專利名稱：腺苷脫氨酶活性測定方法及腺苷脫氨酶診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定腺苷脫氨酶活性的方法，同時(shí)本發(fā)明還涉及用以實(shí)現(xiàn)該方法的腺苷脫氨酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
醫(yī)學(xué)研究表明，腺苷脫氨酶是一種與機(jī)體細(xì)胞免疫活性有重要關(guān)系的核酸代謝酶。因此，腺苷脫氨酶活性的測定被作為良惡性胸腹水，腦脊液鑒別診斷，重癥聯(lián)合免疫缺陷病(SCID)，急、慢性肝炎，肝硬化，肝癌等疾病鑒別的重要診斷標(biāo)志。
腺苷脫氨酶的活性測定方法主要有放射核素法、物理方法和生化法。據(jù)申請人了解，目前國際上普遍采用紫外光法，其測定原理是腺苷(白色結(jié)晶粉末)+水(H2O)腺苷脫氨酶肌苷(Inosine)+氨離子(NH4+)，此反映過程生成的肌苷會在波長為265nm處顯現(xiàn)，因此可以通過測定此波長處吸光度的大小直接反映腺苷脫氨酶活性的大小。然而，此方法無法用一般醫(yī)院的可見光分析儀測定，而需要使用專門的紫外光分析儀，因此難以切實(shí)推廣應(yīng)用。
檢索發(fā)現(xiàn)，申請?zhí)枮?3128092.7、申請日為2003.05.29、名稱為《一種測定腺苷脫氨酶的試劑及其制法》的中國專利申請公開了應(yīng)用酶反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰氨輔酶配制的測定試劑。該發(fā)明所指的酶法測定試劑并不加入測定反應(yīng)所需的還原型煙酰氨輔酶或其類似物，而加入其反應(yīng)產(chǎn)物氧化型煙酰氨輔酶或其類似物，及其相應(yīng)的生成還原型輔酶所需的酶和底物系統(tǒng)，通過在試劑內(nèi)形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反應(yīng)系統(tǒng)，將這類氧化型輔酶或其類似物緩慢循環(huán)還原為還原型煙酰氨輔酶或其類似物，當(dāng)被還原的還原型煙酰氨輔酶或其類似物達(dá)到一定的濃度時(shí)，該發(fā)明所指的酶法試劑就可達(dá)到測定樣本中腺苷脫氨酶及其同工酶活力的目的。該發(fā)明的特點(diǎn)在于為腺苷脫氨酶的測試提供一個(gè)內(nèi)源合成腺苷脫氨酶反應(yīng)所需要的還原型煙酰氨輔酶的腺苷脫氨酶試劑。其缺點(diǎn)之一為，這個(gè)系統(tǒng)在生成反應(yīng)所需要的還原型煙酰氨輔酶的同時(shí)，也抵消了部分腺苷脫氨酶試劑(腺苷脫氨酶偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶反應(yīng)必定將還原型煙酰氨輔酶氧化成氧化型煙酰氨輔酶)的活性，造成試劑測試的準(zhǔn)確性大大降低。其缺點(diǎn)之二是，該試劑在正式測試前必須事先反應(yīng)一段時(shí)間，以便能夠產(chǎn)生足夠的還原型煙酰氨輔酶，這樣一來就造成了緩不濟(jì)急的結(jié)果，給測試帶來很大的不便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提出一種可以克服以上現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)的腺苷脫氨酶活性的測定方法，同時(shí)給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的腺苷脫氨酶診斷試劑盒。采用該試劑盒中的試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀上進(jìn)行腺苷脫氨酶活性測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明測定腺苷脫氨酶活性的方法步驟如下1)、將樣品與主要由腺苷、2-酮戊二酸酯、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶組成的試劑混合，使之發(fā)生如下原理的反應(yīng)腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶2)、檢測最終反應(yīng)物在主波長340nm吸光度下降的速度，測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
通常步驟2)將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，得出腺苷脫氨酶測定結(jié)果。
以上樣品與試劑的混合比例按體積為1/10到1/250，以上過程的測定溫度控制在常規(guī)的20℃到50℃范圍，反應(yīng)時(shí)間控制在常規(guī)的2-30分鐘。
這種方法應(yīng)用腺苷脫氨酶偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法。腺苷脫氨酶酶解腺苷產(chǎn)生氨，再通過偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生谷氨酸，通過谷氨酸脫羧酶催化產(chǎn)生二氧化碳，二氧化碳再和磷酸烯醇式丙酮酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的作用下產(chǎn)生草酰乙酸，再通過偶聯(lián)蘋果酸脫氫酶的作用，將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算腺苷脫氨酶的活性大小。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)利用了二個(gè)分子的還原型輔酶，也產(chǎn)生了二個(gè)分子的氧化型輔酶，因此吸光度有二倍的變化速度，靈敏度也就提高了二倍。
