專利名稱：檢測樣品中核酸片段突變的方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測樣品中核酸片段的一個(gè)或多個(gè)突變的方法和裝置，其中該方法包含按適當(dāng)順序進(jìn)行的下列步驟(a)擴(kuò)增存在于樣品中的核酸片段；(b)在使步驟(a)中形成的雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度存在下，通過凝膠電泳分開該核酸片段，以便在凝膠的特定位置固定部分解鏈的核酸片段；以及(c)檢測分開的核酸片段。
例如，這種方法已知用于篩選核酸片段、特別是DNA片段確定的突變。眾所周知，DNA突變可導(dǎo)致遺傳性疾病和/或特定形式的癌癥。因此，證明患者樣品DNA存在這種突變，對于確定該患者是否是特定遺傳病異?；虻臄y帶者，或者進(jìn)行可靠診斷，都是重要的。DNA突變研究對于諸如確定特定類型癌癥的發(fā)生危險(xiǎn)、設(shè)計(jì)腫瘤治療、對于疾病和特定遺傳缺陷之間關(guān)聯(lián)的科學(xué)研究以及組織分型，也是重要的。
為了能夠檢測樣品中核酸片段(例如DNA)的突變，樣品中的核酸片段通常以太低的拷貝數(shù)或作為大的核酸片段的一部分存在于樣品中，必須首先擴(kuò)增，以便獲得足夠的材料。為此目的，一般使用常規(guī)擴(kuò)增方法，例如PCR。擴(kuò)增步驟以后，擴(kuò)增的雙鏈DNA片段必須在檢測前彼此分開。為此，一般使用基于凝膠電泳的方法。但是，現(xiàn)有方法的缺點(diǎn)在于，擴(kuò)增步驟和分開步驟均費(fèi)時(shí)，完成方法需要大量時(shí)間。由于往往必須篩選大量樣品，最好是開發(fā)一種方法，能夠?qū)τ诖罅繕悠房焖?、簡便地檢測樣品核酸片段中存在的一個(gè)或多個(gè)突變。
因此，本發(fā)明目的在于提供檢測樣品中核酸片段的一個(gè)或多個(gè)突變的方法，其中能夠在短時(shí)間內(nèi)檢測大量樣品是否存在突變。
本發(fā)明在凝膠之中或其上進(jìn)行擴(kuò)增步驟(a)，實(shí)現(xiàn)本發(fā)明這個(gè)目的。
在凝膠之中或其上進(jìn)行擴(kuò)增步驟，使本方法能夠短時(shí)內(nèi)完成。在擴(kuò)增步驟之后，立刻在擴(kuò)增后的凝膠上施加電壓，開始電泳，使擴(kuò)增的核酸片段就地彼此分開。因此，在擴(kuò)增步驟完成之后，不再需要將樣品放到凝膠上，進(jìn)行隨后的電泳步驟。在膠上擴(kuò)增的過程中，PCR混合物(通常由酶、引物、核苷酸等組成)置于凝膠上面。此處PCR混合物只在邊界面上與例如丙烯酰胺凝膠接觸。至于膠內(nèi)擴(kuò)增，則PCR混合物位于凝膠內(nèi)。這樣PCR混合物與丙烯酰胺充分接觸。
突變與無突變的核酸片段的大小之間沒有或幾乎沒有差別，因此根據(jù)結(jié)合能的差異使本發(fā)明的不同片段彼此分開。結(jié)合能取決于該片段的核酸組成。若核酸片段存在突變，例如核苷酸置換，其結(jié)合能將不同于無突變片段的結(jié)合能。
為了使帶有突變的核酸片段與無突變核酸片段分開，應(yīng)用引起雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度，例如升高的溫度梯度。由于突變的雙鏈核酸片段與無突變的雙鏈核酸片段結(jié)合能不同，該片段將在不同溫度下變成至少部分單鏈(解鏈)。片段由于至少部分解鏈而定位于凝膠內(nèi)特定位置。由于結(jié)合能的差異，無突變的雙鏈核酸片段定位于凝膠中的位置不同于突變片段。這樣能夠在凝膠中使突變的核酸片段與無突變的核酸片段分開(


圖1)。
為確保片段定位于凝膠中特定位置，不能在引起至少部分解鏈的梯度影響下使雙鏈片段完全解鏈。例如為此目的，可以給一個(gè)擴(kuò)增引物添加富含GC的尾部(″GC夾″；大約15-60個(gè)GC對)。在引起至少部分解鏈的梯度下，GC夾仍保持雙鏈。
