專利名稱：一種檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。
背景技術(shù)：
國內(nèi)檸檬酸生產(chǎn)是以玉米等淀粉類物質(zhì)為原料，在α -淀粉酶的作用下，使淀粉鏈中的α-1，4糖苷鍵被水解。支鏈淀粉的最終產(chǎn)物為葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖和α-極限糊精；直鏈淀粉的最終產(chǎn)物為葡萄糖、少量麥芽糖和麥芽三糖。糖的檢測是控制檸檬酸生產(chǎn)過程的最常見的指標。目前，檸檬酸生產(chǎn)大多以費林法檢測檸檬酸發(fā)酵液中的殘?zhí)?，所述費林法檢測檸檬酸發(fā)酵液中的殘?zhí)侵饕硎堑途厶窃邴}酸或酶的作用下，發(fā)生水解反應(yīng)，生成具有還原性的單糖，所述單糖再用菲林試劑進行滴定，以次甲基藍作為指示劑來檢測糖的含量，但是該方法只能檢測出殘?zhí)强偭浚鵁o法分析出各種糖的具體組分及其含量。 此外，采用離子交換色譜對檸檬酸發(fā)酵清液進行分析，檸檬酸的特征峰出現(xiàn)在單糖和寡糖中間，因此，會影響檢測結(jié)果的準確性，也無法有效分離檸檬酸與糖。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為了克服采用現(xiàn)有技術(shù)對檸檬酸發(fā)酵清液中的糖進行檢測，只能檢測出殘?zhí)强偭浚鵁o法檢測出檸檬酸發(fā)酵清液中的糖的具體種類并無法準確定量各種糖的含量的缺陷，提供一種能夠檢測出檸檬酸發(fā)酵清液中的糖的具體種類并能夠進行準確定量各種糖的含量的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。本發(fā)明提供了一種檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法，所述檸檬酸發(fā)酵清液含有檸檬酸和糖，所述糖含有單糖和/或寡糖，其中，所述方法包括使用色譜柱，所述色譜柱包括串聯(lián)的反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱；在色譜分離條件下，將所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液從反相色譜分離柱的上端引入，依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸，并連續(xù)用淋洗劑洗脫所述反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱，將流出液A從離子排斥色譜柱的下端引出，所述流動相的組成和色譜分離的條件使得糖中的各組分以及檸檬酸先后被分離出來，并經(jīng)色譜分析后得到保留時間和積峰面積，通過與同等條件下得到的標準譜圖對比得到檸檬酸發(fā)酵清液中糖的組成和糖中的各組分含量以及發(fā)酵清液中檸檬酸的含量；所述淋洗劑和流動相的組成相同。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過深入地研究發(fā)現(xiàn)，采用本發(fā)明提供的方法對所述檸檬酸發(fā)酵清液進行分析，將所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液依次通過由反相色譜柱和離子排斥色譜柱的串聯(lián)組成的色譜分離柱，可實現(xiàn)對所述檸檬酸發(fā)酵清液中的糖中的各組分以及檸檬酸發(fā)酵清液中的檸檬酸的有效分離，并經(jīng)過色譜分析后，與同等條件下得到的標準譜圖進行對比，從峰的位置和面積可進一步判斷出檸檬酸發(fā)酵清液中的糖的各組分以及檸檬酸發(fā)酵清液中的檸檬酸的含量，為檸檬酸發(fā)酵工藝的參數(shù)調(diào)整提供數(shù)據(jù)參考，進而可以從根本上降低發(fā)酵液中殘?zhí)堑暮?，提高檸檬酸的產(chǎn)率。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式
部分予以詳細說明。


圖1為根據(jù)實施例1的方法得到的標準色譜圖； 圖2為根據(jù)實施例2的方法得到的標準色譜圖； 圖3為根據(jù)實施例3的方法得到的標準色譜圖； 圖4為根據(jù)實施例4的方法得到的標準色譜圖。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的具體實施方式