用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方法的腺苷脫氨酶診斷試劑盒可以是單劑，包括緩沖液 40--200mmol/l腺苷0.5--50mmol/l2-酮戊二酸酯1--50mmol/l還原型輔酶 0.15--0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸1--10mmol/l谷氨酸脫氫酶1000--50000U/l谷氨酸脫羧酶1000--50000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 500--20000U/l蘋果酸脫氫酶1000--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)也可以將以上單劑配成如下雙劑，更有利于消除內(nèi)、外源氨、谷氨酸、二氧化碳污染試劑I緩沖液40--200mmol/l2-酮戊二酸酯 1--50mmol/l還原型輔酶0.15--0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 1--10mmol/l谷氨酸脫氫酶 1000--50000U/l谷氨酸脫羧酶 1000--50000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶500--20000U/l蘋果酸脫氫酶 1000--50000U/l穩(wěn)定劑10--80％(總體積)試劑II緩沖液40--200mmol/l
腺苷 0.5--50mmol/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)雙劑的配方不僅限于上述配方，其中的試劑I的成分，2-酮戊二酸酯、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶等可以放在試劑II。試劑II其中的成分，腺苷也可以放在試劑I，如此可以形成多種配方，不在此一一詳述。
還可以將試劑配成如下三試劑，不但更有利于消除內(nèi)、外源氨、谷氨酸、二氧化碳污染，還更有利于試劑的穩(wěn)定試劑I緩沖液 40--200mmol/l2-酮戊二酸酯 1--50mmol/l還原型輔酶 0.15--0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 1--10mmol/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)試劑II緩沖液 40--200mmol/l谷氨酸脫氫酶 1000--50000U/l谷氨酸脫羧酶 1000--50000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 500--20000U/l蘋果酸脫氫酶 1000--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)試劑III緩沖液 40--200mmol/l腺苷 0.5--50mmol/l
穩(wěn)定劑10--80％(總體積)三劑的配方不僅限于上述配方，其中的試劑I的成分，2-酮戊二酸酯、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸等可以放在試劑II或試劑III中。試劑II其中的成分，谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶等也可以放在試劑I或試劑III中。試劑III其中的成分，腺苷也可以放在試劑I或試劑II中，如此可以形成多種配方，不在此一一詳述。
緩沖劑的pH范圍可以是6.0～11.0。緩沖劑可以是三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、磷酸鹽(Phosphate)緩沖液、三乙醇胺(Triethanolamine)緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩沖液、咪唑(Imidazole)緩沖液或雙甘氨肽(Glycylglycine)緩沖液等，但不僅限于這些緩沖液。
以上還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH等還原型煙酰胺輔酶或其衍生物。
此外，為了減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長期儲存，以上單劑、雙劑的試劑I、試劑II或三劑的試劑I、試劑II、試劑III中通常加入穩(wěn)定劑10～80％或者10～50mmol/l，穩(wěn)定劑可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺或鹽等中的一種或一種以上。
實(shí)驗(yàn)表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關(guān)系的本發(fā)明腺苷脫氨酶診斷試劑盒較為理想緩沖液 80--120mmol/l腺苷 3--20mmol/l2-酮戊二酸酯 6--30mmol/l
還原型輔酶0.2--0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 2--8mmol/l谷氨酸脫氫酶 6000--10000U/l谷氨酸脫羧酶 6000--10000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶2000--8000U/l蘋果酸脫氫酶 6000--10000U/l穩(wěn)定劑20--50％(總體積)由于本發(fā)明是完全利用酶學(xué)方法，酶解反應(yīng)具有特異性高的特點(diǎn)，不易受到內(nèi)、外源其他物質(zhì)的干擾。酶法方法簡便、易于操作。酶解反應(yīng)的特異性促使測試結(jié)果精確。酶解反應(yīng)都是在緩沖液條件下進(jìn)行，沒有污染環(huán)境問題。酶法方法不需要特殊、額外的儀器，測試成本低廉。因此可以保證具有較高的測試準(zhǔn)確性，更便于推廣應(yīng)用。
