專利名稱：制備一種受體特異的組織移植體或組織植入體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由組織基質(zhì)和在其上繁殖的受體耐受的細(xì)胞制備受體特異的組織移植體或組織植入體的方法。
在移植醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，對適宜的、盡可能少地引起受體產(chǎn)生不良反應(yīng)的移植體的需求量很大。移植體從受體自己身體中取出用來移植，只在特別案例中是可能的。從免疫學(xué)的角度，這種移植手術(shù)是最不需要顧慮的了，而對于特定的脈管和器官以及較大面積待替換的皮膚卻不存在這種可能性。對于特定的器官，如今實(shí)際上只是異體捐獻(xiàn)者的同種異體移植體，或在矯形外科學(xué)領(lǐng)域更具多樣性，考慮的是合成材料、金屬、陶瓷等等以及不同的復(fù)合材料制備的植入體。在使用同種異體移植材料，例如捐獻(xiàn)器官，永久地需要對受體生物體有負(fù)擔(dān)的免疫抑制。盡管如此排斥反應(yīng)仍經(jīng)常地成為第一并發(fā)癥。即使人造材料也可以導(dǎo)致排斥反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，致使手術(shù)結(jié)果失敗。
出于不同的理由如今經(jīng)常嘗試使用異種材料(來源于動物)。其優(yōu)點(diǎn)主要是所述材料相對于同種異體(捐獻(xiàn))材料較易于獲得。而且這樣的一種“生物材料”比人造材料運(yùn)用靈活并更合適于受體身體的某些部位。所述異種移植材料卻因?yàn)槭菑?qiáng)抗原而成為問題。
因此人們長期試圖使異種同種異體或合成的移植材料，即不同種類可考慮用于移植的組織變成受體耐受的。對此經(jīng)常嘗試的是，在通過無細(xì)胞化對受體盡可能免疫中性化的異種或同種異體的組織或合成的基質(zhì)材料(例如可生物降解的生物聚合物)上繁殖受體耐受的細(xì)胞，由此獲取一種移植體或植入體，其盡可能不被受體當(dāng)作異種或至少因?yàn)榇嬖诘淖泽w的、自身的細(xì)胞而更易于耐受。
例如在DE19828726A1中描述了制備人造生物移植體的一種方法，先是從移植體的間質(zhì)結(jié)締組織中清除原有的細(xì)胞，在基質(zhì)上重新繁殖受體耐受的，優(yōu)選的是自體細(xì)胞，以便獲得受體特異的生物移植體。
為了促使用于新繁殖的細(xì)胞接近自然地生長和持續(xù)不斷永久性地細(xì)胞更新，適宜的作法是，將特定的細(xì)胞介質(zhì)或還有因子加入培養(yǎng)物，這些細(xì)胞介質(zhì)或因子刺激所述生長中的細(xì)胞進(jìn)入特定的過程。如果培養(yǎng)的受體特異細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞，則例如在合適的介質(zhì)/因子的幫助下可以刺激膠原蛋白再生并以此促進(jìn)組織基質(zhì)重建成對于受體來說是自體的。許多因子有趨化性或加快生長的作用，對于專業(yè)人員來說，每個因子的作用已經(jīng)是被徹底研究乃至清楚了的。通過加入所述因子，使所述的過程被啟動、加速并通過因子種類和功能被控制。
現(xiàn)有技術(shù)已知的操作方式存在缺陷，使用的因子是很昂貴的。這就限制了所述方法的應(yīng)用范圍，因?yàn)橥ㄟ^在特定的移植體基體上繁殖受體耐受細(xì)胞來制備受體特異的移植體或植入體的方式已經(jīng)是很昂貴的了，并且通過使用天然分離的或合成的介質(zhì)還會使之變得更昂貴。
另一個問題在于介質(zhì)/因子和輔助因子準(zhǔn)確的投入劑量及對其理想投入時間和部位的控制。
本發(fā)明的任務(wù)因此在于，在由組織基質(zhì)和其上繁殖的受體耐受細(xì)胞制備受體特異的組織移植體或組織植入體的方法中簡化并更好地控制向組織培養(yǎng)物中加入介質(zhì)、因子、輔助因子的過程，并使其更加經(jīng)濟(jì)。同時所述方法還應(yīng)該使獲取的受體特異的移植體或植入體的自然形成成為可能。
根據(jù)本發(fā)明，所述問題的解決方案是這樣擬定的，在一種由組織基質(zhì)和其上繁殖的受體耐受細(xì)胞制備受體特異的組織移植體或組織植入體的方法中，受體耐受細(xì)胞在組織基質(zhì)上的繁殖是在附加細(xì)胞的參與下進(jìn)行，所述附加細(xì)胞產(chǎn)生并向周圍釋放促進(jìn)組織再生的介質(zhì)、因子或輔助因子。
