專利名稱：一種冬蟲夏草的培養(yǎng)方法及其專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及冬蟲夏草的培養(yǎng)方法及其專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
冬蟲夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]為子囊菌門(Ascomycota)、麥角菌科(Clavicipitaceae)、蟲草屬[Cordyceps(Fr.)Link]的成員，寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科(Hepialidae)昆蟲幼蟲上，侵蝕蟲體，使其死亡并形成菌核(外表為昆蟲幼蟲的皮殼)，次年春夏產(chǎn)生子座構(gòu)成了藥用復(fù)合體。冬蟲夏草是我國(guó)醫(yī)藥寶庫中的一味珍貴的中藥藥材，與人參、鹿茸齊名。我國(guó)冬蟲夏草的藥用歷史悠久，于1963年被《中華人民共和國(guó)藥典》正式收錄。
現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)冬蟲夏草具有免疫調(diào)節(jié)功能，可祛痰平喘，并對(duì)肝腎損傷具有保護(hù)作用，在抗腫瘤、治療腎功能衰竭等方面具有較好的應(yīng)用前景。但是，冬蟲夏草為青藏高原特有的物種，僅分布于海拔3000-5000米之間的高山草甸和高山灌木叢中，其天然產(chǎn)量非常有限，長(zhǎng)期的過度采挖和生態(tài)環(huán)境的破壞，已使這種珍貴藥材的分布范圍和發(fā)生數(shù)量出現(xiàn)明顯的萎縮趨勢(shì)?，F(xiàn)代研究證實(shí)冬蟲夏草人工培養(yǎng)菌絲體也具有和天然冬蟲夏草相似的藥理作用，因此通過冬蟲夏草菌種發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體以代替天然的冬蟲夏草，已成為緩解人類需求對(duì)自然資源造成的壓力和滿足市場(chǎng)需要的重要途徑。
冬蟲夏草所處的生態(tài)環(huán)境特殊，年平均氣溫僅1.5℃左右，使其生長(zhǎng)溫度低，生長(zhǎng)速度緩慢。在工業(yè)發(fā)酵上由于溫度低、生長(zhǎng)慢，往往造成生產(chǎn)產(chǎn)率低、消耗大、成本高的問題。
國(guó)內(nèi)有不少單位進(jìn)行了冬蟲夏草的人工培養(yǎng)研究，有的雖已進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)階段，但經(jīng)研究證實(shí)很多稱為“冬蟲夏草菌絲體”的發(fā)酵產(chǎn)品在分子水平與天然冬蟲夏草沒有聯(lián)系，其培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件不能應(yīng)用于真正的冬蟲夏草菌種；而用冬蟲夏草菌種進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)，仍存在發(fā)酵周期長(zhǎng)、產(chǎn)率低、成本高的問題，其培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件亟待優(yōu)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基。
本發(fā)明所提供的冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基，其配方包括復(fù)合氮源10.0-50.0克，土豆200克，單糖或雙糖0-20.0克，復(fù)合維生素源0-5.0克，植物油0-3.0克，蛋白胨0-5.0克，用水定容至1000mL；所述單糖或雙糖可為蔗糖、葡萄糖、麥芽糖或乳糖；所述復(fù)合氮源可為麥麩、奶粉、豆粕或玉米粉；所述復(fù)合維生素源可為酵母提取物；所述植物油可為大豆油。
所述冬蟲夏草培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為復(fù)合氮源10.0-50.0克，土豆200克，蔗糖0-20.0克，蛋白胨0-5.0克，酵母提取物1.0-3.0克，大豆油0-3.0克，用水定容至1000mL。
所述冬蟲夏草培養(yǎng)基的配方尤其優(yōu)選為復(fù)合氮源20.0-50.0克，土豆200克，蔗糖10.0-20.0克，蛋白胨2.0-5.0克，酵母提取物1.0-2.0克，大豆油2.0-3.0克，用水定容至1000mL。
所述冬蟲夏草的專用固體培養(yǎng)基是在上述液體培養(yǎng)基中再添加質(zhì)量百分含量為1.5-2.0％的瓊脂。
上述冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基可按常規(guī)方法配制，如先將上述質(zhì)量配比的復(fù)合氮源和土豆煮汁，離心后，取上清液放入容器，再加入其它成分，加熱溶解，使各種成分混合均勻，滅菌即可。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種冬蟲夏草的培養(yǎng)方法。
本發(fā)明所提供的冬蟲夏草的培養(yǎng)方法，是在起始pH值為4.8-7.2下，按5-20％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，然后在12-21℃，轉(zhuǎn)速100-150rpm，自然光照或24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到冬蟲夏草菌絲體；所述裝瓶量為燒瓶容積的1/5-3/5。
所述起始pH值優(yōu)選為5.0-6.5；所述接種量?jī)?yōu)選為10-20％；所述培養(yǎng)溫度優(yōu)選為15-20℃；接種了冬蟲夏草菌種的冬蟲夏草專用培養(yǎng)基的裝瓶量為容器容積的1/5-3/5。
所述起始pH值尤其優(yōu)選為5.5-6.5；所述培養(yǎng)條件尤其優(yōu)選為在15-18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)；所述裝瓶量?jī)?yōu)選為容器容積的1/5-2/5，尤其優(yōu)選為1/5。
上述培養(yǎng)方法中的容器優(yōu)選為燒瓶；培養(yǎng)25-30天即可達(dá)到培養(yǎng)終點(diǎn)。
