(dǎo)通過(guò)同源重組向宿主細(xì)胞基因組中的定向整合。所述額外的核苷酸序列使所述載體能夠整合到宿主細(xì)胞基因組中一個(gè)或多個(gè)染色體中的一個(gè)或多個(gè)精確位置。為了增加整合于精確位置的可能性，所述整合元件應(yīng)當(dāng)優(yōu)選包含足夠數(shù)目的核苷酸，如100至1,500個(gè)堿基對(duì)，優(yōu)選400至1,500個(gè)堿基對(duì)，最優(yōu)選800至1,500個(gè)堿基對(duì)，其與相應(yīng)的靶序列高度同源，以增加同源重組的概率。所述整合元件可以是任何與宿主細(xì)胞基因組中的靶序列同源的序列。另外，所述整合元件可以是非編碼或編碼核苷酸序列。另一方面，所述載體可以通過(guò)非同源重組整合到宿主細(xì)胞的基因組中。為了自主復(fù)制，所述載體可以進(jìn)一步包含復(fù)制原點(diǎn)，所述復(fù)制原點(diǎn)使所述載體能夠在所討論的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制。細(xì)菌復(fù)制原點(diǎn)的的例子是允許在大腸桿菌中復(fù)制的質(zhì)粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的復(fù)制原點(diǎn)，允許在芽孢桿菌中復(fù)制的pUB110、pE194、pTA1060、和pAM131的復(fù)制原點(diǎn)。用于酵母宿主細(xì)胞的復(fù)制原點(diǎn)的例子是2微米(2micron)復(fù)制原點(diǎn)、ARS1、ARS4、ARS1和CEN3的組合、以及ARS4和CEN6的組合。復(fù)制原點(diǎn)可以是具有突變的復(fù)制原點(diǎn)，所述突變使其在宿主細(xì)胞中起溫度敏感性作用(參見(jiàn)，例如，Ehrlich，1978,iVocee^wgso/f/zeiVa"o，/y4c"(ie，。/tSWe"cest75^75:1433)。可以將超過(guò)一個(gè)拷貝的本發(fā)明的核芬酸序列插入到宿主細(xì)胞中以增加基因產(chǎn)物的生產(chǎn)。可以通過(guò)將序列的至少一個(gè)額外拷貝整合到宿主細(xì)胞基因組中，或者通過(guò)將可擴(kuò)增的可選擇標(biāo)志基因與核苷酸序列包括在一起，而獲得核苷酸序列拷貝數(shù)的增加；其中通過(guò)在合適的可選擇試劑存在下培養(yǎng)細(xì)胞，而選擇包含可選擇標(biāo)志基因的擴(kuò)增了的拷貝、并因而包含核苷酸序列的額外拷貝的細(xì)胞。用于連接上述元件以構(gòu)建本發(fā)明的重組表達(dá)載體的方法是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的(參見(jiàn)，例如，Sambrooketal.，1989，^J:)。宿主細(xì)胞本發(fā)明還涉及重組發(fā)酵真菌，或者包含本發(fā)明的核酸構(gòu)建體的宿主細(xì)胞，其有利地用于多肽的就地(onsite)重組生產(chǎn)。包含本發(fā)明的核苷酸序列的載體被？1入到宿主細(xì)胞中以便所述載體作為染色體組成部分或者作為之前描述的自我復(fù)制性染色體外載體存在。所述宿主細(xì)胞是真菌細(xì)胞。本文所用"真菌"包括子嚢菌門(/^cow少coZa)、4旦子菌門(S<3V//ow_ycoto)、壺菌門(C72_yZn.d/ow_ycc/a)、禾口4妻合菌門(Zyg(5，coto)(如HawkswortheZa/.，在y4/rawoW/z<a"d他》Z)/c"ow"r_yT7ze尸wwg7',第8W反，1995，CABInternational,UniversityPress,Cambridge,UK中定義的)以及卵菌亞門((9ow_ycoto)0口Hawksworth"a/.,1995,同上，171頁(yè)所引用的)和所有有絲分裂孢子真菌(Hawksworthetal.，1"5，同上)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述真菌宿主細(xì)胞是絲狀真菌細(xì)胞。"絲狀真菌"包括真菌和卵菌亞門的所有絲狀形式(如Hawksworth""/.，1995，同上定義的)。所述絲狀真菌以由幾丁質(zhì)、纖維素、葡聚糖、脫乙酰殼多糖、甘露聚糖、和其它復(fù)合多糖組成的菌絲體壁為特征。通過(guò)菌絲延伸進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)并且碳分解代謝是嚴(yán)格需氧的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，絲狀真菌宿主細(xì)胞是嗜熱或者耐熱真菌的細(xì)胞，例:i口子嚢菌亞門O^comyco&'wa)、才旦子菌亞門(5oWom_yco""a)、才妄合菌門或壺菌門中的物種,特另ll是由毛殼屬(CTwetom/ww)、77zenwoasr、Ma/^rawc/^ea、或梭孢殼霉屬(77z/e/av/a)(如太瑞斯梭孢殼霉(77H'e/aWa^re^W")、或盤菌屬(7Hc/7op/wea)組成的組中的物種。更加優(yōu)選所述宿主細(xì)胞是7Hc/2o//2aea^ccato或腐殖霉如特異腐質(zhì)霉菌^^。真菌細(xì)胞可以通過(guò)涉及以本身已知的方式形成原生質(zhì)體、轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體、和再生細(xì)胞壁的方法來(lái)轉(zhuǎn)化。用于轉(zhuǎn)化曲霉屬宿主細(xì)胞的合適的方法描述于EP238023和Yelton"a/"1984，尸raceec/"gso/淑/o"c(/v4cflcfem;;。/5We"ces81:1470-1474。Malardieraa/.，1989,G"e"e78:147-156和WO96/00787描述了用于轉(zhuǎn)化鐮刀霉物種的合適的方法?？梢岳肂eckerandGuarente,/"Abelson,J.N.andSimon,M.L,editors,to7eoy/Ge"e"cs朋dM/ecw/arBz'o/ogy,她^2oA/"五"z，o/ogy，Volume194,pp182-187，AcademicPress,Inc.,NewYork;Itoa/.,1983，Jot/wa/</Bac/en'o/c^153:163;andHinnene/a/.,1978，/VoceWwgs//ze7V加'o/7fl/Jcacfem_yo/Sc/e"c&y75:1920所述的方法轉(zhuǎn)化酵母。酶在才直物中的表達(dá)可以如下所述在轉(zhuǎn)基因植物中轉(zhuǎn)化和表達(dá)編碼感興趣多肽如本發(fā)明的雜合酶或野生型酶的變體或雜合體的DNA序列。所述轉(zhuǎn)基因植物可以是雙子葉的或單子葉的，簡(jiǎn)稱雙子葉植物或單子葉植物。單子葉植物的例子是草，如草地草(bluegrass,早熟禾屬(Poa))，詞料草，如羊矛(FeWca),黑麥(丄o/Zww)，溫帶草(temperategrass),如剪股穎屬M(fèi)graW/》，和谷物，例如，小麥，燕麥，黑麥，大麥，稻，高粱和玉蜀黍(玉米)。雙子葉植物的例子為煙草，豆科植物(如羽扇豆)，馬鈴薯，甜菜，豌豆，黃豆(bean)和大豆(soybean),和十字花科植物(十字花科(B如花椰菜，油菜和密切相關(guān)的才莫式生物擬南芥04ra6/Jo;w、^2"flwa)。植物部分的例子為莖、愈傷組織、葉、4艮、果實(shí)、種子、和塊莖(tuber)以及包含這些部分的獨(dú)立組織，例如，表皮、葉肉、間質(zhì)組織(parenchyme)、維管組織、分生組織。在本上下文中，特定的植物細(xì)胞小室，如葉綠體、質(zhì)外體、線粒體、液泡、過(guò)氧物酶體和細(xì)胞質(zhì)也祐j人為是植物部分。另外，任何植物細(xì)胞，無(wú)論組織起源是什么，都被認(rèn)為是植物部分。同樣，植物部分，如被分離以便于本發(fā)明利用的特定組織和細(xì)胞也被認(rèn)為是植物部分，例如，胚、胚乳、糊粉和種皮。這些植物、植物部分和植物細(xì)胞的后代也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？梢园凑毡绢I(lǐng)域已知的方法構(gòu)建表達(dá)感興趣多肽的轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞。簡(jiǎn)單地說(shuō)通過(guò)將編碼感興趣多肽的一個(gè)或多個(gè)表達(dá)構(gòu)建體整合到植才直物細(xì)"包構(gòu)建一直物或纟直物細(xì)胞。便利地，所述表達(dá)構(gòu)建體是DNA構(gòu)建體，其包含編碼感興趣多肽的與合適的調(diào)節(jié)序列可操作關(guān)聯(lián)的基因，所述調(diào)節(jié)序列是所述基因在所選植物或植物部分中表達(dá)所需的。