進行詳細說明。應(yīng)當理解的是，此處所描述的具體實施方式
僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。根據(jù)本發(fā)明提供的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法，所述檸檬酸發(fā)酵清液含有檸檬酸和糖，所述糖含有單糖和/或寡糖，其中，所述方法包括使用色譜柱，所述色譜柱包括串聯(lián)的反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱；在色譜分離條件下，將所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液從反相色譜分離柱的上端引入，依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸，并連續(xù)用淋洗劑洗脫所述反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱，將流出液A從離子排斥色譜柱的下端引出，所述流動相的組成和色譜分離的條件使得糖中的各組分以及檸檬酸先后被分離出來，并經(jīng)色譜分析后得到保留時間和積峰面積，通過與同等條件下得到的標準譜圖對比得到檸檬酸發(fā)酵清液中糖的組成和糖中的各組分含量以及發(fā)酵清液中檸檬酸的含量；所述淋洗劑和流動相的組成相同。需要說明的是，根據(jù)本發(fā)明的方法對檸檬酸發(fā)酵液中的各組分進行分析，在將檸檬酸發(fā)酵清液進行色譜分離之前或之后，測定標準曲線，與以采用本發(fā)明的方法得到的色譜圖進行對比，所述測定標準曲線的方法為在相應(yīng)的色譜分離條件下，將已知配比的檸檬酸、葡萄糖、果糖、麥芽二糖和麥芽三糖的混合溶液用上述色譜柱進行色譜分離，得到各物質(zhì)的保留時間和峰面積的標準曲線。在該條件下得到的色譜圖與所述標準色譜圖進行對比便可得知未知組成的檸檬酸發(fā)酵清液中的糖的組成和糖中各組分含量以及發(fā)酵清液中檸檬酸的含量。根據(jù)本發(fā)明，所述檸檬酸發(fā)酵清液指在檸檬酸發(fā)酵過程中或發(fā)酵完畢后所得到去除了檸檬酸酸發(fā)酵液中的顆粒雜質(zhì)和沉淀物后(例如菌體、蛋白等)所得的溶液。所述檸檬酸發(fā)酵液可以通過本領(lǐng)域常規(guī)的檸檬酸發(fā)酵方法制得，如黑曲霉發(fā)酵的方法例如，將淀粉質(zhì)原料(如玉米等)粉碎并與淀粉酶混合進行酶解，以酶解產(chǎn)物配置發(fā)酵培養(yǎng)基，并向發(fā)酵培養(yǎng)基中接入黑曲霉菌種，發(fā)酵后得到檸檬酸發(fā)酵液。其中，所述除去檸檬酸酸發(fā)酵液中的顆粒雜質(zhì)和沉淀物的方法可以為現(xiàn)有的各種方法，例如，離心分離、過濾等。通常來說， 在檸檬酸的生產(chǎn)過程中，所得的檸檬酸發(fā)酵清液中含有糖，所述糖含有單糖和/或寡糖，例如，所述單糖通常可以選自葡萄糖和果糖中的一種或多種；所述寡糖通?？梢赃x自麥芽二糖和麥芽三糖中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明，所述反相色譜是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強的溶劑為流動相的一種液相色譜分離模式。目前，反相色譜的固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團，基于樣品中的不同組分與疏水基團之間疏水作用的不同而分離。離子排斥色譜分離是建立在Dormon膜排斥效應(yīng)的基礎(chǔ)上，空間排阻和吸附作用共同作用的機理，進行各組分分離的。根據(jù)上述反相色譜和離子排斥色譜的分離原理，可以推測，本發(fā)明利用串聯(lián)的反相色譜柱和離子排斥色譜柱將檸檬酸發(fā)酵清液中的檸檬酸和各種糖相分離的機理可能是 檸檬酸和糖類具有不同的疏水性能，通過反相色譜柱可以將檸檬酸和糖分離；而糖中的各組分的空間排阻作用不同，可在離子排斥色譜柱中得到進一步分離。本發(fā)明中，用流動相將檸檬酸發(fā)酵液稀釋可以減少得到的色譜圖中倒峰的干擾， 減少基線的毛刺。所述檸檬酸發(fā)酵清液與流動相的體積比可以在很大范圍內(nèi)變動，但為了實現(xiàn)更為有效地分離，優(yōu)選情況下，所述檸檬酸發(fā)酵清液與流動相的體積比為1 5-20，進一步優(yōu)選為1 5-15。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明對流動相的種類沒有特別地限制，只要能實現(xiàn)將檸檬酸發(fā)酵清液中的各組分分離即可。