本發(fā)明提供了一種冬蟲夏草的培養(yǎng)方法及其專用培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基的原料簡(jiǎn)單、易得，而且可根據(jù)不同地方的實(shí)際情況選用不同的原材料，因而成本低廉。利用該培養(yǎng)基及本發(fā)明的培養(yǎng)方法對(duì)發(fā)酵生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲體具有生長(zhǎng)速度快、周期短、產(chǎn)率高、工藝簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適于冬蟲夏草的工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)。用本發(fā)明方法培養(yǎng)所得的冬蟲夏草菌絲體可更大地滿足市場(chǎng)對(duì)冬蟲夏草的需求，緩解了市場(chǎng)需求對(duì)自然資源的壓力?；谏鲜鰞?yōu)點(diǎn)，本發(fā)明可產(chǎn)生較好的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益，市場(chǎng)前景廣闊。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基奶粉50.0克，蔗糖20.0克，蛋白胨5.0克，酵母提取物1.0克，大豆油3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
一、培養(yǎng)基的配制土豆的處理土豆去皮，切成小塊煮沸半小時(shí)，然后用紗布過濾，加水補(bǔ)足至1000毫升。
取1000毫升土豆汁，按上述培養(yǎng)基配方加入奶粉、蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、大豆油，溶解，最后用水定容至1000毫升。
二、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)25.5g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例2、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基玉米粉50.0克，蔗糖20.0克，酵母提取物3.0克，大豆油3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
培養(yǎng)基的配制玉米粉煮沸半小時(shí)，加入土豆再煮沸半小時(shí)，然后用紗布過濾，按上述配方加入蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、大豆油，最后用水定容至1000毫升。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)23.8g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例3、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基豆粕50.0克，葡萄糖20.0克，蛋白胨5.0克，大豆油3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)21.5g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例4、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基麥麩50.0克，葡萄糖20.0克，蛋白胨5.0克，大豆油3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)18.0g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例5、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基奶粉10.0克，蔗糖20.0克，蛋白胨5.0克，酵母提取物1.0克，大豆油3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例1相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)17.7g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例6、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基麥麩50.0克，蛋白胨5.0克，酵母提取物5.0克，大豆油1.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)14.6g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例7、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基麥麩50.0克，蔗糖20.0克，蛋白胨5.0克，酵母提取物3.0克，大豆油3克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)13.2g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例8、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基麥麩50.0克，蔗糖20.0克，蛋白胨5.0克，酵母提取物3.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為4.8下，按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)15.6g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
實(shí)施例9、冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)冬蟲夏草專用培養(yǎng)基麥麩50.0克，土豆200克，用水定容至1000毫升。
對(duì)照培養(yǎng)基土豆200克，葡萄糖20.0克，用水定容至1000毫升。
用與實(shí)施例2相同的方法配制培養(yǎng)基。