此外，所述表達(dá)構(gòu)建體可以包含用于鑒定表達(dá)構(gòu)建體已經(jīng)整合到其中的宿主細(xì)胞的可選擇標(biāo)記和將所述構(gòu)建體導(dǎo)入到所討論的植物中必需的DNA序列(后者取決于所要使用的DNA導(dǎo)入方法)。例如才艮據(jù)所述的酶需要何時(shí)、何地以及如何表達(dá)來(lái)確定調(diào)控序列(如啟動(dòng)子和終止子序列以及任選信號(hào)或轉(zhuǎn)運(yùn)序列)的選擇。例如，編碼本發(fā)明的酶的基因的表達(dá)可以是組成型的或可誘導(dǎo)的，或者可以是發(fā)育、階段或組織特異性的，并且可以將基因產(chǎn)物定向到特定細(xì)胞小室、組織或植物部分如種子或葉。如Tagueetal，PlantPhys.,86，506,1988中描述了調(diào)控序列。為了進(jìn)行組成性表達(dá)，可以使用35S-CaMV、玉蜀黍泛素1和水稻肌動(dòng)蛋白1啟動(dòng)子(Francketal.1980.Cell21:285-294，ChristensenAH，SharrockRAandQuail1992.Maizepolyubiquitingenes:structure,thermalperturbationofexpressionandtranscriptsplicing,andpromoteractivityfollowingtransfertoprotoplastsbyelectroporation.PlantMo.Biol.18，675-689.;ZhangW，McElroyD.andWuR1991，Analysisofricevic75'regionactivityintransgenicriceplants.PlantCell3，1155-1165)。器官特異性啟動(dòng)子可以例如是來(lái)自存儲(chǔ)庫(kù)(storagesink)組織如種子、馬鈴薯塊莖、和果實(shí)(Edwards&Coruzzi,1990.Annu.Rev.Genet24:275-303),或來(lái)自代謝庫(kù)(metabolicsink)組織如分生組織(Itoetal.,1994,PlantMol.Biol.24:863-878)的啟動(dòng)子，種子特異性啟動(dòng)子如來(lái)自水稻谷蛋白、醇溶蛋白、球蛋白或白蛋白的啟動(dòng)子(Wuetal.，PlantandCellPhysiologyVol.39，No.8pp.885-889(1998》，ConradU.etal，JournalofPlantPhysiologyVol.152，No.6,pp.708-711(1998)描述的來(lái)自蠶豆(W".a/aM)的豆球蛋白B4和未知種子蛋白的蠶豆啟動(dòng)子，來(lái)自種子油體蛋白的啟動(dòng)子(Chenetal"PlantandCellPhysiology,Vol.39，No.9,pp.935-941(1998),來(lái)自甘藍(lán)型油菜CSra^/cawopM力的貯藏蛋白napA啟動(dòng)子，或者本領(lǐng)域已知的任何其它種子特異性啟動(dòng)子，例如，WO91/14772中所述的。此外，所述啟動(dòng)子可以是來(lái)自水稻或番茄的葉特異性啟動(dòng)子如rbcs啟動(dòng)子(Kyozukaetal.，PlantPhysiology,Vol.102,No.3，pp.991-1000(1993)，小球藻病毒腺噪呤曱基轉(zhuǎn)移酶基因啟動(dòng)子(Mitra,A.andHiggins，DW,PlantMolecularBiology,Vol.26,No.1，pp.85-93(1994)，或來(lái)自水稻的aldP基因啟動(dòng)子(Kagayaetal.,MolecularandGeneralGenetics,Vol.248,No.6,pp.668-674(1995)或創(chuàng)傷可i秀導(dǎo)的啟動(dòng)子:fe口馬鈴募pin2啟動(dòng)子(Xuetal,PlantMolecularBiology,Vol.22，No.4,pp.573-588(1993)。同樣，所述啟動(dòng)子可以是能夠由非生物處理如溫度、干旱或鹽度變化誘導(dǎo)的，或者是通過(guò)外部施加的激活啟動(dòng)子的物質(zhì)，例如，乙醇、雌激素、植物激素樣乙烯、脫落酸和赤霉酸以及重金屬所誘導(dǎo)的。啟動(dòng)子增強(qiáng)子元件可用于在植物中獲得更高的酶表達(dá)。例如，所述啟動(dòng)子增強(qiáng)子組件可以是位于啟動(dòng)子和編碼酶的核苷酸序列之間的內(nèi)含子。例如，Xuetal.opd公開(kāi)了水稻肌動(dòng)蛋白1基因的第一個(gè)內(nèi)含子增強(qiáng)表達(dá)的用途。可選擇標(biāo)記基因和表達(dá)構(gòu)建體的任何其它部分可以從本領(lǐng)域現(xiàn)有的那些中選擇。將所迷DNA構(gòu)建體按照本領(lǐng)域已知的傳統(tǒng)技術(shù)摻入到植物基因組中，包括農(nóng)桿菌04graMc/eWwm)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化、微注射、粒子轟擊、基因槍法轉(zhuǎn)化、和電穿孔(Gasseretal，Science,244,1293;Potrykus,Bio/Techn.8,535,1990;Shimamotoetal,Nature,338，274,1989)。目前，4艮癌農(nóng)桿菌(^(graZ^c/en'MWmme/ac/era)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移是為了生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因雙子葉植物而選擇的方法(綜述參見(jiàn)Hooykas&Schilperoort，1992,PlantMol.Biol.，19:15-38)，也可以用于轉(zhuǎn)化單子葉植物，雖然對(duì)于這些才直物通常使用其它的轉(zhuǎn)化方法。目前，對(duì)農(nóng)桿菌手段加以補(bǔ)充的理想的生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因單子葉植物的方法是對(duì)胚愈傷組織或發(fā)育中的胚的粒子轟擊(用轉(zhuǎn)化DNA包被顯微金或鴒粒子)(Christou,1992,PlantJ.,2:275-281;Shimamoto,1994,Curr.Opin.Biotechnol"5:158-162;Vasiletal"1992，Bio/Technology10:667-674)。用于轉(zhuǎn)化單子葉植物的替代方法以O(shè)mirullehS,etal.,PlantMolecularBiology,Vol.21，No.3，pp.415-428(1993)所述的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化為基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)化后，選擇已摻入了所述表達(dá)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)化體并按照本領(lǐng)域熟知的方法繁殖為完整植物。通常將所述轉(zhuǎn)化方法設(shè)計(jì)為用于在再生期間或者在之后的生產(chǎn)中利用例如用兩個(gè)獨(dú)立的T-DNA構(gòu)建體進(jìn)^f亍共轉(zhuǎn)化或通過(guò)特異性重組酶進(jìn)行選擇基因的位點(diǎn)特異性切除來(lái)選擇性去除選擇基因。淀粉加工第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽可以用于液化淀粉的方法中，其中在水介質(zhì)中用所述雜合酶處理糊化或顆粒狀淀粉底物。第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽也可以用于液化淀粉底物的糖化方法中。優(yōu)選的用途是在發(fā)酵方法中，在該方法中淀粉底物在第一個(gè)、第二個(gè)和/或第三個(gè)方面的多肽的存在下液化和/或糖化以生產(chǎn)適于由發(fā)酵生物優(yōu)選酵母轉(zhuǎn)化為發(fā)酵產(chǎn)物的葡萄糖和/或麥芽糖。這些發(fā)酵方法包括生產(chǎn)燃料用乙醇或飲用乙醇(portablealcohol)的方法、生產(chǎn)飲料的方法、生產(chǎn)所需有機(jī)化合物的方法，如檸檬酸、衣康酸、乳酸、葡糖酸、葡糖酸鈉、葡糖酸4丐、葡糖酸鉀、葡糖酸A內(nèi)酯、或異抗壞血酸鈉；酮類；氨基酸，如谷氨酸(谷氨酸單鈉(sodiummonoglutaminate)),還有難以用合成方法生產(chǎn)的更多復(fù)雜化合物如抗生素，如青霉素、四環(huán)素；酶；維生素，如核黃素、B12、(3-胡蘿卜素；激素。所要加工的淀粉可以是高度精制的淀粉品質(zhì)，優(yōu)選至少90%、至少95%、至少97%或至少99.5%純的，或者其可以是更粗的包含研磨的整谷粒的含淀粉材料，其包括非淀粉部分如胚芽殘?jiān)屠w維。