此外，本發(fā)明的顯著特色之一是可以消除內(nèi)、外源氨、谷氨酸、二氧化碳的污染，消除內(nèi)、外源氨、谷氨酸、二氧化碳的作用發(fā)生在整個(gè)反應(yīng)時(shí)間段的前半部分，在后半段時(shí)間受污染的內(nèi)、外源氨、谷氨酸、二氧化碳已經(jīng)被消耗殆盡，而在后半段時(shí)間測試腺苷脫氨酶活性所需要的氨、谷氨酸、二氧化碳都是產(chǎn)生于腺苷脫氨酶的活性。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例子對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例一(單劑)本實(shí)施例的腺苷脫氨酶診斷試劑盒包括緩沖液 80mmol/l腺苷 3mmol/l2-酮戊二酸酯 6mmol/l還原型輔酶 0.2mmo/l
磷酸烯醇式丙酮酸2mmol/l谷氨酸脫氫酶6000U/l谷氨酸脫羧酶6000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 2000U/l蘋果酸脫氫酶6000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測試主波長340nm，測試副波長405nm以上，被測腺苷脫氨酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，從而測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
本實(shí)施例應(yīng)用腺苷脫氨酶偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法。腺苷脫氨酶酶解腺苷產(chǎn)生氨，再通過偶聯(lián)谷氨酸脫氫酶的作用，產(chǎn)生谷氨酸，通過谷氨酸脫羧酶催化產(chǎn)生二氧化碳，二氧化碳再和磷酸烯醇式丙酮酸在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的作用下產(chǎn)生草酰乙酸，再通過偶聯(lián)蘋果酸脫氫酶的作用，將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算腺苷脫氨酶的活性大小。
實(shí)施例二(雙劑)本實(shí)施例的腺苷脫氨酶診斷試劑有試劑I緩沖液 100mmol/l2-酮戊二酸酯 18mmol/l還原型輔酶 0.25mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 5mmol/l谷氨酸脫氫酶 8000U/l谷氨酸脫羧酶 8000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 5000U/l蘋果酸脫氫酶 8000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)試劑II緩沖液 100mmol/l腺苷 12mmol/l穩(wěn)定劑 20mmol/l測定腺苷脫氨酶活性時(shí)，溫度控制在30℃，反應(yīng)時(shí)間15分鐘，測試主波長340nm，測試副波長405nm以上，被測腺苷脫氨酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
具體測定步驟為腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，從而測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時(shí)間控制在15分鐘。
實(shí)施例三(三劑)本實(shí)施例的腺苷脫氨酶診斷試劑為三劑，有試劑I緩沖液 120mmol/l2-酮戊二酸酯30mmol/l還原型輔酶 0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸8mmol/l穩(wěn)定劑 20mmol/l試劑II緩沖液 120mmol/l谷氨酸脫氫酶10000U/l谷氨酸脫羧酶10000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 8000U/l
蘋果酸脫氫酶 10000U/l穩(wěn)定劑50％(總體積)試劑III緩沖液120mmol/l腺苷 20mmol/l穩(wěn)定劑20mmol/l在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度25℃，反應(yīng)時(shí)間20分鐘，測試主波長340nm，測試副波長405nm以上，被測腺苷脫氨酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
具體測定步驟為腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，從而測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時(shí)間控制在20分鐘。
實(shí)施例四本實(shí)施例的腺苷脫氨酶診斷試劑有試劑I
緩沖液100mmol/l谷氨酸脫氫酶 6000U/l谷氨酸脫羧酶 6000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶8000U/l蘋果酸脫氫酶 6000U/l穩(wěn)定劑50％(總體積)試劑II緩沖液100mmol/l腺苷 5mmol/l2-酮戊二酸酯 10mmol/l還原型輔酶0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 3mmol/l穩(wěn)定劑20mmol/l在生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測試主波長340nm，測試副波長405nm以上，被測腺苷脫氨酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測時(shí)間2分鐘，理論K值-4180。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，從而測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