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當所述流動相為有機溶劑和緩沖液的混合液時，色譜分離的效果非常好。所述流動相的含量可以在很大范圍內(nèi)變動，通常來說，以所述流動相的總體積為基準，所述有機溶劑的含量為1-10體積％ ；所述緩沖液的含量為 90-99 體積 ％。根據(jù)本發(fā)明，所述有機溶劑和緩沖液可以為現(xiàn)有的各種能用于色譜分離并且能將檸檬酸發(fā)酵清液中各組分分離的有機溶劑和緩沖液，通常情況下，所述有機溶劑選自乙腈、 乙醇和異丙醇中的一種或多種；所述緩沖液選自硫酸溶液、鹽酸溶液，磷酸溶液中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明，為實現(xiàn)檸檬酸發(fā)酵清液中的糖中的各組分以及檸檬酸發(fā)酵清液中的檸檬酸的有效分離，優(yōu)選情況下，所述緩沖液的濃度為0. 001-0. 02mol/L,進一步優(yōu)選為 0. 004-0. 008mol/L。且本發(fā)明對所述緩沖液的pH沒有特別地限制，但為了進一步提高分離的效果，優(yōu)選地，所述緩沖液的PH值為1.5-3。根據(jù)本發(fā)明，所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液的用量可以根據(jù)反相色譜柱和離子排斥色譜柱中的填料的體積來選擇。所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與所述反相色譜柱中填料的體積比可以在很大的范圍內(nèi)變動，例如可以為1 130-4000，優(yōu)選為 1 200-400;所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與離子排斥色譜柱中填料的體積比也可以在很大范圍內(nèi)變動，例如可以為1 400-14000，優(yōu)選為1 700-1400。根據(jù)本發(fā)明，為了保證所述檸檬酸發(fā)酵清液中的各組分能夠得到很好地分離，所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液從反相色譜分離柱的上端引入應(yīng)該在很短的時間內(nèi)完成，因此，引入時間可以忽略不計。根據(jù)本發(fā)明，雖然所述淋洗劑的流速可以在較大范圍內(nèi)變動，但是為了提高分離效果并節(jié)約時間，優(yōu)選情況下，所述淋洗劑的流速為0. l-1.5mL/min，進一步優(yōu)選為 0.4-0. 7mL/min。本發(fā)明對色譜分離的溫度沒有特別地限制，但為了確保流動相的粘度小，減少液相色譜系統(tǒng)壓力。具體地，所述色譜分離的溫度可以為20-80°C，本發(fā)明更優(yōu)選在40-60°C 下進行。根據(jù)本發(fā)明，所述反相色譜柱的填料以及所述離子排斥色譜柱的填料可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種用于填裝反相色譜柱和離子排斥色譜柱的填料并可以通過商購得到，只要能夠達到吸附解析所述檸檬酸發(fā)酵清液中的檸檬酸和糖，并將檸檬酸發(fā)酵清液中的糖中的各組分以及檸檬酸先后分離出來即可，例如，所述反相色譜柱的填料以二氧化硅為基體，在二氧化硅表面鍵合的官能團選自C4烷基、C8烷基和C18烷基中的一種；例如，所斥色譜柱的填料可以為聚苯乙烯與二乙烯基苯共聚物，交換基團為-SO3H。下面將通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的詳細描述。在下述實施例和對比例中，采用高效液相色譜儀對所述檸檬酸發(fā)酵清液中各組分進行組分和含量的分析，所述高效液相色譜儀是購于Waters公司的高效液相色譜儀，其中，該高效液相色譜儀中的色譜柱為串聯(lián)的反相色譜分離柱(型號=Diamonsil C18，購于杭州庫侖科技有限公司，填料以二氧化硅為基體、官能團為C18烷基，4. 6X 150mm)和離子排斥色譜柱(型號=Aminex HPX-87H，購于天津譜祥科技有限公司，填料是聚苯乙烯與二乙烯基苯的共聚物，交換基團為-SO3H, 7. 8 X 300mm)。以下實施例中所用檸檬酸發(fā)酵液可以通過以下方法制得將0. 872千克玉米用 SFSP系列錘片式粉碎機進行粉碎，得到平均顆粒直徑為2毫米(采用美國PPS公司的Accu Sizer TM 780光學粒徑檢測儀測定)的0. 