原材料如完整谷粒被研磨以打開(kāi)組織，從而能進(jìn)一步加工。根據(jù)本發(fā)明兩種研磨法是優(yōu)選的濕磨和干磨。也可以應(yīng)用玉米渣，優(yōu)選經(jīng)研磨的玉米渣。除了淀粉之外，干燥的經(jīng)研磨谷粒還將包含大量的非淀粉碳水化合物。當(dāng)通過(guò)噴射蒸煮(jetcooking)加工這種非均質(zhì)材料時(shí)，通常只達(dá)到淀粉的部分糊化。由于本發(fā)明的多肽具有針對(duì)非糊化淀粉的高活性，因而有利地將所述多肽應(yīng)用于包括對(duì)經(jīng)過(guò)噴射蒸煮的干燥和經(jīng)研磨淀粉進(jìn)行液化和/或糖化的方法中。此外，由于第一個(gè)方面的多肽優(yōu)越的水解活性，糖化步驟期間對(duì)葡糖淀粉酶的需求大大減小。這允許在極低的葡糖淀粉酶活性水平下進(jìn)行糖化，并且優(yōu)選葡糖淀粉酶活性缺失或者如果存在的話，則以不超過(guò)或者甚至少于0.5AGU/gDS、更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.4AGU/gDS、更加優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.3AGU/gDS、最優(yōu)選少于0.1AGU/gDS、如不超過(guò)或者甚至少于0.05AGU/gDS淀粉底物的量存在。以mg酶蛋白表示的具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以不超過(guò)或者甚至少于0.5mgEP/gDS、更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.4mgEP/gDS、更加優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.3mgEP/gDS、最優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.1mgEP/gDS，例如不超過(guò)或者甚至少于0.05mgEP/gDS或者不超過(guò)或者甚至少于0.02mgEP/gDS淀粉底物的量存在。所述葡糖淀粉酶可以優(yōu)選來(lái)源于曲霉屬的菌種、籃狀菌屬的菌種、厚孢孔菌屬的菌種或栓菌屬的菌種中的菌抹，更優(yōu)選源于黑曲霉、埃默森籃狀菌(ra/araw7cesewewowY)、瓣環(huán)對(duì)全菌或紙質(zhì)大紋飾孢同樣由于第一個(gè)方面的多肽優(yōu)越的水解活性，液化和/或糖化步驟中對(duì)a-淀粉酶的需求大大減小。以mg酶蛋白表示的第一個(gè)方面的多肽可以不超過(guò)或者甚至少于0.5mgEP/gDS、更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.4mgEP/gDS、更加優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.3mgEP/gDS、最優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.1mgEP/gDS，例如不超過(guò)或者甚至少于0.05mgEP/gDS或者不超過(guò)或者甚至少于0.02mgEP/gDS淀粉底物的量配制。第一個(gè)方面的多肽可以以0.05至10.0AFAU/gDS、優(yōu)選0.1至5.0AFAU/gDS、更優(yōu)選0.25至2.5AFAU/gDS淀粉的量配制。所述方法可以包括a)將淀粉底物與包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，例如，第一個(gè)方面的多肽接觸；b)于足以將至少90。/。、或至少92。/。、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%w/w的所述淀粉底物轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵糖的溫度和時(shí)間內(nèi)，將所述淀粉底物與所述多肽一起孵育；c)發(fā)酵生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物，d)任選回收發(fā)酵產(chǎn)物。在處理步驟b)和/或c)期間，具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以0.001至2.0AGU/gDS、0.01至1.5AGU/gDS、0.05至1.0AGU/gDS、0.01至0.5AGU/gDS6勺量存在。優(yōu)選具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以不超過(guò)或者甚至小于0.5AGU/gDS、更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.4AGU/gDS、再優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.3AGU/gDS、最優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.1AGU,如不超過(guò)或者甚至小于0.05AGU/gDS淀粉底物的量存在。以mg酶蛋白表示的具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以不超過(guò)或者甚至少于0.5mgEP/gDS、更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.4mgEP/gDS、更加優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.3mgEP/gDS、最優(yōu)選不超過(guò)或者甚至少于0.1mgEP/gDS，例如不超過(guò)或者甚至少于0.05mgEP/gDS或者不超過(guò)或者甚至少于0.02mgEP/gDS淀粉底物的量存在。在所述方法中步驟a、b、c、和/或d可以單獨(dú)或同時(shí)進(jìn)行。另一方面所述方法可以包括a)將淀粉底物與經(jīng)轉(zhuǎn)化以表達(dá)多肽的酵母細(xì)胞接觸，所述多肽包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊，例如，第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽；b)于足以將至少90%w/w的所述淀粉底物轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵糖的溫度和時(shí)間內(nèi)將所述淀粉底物與所述酵母一起孵育；c)發(fā)酵以生產(chǎn)乙醇；d)任選回收乙醇。步驟a、b、和c可以單獨(dú)或者同時(shí)進(jìn)行。又一方面所述方法包括糊化或顆粒狀淀粉漿的水解，特別是顆粒狀淀粉在低于所述顆粒狀淀粉的起始糊化溫度的溫度下水解為可溶性淀粉水解產(chǎn)物。除了與包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，例如，第一個(gè)方面的多肽接觸之外，所述淀粉還可以與選自下組的酶接觸真菌a-淀粉酶(EC3.2.1.1)、卩-淀粉酶(E.C.3.2丄2)、和葡糖淀粉酶(E.C.3.2丄3)。在實(shí)施方案中可以進(jìn)一步添加細(xì)菌a-淀粉酶或脫支酶，例如異淀粉酶(E.C.3.2.1.68)或支鏈淀粉酶(E.C.3.2.1.41)。在本發(fā)明的上下文中細(xì)菌a-淀粉酶是如WO99/19467中第3頁(yè)第18行至第6頁(yè)第27行所定義的a-淀粉酶。在實(shí)施方案中所述方法在低于起始糊化溫度的溫度下實(shí)施。優(yōu)選實(shí)施所述方法時(shí)的溫度為至少30。C、至少31°C、至少32°C、至少33°C、至少34°C、至少35°C、至少36。C、至少37。C、至少38°C、至少39。C、至少40°C、至少41°C、至少42°C、至少43°C、至少44。C、至少45°C、至少46。C、至少47°C、至少48°C、至少49。C、至少50°C、至少51。C、至少52°C、至少53°C、至少54。C、至少55°C、至少56°C、至少57。C、至少58°C、至少59°C、或優(yōu)選至少60。C。實(shí)施所述方法時(shí)的pH可以在3.0至7.0、優(yōu)選3.5至6.0、或更優(yōu)選4.0-5.0范圍內(nèi)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法包括例如在約32°C，如30到35°C的溫度用例如酵母發(fā)酵以生產(chǎn)乙醇。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法包括例如在30到35°C，例如在約32°C的溫度同時(shí)糖化和發(fā)酵，例如用酵母以生產(chǎn)乙醇，或者用另一種合適的發(fā)酵生物以生產(chǎn)所需的有機(jī)化合物。