專利名稱：一種耐高硒菌種及其制備方法和該菌種在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療地方病的微生物及其制備方法以及該微生物在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用，具體的說，本發(fā)明涉及一種治療砷中毒的耐高硒菌種及其制備方法以及該耐高硒菌種在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用。
地方性砷中毒在許多國家流行，是嚴(yán)重威脅人類健康的常見多發(fā)性疾病之一，其危害不僅表現(xiàn)為近期對(duì)健康的損害，尤為嚴(yán)重的是引起人體全身性多生理系統(tǒng)損傷和遠(yuǎn)期惡性化改變——癌變、突變和畸變，因此對(duì)砷中毒的預(yù)防和治療為世界衛(wèi)生組織和我國政府所高度重視。
60年代在我國臺(tái)灣即發(fā)現(xiàn)有地方性砷中毒病的流行，在80年代以后陸續(xù)發(fā)現(xiàn)新疆、內(nèi)蒙古、貴州、山西等省也有地方性砷中毒病的流行，而且病區(qū)不斷擴(kuò)大，病情日趨嚴(yán)重。
目前，治療、防治地方性砷中毒病的方法大致有兩種，其一是切斷高砷水源，改飲低砷水。實(shí)踐證明，改飲低砷水的方法雖有一定作用，但不能有效地排除人體蓄積的過量砷和修復(fù)受損組織。同時(shí)在某些地區(qū)，需要打井取水，使得固定設(shè)備投資較大，在我國目前經(jīng)濟(jì)條件下，很難保證各地區(qū)在經(jīng)濟(jì)上都能承受這么大的負(fù)擔(dān)；另外，由于打井取水時(shí)，機(jī)井水中的含砷量難以預(yù)測(cè)，使得打井取水在實(shí)際中的操作難度較大。第二種方法是服用藥物；目前我國常用的用于重金屬中毒的急救藥物是巰基化合物，但巰基化合物的毒副作用比較大，該藥物不能長(zhǎng)期使用，對(duì)體征和受損組織沒有明顯修復(fù)作用。另外一個(gè)實(shí)出的問題是，巰基化合物對(duì)于地方性砷中毒可能發(fā)生的遠(yuǎn)期惡性改變均無預(yù)防效果，而只能用于急性救治。
硒是人體和動(dòng)物必須的微量元素，谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分，人體內(nèi)硒含量的失調(diào)可以引發(fā)一些疾病，例如克山病、大骨節(jié)病、癌癥、心腦血管病、硒缺乏癥、糖尿病、質(zhì)褐質(zhì)素沉淀、微循環(huán)障礙、白內(nèi)障或免疫和生殖系統(tǒng)機(jī)能低下等。
硒和砷可以互為解毒劑，且硒具有抑制和抗癌變、突變、畸變的藥物學(xué)特性。但無機(jī)硒制劑是劇毒物，臨床應(yīng)用有一定的危險(xiǎn)性。因此，尋求低毒高效硒制劑應(yīng)用于醫(yī)藥工業(yè)和臨床治療一直是許多國家的藥物學(xué)家、化學(xué)家多年探索的目標(biāo)。
綜上所述，目前對(duì)于地方性砷中毒沒有切實(shí)有效的防治方法。因此，尋找一種高效、價(jià)廉、服用簡(jiǎn)便、易于推廣應(yīng)用的治療地方性砷中毒的藥物，是一個(gè)非常緊迫的問題。尋找一種能夠應(yīng)用于治療地方性砷中毒的微生物也成為研究人員所迫切需要解決的問題。
本發(fā)明的目的之一在于提供一種耐高硒菌種，該菌種具有較高生物活性且其毒性大幅度降低，所述的耐高硒菌種可以在50PPM的硒培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)。
本發(fā)明的目的之二在于提供所述的耐高硒菌種的制備方法。
本發(fā)明的目的之三在于提供所述的耐高硒菌種在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用。
下面將詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，已在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)保藏，保藏號(hào)為CGMCC NO.0454，保藏日期為2000年5月31日。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種可以在50PPM的硒培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)，并可以在50PPM的硒基質(zhì)中進(jìn)行批量生產(chǎn)，產(chǎn)品酵母中硒含量＞4000PPM，該產(chǎn)品酵母的蛋白質(zhì)含量＞38.0％。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種的其他生理生化指標(biāo)與普通醫(yī)用酵母相同。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種(釀酒酵母CGMCC NO.0454)通過菌種初選、復(fù)選和馴化培養(yǎng)過程制得。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種采用如下篩選和培養(yǎng)程序一、初選菌種本發(fā)明所述的初選菌種可以選自不同種類的釀酒酵母，其中包括各種啤酒酵母或白酒酵母。一般情況下，可以選用5—6種釀酒酵母作為篩選的初選菌種。