然后可以用常規(guī)方法在凝膠中檢測相互分開的片段。例如為此目的，在電泳步驟之前或其間，向樣品中加入可結(jié)合核酸片段的溴化乙錠，借此能利用紫外線使片段可見。但本發(fā)明也可以使用其它已知的檢測方法。
在本發(fā)明方法特別適合的優(yōu)選實(shí)施方案中，該方法包含以下步驟
(d)在步驟(b)之前使樣品中存在的雙鏈核酸片段完全解鏈為單鏈核酸片段，并由這些單鏈核酸片段重新組成雙鏈片段，其中除同源雙鏈(homoduplex)核酸片段之外，還形成異源雙鏈(heteroduplex)核酸片段。
如果兩個(gè)″正?！?即無突變)的單鏈核酸片段或兩個(gè)突變的單鏈核酸片段配對形成雙鏈核酸片段，產(chǎn)生同源雙鏈核酸片段(下文稱為同源雙鏈片段)。如果一個(gè)正常的單鏈核酸片段與一個(gè)突變的單鏈核酸片段配對，形成異源雙鏈核酸片段(下文稱為異源雙鏈片段)(圖2)。由于兩條鏈不完全互補(bǔ)，異源雙鏈片段比同源雙鏈片段的結(jié)合能低。
例如，通過加熱樣品使雙鏈片段解鏈，再冷卻樣品使單鏈片段重新形成雙鏈核酸片段，可以實(shí)現(xiàn)將雙鏈核酸片段完全解鏈為單鏈片段，并由這些單鏈片段重新組成雙鏈核酸片段，然后利用凝膠電泳彼此分開。
如上所述，然后在引起片段部分解鏈的梯度下，根據(jù)其結(jié)合能的差異，使不同的核酸片段互相分開。鑒于異源雙鏈片段的結(jié)合能低于同源雙鏈，因而部分解鏈，并很快定位于凝膠中。
如果存在雜合突變，將形成四個(gè)不同的雙鏈核酸片段，兩個(gè)同源雙鏈片段和兩個(gè)異源雙鏈片段，如圖2所示。異源雙鏈片段的特征在于至少一個(gè)堿基不配對，也就是說，不能與對應(yīng)堿基結(jié)合。兩個(gè)異源雙鏈片段具有較低的結(jié)合能，因而將比同源雙鏈片段更早地部分解鏈，并定位于凝膠中不同的特定位置。由于該堿基對影響相鄰堿基對的結(jié)合能(對緊相鄰的堿基對影響較多，較遠(yuǎn)的堿基對影響較少)，兩個(gè)不同的異源雙鏈片段應(yīng)具有不同的結(jié)合能。由于兩種異源雙鏈片段結(jié)合能的相對差異，它們在凝膠中不同位置解鏈(例如不同溫度)，并因而定位于不同的位置。按這樣的方式，例如可以相互分開不同的等位基因。
本發(fā)明方法進(jìn)行的電泳優(yōu)選毛細(xì)管電泳。該方法基于在毛細(xì)管中放置凝膠，例如聚丙烯酰胺。將樣品放置在毛細(xì)管中，然后對毛細(xì)管施加電壓。樣品中的分子根據(jù)其大小和/或電荷，以不同的速度在毛細(xì)管中遷移，從而彼此分離。毛細(xì)管電泳的優(yōu)點(diǎn)在于，由于可以給毛細(xì)管中的凝膠施加較高的電壓，分子(此處為核酸片段)可以在毛細(xì)管中更快遷移。因而可以在非常短的時(shí)間內(nèi)完成電泳步驟。這是由于毛細(xì)管很細(xì)，故毛細(xì)管中凝膠的電阻高。在凝膠上存在高電壓時(shí)，電流及因而的熱量產(chǎn)生會保持低。此外毛細(xì)管的表面積與體積比很高，以致可以更容易、更快速地釋放產(chǎn)生的熱量。也可以在毛細(xì)管中放置粘度更低的凝膠(幾乎是液體)。因此可以選擇更低密度的以及固體凝膠基質(zhì)。另外的優(yōu)點(diǎn)在于，能夠分析非常小的樣品，當(dāng)?shù)玫降牟牧陷^少時(shí)，這點(diǎn)尤其重要。
由于毛細(xì)管壁很薄以及表面積體積比高，還可能快速傳遞熱量，并能夠施加急劇升降的溫度梯度。因此，擴(kuò)增步驟可能很快速，從而能夠相當(dāng)快速地完成本發(fā)明方法。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本方法進(jìn)一步包含(e)在步驟(b)之后改變電泳條件，以使至少部分解鏈的核酸片段重新變?yōu)殡p鏈，使分開的核酸片段以幾乎相同的速度，從其膠中特定位置進(jìn)一步遷移。