對于釋放介質(zhì)或因子的附加細(xì)胞的“參與”在這里的理解是，將所述附加細(xì)胞在所述繁殖方法中，作為對用于繁殖的受體耐受細(xì)胞的補(bǔ)充，或者直接加入組織培養(yǎng)物中并通過和受體特異細(xì)胞的相互作用刺激釋放介質(zhì)或因子(以便于附加細(xì)胞對繁殖過程直接干涉，也就是參與)，或者與組織移植體或植入體的培養(yǎng)并行地在同一培養(yǎng)裝置中(生物反應(yīng)器)，或者在一個分開的儀器中同時培養(yǎng)所述附加細(xì)胞(協(xié)同培養(yǎng))，而根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的細(xì)胞在并行培養(yǎng)物中分泌的產(chǎn)物(介質(zhì)、因子、輔助因子)被直接加入所述組織培養(yǎng)物。屬于介質(zhì)的也包括引起炎癥的介質(zhì)。
在介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞的并列培養(yǎng)中，可以使用分別相應(yīng)于其細(xì)胞類型的常用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。
對于“介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞”在本發(fā)明范圍內(nèi)的理解是，其相對易于被激活(即被刺激)，以釋放促進(jìn)組織再生的介質(zhì)、因子或輔助因子。這里算得上的有巨噬細(xì)胞、某些免疫活性的細(xì)胞及其它。激活過程可以優(yōu)選通過一種來自繁殖細(xì)胞的刺激(如細(xì)胞碎屑)來進(jìn)行，作為替代方案也通過加入化學(xué)物質(zhì)或小的異物顆粒。
對于組織再生的理解是指修復(fù)過程以及組織的分解和重建過程。介質(zhì)釋放細(xì)胞刺激周圍的細(xì)胞分別進(jìn)行表型重建，促進(jìn)神經(jīng)合成過程和組織更新。
作為介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞可以使用移植體受體的自體細(xì)胞。特別考慮的是白細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒性白細(xì)胞，樹突細(xì)胞，干細(xì)胞，特別是多能性干細(xì)胞以及體干細(xì)胞或所述細(xì)胞的混合。使用巨噬細(xì)胞目前被看作是特別有利的。
特別是在介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞的協(xié)同培養(yǎng)中，但也在直接加入移植體組織培養(yǎng)物的情況下，可以通過加入適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)刺激所述細(xì)胞產(chǎn)生特定的介質(zhì)、因子或輔助因子或增加細(xì)胞產(chǎn)物的產(chǎn)生?？刹捎脕泶碳に黾?xì)胞的其中有來自組織培養(yǎng)中的細(xì)胞碎屑。
所述方法優(yōu)選這樣進(jìn)行，使所述介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞在繁殖期間至少短時地直接加入到用于繁殖的培養(yǎng)基和/或組織基質(zhì)中。
在組織基座上繁殖受體耐受細(xì)胞制備組織移植體或植入體，可以遵循一種已知的方式，就此例如DE 198 28 726中給出了詳細(xì)描述。在這里組織基座或組織基質(zhì)，例如是一種天然或合成的，無細(xì)胞化的或自體膠原基質(zhì)或合成組織，如一種生物聚合物纖維或網(wǎng)狀構(gòu)造通常存在于一種培養(yǎng)基中，可以往其中加入不同的添加物(也稱為調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基，意思是為繁殖而對組織的調(diào)節(jié))?？梢岳缡顾雠囵B(yǎng)基流過組織或在一個循環(huán)中循環(huán)經(jīng)過組織。所述培養(yǎng)基也可以間隔地加入然后在培養(yǎng)物上靜止保留一段時間；理想的條件是根據(jù)待繁殖的組織的種類而定。
常用的營養(yǎng)基可以作為培養(yǎng)基或調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基使用，任選地可配有不同的添加劑。對此合適的營養(yǎng)基是專業(yè)人員所熟悉的。