在上述發(fā)酵方法中，乙醇含量達(dá)到至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11°/。、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%、如至少16%乙醇。用于上述任一方面中的淀粉漿可以具有20-55%的干燥固體顆粒狀淀粉，優(yōu)選25-40%的干燥固體顆粒狀淀粉，更優(yōu)選30-35%的干燥固體顆粒狀淀粉。與包含具有a-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，例如，第一個(gè)方面的多肽接觸后，顆粒狀淀粉的干燥固體的至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或J尤選至少99%一皮轉(zhuǎn)化為可溶性淀粉水解產(chǎn)物。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，將包含具有ct-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，例如，第一個(gè)方面的多肽用于糊化淀粉的液化、糖化方法中，例如但不限于通過(guò)噴射蒸煮進(jìn)行的糊化。所述方法可以包括發(fā)酵以生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物例如乙醇。這種從含淀粉材料通過(guò)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法包括(i)用包含具有(x-淀粉酶活性的催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，例如，第一個(gè)方面的多肽液化所述含淀粉材料；(ii)糖化所獲得的液化醪；(iii)在發(fā)酵生物存在下發(fā)酵步驟(ii)中獲得的材料。任選所述方法進(jìn)一步包括回收乙醇。糖化和發(fā)酵可以作為同時(shí)糖化和發(fā)酵方法(SSF方法)實(shí)施。發(fā)酵期間乙醇含量達(dá)到至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%如至少16%乙醇。特別地，在上述方面的方法中，所要加工的淀粉可以從塊莖、根、莖、豆科植物、谷物或整谷粒獲得。更特別地，顆粒狀淀粉可以從玉米、玉米穗(cobs)、小麥、大麥、黑麥、買羅高梁、西米、木薯、木薯淀粉、高粱、水稻、豌豆、黃豆(bean)、香蕉或馬鈴薯獲得。特別考慮糯型和非糯型玉米和大麥。本發(fā)明還涉及包含第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽的組合物。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中所述組合物包含第一個(gè)方面的多肽，所述多肽選自VOOl、V002、V003、V004、V005、V006、V007、V008、V009、VOIO、VOll、V012、V013、V014、V015、V016、V017、V018、V019、V021、V022、V023、V024、V025、V026、V027、V028、V029、V030、V031、V032、V033、V034、V035、V036、V037、V038、V039、V040、V041、V042、V043、V047、V048、V049、V050、V051、V052、V054、V055、V057、V059、V060、V061、V063、V064、V065、V066、V067、V068和V069的組。所述組合物可以進(jìn)一步包含選自下組的酶真菌a-淀粉酶(EC3.2.1.1)、(3-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)、葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)和支鏈淀粉酶(E.C.3.2.1.41)。所述葡糖淀粉酶可以優(yōu)選源于曲霉屬的菌種的菌抹如黑曲霉、或者源于籃狀菌屬的菌種，特別是源于ra/aram少cey/eyc"tom^的菌林，如美國(guó)專利Re.32,153中公開(kāi)的葡糖淀4分酵、源于7^/oro附y(tǒng)c&yc/m/cw//禾口/或7^/flra附y(tǒng)cay//2er附o/z7es，3口美國(guó)專矛j4,587,215中公開(kāi)的葡糖淀粉酶，以及更優(yōu)選源于埃默森籃狀菌。最優(yōu)選所述葡糖淀粉酶來(lái)源于埃默森籃狀菌菌林CBS793.97和/或具有WO99/28448中如SEQIDNO:7公開(kāi)的序列。更優(yōu)選具有與前述氨基酸序列有至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或者甚至至少95%同源性的氨基酸序列的葡糖淀粉酶。商業(yè)籃狀菌葡糖淀粉酶制品由NovozymesA/S供應(yīng)，稱為SpirizymeFuel。對(duì)于包含第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽和葡糖淀粉酶的組合物，還優(yōu)選具有葡糖淀粉酶活性的源于栓菌屬、優(yōu)選瓣環(huán)栓菌的菌抹的多肽。更優(yōu)選具有葡糖淀粉酶活性并且與美國(guó)專利申請(qǐng)No.60/650,612中SEQIDNO:5的成熟多肽氨基酸1至575的氨基酸有至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或者甚至至少95%同源性的多肽。對(duì)于包含第一個(gè)和/或第二個(gè)方面的多肽和葡糖淀粉酶的組合物，還優(yōu)選具有葡糖淀粉酶活性的源于厚孢孔菌屬、優(yōu)選紙質(zhì)大紋飾孢的菌抹、或源于保藏在DSMZ且給予保藏號(hào)DSM17105的大腸桿菌菌抹的多肽。更優(yōu)選具有葡糖淀粉酶活性并且與美國(guó)專利申請(qǐng)No.60/650,612中SEQIDNO:2的成熟多肽氨基酸1至556的氨基酸有至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或者甚至至少95%同源性的多肽。上述組合物可用于液化和/或糖化糊化的或顆粒狀的淀粉，以及部分糊化的淀粉。部分糊化的淀粉指在某種程度上被糊化的淀粉，即其中部分淀粉已不可逆地膨脹和糊化而部分淀粉仍然以顆粒狀狀態(tài)存在。上述組合物可以優(yōu)選包含以0.01至10AFAU/gDS、優(yōu)選0.1至5AFAU/gDS、更優(yōu)選0.5至3AFAU/gDS、最優(yōu)選0.3至2AFAU/gDS的量存在的酸性a-淀4分酶?？梢詫⑺鼋M合物應(yīng)用于上述任一淀粉加工方法中。材料和方法酸性a-淀粉酶活性的測(cè)定當(dāng)根據(jù)本發(fā)明使用時(shí)，可以以AFAU(酸性真菌01-淀粉酶單位)測(cè)量<壬<可酸性a-淀粉酶的活性，它是相對(duì)于酶標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定的。1AFAU定義為在下面4是到的標(biāo)準(zhǔn)條件下每小時(shí)降解5.260mg淀粉干物質(zhì)的酶的量。酸性a-淀粉酶，即酸穩(wěn)定的a-淀粉酶，一種內(nèi)切-a-淀粉酶(l,4-a-D-葡聚糖-葡萄糖苷基-水角年酶(1，4-alpha畫(huà)D-glucan-gl濃no國(guó)hydrolase)，E.C.3.2丄1),在淀粉分子的內(nèi)部區(qū)域水解a-l,4-糖苷鍵以形成具有不同鏈長(zhǎng)的糊精和寡糖。與碘形成的顏色的強(qiáng)度與淀粉的濃度成正比。淀粉酶活性在指定的分析條件下以淀粉濃度的降低的反向比色法(reversecolorimetry)，進(jìn)4亍測(cè)定。淀粉+碘藍(lán)/紫ALPHA-淀粉糊精t=23秒去色寡糖標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件底物可溶性淀粉，約0.17g/L緩沖液檸檬酸鹽，約0.03M碘(I2):0.03g/LCaCl2:1.85mMpH:2.50±0.05孵育溫度40。C反應(yīng)時(shí)間23秒波長(zhǎng)590nm酶濃度0.025AFAU/mL酶工作范圍0.01-0.04AFAU/mL更詳細(xì)地描述該分析方法的小冊(cè)子EB-SM-0259.02/01可向NovozymesA/S,丹麥索取，此處將該小冊(cè)子加入作為參考。葡糖淀粉酶活性可以以淀粉葡萄糖苷酶單位(AGU)測(cè)量葡糖淀粉酶活性。AGU定義為在37。C、pH4.3、底物麥芽糖23.2mM、緩沖液醋酸鹽0.1M、反應(yīng)時(shí)間5分鐘的標(biāo)準(zhǔn)條件下每分鐘水解1微摩爾麥芽糖的酶的量?？梢允褂米詣?dòng)分析儀系統(tǒng)。向葡萄糖脫氫酶試劑中添加變旋酶，以使所存在的任何a-D-葡萄糖都轉(zhuǎn)化為p-D-葡萄糖。