優(yōu)選在其離開毛細(xì)管時(shí)檢測此處分開的核酸片段。分開的核酸片段通過進(jìn)一步電泳，不同片段將按確定順序離開毛細(xì)管。例如，此處可以在分開以前標(biāo)記核酸片段，例如熒光標(biāo)記，并在片段離開毛細(xì)管之前或當(dāng)時(shí)立刻用正確波長的激光激發(fā)，而自動檢測片段。然后利用光電管檢測熒光。用于DNA片段的標(biāo)記可由熒光材料制成，不過也可能使用其它形式的標(biāo)記。通過標(biāo)記片段，該方法變得更加敏感，需要的材料更少。
然而，例如片段在毛細(xì)管內(nèi)遷移過程中，其它本身已知的檢測形式也是可能的。例如，有可能在不同時(shí)刻將毛細(xì)管暴露于紫外光，利用照相機(jī)進(jìn)行記錄。這樣也可以確定片段在凝膠中的特定位置。
本發(fā)明方法特別適合的優(yōu)選實(shí)施方案另外包含從凝膠中分離已分開的核酸片段。該分離的片段可以隨后用于進(jìn)一步分析，例如序列測定。
例如可以在其離開毛細(xì)管時(shí)分離分開的核酸片段。另一分離方法包括在確定毛細(xì)管內(nèi)特定位置(例如，如上所述使用照相機(jī))之后，從凝膠中分離片段。例如，為此可以在正確位置斷開(一次性使用的)毛細(xì)管，然后從該段毛細(xì)管殘留的凝膠中分離核酸片段。例如，可以利用該方法分選分開的等位基因。
本發(fā)明引起雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度優(yōu)選溫度梯度。通過漸進(jìn)或分段式提高溫度，有可能以簡單方法實(shí)現(xiàn)雙鏈核酸片段根據(jù)其結(jié)合能解鏈，從而定位于凝膠中特定位置。例如溫度梯度可以從毛細(xì)管上端作用到下端，但也可以是按時(shí)間(即實(shí)驗(yàn)的由始至終)作用的溫度梯度。
本發(fā)明方法的另一個(gè)特別適合的實(shí)施方案中，引起至少部分解鏈的梯度是化學(xué)梯度。
此處優(yōu)選由尿素和甲酰胺形成的化學(xué)梯度。升高尿素和甲酰胺的濃度，核酸片段將會解鏈，具有較低的結(jié)合能的片段將更快定位于凝膠中。
除上述梯度以外，本發(fā)明還可以應(yīng)用引起雙鏈片段解鏈的其它梯度。如果引起部分解鏈的梯度由溫度梯度和化學(xué)梯度聯(lián)合組成，則得到本方法另一優(yōu)選實(shí)施方案。
本發(fā)明方法特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，只要核酸片段已經(jīng)彼此分開并定位于凝膠中特定位置，就如上所述改變電泳條件，以使部分解鏈的核酸片段重新變?yōu)殡p鏈，使分開的片段從其毛細(xì)管中特定位置按相同速度進(jìn)一步遷移。此處改變電泳條件優(yōu)選包括降低溫度。通過降低毛細(xì)管的溫度，部分解鏈的片段將再次變?yōu)殡p鏈，以幾乎相同的相對速度，從其凝膠的特定位置進(jìn)一步遷移，并按確定順序離開毛細(xì)管。突變的雙鏈核酸片段的大小與無突變核酸片段的大小沒有或幾乎沒有差別，故其相對速度相同。
如果核酸片段在凝膠中的分開受到應(yīng)用化學(xué)或其它梯度的影響，那么可以按同樣方法在分開之后降低溫度，使至少部分解鏈的片段再次成為雙鏈。
希望檢測其核酸中一個(gè)或多個(gè)突變的樣品可以由來自個(gè)體的任何適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)組成，如血液、精液、唾液和/或各種組織細(xì)胞，其中遺傳物質(zhì)以核酸形式存在，例如DNA和/或RNA?？梢允紫忍幚順悠罚苑蛛x核酸。根據(jù)技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法提取并純化核酸。如果樣品中核酸由單鏈片段，例如RNA組成，必須首先利用已知方法制成雙鏈核酸片段。例如就RNA而言，為此可以使用已知的PT-PCR方法。