871千克粉碎產(chǎn)物；一次液化溫度83 士 1°C，二次液化控制溫度93士 1°C，將粉碎產(chǎn)物與淀粉酶混合進行噴射液化，維持時間為50分鐘，所述酶解的PH值維持在5. 7-6. 2 ；加入活力彡2000u/ml的α -淀粉酶0. 7g/kg玉米粉(購自諾維信公司)；溫度降至38°C，接種生物量為18g/L (母液)的黑曲霉，所得混合物在37°C 下于發(fā)酵罐中攪拌培養(yǎng)，得到檸檬酸發(fā)酵液。實施例1本實施例用于說明本發(fā)明提供的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。(1)檸檬酸發(fā)酵清液的制備按上述方法攪拌培養(yǎng)20小時后得到的檸檬酸濃度為
4.21重量％的檸檬酸發(fā)酵液，取50mL該檸檬酸發(fā)酵液，在室溫(25°C )、轉(zhuǎn)速為4000rpm的條件下離心分離5min，得到上清液，即檸檬酸發(fā)酵清液。(2)色譜分析將步驟(1)所得的IOmL檸檬酸發(fā)酵清液用流動相稀釋10倍(所述流動相為硫酸水溶液(濃度為0. 005mol · L-1，pH為2. 15)與乙腈按體積比為98. 5:1.5 混合)得到混合液。在60°C下，并在淋洗劑以0.6mL/min的流速的帶動下，將20uL該混合液通入所述高效液相色譜儀中，使其依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸。由于檸檬酸發(fā)酵清液中各組分在色譜柱中滯留的時間不同，從而先后從色譜柱中流出，再經(jīng)過檢測器，由記錄儀記錄色譜圖。在同等條件下，將1. Og的檸檬酸、0. Sg的葡萄糖、0. Sg的果糖、0. 4g的麥芽二糖和0. 4g的麥芽三糖與IOOmL流動相混合，取20uL該混合液通過上述方法進行色譜分離，得到標準色譜圖，如圖1所示。通過與標準譜圖對比，可得知所述檸檬酸清液中的組分以及各組分的含量，所得結(jié)果如下保留時間為15. 979min的是葡萄糖，含量為6. 91重量％ ；保留時間為17. 043min 的是果糖，含量為0. 02重量％ ；保留時間為14. 55min的是麥芽二糖，含量為1. 78重量％ ； 保留時間為13. 256min的是麥芽三糖，含量為0. 82重量％ ；保留時間為20. 433min的是檸檬酸，含量為4. 21重量％。從圖1的結(jié)果可以說明，在此條件下檸檬酸發(fā)酵液中殘?zhí)堑慕M分與檸檬酸能夠得到有效分離。實施例2本實施例用于說明本發(fā)明提供的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。(1)檸檬酸發(fā)酵清液的制備按上述方法攪拌培養(yǎng)30小時后得到的檸檬酸濃度為
5.26重量％的檸檬酸發(fā)酵液，取50mL該檸檬酸發(fā)酵液，在室溫(25 °C )、轉(zhuǎn)速為4000rpm的條件下離心分離5min，得到上清液，即檸檬酸發(fā)酵清液
(2)色譜分析將步驟(1)所得的檸檬酸發(fā)酵清液用流動相稀釋5倍(所述流動相為硫酸水溶液(濃度為0. 005mol · L-1，ρΗ為2. 15)與乙腈按體積比為96. 5 3. 5混合) 得到混合液。在60°C下，并在淋洗劑以0.6mL/min的流速的帶動下，將20uL該混合液通入所述高效液相色譜儀中，使其依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸。由于檸檬酸發(fā)酵清液中各組分在固定相中滯留的時間不同，從而先后從固定相中流出，再經(jīng)過檢測器， 由記錄儀記錄色譜圖。在同等條件下，將0. 5g的檸檬酸、0. 4g的葡萄糖、0. 4g的果糖、0. 2g 的麥芽二糖和0. 2g的麥芽三糖與IOOmL流動相混合，取20uL該混合液通過上述方法進行色譜分離，得到標準色譜圖，如圖2所示。通過與標準譜圖對比便可得知所述檸檬酸清液中的組分以及各組分的含量，所得結(jié)果如下保留時間為15.7(Mmin的色譜圖為葡萄糖，含量為5.4重量％ ；保留時間為 16. 717min的是果糖，含量為0.01重量％ ；保留時間為14. 048min的是麥芽二糖，含量為1.30重量％ ；保留時間為13. 359min的是麥芽三糖，含量為0. 42重量％ ；保留時間為 18. 088min的是檸檬酸，含量為5.沈重量％。從圖2的結(jié)果可以說明，在此條件下檸檬酸發(fā)酵液中殘?zhí)堑慕M分與檸檬酸能夠得到有效分離測定。