二、培養(yǎng)基將商品飴糖(大米或玉米飴糖，28℃，39—40°波美度)稀釋至6—7°波美度，加入1％KH2PO4、5‰(NH4)2SO4和2—3％的瓊脂，1pt×20min滅菌后，加入硒溶液，使培養(yǎng)基中的硒濃度達(dá)到所需的濃度，經(jīng)搖勻后，制成斜面或平面培養(yǎng)皿；將其中的瓊脂去除，即得到液體基質(zhì)。所述的硒溶液可以用Na2SeO3以蒸餾水配制。
三、篩選程序(1)復(fù)選將選取的初選菌種分別接種于150ml的基質(zhì)中，在搖床上于28℃，振幅為60—90次/分的條件下培養(yǎng)2天進(jìn)行復(fù)蘇，然后將復(fù)蘇了的各菌種分別接種在含硒量為5、50、100、200、300、400和500PPM的平面培養(yǎng)基上，在28℃—30℃條件下培養(yǎng)2—3天，選取其中2—3個(gè)在硒濃度較高的培養(yǎng)基上尚可生長(zhǎng)的菌種作為復(fù)選菌種。
(2)馴化培養(yǎng)a.將選取的復(fù)選菌種接種在10PPM硒的平面培養(yǎng)基中，在28℃—30℃條件下培養(yǎng)3天；然后轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中，以相同的條件繼續(xù)培養(yǎng)3天；然后再轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況旺盛為止。
b.將在10PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為50PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
c.將在50PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為100PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
d.將在100PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為200PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
e.將在200PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為300PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
f.將在300PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為400PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
g.將在400PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為500PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
h.選取在500PPM的硒環(huán)境下仍可正常生長(zhǎng)的菌種，即得到本發(fā)明所述的耐高硒菌種。
在本發(fā)明所述的復(fù)選菌種從10PPM硒培養(yǎng)基上馴化結(jié)束至轉(zhuǎn)移到含硒量為50PPM的培養(yǎng)基上以前，可以在含硒量為20PPM、30PPM、40PPM的培養(yǎng)基上分別重復(fù)馴化步驟一次或幾次。，以逐步提高復(fù)選菌種對(duì)硒的耐受性。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種在硒一飴糖瓊脂或硒一麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上于28℃一30℃上培養(yǎng)2—3天后，可以見到橙紅色、圓形突起菌落，表面濕潤、粘稠，并散發(fā)有醇香氣味，表明該菌種具有可使低糖轉(zhuǎn)化為酒精和二氧化碳的生理特征，在鏡下成不規(guī)則圓形。本發(fā)明所述的耐高硒菌種除可以在含硒量50PPM以上正常生長(zhǎng)，并呈橙紅色外，其他生理、生化特性均與普通釀酒酵母相同。