在上述反應(yīng)中葡萄糖脫氫酶特異性地與(3-D-葡萄糖反應(yīng)形成NADH，利用光度計(jì)在340nm處測(cè)量NADH，作為初始葡萄糖濃度的量度。AMG孵育底物麥芽糖23.2mM緩沖液醋酸鹽0.1MPh:4.30±0.05孵育溫度37。C±1反應(yīng)時(shí)間5分鐘酶工作范圍0.5-4.0AGU/mL顏色反應(yīng)GlucDH:430U/L變旋酶9U/LNAD:0.21mM緩沖液磷酸鹽0.12M;0.15MNaClpH:7,60±0.05孵育溫度37。C±1反應(yīng)時(shí)間5分鐘波長(zhǎng)340nm更詳細(xì)地描述該分析方法的小冊(cè)子(EB-SM-0131.02/01)可向NovozymesA/S，丹麥索取，此處將該小冊(cè)子加入作為參考。菌林和質(zhì)粒大腸桿菌DH12S(可由GibcoBRL獲得)用于酵母質(zhì)粒拯救(rescue)。pLAl是處于TPI啟動(dòng)子控制之下的釀酒酵母和大腸桿菌穿梭載體，WO01/92502中描述了其構(gòu)建自pJC039。其中已經(jīng)插入了酸性黑曲霉a-淀粉酶信號(hào)序列、酸性黑曲霉a-淀粉酶基因(SEQIDNO:l)以及包含接頭(SEQIDNO:67)和CBM(SEQIDNO:91)的部分羅耳阿太菌葡糖淀粉酶基因序列。SEQIDNO:103中給出了所述質(zhì)粒的完整序列。a-淀粉酶基因?yàn)閺?029到6468的序列，接頭為從6469到6501的序列，CBM為從6502到6795的序列。所述載體用于a-淀粉酶CBM雜合體構(gòu)建。酉良酒酵母YNG318:MATaDpep4[cir+]ura3陽(yáng)52，leu2-D2，his4-539被用于oc-淀粉酶變體表達(dá)。對(duì)其的描述見(jiàn)J.Biol.Chem.272(15),pp9720-9727,1997。培養(yǎng)基和底物10X基礎(chǔ)溶液不含氨基酸的酵母氮基(DIFCO)66.8g/1、琥珀酸酯(鹽)100g/1、NaOH60g/1。SC-葡萄糖20%葡萄糖(即,2%的終濃度=2g/100ml))100ml/l、5%蘇氨酸4ml/1、1%色氨酸10ml/1、20。/。酪蛋白氨基酸25m1/1、10X基礎(chǔ)溶液100m1/1。溶液用孔徑0.20微米的過(guò)濾器滅菌。瓊脂和1120(約761ml)—起高壓滅菌，并將單獨(dú)滅菌的sc-葡萄糖溶液添加到所述瓊脂溶液。YPD:Bacto蛋白胨20g/1、酵母提取物10g/1、20%葡萄糖IOOm1/1。PEG/LiAc溶液40%PEG400050ml、5M乙酸鋰lml。DNA操作除非另有說(shuō)明，DNA操作和轉(zhuǎn)化采用Sambrooketal.(1989)MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLab.,ColdSpringHarbor,NY;Ausubel,F.M.etal.(eds.)"CurrentProtocolsinMolecularBiology",JohnWileyandSons,1995;Harwood，C.R.andCutting,S.M.(eds.)中所述的分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。酵母轉(zhuǎn)化用乙酸鋰法實(shí)施酵母轉(zhuǎn)化。將0.5pL的載體(通過(guò)限制性核酸內(nèi)切酶消化的)與lfiL的PCR片段混合。在冰上解凍YNG318感受態(tài)細(xì)胞。在12ml聚丙烯試管(Falcon2059)中混合IOOjiL的纟田胞、DNA混合物和IOiiL的載體DNA(Clontech)。添加0.6mlPEG/LiAc溶液并輕輕混合。30。C、200rpm孵育30min。42。C孵育30min(熱休克)。轉(zhuǎn)移到eppendorf管并離心5秒。去除上清并溶解在3mlYPD中。200rpm30。C孵育所述細(xì)胞懸液45min。將所述懸浮液倒入SC-葡萄糖平》反并于30。C孵育3天以產(chǎn)生菌落。用NucleicAcidsResearch,Vol.20，No.14(1992)3790中描述的RobzykandKassir，s法提耳又酵母總DNA。DNA測(cè)序通過(guò)電穿孔(BIO-RADGene脈沖發(fā)生器)實(shí)施大腸桿菌轉(zhuǎn)化，用于DNA測(cè)序。用堿法(分子克隆，ColdSpringHarbor)或者用QiagenPlasmid試劑盒制備DNA質(zhì)粒。用Qiagen凝膠提取試劑盒從瓊脂糖凝膠回收DNA片段。用PTC-200DNAEngine實(shí)施PCR。ABIPRISM310GeneticAnalyzer用于所有DNA序列的測(cè)定。表2所用催化結(jié)構(gòu)域(CD)、接頭、碳水化合物結(jié)合模塊(CBM)、質(zhì)粒、和引物的氨基酸(AA)和DNA序列編號(hào)。AA指a-淀粉酶，GA指葡糖淀粉酶.<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>實(shí)施例1:編碼微小根毛霉(//i/w附M(w/;ww7/附)a淀粉酶和羅耳阿太菌0^/^"^//^7)葡糖淀粉酶CBM的核酸序列V019的構(gòu)建用合適的限制性內(nèi)切核酸酶消化載體pLAl,以切掉編碼黑曲霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域的區(qū)域。用引物P001(SEQIDNO:104)和P002(SEQIDNO:105)PCR擴(kuò)增微小根毛霉a-淀粉酶基因，擴(kuò)增的片段如SEQIDNO:19所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>用Qiagen凝膠提取試劑盒從瓊脂糖凝膠回收DNA片段。所得的純化片段與載體消化物一起混合。將混合的溶液導(dǎo)入到釀酒酵母中，以通過(guò)體內(nèi)重組構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pLAV019。實(shí)施例2:編碼巨大多孔菌(Meripilusgiganteus)a淀粉酶和羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM的核酸序列V022的構(gòu)建用引物P003(SEQIDNO:106)和P004(SEQIDNO:107)PCR擴(kuò)增巨大多孔菌a-淀粉酶基因。用Qiagen凝膠提取試劑盒從瓊脂糖凝膠回收DNA片段。將所得的純化片段和用合適的限制性內(nèi)切核酸酶消化而切掉了編碼黑曲霉ot-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域的載體pLAl混合。將混合的溶液導(dǎo)入到釀酒酵母中，以通過(guò)體內(nèi)重組構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pLAV022。實(shí)施例3.在米曲霉中表達(dá)帶有CBM的淀粉酶實(shí)施例1和2中描述的包含帶有CBM的a淀粉酶基因的構(gòu)建體分別用于構(gòu)建表達(dá)載體pAspV019和pAspV022。pAspV019和pAspV022這兩個(gè)質(zhì)粒由表達(dá)盒組成，所述表達(dá)盒基于黑曲霉中性淀粉酶II啟動(dòng)子和黑曲霉淀粉糖苷酶(amyloglycosidase)終止子(Tamg),所述中性淀粉酶II啟動(dòng)子融合于構(gòu)巢曲霉磷酸丙糖異構(gòu)酶非翻譯的前導(dǎo)序列(Pna2/tpi)。所述質(zhì)粒上還存在來(lái)自構(gòu)巢曲霉的曲霉屬選擇性標(biāo)記am必，其允許在作為唯一氮源的乙酰胺上生長(zhǎng)。如Lassenetal.(2001),AppliedandEnvironmentalMicorbiology，67,4701-4707中所述將表達(dá)質(zhì)粒pAspV019和pAspV022轉(zhuǎn)化到曲霉中。將表達(dá)V019和V022的轉(zhuǎn)化體分離、純化并培養(yǎng)于搖瓶中。用親合純化法(Biochem.J.(2003)372,卯5-910)純化由米曲霉發(fā)酵獲得的液體培養(yǎng)基，所述米曲霉表達(dá)帶有CBM的淀粉酶。實(shí)施例4.帶有CBM的淀粉酶生產(chǎn)了本發(fā)明的多肽；將選擇的催化結(jié)構(gòu)域融合于羅耳阿太菌葡糖淀粉酶的接頭-CBM區(qū)域，將選擇的CBM區(qū)域附著于C003米曲霉催化結(jié)構(gòu)域(FungamylPE變體)。因?yàn)閬?lái)自Trichophaeasaccataa-淀粉酶的CBM+接頭位于N-末端，所以將其插在SP288信號(hào)和米曲霉催化結(jié)構(gòu)域之間。其它的CBM都置于C-末端。變體V008既包含置于C末端的羅耳阿太菌葡糖淀粉酶接頭和CBM區(qū)域，也包含置于N-末端的來(lái)自Trichophaeasaccataa-淀粉酶的接頭+CBM。米曲霉cc-淀粉酶的CBM變體和羅耳阿太菌葡糖淀粉酶CBM的催化結(jié)構(gòu)域變體分別列于表3和4。