實施例3本實施例用于說明本發(fā)明提供的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。(1)檸檬酸發(fā)酵清液的制備按上述方法攪拌培養(yǎng)40小時后得到的檸檬酸濃度為 10.21重量％的檸檬酸發(fā)酵液，取50mL該檸檬酸發(fā)酵液，在室溫(25 °C )、轉(zhuǎn)速為4000rpm的條件下離心分離5min，得到上清液，即檸檬酸發(fā)酵清液。(2)色譜分析將步驟(1)所得的檸檬酸發(fā)酵清液用流動相稀釋10倍(所述流動相為硫酸水溶液(濃度為0. 005mol · L-l,pH為2. 15)與乙腈按體積比為95 5的混合) 得到混合液。在40°C下，并在淋洗劑以0. 5mL/min的流速的帶動下，將20uL該混合液通入所述高效液相色譜儀中，使其依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸。由于檸檬酸發(fā)酵清液中各組分在固定相中滯留的時間不同，從而先后從固定相中流出，再經(jīng)過檢測器， 由記錄儀記錄色譜圖。在同等條件下，將0. 5g的檸檬酸、0. 4g的葡萄糖、0. 4g的果糖、0. 2g 的麥芽二糖和0. 2g的麥芽三糖與IOOmL流動相混合，取20uL該混合液通過上述方法進行色譜分離，得到標準色譜圖，如圖3所示。通過與標準譜圖對比便可得知所述檸檬酸清液中的組分以及各組分的含量，所得結(jié)果如下保留時間為15. 174min的是葡萄糖，含量為4. 20重量％ ；保留時間為16. 200min 的是果糖，含量為0. 01重量％ ；保留時間為13. 520min的是麥芽二糖，含量為1. 01重量％ ； 保留時間為12. 789min的是麥芽三糖，含量為0. 32重量％ ；保留時間為17. 713min的是檸檬酸，含量為10. 21重量％。從所得結(jié)果可以說明，在此條件下檸檬酸發(fā)酵液中殘?zhí)堑慕M分與檸檬酸能夠得到有效分離。實施例4本實施例用于說明本發(fā)明提供的檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法。(1)檸檬酸清液的提取按上述方法攪拌培養(yǎng)40小時后得到的檸檬酸濃度為 10.21重量％的檸檬酸發(fā)酵液，取50mL該檸檬酸發(fā)酵液，在室溫(25 °C )、轉(zhuǎn)速為4000rpm的條件下離心分離5min，得到上清液，即檸檬酸發(fā)酵清液。(2)色譜分析將步驟(1)所得的檸檬酸發(fā)酵清液用流動相稀釋15倍(所述流動相為硫酸水溶液(濃度為0. OOSmol · L—1，pH為1. 99)與乙腈按體積比為97. 5 2. 5混合)得到混合液。在55°C下，并在淋洗劑以0.4mL/min的流速的帶動下，將20uL該混合液通入所述高效液相色譜儀中，使其依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸。由于檸檬酸發(fā)酵清液中各組分在固定相中滯留的時間不同，從而先后從固定相中流出，再經(jīng)過檢測器，由記錄儀記錄色譜圖。在同等條件下，將0. 5g的檸檬酸、0. 4g的葡萄糖、0. 4g的果糖、 0. 2g的麥芽二糖和0. 2g的麥芽三糖與IOOmL流動相混合，取20uL該混合液通過上述方法進行色譜分離，得到標準色譜圖，如圖4所示。通過與標準譜圖對比便可得知所述檸檬酸清液中的組分以及各組分的含量，所得結(jié)果如下 保留時間為15. 428min的是葡萄糖，含量為4. 20重量％ ；保留時間為16. 458min 的是果糖，含量為0. 01重量％ ；保留時間為13. 975min的是麥芽二糖，含量為1. 01重量％ ； 保留時間為13. 477min的是麥芽三糖，含量為0. 32重量％ ；保留時間為20. 311min的是檸檬酸，含量為10. 21重量％。從所得結(jié)果可以說明，在此條件下檸檬酸發(fā)酵液中殘?zhí)堑慕M分與檸檬酸能夠得到有效分離。
權(quán)利要求