本申請中術(shù)語″突變″涉及核酸片段相對于″正?！?野生型)遺傳物質(zhì)的任何改變。此處突變核酸的核苷酸序列顯示與相應(yīng)非突變核酸的核苷酸序列的一個(gè)或多個(gè)差異。例如這種突變可以是點(diǎn)突變(通常其中單個(gè)堿基對不同，一般替換為另一堿基對)，或者插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸。本發(fā)明術(shù)語突變還另外涉及所謂的多態(tài)性，即在自然群體中發(fā)生的對于某一確定基因的等位基因差異。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及并提供可以用來實(shí)現(xiàn)上述方法的裝置。
本發(fā)明裝置包含若干裝有凝膠的毛細(xì)管(其中毛細(xì)管內(nèi)凝膠的上下兩端與帶電極的液池接觸)、在凝膠上施加電壓的電壓源、電泳過程中改變電泳條件的設(shè)備、以及檢測分開的DNA片段的設(shè)備。本發(fā)明方法的裝置可以簡單快速地使用。
本發(fā)明裝置的優(yōu)選實(shí)施方案中，該裝置包含大量毛細(xì)管，其中毛細(xì)管中凝膠的上端與一個(gè)基本上所有毛細(xì)管的共用液池接觸，共用液池中裝有電極，毛細(xì)管中每個(gè)凝膠的下端與分開的液池接觸，在每個(gè)分開的液池中裝有電極。
利用合適的內(nèi)設(shè)電壓源，在毛細(xì)管內(nèi)凝膠的電極之間施加電壓。作用于凝膠的電壓可以但不必須變化。
可用于本發(fā)明裝置中的檢測設(shè)備可以是例如層析中常用的常規(guī)檢測設(shè)備，如紫外/可見光分光光度計(jì)。因更敏感而優(yōu)選使用熒光檢測設(shè)備。然而為此目的，必須首先標(biāo)記樣品中核酸片段。
本發(fā)明改變毛細(xì)管電泳條件的設(shè)備，優(yōu)選由電泳期間改變毛細(xì)管溫度的設(shè)備組成。
本發(fā)明裝置中，改變溫度的設(shè)備優(yōu)選包含所謂的珀?duì)柼?Peltier)元件夾緊毛細(xì)管，或者珀?duì)柼@在毛細(xì)管上。珀?duì)柼蓛煞N不同的金屬條組成。通過改變該元件電流的強(qiáng)度和/或方向，該元件既可冷卻又可加熱(所謂的珀?duì)柼?yīng)(Peltier effect))。其它可以在電泳期間改變毛細(xì)管溫度的設(shè)備也可以，例如加熱毛細(xì)管周圍區(qū)域的加熱設(shè)備，如(鹵素)燈，以及例如沿著毛細(xì)管吹冷空氣以降低毛細(xì)管溫度的冷卻設(shè)備，如風(fēng)扇。
由于每個(gè)毛細(xì)管的凝膠下端與分開的液池接觸，在一個(gè)特定片段離開毛細(xì)管以后，通過更換液池的簡單方法，可以分離分開的核酸片段。液池含有已知的標(biāo)準(zhǔn)電泳緩沖液，能夠利用已知方法，例如沉淀或濃縮，從中回收分離的核酸片段，并用作進(jìn)一步分析。
該裝置特別適當(dāng)?shù)膬?yōu)選實(shí)施方案中，至少一根毛細(xì)管裝有測量溫度的設(shè)備。擴(kuò)增步驟中必須快速并盡可能精確地調(diào)節(jié)毛細(xì)管的溫度。通過在毛細(xì)管中安裝溫度測量設(shè)備，獲得擴(kuò)增步驟過程中毛細(xì)管現(xiàn)時(shí)(prevailing)溫度的極可靠指示。
此處包含適于此目的的任何方式的溫度測量設(shè)備。溫度測量設(shè)備優(yōu)選包含安裝在至少一個(gè)毛細(xì)管中的鉑電阻絲。例如此處毛細(xì)管可以充滿水并密封，以便得到與其它毛細(xì)管的熱容量幾乎相同的毛細(xì)管。
該裝置進(jìn)一步特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，毛細(xì)管包被引物和dNTPs，以便在毛細(xì)管凝膠之中或其上擴(kuò)增樣品中的核酸片段。這樣毛細(xì)管上只需上樣待檢測其中突變的樣品和聚合酶。毛細(xì)管更優(yōu)選包被引物、dNTPs和聚合酶。