本發(fā)明生產(chǎn)的其它多肽列于表5和6。.所述變體對(duì)于淀粉，尤其是對(duì)于顆粒狀淀粉具有改善的活性。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>200580048598.0說(shuō)明書(shū)第66/72頁(yè)表5具有帶接頭的其它催化結(jié)構(gòu)域/CBM的多肽。V069中CBM和接頭具有不同起源。<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>表6帶有微小根毛霉a-淀粉酶催化結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:20)的多肽，并且CBM和接頭來(lái)自<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>實(shí)施例5在小規(guī)模發(fā)酵中用不同劑量的埃默森籃狀菌(ra/aram;/cMemeraom'z')葡糖淀粉酶評(píng)估多肽V019的性能。將淀粉底物，583.3g的粉碎玉米添加入912.2g自來(lái)水中。向該混合物中補(bǔ)充4.5ml的1g/L青霉素溶液。用40%H2S04將該漿液的pH調(diào)至5.0。一式兩份測(cè)定DS水平為34.2士0.8%。將大約5g這種漿液添加到20ml管形瓶中。每個(gè)管形瓶按劑量加入適量的酶，之后添加200pL酵母繁殖物/5g漿液。實(shí)際劑量以每個(gè)管形瓶中玉米漿液的精確重量為基礎(chǔ)。管形瓶于32。C保溫。發(fā)酵后隨時(shí)間推移測(cè)量重量損失。70小時(shí)時(shí)終止發(fā)酵，并準(zhǔn)備HPLC分析。HPLC的準(zhǔn)備工作包括通過(guò)添加50pL的40。/。H2S04終止反應(yīng)、離心、和通過(guò)0.45微米濾器過(guò)濾。等待HPLC分析的樣品于4。C存儲(chǔ)。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>實(shí)施例6通過(guò)將用熱穩(wěn)定的細(xì)菌a-淀粉酶(LIQUOZYMEX,NovozymesA/S)液化的玉米淀粉制備的DE11麥芽糖糊精溶解在Milli-QTM水中，并將千燥固體物質(zhì)含量(DS)調(diào)節(jié)到30%,而制備用于糖化的底物。在60。C、初始pH4.3、持續(xù)攪動(dòng)的條件下，在密封的2ml玻璃管形瓶中進(jìn)行糖化試驗(yàn)。在利用0.35AGU/gDS埃默森籃狀菌葡糖淀粉酶和0.04AFAU/gDS黑曲霉酸性a-淀粉酶的標(biāo)準(zhǔn)處理之后，馬上施加兩種不同劑量的CBMa-淀粉酶V019或V022。于規(guī)定的時(shí)間間隔取樣，并在沸水中加熱15分鐘，以將酶滅活。冷卻后，在HPLC分析前將樣品稀釋到5%DS并過(guò)濾(SartoriusMINISARTNML0.2微米)。以下表8中提供了以總可溶性碳水化合物的百分?jǐn)?shù)表示的葡萄糖水平。表8____所有都利用0.35AGU/gDS埃默森籃狀菌葡糖淀粉酶和0.04AFAU/gDS黑曲霉酸性a-淀粉酶處理。緊接著，依照所述表格，定量加入酸性a-淀粉酶變體V019和V022。<table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>實(shí)施例7在小規(guī)模發(fā)酵中評(píng)估生淀粉SSF處理?；旌?10g細(xì)磨玉米、5卯ml自來(lái)水、3.0ml1g/L青霉素和1g尿素，獲得35%DS的顆粒狀淀;除漿。用5NNaOH將漿液的pH調(diào)至4.5，將5g樣品分配到20ml管形瓶中。定量加入適量的酶，向管形瓶中接種酵母。管形瓶于32。C保溫。每種處理進(jìn)行一式九份發(fā)酵。選擇一式三份來(lái)用作24小時(shí)、48小時(shí)和70小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的分析。于24、48和70小時(shí)時(shí)渦旋管形瓶。時(shí)間點(diǎn)分析包括對(duì)管形瓶稱重和預(yù)備用于HPLC的樣品。為進(jìn)行HPLC,通過(guò)添加50jliL40%H2S04終止反應(yīng)、離心、并通過(guò)0.45pm濾器過(guò)濾。將等待HPLC分析的樣品于4。C存儲(chǔ)。實(shí)施例7a酶和所使用的量如下表所示。A-AMG為黑曲霉葡糖淀粉酶組合物。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>在1.7-85.5AGU/AFAU的黑曲霉AMG與V019的比率范圍內(nèi)，觀測(cè)到70小時(shí)發(fā)酵后很好的乙醇產(chǎn)率，顯示黑曲霉AMG與V019的混合物在廣泛的活性比率范圍內(nèi)有優(yōu)異的性能。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>實(shí)施例7b酶和所使用的量如下表所示。A-AMG為埃默森籃狀菌葡糖淀粉酶組合表11<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>在10-216AGU/AFAU的埃默森籃狀菌AMG與V019比率范圍內(nèi)，觀測(cè)到70小時(shí)發(fā)酵后很好的乙醇產(chǎn)量，顯示了埃默森籃狀菌AMG與V019的混合物的廣泛的活性比率范圍。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage79</column></row><table>生物材料保藏下述生物材料已根據(jù)布達(dá)佩斯條約保藏在DeutscheSammmlungvonMicroorganismenundZellkulturenGmbH(DSMZ),MascheroderWeglb,D-38124BraunschweigDE，并給予了以下保藏號(hào)保藏大腸桿菌NN049798大腸桿菌NN049797保藏號(hào)保藏日期2005年2月2曰2005年2月2曰DSM17106DSM17105所述菌株已在保證專利商標(biāo)委員依據(jù)37C.RR.§1.14和35U.S.C.§122確定其有資格的人能夠在本專利申請(qǐng)懸而未決期間得到該培養(yǎng)物的條件下被保藏。所述保藏物為所保藏菌抹的基本上純的培養(yǎng)物。在提交了所述申請(qǐng)的對(duì)應(yīng)申請(qǐng)、或其子申請(qǐng)的外國(guó)，可以如這些國(guó)家的專利法所要求的獲得所述保藏物。然而，應(yīng)當(dāng)明白，可以獲得該保藏物，并不構(gòu)成在侵犯由政府行為授予的專利權(quán)過(guò)程中實(shí)施本發(fā)明的許可。權(quán)利要求1.一種多肽，其包含含有催化模塊的第一氨基酸序列和含有碳水化合物結(jié)合模塊的第二氨基酸序列，其中所述催化模塊具有α-淀粉酶活性，其中所述第二氨基酸序列與選自下組的任一氨基酸序列具有至少60％的同源性SEQIDNO52、SEQIDNO76、SEQIDNO78、SEQIDNO80、SEQIDNO82、SEQIDNO84、SEQIDNO86、SEQIDNO88、SEQIDNO90、SEQIDNO92、SEQIDNO94、SEQIDNO96、SEQIDNO98、SEQIDNO109、SEQIDNO137、SEQIDNO139、SEQIDNO141和SEQIDNO143。2.權(quán)利要求1的多肽，其中所述第一氨基酸序列與選自下組的任一氨基酸序列具有至少60。/。的同源性SEQIDNO:02、SEQIDNO:04、SEQIDNO:06、SEQIDNO:08、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO:32、SEQIDNO:34、SEQIDNO:36、SEQIDNO:38、SEQIDNO:40、SEQIDNO:42、SEQIDNO:44、SEQIDNO:111、SEQIDNO:113、SEQIDNO:115、SEQIDNO:117、SEQIDNO:119、SEQIDNO:121、SEQIDNO:123、SEQIDNO:125、SEQIDNO:127、SEQIDNO:129、SEQIDNO:131、SEQIDNO:133、SEQIDNO:135和SEQIDNO:155。3.權(quán)利要求1或2的多肽，其中在所述第一和所述第二氨基酸序列之間的位置存在接頭序列，所述接頭序列與選自下組的任一氨基酸序列具有至少60%的同源性SEQIDNO:46、SEQIDNO:48、SEQIDNO:50、SEQIDNO:54、SEQIDNO:56、SEQIDNO:58、SEQIDNO:60、SEQIDNO:62、SEQIDNO:64、SEQIDNO:66、SEQIDNO:68、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:74、SEQIDNO:145、SEQIDNO:147、SEQIDNO:149、SEQIDNO:151和SEQIDNO:52。