1.一種檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法，所述檸檬酸發(fā)酵清液含有檸檬酸和糖，所述糖含有單糖和/或寡糖，其特征在于，所述方法包括使用色譜柱，所述色譜柱包括串聯(lián)的反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱；在色譜分離條件下，將所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液從反相色譜分離柱的上端引入，依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸，并連續(xù)用淋洗劑洗脫所述反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱，將流出液A從離子排斥色譜柱的下端引出，所述流動相的組成和色譜分離的條件使得糖中的各組分以及檸檬酸先后被分離出來，并經(jīng)色譜分析后得到保留時間和積峰面積，通過與同等條件下得到的標準譜圖對比得到檸檬酸發(fā)酵清液中糖的組成和糖中的各組分含量以及發(fā)酵清液中檸檬酸的含量；所述淋洗劑和流動相的組成相同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述檸檬酸發(fā)酵清液與流動相的體積比為 1 5-20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述流動相為有機溶劑和緩沖液的混合液；以所述流動相的總體積為基準，所述有機溶劑的含量為1-10體積％ ；所述緩沖液的含量為 90-99 體積 ％。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述有機溶劑選自乙腈、乙醇和異丙醇中的一種或多種；所述緩沖液為酸性水溶液，所述酸性水溶液中的酸選自硫酸、鹽酸和磷酸中的一種或多種；所述緩沖液的濃度為0. 001-0. 02mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述緩沖液的pH值為1.5-3。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述色譜分離的條件包括所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與所述反相色譜柱中填料的體積比為1 130-4000 ；所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與離子排斥色譜柱中填料的體積比為1 400-14000 ；色譜分離的溫度為20-80°C ；所述淋洗劑的流速為0. 1-1. 5mL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與所述反相色譜柱中填料的體積比為1 200-400;所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液與離子排斥色譜柱中填料的體積比為1 700-1400;所述色譜分離的溫度為20-60°C;所述淋洗劑的流速為0. 4-0. 7mL/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述反相色譜柱的填料以二氧化硅為基體，在二氧化硅表面鍵合的官能團選自C4烷基、C8烷基和C18烷基中的一種；所述離子排斥色譜柱的填料為聚苯乙烯與二乙烯基苯共聚物，交換基團為-S03H。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述單糖選自葡萄糖和果糖中的一種或多種；所述寡糖選自麥芽二糖和麥芽三糖中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檸檬酸發(fā)酵清液的分析方法，其中，該方法包括使用色譜柱，所述色譜柱包括串聯(lián)的反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱；在色譜分離條件下，將所述檸檬酸發(fā)酵清液和流動相的混合液從反相色譜分離柱的上端引入，依次與反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱接觸，并連續(xù)用淋洗劑洗脫所述反相色譜分離柱和離子排斥色譜柱，將流出液A從離子排斥色譜柱的下端引出，并經(jīng)色譜分析后得到保留時間和積峰面積，通過與同等條件下得到的標準譜圖對比得到檸檬酸發(fā)酵清液中糖的組成和糖中的各組分含量以及發(fā)酵清液中檸檬酸的含量；所述淋洗劑和流動相的組成相同。采用本發(fā)明的方法對檸檬酸清液進行檢測，不但能夠?qū)幟仕岷吞欠蛛x，還能夠檢測出糖的具體的組成以及糖中各組分含量以及檸檬酸的含量，方法簡單。
文檔編號G01N30/02GK102313785SQ201110222319
公開日2012年1月11日 申請日期2011年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月4日
發(fā)明者周勇, 孫鳳, 滿云, 王慧娟, 陳影 申請人:中糧生物化學(安徽)股份有限公司