總之，實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的測定方法完全可以通過紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器得出所需的測定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。
權(quán)利要求
1.一種測定腺苷脫氨酶活性的方法，步驟如下1)、將樣品與主要由腺苷、2-酮戊二酸酯、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶組成的試劑混合，使之發(fā)生如下原理的反應(yīng)腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸+輔酶+水谷氨酸谷氨酸脫羧酶4-氨基丁酸(aminobutanoate)+二氧化碳二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶草酰乙酸+磷酸根草酰乙酸+還原型輔酶蘋果酸脫氫酶蘋果酸+氧化型輔酶2)、檢測最終反應(yīng)物在主波長340nm吸光度下降的速度，測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測定腺苷脫氨酶活性的方法，其特征在于所述步驟2)為，將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的速度，測算出腺苷脫氨酶的活性大小。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述測定腺苷脫氨酶活性的方法，其特征在于溫度控制在20℃到50℃范圍，反應(yīng)時(shí)間控制在2-30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述測定腺苷脫氨酶活性的方法，其特征在于被測樣品與試劑的比例控制在1/10到1/250。
5.一種腺苷脫氨酶診斷試劑盒，由以下成分組成緩沖液40--200mmol/l腺苷 0.5--50mmol/l2-酮戊二酸酯 1--50mmol/l還原型輔酶0.15--0.3mmo/l磷酸烯醇式丙酮酸 1--10mmol/l谷氨酸脫氫酶 1000--50000U/l谷氨酸脫羧酶 1000--50000U/l磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶500--20000U/l蘋果酸脫氫酶 1000--50000U/l穩(wěn)定劑10--80％(總體積)
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述腺苷脫氨酶診斷試劑盒，其特征在于所述試劑配成單劑、雙劑或三劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述腺苷脫氨酶診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸銨或鹽中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述腺苷脫氨酶診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖劑的pH范圍是6.0～11.0，所述緩沖劑是三(羧甲基)氨基甲烷—鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三乙醇胺緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、咪唑緩沖液或雙甘氨肽緩沖液中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述腺苷脫氨酶診斷試劑盒，其特征在于所述還原型輔酶是NADPH、NADH或thio-NADH還原型煙酰胺輔酶或其衍生物中的一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測定腺苷脫氨酶活性的方法，同時(shí)本發(fā)明還涉及腺苷脫氨酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。該試劑盒包括緩沖液、腺苷、2－酮戊二酸酯、還原型輔酶、磷酸烯醇式丙酮酸、谷氨酸脫氫酶、谷氨酸脫羧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、蘋果酸脫氫酶、穩(wěn)定劑，通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，再將最終反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測主波長吸光度變化的情況(速度)，從而測算出腺苷脫氨酶的活性大小。采用本發(fā)明完全可以通過生化分析儀器得出所需的測定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)外源物質(zhì)的污染，便于推廣應(yīng)用。
文檔編號C12Q1/32GK1769477SQ20041006560
公開日2006年5月10日 申請日期2004年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月5日
發(fā)明者王爾中 申請人:王爾中