4.權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的多肽，其中所述第一氨基酸序列與SEQIDNO:4所示氨基酸序列具有至少60%的同源性，并且其中所述第一氨基酸序列包含選自下組的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代A128P、K138V、S141N、Q143A、D144S、Y155W、E156D、D157N、N244E、M246L、G446D、D448S和N450D。5.權(quán)利要求4的多肽，其中所述多肽具有SEQIDNO:100所示的氨基酸序列或者與SEQIDNO:1OO所示氨基酸序列具有至少60%同源性的氨基酸序列。6.權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽具有SEQIDNO:101所示的氨基酸序列或者與SEQIDNO:101所示氨基酸序列具有至少60%同源性的氨基酸序列。7.權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽具有SEQIDNO:102所示的氨基酸序列或者與SEQIDNO:102所示氨基酸序列具有至少50%同源性的氨基酸序列。8.權(quán)利要求l-7任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽是雜合體。9.具有(x-淀粉酶活性的多肽，選自下組(a)—種多肽，其具有與成熟多肽的氨基酸有至少75%同源性的氨基酸序列，所述成熟多肽的氨基酸選自下組SEQIDNO:14中的氨基酸1-441、SEQIDNO:18中的氨基酸1-471、SEQIDNO:20中的氨基酸1-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸1-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸1-477、SEQIDNO:42中的氨基酸1-449、SEQIDNO:115中的氨基酸l-442、SEQIDNO:117中的氨基酸l-441、SEQIDNO:125中的氨基酸1-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-626、SEQIDNO:161中的氨基酸24-630、SEQIDNO:163中的氨基酸27-602、SEQIDNO:165中的氨基酸21-643、SEQIDNO:167中的氨基酸29-566、SEQIDNO:169中的氨基酸22-613、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO:173中的氨基酸21-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-773、SEQIDNO:177中的氨基酸22-586、SEQIDNO:179中的氨基酸20-582。(b)由核苷酸序列編碼的多肽，所述核苷酸序列(i)至少在低嚴(yán)緊條件下與SEQIDNO:13中的核苷酸1-1326、SEQIDNO:17中的核苷酸1-1413、SEQIDNO:19中的核香酸1-1350、SEQIDNO:21中的核苷酸1-1338、SEQIDNO:25中的核苷酸1-1494、SEQIDNO:27中的核香酸52-1539、SEQIDNO:29中的核香酸1-1521、SEQIDNO:31中的核香酸1-1443、SEQIDNO:33中的核苦酸1-1485、SEQIDNO:37中的核苷酸1-1431、SEQIDNO:41中的核苦酸1-1347、SEQIDNO:114中的核苷酸1-1326、SEQIDNO:116中的核苦酸1-1323、SEQIDNO:124中的核苦酸1-1431、SEQIDNO:130中的核苦酸1-1338、SEQIDNO:156中的核苦酸121-1443、SEQIDNO:158中的核芬酸64-1878、SEQIDNO:160中的核芬酸70-1890、SEQIDNO:162中的核苷酸79-1806、SEQIDNO:164中的核芬酸61-1929、SEQIDNO:166中的核苦酸85-1701、SEQIDNO:168中的核苦酸64-1842、SEQIDNO:170中的核苦酸61-1389、SEQIDNO:172中的核苷酸61-1764、SEQIDNO:174中的核苦酸61-.2322、SEQIDNO:176中的核苷酸64-1761、SEQIDNO:178中的核芬酸58:-1749雜交，或者(ii)至少在中等嚴(yán)緊條件下與包含于SEQIDNO:13中核苦酸1-1326、SEQIDNO:17中核普酸1-1413、SEQIDNO:19中核苦酸1-1350、SEQIDNO:21中核苦酸1-1338、SEQIDNO:25中核苷酸1-1494、SEQIDNO:27中核苷酸52-1539、SEQIDNO:29中核苷酸1-1521、SEQIDNO:31中核苦酸1-1443、SEQIDNO:33中核苷酸1-1485、SEQIDNO:37中核香酸1-1431、SEQIDNO:41中核苷酸1-1347、SEQIDNO:114中核苷酸1-1326、SEQIDNO:l16中核苷酸1-1323、SEQIDNO:124中核苷酸1-1431、SEQIDNO:130中核苦酸1-1338、SEQIDNO:156中核香酸121,1443、SEQIDNO:158中核苷酸64-1878、SEQIDNO:160中核苦酸70-1890、SEQIDNO:162中核苷酸79-1806、SEQIDNO:164中核苷酸61-1929、SEQIDNO:166中核芬酸85-1701、SEQIDNO:168中核苷酸64-1842、SEQIDNO:170中核苷酸61-1389、SEQIDNO:172中核芬酸61-1764、SEQIDNO:174中核芬酸61-2322、SEQIDNO:176中核苷酸64-1761、SEQIDNO:178中核苷酸58-1749所示多核苷酸中的cDNA序列雜交，或者(iii)，(i)或(ii)的互補(bǔ)鏈；和(c)一種變體，其在選自下組的氨基酸序列中包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸的保守性取代、缺失、和/或插入SEQIDNO:14中的氨基酸1-441、SEQIDNO:18中的氨基酸1-471、SEQIDNO:20中的氨基酸1-450、SEQIDNO:22中的氨基酸1-445、SEQIDNO:26中的氨基酸1-498、SEQIDNO:28中的氨基酸18-513、SEQIDNO:30中的氨基酸1-507、SEQIDNO:32中的氨基酸1-481、SEQIDNO:34中的氨基酸1-495、SEQIDNO:38中的氨基酸1-477、SEQIDNO:42中的氨基酸1-449、SEQIDNO:115中的氨基酸1-442、SEQIDNO:117中的氨基酸1-441、SEQIDNO:125中的氨基酸1-477、SEQIDNO:131中的氨基酸1-446、SEQIDNO:157中的氨基酸41-481、SEQIDNO:159中的氨基酸22-626、SEQIDNO:161中的氨基酸24-630、SEQIDNO:163中的氨基酸27-602、SEQIDNO:165中的氨基酸21-643、SEQIDNO:167中的氨基酸29-566、SEQIDNO:169中的氨基酸22-613、SEQIDNO:171中的氨基酸21-463、SEQIDNO:173中的氨基酸21-587、SEQIDNO:175中的氨基酸30-773、SEQIDNO:177中的氨基酸22-586和SEQIDNO:179中的氨基酸20-582。10.具有碳水化合物結(jié)合親合力的多肽，所述多肽選自下組(a)包含與選自下組的序列具有至少60%同源性的氨基酸序列的多肽SEQIDNO:159的氨基酸529-626、SEQIDNO:161的氨基酸533-630、SEQIDNO:163的氨基酸508-602、SEQIDNO:165的氨基酸540-643、SEQIDNO:167的氨基酸502-566、SEQIDNO:169的氨基酸513-613、SEQIDNO:173的492-587、SEQIDNO:175的氨基酸30-287、SEQIDNO:177的氨基酸487-586、和SEQIDNO:179的氨基酸482-582;(b)由核苷酸序列編碼的多肽，所述核苷酸序列在低嚴(yán)緊條件下與多核苷酸探針雜交，所述多核苷酸探針選自下組序列的互補(bǔ)鏈SEQIDNO:158中的核苦酸1585-1878、SEQIDNO:160中的核苷酸1597-1890、SEQIDNO:162中的核苷酸1522-1806、SEQIDNO:164中的核苷酸1618-1929、SEQIDNO:166中的核苷酸1504-1701、SEQIDNO:168中的核苷酸1537-1842、SEQIDNO:172中的核苷酸1474-1764、SEQIDNO:174中的核苦酸61-861、SEQIDNO:176中的核苷酸1459-1761、和SEQIDNO:178中的核苦酸1444-1749;(c)(a)或(b)的具有碳水化合物結(jié)合親合力的片段。11.權(quán)利要求10的多肽，其中所述碳水化合物結(jié)合親合力是淀粉結(jié)合親合力。