本發(fā)明也涉及并提供用于上述方法和裝置的毛細(xì)管，其中該毛細(xì)管包被引物和dNTPs，更優(yōu)選包被引物、dNTPs和聚合酶。例如，為此目的使用內(nèi)側(cè)包被的一次性毛細(xì)管。
本發(fā)明進(jìn)一步參照附圖進(jìn)行說明，其中
圖1顯示部分解鏈的DNA片段的示意圖(本發(fā)明方法的步驟b)；圖2顯示同源和異源雙鏈的形成示意圖(本發(fā)明方法的步驟d)；圖3顯示本發(fā)明裝置優(yōu)選實(shí)施方案的示意圖(局部橫截面)；
圖4顯示圖3的細(xì)節(jié)；以及圖5為本發(fā)明裝置另一合適的優(yōu)選方案的局部橫截面的示意圖。
如圖3所示，裝置1在容器3內(nèi)包含很多毛細(xì)管2，其中毛細(xì)管內(nèi)裝有凝膠。毛細(xì)管2中凝膠的上端4和下端5與液池6、7接觸，其中分別裝有陰極8和陽極9。毛細(xì)管2中凝膠的上端4與毛細(xì)管的共用液池6(其中帶有陰極8)接觸，每個(gè)毛細(xì)管2中凝膠的下端5與分開的液池7接觸，其中每個(gè)分開的液池7裝有陽極9。其更多細(xì)節(jié)如圖4所示。裝置1進(jìn)一步包含電壓源10以及改變溫度的設(shè)備11，其由所謂的珀?duì)柼糠纸M成，固定夾緊毛細(xì)管，其示意圖也如圖4所示。
圖4所示優(yōu)選實(shí)施方案中帶有設(shè)備12，用來檢測分開的核酸片段，在核酸片段離開毛細(xì)管2時(shí)檢測它們。例如，檢測設(shè)備包含二極管激光器13，其激發(fā)標(biāo)記的核酸片段，由熒光檢測器12檢測其中片段發(fā)射的熒光。
圖5顯示本發(fā)明裝置的另一個(gè)有利的實(shí)施方案。此處裝置1同樣包含很多裝有凝膠的毛細(xì)管2，其上端4接觸所有毛細(xì)管的共用液池6(其中裝有陰極8)，其下端5接觸分開的液池7(其中裝有分開的陽極9)。此實(shí)施方案中的改變溫度的設(shè)備11由提高毛細(xì)管溫度的加熱設(shè)備(未顯示)，以及沿著毛細(xì)管吹出冷空氣的冷卻設(shè)備構(gòu)成。
本發(fā)明方法中的檢測方法使用諸如紫外曝光和高分辨率CCD照相機(jī)。例如可以用此方法檢測EtBr或SyBr-金標(biāo)記的片段。例如可以利用彩色CCD照相機(jī)檢測熒光標(biāo)記的片段；此處使用濾光片阻擋紫外線。以后利用合適的軟件，可以見到不同顏色。
權(quán)利要求
1.檢測樣品中核酸片段的一個(gè)或多個(gè)突變的方法，其包含按適當(dāng)順序進(jìn)行的下列步驟(a)擴(kuò)增樣品中存在的核酸片段；(b)通過凝膠電泳設(shè)備，在引起步驟(a)中形成的雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度存在下分開該核酸片段，以使部分解鏈的核酸片段定位于凝膠中特定位置；以及(c)檢測分開的核酸片段，其特征在于在凝膠之中或其上進(jìn)行擴(kuò)增步驟(a)。
2.權(quán)利要求1的方法，其特征在于該方法另外包含(d)在步驟(b)之前使樣品中存在的雙鏈核酸片段完全解鏈為單鏈核酸片段，并由這些單鏈核酸片段重新組成雙鏈片段，其中除同源雙鏈核酸片段之外，還形成異源雙鏈核酸片段。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于該凝膠電泳是毛細(xì)管凝膠電泳。
4.權(quán)利要求1、2或3的方法，其特征在于該方法另外包含(e)在步驟(b)之后改變電泳條件，以使至少部分解鏈的核酸片段重新變?yōu)殡p鏈，使分開的核酸片段從其凝膠中特定位置以幾乎相同的速度進(jìn)一步遷移。
5.權(quán)利要求3或4中任一項(xiàng)的方法，其特征在于分開的核酸片段在其離開毛細(xì)管時(shí)被檢測。
6.上述權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其特征在于該方法另外包含從凝膠中分離分開的核酸片段。