在所述培養(yǎng)基中加入受體特異細(xì)胞，或是從繁殖的一開始連續(xù)地，或是分批多次地加入。對受體特異細(xì)胞的理解是指，受體自體的、對受體盡可能免疫耐受而挑選的(相容的)同種異體的或基因修飾過的同種異體的或異種的細(xì)胞。如果通過測試被歸類為類似受體的或特別通過基因修飾而適應(yīng)于受體的細(xì)胞可以看作是免疫相容的細(xì)胞。
也可以在繁殖及處理的不同時段加入不同種類的細(xì)胞，以便在組織上構(gòu)成由不同的細(xì)胞種類組成的不同的細(xì)胞層。此外可以局部性地加入不同的細(xì)胞。例如在一皮膚移植體的上端和下端有不同的細(xì)胞或一管狀脈管的內(nèi)側(cè)和外側(cè)有不同的細(xì)胞?；旧纤蟹N類的體細(xì)胞都可以作為受體耐受細(xì)胞考慮，例如結(jié)締組織細(xì)胞(其中有成纖維細(xì)胞，結(jié)締組織細(xì)胞)，肌肉細(xì)胞(肌細(xì)胞)，內(nèi)皮細(xì)胞，皮膚細(xì)胞(其中有生角質(zhì)細(xì)胞)，分化成器官細(xì)胞的細(xì)胞(心臟細(xì)胞、腎臟細(xì)胞等)，優(yōu)選帶有膠原構(gòu)架的結(jié)構(gòu)化的器官，通常所有的細(xì)胞，其可被提供有效用于特定的作為植入體的組織的重建。
對于組織移植體，基本上涉及到每一個可移植的組織。特別在這里算得上的是通常的脈管，如動脈和靜脈，動脈瓣、心瓣膜，部分器官和完整器官，皮膚塊、肌腱、角膜、軟骨、骨、喉、心臟、氣管、神經(jīng)、Miniskus、椎間盤、輸尿管、尿道、膀胱以及其它等等。
以合成的基質(zhì)或框架為基礎(chǔ)的植入體提供的許多可能性中有靜脈、心瓣膜、角膜、膀胱和皮膚。
介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞可以，如上所述，在繁殖期間至少短時地加入到組織培養(yǎng)基和/或組織基質(zhì)中。為此可能的是，介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞在繁殖開始時一次性或和受體耐受細(xì)胞一同直接加在組織基質(zhì)上。介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞也可以隨著培養(yǎng)基分批或連續(xù)地加入，其中培養(yǎng)基的交替也可在有或沒有介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞的情況下進(jìn)行。
在本發(fā)明的擴(kuò)展形式中還考慮到了，為了加入介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞而使用血液，它本身含有所期望的介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞，優(yōu)選移植體或植入體受體的自身血液。所述血液可就所期望的組分而言濃縮或可以分離血液組分并加以運(yùn)用。
進(jìn)一步優(yōu)選的可以是將可激活的介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞保持在一培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基與組織在繁殖過程中是有聯(lián)系的，以使從細(xì)胞培養(yǎng)物中釋放的介質(zhì)/因子在繁殖期間導(dǎo)入組織。如上所述，這種介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞的協(xié)同培養(yǎng)作為并列培養(yǎng)可以設(shè)置在所述組織培養(yǎng)裝置的外部或內(nèi)部。
介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞的培養(yǎng)，例如巨噬細(xì)胞培養(yǎng)，可以在一個生物反應(yīng)器中進(jìn)行，其與培養(yǎng)和處理受體特異的移植體或植入體的反應(yīng)器通過適當(dāng)?shù)姆绞较噙B。從生物反應(yīng)器中取得的因子可按適合的量加入到循環(huán)地或分批式加料的調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基中。