12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽用于液化的用途。13.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽用于糖化的用途。14.根據(jù)權(quán)利要求1-1l任一項(xiàng)的多肽用于包括發(fā)酵的方法中的用途。15.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽在淀粉轉(zhuǎn)化方法中的用途。16.根據(jù)權(quán)利要求1-1l任一項(xiàng)的多肽在生產(chǎn)寡糖的方法中的用途。17.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽在生產(chǎn)麥芽糖糊精或葡萄糖漿的方法中的用途。18.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽在生產(chǎn)燃料或飲用乙醇的方法中的用途。19.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽在生產(chǎn)飲料的方法中的用途。20.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽在用于生產(chǎn)有機(jī)化合物的發(fā)酵方法中的用途，所述有機(jī)化合物例如檸檬酸、抗壞血酸、賴氨酸、谷氨酸。21.包含根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的多肽的組合物。22.糖化淀粉的方法，其中用根據(jù)權(quán)利要求l-ll任一項(xiàng)的多肽處理淀粉。23.根據(jù)權(quán)利要求22的方法，包括將淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)楹杏倚呛?或麥芽糖的糖漿。24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的方法，其中所述淀粉是糊化的或顆粒狀的淀粉。25.根據(jù)權(quán)利要求22-24任一項(xiàng)的方法，其中將糖化的淀粉與發(fā)酵生物接觸以生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物。26.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中所述發(fā)酵生物是酵母，且發(fā)酵產(chǎn)物是乙醇。27.—種方法，包括(a)將淀粉與多肽接觸，所述多肽包含催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性；(b)將所述淀粉與所述多肽一起保溫；(c)發(fā)酵，以生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物，(d)任選回收所述發(fā)酵產(chǎn)物，其中具有葡糖淀粉酶活性的酶或者缺失，或者以不超過(guò)或者甚至小于0.5AGU/gDS的量存在，更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.4AGU/gDS淀粉底物，甚至更優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.3AGU/gDS淀粉底物，以及最優(yōu)選不超過(guò)或者甚至小于0.1AGU/gDS淀粉底物，例如不超過(guò)或者甚至小于0.05AGU/gDS淀粉底物，并且其中步驟a、b、c、和/或d可以單獨(dú)或者同時(shí)進(jìn)行。28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述多肽是根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的多肽。29.—種方法，包括(a)將淀粉底物與酵母細(xì)胞接觸，所述酵母細(xì)胞被轉(zhuǎn)化以表達(dá)包含催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊的多肽，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性；(b)將所述淀粉底物與所述酵母一起保存；(c)發(fā)酵以生產(chǎn)乙醇；(d)任選回收乙醇；其中步驟a、b、和c分開(kāi)或者同時(shí)進(jìn)行。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述酵母細(xì)胞是權(quán)利要求43的酵母細(xì)胞。31.通過(guò)發(fā)酵由含淀粉的材料生產(chǎn)乙醇的方法，所述方法包括(i)用多肽液化所述含淀粉的材料，所述多肽包含催化模塊和碳水化合物結(jié)合模塊，所述催化模塊具有a-淀粉酶活性；(ii)糖化所獲得的液化醪；(iii)在發(fā)酵生物存在下發(fā)酵步驟(ii)中獲得的材料。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述多肽是根據(jù)權(quán)利要求l-ll任一項(xiàng)的多肽。33.根據(jù)權(quán)利要求31或32的方法，進(jìn)一步包括回收乙醇。34.根據(jù)權(quán)利要求31-33任一項(xiàng)的方法，其中所述糖化和發(fā)酵以同時(shí)的糖化和發(fā)酵方法(SSF方法)實(shí)施。35.根據(jù)權(quán)利要求31-34任一項(xiàng)的方法，其中步驟iii期間乙醇含量達(dá)到至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、例如至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%、例如至少16%乙醇。36.根據(jù)權(quán)利要求31-35任一項(xiàng)的方法，其中所述酸性a-淀粉酶以0.01至10AFAU/gDS、優(yōu)選0.1至5AFAU/gDS、尤其是0.3至2AFAU/gDS的量存在。37.根據(jù)權(quán)利要求3l-36任一項(xiàng)的方法，其中所述酸性a-淀粉酶和葡糖淀粉酶以0.1至10AFAU/AGU、優(yōu)選0.30至5AFAU/AGU、尤其是0.5至3AFAU/AGU的比例添加。38.編碼根據(jù)權(quán)利要求1-1l任一項(xiàng)的多肽的DNA序列。39.包含根據(jù)權(quán)利要求38的DNA序列的DNA構(gòu)建體。40.攜帶根據(jù)權(quán)利要求39的DNA構(gòu)建體的重組表達(dá)載體。41.用根據(jù)權(quán)利要求39的DNA構(gòu)建體或根據(jù)權(quán)利要求40的載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)月包。42.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞，其為微生物，特別是細(xì)菌或真菌細(xì)胞。43.根據(jù)權(quán)利要求41或42的宿主細(xì)胞，其為酵母。44.根據(jù)權(quán)利要求41或42的宿主細(xì)胞，其為來(lái)自曲霉屬的菌抹、來(lái)自籃狀菌屬的菌林、或來(lái)自木霉屬的菌抹，所述來(lái)自曲霉屬的菌抹特別是黑曲霉，所述來(lái)自籃狀菌屬的菌抹特別是埃默森籃狀菌。45.根據(jù)權(quán)利要求41的宿主細(xì)胞，其為植物細(xì)胞。46.包含根據(jù)權(quán)利要求1-1H壬一項(xiàng)的多肽的組合物。47.根據(jù)權(quán)利要求46的組合物，所述組合物進(jìn)一步包含葡糖淀粉酶。48.根據(jù)權(quán)利要求46或47的組合物，其中所述葡糖淀粉酶來(lái)源于籃狀菌屬的菌種、曲霉菌屬的菌種、栓菌屬的菌種或厚孢孔菌屬的菌種中的菌抹。49.根據(jù)權(quán)利要求46-48任一項(xiàng)的組合物，其中所述葡糖淀粉酶來(lái)源于選自下纟且的物種黑曲審、7b/aram^yces/eyce"a/ws、Jla/aro^ycesdM/ww/z.、》矣默森籃狀菌、瓣環(huán)栓菌和紙質(zhì)大紋飾孢。50.根據(jù)權(quán)利要求46-49任一項(xiàng)的組合物用于使糊化、部分糊化的或顆粒狀的淀粉液化和/或糖化的用途。全文摘要本發(fā)明涉及包含碳水化合物結(jié)合模塊氨基酸序列和α-淀粉酶氨基酸序列的多肽，以及這些多肽的應(yīng)用。文檔編號(hào)C12N1/16GK101128580SQ200580048598公開(kāi)日2008年2月20日申請(qǐng)日期2005年12月22日優(yōu)先權(quán)日2004年12月22日發(fā)明者曄劉,利尼·N·安德森,吳文平,埃里克·阿蘭,宇田川裕晃,安德斯·維克索-尼爾森,宋子良,松井知子,段俊欣,福山志朗,薩拉·蘭德維克申請(qǐng)人:諾維信公司;諾維信北美公司