從天然冬蟲夏草上分離菌種，純化，進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，確定其為真正的冬蟲夏草菌種菌株。將其在起始pH值為6.0下，按15％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于上述冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)25-30d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率達(dá)8.5g/L。同時(shí)按10％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于對(duì)照培養(yǎng)基中，在起始pH值為6.0下，裝瓶，裝瓶量為燒瓶容積的1/5，然后在15℃，轉(zhuǎn)速150rpm，自然光照條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)40d，得到冬蟲夏草菌絲體，菌絲體產(chǎn)率為6.9g/L。
將所得的冬蟲夏草菌絲體提取DNA，對(duì)其ITS(核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，采用冬蟲夏草專用分子數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較分析，分析結(jié)果表明本方法培養(yǎng)得到的菌絲體為冬蟲夏草菌絲體。
權(quán)利要求
1.冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基，其配方包括復(fù)合氮源10.0-50.0克，土豆200克，單糖或雙糖0-20.0克，復(fù)合維生素源0-5.0克，植物油0-3.0克，蛋白胨0-5.0克，用水定容至1000mL；所述單糖或雙糖為蔗糖、葡萄糖、麥芽糖或乳糖；所述復(fù)合氮源為麥麩、奶粉、豆粕或玉米粉；所述復(fù)合維生素源為酵母提取物；所述植物油為大豆油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基，其特征在于其配方包括復(fù)合氮源10.0-50.0克，蔗糖0-20.0克，蛋白胨0-5.0克，酵母提取物1.0-3.0克，大豆油0-3.0克，土豆200克，用水定容至1000mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基，其特征在于其配方包括復(fù)合氮源20.0-50.0克，蔗糖10.0-20.0克，蛋白胨2.0-5.0克，酵母提取物1.0-2.0克，大豆油2.0-3.0克，土豆200克，用水定容至1000mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的冬蟲夏草的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述冬蟲夏草的專用固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中再添加質(zhì)量百分含量為1.5-2.0％的瓊脂。
5.一種冬蟲夏草的培養(yǎng)方法，是在起始pH值為4.8-7.2下，按5-20％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，然后在12-21℃，轉(zhuǎn)速100-150rpm，自然光照或24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到冬蟲夏草菌絲體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述起始pH值為5.0-6.5；所述接種量為10-20％；所述培養(yǎng)溫度為15-20℃；接種了冬蟲夏草菌種的冬蟲夏草專用培養(yǎng)基的裝瓶量為容器容積的1/5-3/5。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述起始pH值為5.5-6.5；所述培養(yǎng)條件為在15-18℃，轉(zhuǎn)速100rpm，24小時(shí)黑暗下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)；所述裝瓶量為容器容積的1/5-2/5。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述裝瓶量為容器容積的1/5。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述容器為燒瓶。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述振蕩培養(yǎng)時(shí)間為25-30天。
全文摘要
本發(fā)明公開了冬蟲夏草的培養(yǎng)方法及其專用培養(yǎng)基。其配方包括復(fù)合氮源10.0－50.0克，土豆200克，單糖或雙糖0－20.0克，復(fù)合維生素源0－5.0克，植物油0－3.0克，蛋白胨0－5.0克，用水定容至1000mL。該培養(yǎng)方法為在起始pH值為4.8－7.2下，按5－20％的接種量將冬蟲夏草菌種接種于權(quán)利要求1所述的冬蟲夏草專用培養(yǎng)基中，然后在12－21℃，轉(zhuǎn)速100－150rpm，自然光照或24小時(shí)黑暗條件下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到冬蟲夏草菌絲體。利用該培養(yǎng)基及本發(fā)明的培養(yǎng)方法對(duì)發(fā)酵生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲體具有生長(zhǎng)速度快、周期短、產(chǎn)率高、工藝簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適于冬蟲夏草的工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1807574SQ20051013745
公開日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者姚一建, 董彩虹, 王波, 謝雪欽 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院微生物研究所