作為選擇，所述巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物或其它介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞或混和的介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞培養(yǎng)物，在用受體耐受細(xì)胞的處理步驟中，通過一種對于細(xì)胞介質(zhì)和/或因子可透過的薄膜、膜或隔離壁與調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基保持分隔，以便可以將生成的介質(zhì)和/或因子連續(xù)地釋放到所述調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基中。
考慮用于移植的組織的處理通常是在一個生物反應(yīng)器中進(jìn)行的，其中培養(yǎng)基在一特定空間內(nèi)保存并任選地循環(huán)。在所述空間內(nèi)可以用一個可透過的隔離壁為依據(jù)本發(fā)明運(yùn)用的細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)構(gòu)造出一個培養(yǎng)空間，以便生成的細(xì)胞介質(zhì)和/或因子可以永久性地穿出來進(jìn)入條件培養(yǎng)基。
作為介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞可以應(yīng)用的特別是來自白細(xì)胞家族的細(xì)胞，然而也可以是外周或中央干細(xì)胞(來自于血，脂肪組織，器官和骨髓)，優(yōu)選多能性干細(xì)胞，例如所有形式的白細(xì)胞、粒性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、脾細(xì)胞、記憶細(xì)胞、胸腺細(xì)胞。
為了借助于受體耐受細(xì)胞的繁殖，挑選適合于相應(yīng)組織類別的各種細(xì)胞或混和細(xì)胞。所述受體耐受的，優(yōu)選自體的或通過基因修飾而成為受體特異的同種異體或異種的細(xì)胞包括，適于構(gòu)造所期望的組織的細(xì)胞，選擇性地還有那些可以刺激和/或控制組織重建的細(xì)胞，如產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞和/或趨化影響性細(xì)胞，其中有如上所述的介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞。
本發(fā)明，即產(chǎn)生并釋放介質(zhì)、因子、輔助因子至調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基的細(xì)胞參與用受體耐受細(xì)胞繁殖的移植體或植入體的培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)在于為相應(yīng)目的而特別合適的介質(zhì)/因子可以在反正需要的培養(yǎng)步驟期伴隨產(chǎn)生。以致可以放棄使用格外昂貴的和特異性較低的因子。
通過規(guī)定某些可激活的介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞和任選地給予這些細(xì)胞適當(dāng)?shù)拇碳?，可以影響介質(zhì)/因子的釋放并以此控制和加速組織生長。
作為組織基質(zhì)可以，分別根據(jù)應(yīng)用情形，例如使用一個合成的組織基質(zhì)，它包括例如一種或多種以下材料Polyglactid，聚二噁酮(Polydioxanon)、可生物降解的聚酯、聚氨酯、聚丙烯酸酯(Polyacryle)、膠原蛋白、血纖維蛋白原。作為替代方案可以應(yīng)用的，如上已描述的，還有自身或無細(xì)胞化的異種或同種異體組織基質(zhì)。
如下，本發(fā)明將依據(jù)實(shí)施例加以描述用于新的人造生物組織的以工業(yè)和生物聚合物作為載體物質(zhì)(組織基質(zhì))的加速重建使用可生物降解的聚合物作為合成基質(zhì)材料。所述合成材料可以是提純了的生物來源性材料。將所述材料成型為“合成”基質(zhì)(相對于無細(xì)胞化的生物組織)。
所述聚合物的降解可以通過水解或也可以通過酶催化完成。