7.上述權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其特征在于凝膠中引起雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度為溫度梯度。
8.上述權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其特征在于引起雙鏈核酸片段至少部分解鏈的梯度為化學(xué)梯度。
9.權(quán)利要求8的方法，其特征在于該化學(xué)梯度由尿素和甲酰胺形成。
10.權(quán)利要求7、8或9的方法，其特征在于該梯度由溫度梯度和化學(xué)梯度聯(lián)合組成。
11.上述權(quán)利要求2-10中任一項(xiàng)的方法，其特征在于改變電泳條件，包括降低凝膠溫度，以使至少部分解鏈的核酸片段重新形成雙鏈核酸片段。
12.上述權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其特征在于樣品包含來自個(gè)體的遺傳物質(zhì)，例如血液、精液、唾液和/或組織細(xì)胞，其中該遺傳物質(zhì)以核酸形式存在。
13.檢測樣品中核酸片段一個(gè)或多個(gè)突變的裝置，包含很多裝有凝膠的毛細(xì)管，其中毛細(xì)管內(nèi)凝膠的上下兩端與帶電極的液池接觸，以及在凝膠上施加電壓的電壓源、電泳過程中改變電泳條件的設(shè)備和檢測分開的DNA片段的設(shè)備。
14.權(quán)利要求13的裝置，其特征在于毛細(xì)管內(nèi)凝膠的上端接觸一個(gè)基本上所有毛細(xì)管的共用液池，其中在共用液池內(nèi)裝有電極，每個(gè)毛細(xì)管凝膠的下端接觸分開的液池，其中每個(gè)分開的液池中裝有電極。
15.權(quán)利要求13或14的裝置，其特征在于改變毛細(xì)管電泳條件的設(shè)備是改變毛細(xì)管溫度的設(shè)備。
16.權(quán)利要求15的裝置，其特征在于改變溫度的設(shè)備包含珀?duì)柼?br> 17.上述權(quán)利要求13-16中任一項(xiàng)的裝置，其特征在于至少一個(gè)毛細(xì)管中裝有溫度測量設(shè)備。
18.權(quán)利要求17的裝置，其特征在于溫度測量設(shè)備包含裝在至少一個(gè)毛細(xì)管中的鉑電阻絲。
19.權(quán)利要求13-18中任一項(xiàng)的裝置，其特征在于毛細(xì)管包被有引物和dNTPs，用于在凝膠中擴(kuò)增樣品中的核酸片段。
20.權(quán)利要求13-19中任一項(xiàng)的裝置，其特征在于毛細(xì)管另外包被有聚合酶，用于在凝膠中擴(kuò)增樣品中的核酸片段。
21.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)方法和/或權(quán)利要求13-20中任一項(xiàng)裝置所使用的毛細(xì)管，其特征在于毛細(xì)管包被有引物和dNTPs。
22.權(quán)利要求21的毛細(xì)管，其特征在于該毛細(xì)管另外包被有聚合酶。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測核酸樣品(例如血液、精液、唾液、細(xì)胞…)多態(tài)性的方法和裝置。為提高已知方法(例如DGGE、SSCP和TGGE)的效率和可靠性，實(shí)際檢測步驟以前在聚丙烯酰胺凝膠之中或其上進(jìn)行擴(kuò)增過程(例如PCR)。通過凝膠平板區(qū)帶電泳或毛細(xì)管電泳，使用(化學(xué)變性劑、熱變性劑以及多孔性凝膠基質(zhì))多種梯度分離DNA片段。
文檔編號C12M1/00GK1461348SQ00820035
公開日2003年12月10日 申請日期2000年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月23日
發(fā)明者G·J·德沃斯 申請人:因哲尼控股公司