可使用的是可以生物降解的聚合物如Polyglactid，聚二噁酮、聚酯、聚氨酯、聚丙烯酸酯、特別的生物聚合物和(生物)大分子，如典型的細(xì)胞外基質(zhì)的組分，膠原蛋白或血纖維蛋白原。
與常規(guī)方法相符，在一個合成的組織基座(例如合成的心臟瓣膜)上繁殖挑選出來的受體特異細(xì)胞。培養(yǎng)在一種通常用于此目的培養(yǎng)基(例如DMBM；WE)中進(jìn)行。在繁殖期間，以一定時間間隔地用植入體受體的自身血液、濃縮的自身血液或加入了血液成分的培養(yǎng)基清洗所述組織植入體。在此階段巨噬細(xì)胞選擇性粘附在曝露的基質(zhì)上。通過聚合物的分解產(chǎn)物使淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞獲得免疫刺激性刺激并被激活，自體的成肌纖維細(xì)胞經(jīng)內(nèi)源性激活劑刺激合成基質(zhì)。這是特別重要的，因?yàn)殡S后加速例如水解方式的聚合物分解，以至比現(xiàn)有技術(shù)所可能的時間縮短了很多。這再次使得在沒有殘余聚合物的存在下活體植入一個已制成的產(chǎn)品成為可能，所述殘余聚合物在突然加速分解時可能引發(fā)活體不期望的不穩(wěn)定狀況或還引起異物反應(yīng)。
作為對于在血液中培養(yǎng)的替代方案，可以將血小板制劑(在約3000g和白血球1800g時獲得)分開地在生物反應(yīng)器的不同的部位或同步地在一個分開的設(shè)備中協(xié)同培養(yǎng)。在后一情況下，使如此獲取的組織培養(yǎng)的培養(yǎng)產(chǎn)物導(dǎo)入到真正的組織生物反應(yīng)器中。
誘導(dǎo)心臟瓣膜重建至正常的細(xì)胞生理特征受體血管細(xì)胞的預(yù)擴(kuò)張階段運(yùn)用傳統(tǒng)的方式需要大約10天。心臟瓣膜隨后置入一生物反應(yīng)器并使用預(yù)擴(kuò)張了的成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞(SMC)和內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelialen)如通常地在管式繁殖。并行地使新鮮獲取的骨髓干細(xì)胞作為總細(xì)胞庫通過注射而加至基質(zhì)上和之內(nèi)。在那里在細(xì)胞外基質(zhì)空間位點(diǎn)的局部微環(huán)境壓力下發(fā)生了干細(xì)胞的分化控制。另外通過基質(zhì)和局部細(xì)胞分解產(chǎn)物刺激干細(xì)胞的活化狀態(tài)。通過受體血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的運(yùn)用發(fā)生了和干細(xì)胞之間的相互影響。此外因此就地產(chǎn)生了所述組織特異細(xì)胞。這意味著，基于活體抽取技術(shù)(Biopsieentnahmen)例如在制備主動脈心瓣膜時必需使用不能直接從目標(biāo)組織上獲取的組織。這包括例如靜脈組織，其具有不同于動脈瓣的動脈細(xì)胞的分子和表型分化。另外還缺少不同的細(xì)胞類型，它們例如只在瓣尖出現(xiàn)的，如神經(jīng)元細(xì)胞系統(tǒng)。在局部微環(huán)境壓力和瓣膜中存在基質(zhì)參數(shù)(理想的是例如一同種異體的動脈瓣基質(zhì))下所述干細(xì)胞分化為部位特異的細(xì)胞類型包括負(fù)責(zé)局部神經(jīng)支配過程的神經(jīng)元細(xì)胞系統(tǒng)。在活體植入后，干細(xì)胞還可以使使用動脈細(xì)胞的分化繁殖(Repopulation)成為可能。然而EC還是重要的，因?yàn)樵谘芟到y(tǒng)中減少了血栓形成。通過FB和SMC，本身來源于靜脈，至少在受體特異的基質(zhì)中啟動了重建過程，它通過由干細(xì)胞募集的細(xì)胞庫推進(jìn)，矯正和直至完成。
權(quán)利要求
1.由組織基質(zhì)和在其上繁殖的受體耐受的細(xì)胞制備受體特異的組織移植體或組織植入體的方法，其特征在于，在組織基質(zhì)上所述受體耐受的細(xì)胞的繁殖是在附加細(xì)胞的參與下進(jìn)行的，所述附加細(xì)胞產(chǎn)生促進(jìn)組織再生的介質(zhì)、因子或輔助因子并向周圍釋放。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述細(xì)胞釋放引起炎癥的介質(zhì)或因子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于，所述介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞包括移植體受體的自體細(xì)胞，特別是白細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或這些細(xì)胞的混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3之一項(xiàng)的方法，其特征在于，所述介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞包括前體細(xì)胞和干細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4之一項(xiàng)的方法，其特征在于，所述介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞在繁殖期間至少短時地加入到用于繁殖的培養(yǎng)基和/或組織基質(zhì)中。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其特征在于，所述加入過程是通過添加移植體或植入體受體的自身血液或自身血液的組分完成的。
7.根據(jù)權(quán)利要求5至6的方法，其特征在于，所述介質(zhì)或因子釋放細(xì)胞保持在一培養(yǎng)物中，該培養(yǎng)物與組織在繁殖期間以某種形式相連，以便將從細(xì)胞的培養(yǎng)物釋放的介質(zhì)/因子在繁殖期間加入到組織中。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其特征在于，所述釋放介質(zhì)或因子細(xì)胞的培養(yǎng)物，優(yōu)選為巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物，在用受體耐受細(xì)胞的繁殖和處理期間通過一種對于細(xì)胞介質(zhì)和/或因子可透過的薄膜、膜或隔離壁保持與培養(yǎng)基分隔，并且所生成的介質(zhì)和/或因子連續(xù)地釋放至所述組織-移植體-培養(yǎng)基中。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8之一項(xiàng)的方法，其特征在于，使用一種合成的組織基質(zhì)作為組織基質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其特征在于，所述使用的組織基質(zhì)包括一種或多種以下材料Polyglactid，聚二噁酮、可生物降解的聚酯、聚氨酯、聚丙烯酸酯、膠原蛋白、血纖維蛋白原。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至8之一項(xiàng)的方法，其特征在于，使用一種自身的或無細(xì)胞化的異種的或同種異體的組織基質(zhì)作為組織基質(zhì)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至11之一項(xiàng)的方法，其特征在于，所述使用的受體耐受細(xì)胞是移植體或植入體受體的自體細(xì)胞。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至11之一項(xiàng)的方法，其特征在于，所述使用的受體耐受細(xì)胞是針對受體作為耐受細(xì)胞而挑選的同種異體細(xì)胞或基因修飾過的同種異體細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明的方法是一種進(jìn)一步發(fā)展的細(xì)胞繁殖方法，根據(jù)該方法生物細(xì)胞在一種合成的或天然的組織基質(zhì)上繁殖以獲得組織植入體或組織移植體。頻繁通過添加介質(zhì)、因子或輔助因子促進(jìn)一般來源于移植體或植入體受體的細(xì)胞的繁殖。根據(jù)本發(fā)明的方法，因子或介質(zhì)是這樣添加的，即特別適于產(chǎn)生所述因子的細(xì)胞，與組織協(xié)同培養(yǎng)。
文檔編號C12N5/10GK1439050SQ01810294
公開日2003年8月27日 申請日期2001年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月29日
發(fā)明者奧古斯蒂努斯·巴德 申請人:奧古斯蒂努斯·巴德