本發(fā)明所述的篩選程序是根據(jù)生物學(xué)上生物對(duì)環(huán)境逐步適應(yīng)的原理而設(shè)計(jì)的；在每個(gè)培養(yǎng)周期中經(jīng)多代繁殖，使酵母菌種逐步獲得耐高硒的特性；隨著環(huán)境硒濃度的提高、培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，菌種的耐硒特性也日趨穩(wěn)定。本發(fā)明所述的篩選過程是經(jīng)過多個(gè)硒濃度梯度、多天培養(yǎng)，最后形成新的耐高硒菌種，并應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種可以在防治砷中毒的藥中的得到應(yīng)用。
本發(fā)明所述的耐高硒菌種在不同硒基質(zhì)中生產(chǎn)的硒酵母的含硒量數(shù)值列入在表1中。
表1
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述的耐高硒菌種具有特殊的耐硒性，對(duì)無機(jī)硒的吸收隨培養(yǎng)基質(zhì)中硒含量的增加而增加；可以看出，生產(chǎn)出的硒酵母的含硒量與基質(zhì)中的硒濃度呈顯著的正比關(guān)系。
無機(jī)硒含量的多少是影響硒酵母產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一，可以采用如下所述的方法來測(cè)定硒酵母中的無機(jī)硒含量在離心管中加入成品硒酵母和適量的去離子水，搖動(dòng)5分鐘，離心，取上清液，測(cè)定其可溶性硒含量。
硒酵母中硒的形態(tài)直接關(guān)系到硒的生物學(xué)活性。有關(guān)硒酵母中硒的形態(tài)目前尚未完全清楚其確切組份和結(jié)構(gòu)。目前經(jīng)典的方法是透析法。
表2為用0.1N NaOH透析硒酵母的結(jié)果。
表2
表2的結(jié)果表明，保留在硒酵母中的硒約58％。這部分硒主要是蛋氨酸形態(tài)的蛋白質(zhì)或其他大分子態(tài)的有機(jī)硒，透析的硒則是非結(jié)合態(tài)的硒氨基酸、硒谷胱甘肽等小分子量的有機(jī)態(tài)硒和少量未同化的無機(jī)態(tài)硒。
表3為本發(fā)明所述的硒酵母的動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
表3
由表3可以得知，本發(fā)明所述的硒酵母其半數(shù)致死量LD50為11.72±0.5g/kg，經(jīng)計(jì)算，折合純硒為62.668mg/kg，硒酵母的最小致死量為8.60g/kg。目前常用的無機(jī)態(tài)亞硒酸鈉的LD50為8.77—14.560mg/kg，硒酵母的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于亞硒酸鈉，僅為亞硒酸鈉的1/4，因此，可以保證臨床使用的安全性。
經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明的硒酵母對(duì)動(dòng)物的自由活動(dòng)、血壓、心率、呼吸頻率和深度均沒有明顯影響。硒酵母對(duì)生物體無致突變作用，不引起染色體畸變頻率的升高，亦不誘發(fā)微核率升高。
人體對(duì)硒酵母的相對(duì)生物利用率列入在表4中表4
用于治療地方性砷中毒過程中體征和臨床癥狀綜合療效的比較情況列入在表5中。
表5
用于治療地方性砷中毒過程中體征和臨床癥狀轉(zhuǎn)歸的比較情況列入在表6中。
表6
用于治療地方性砷中毒過程中肝功陽性轉(zhuǎn)歸的比較情況列入在表7中。
表7
用于治療地方性砷中毒過程中肝B超異常轉(zhuǎn)歸的比較情況列入在表8中。
表8
用于治療地方性砷中毒過程中治療前后心電圖轉(zhuǎn)歸的比較情況列入在表9中。
表9
用于治療地方性砷中毒過程中治療前后甲皺微循環(huán)變化的比較情況列入在表10中。
表10
用于治療地方性砷中毒過程中治療前后紅細(xì)胞電鏡觀察結(jié)果的比較情況列入在表11中。
表11
用于治療地方性砷中毒過程中全血GSHPX的動(dòng)態(tài)比較情況列入在表12中。
表12 (單位活力單位)
用于治療地方性砷中毒過程中治療前后SOD酶變化的比較情況列入在表13中。表13 (單位ng/mg.Hb)
用于治療地方性砷中毒過程中血、尿、發(fā)中砷、硒的動(dòng)態(tài)變化情況列入在表14中。
表14
使用本發(fā)明所述的制備方法得到的硒酵母中的含硒量大約為4000PPM。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)1.本發(fā)明利用現(xiàn)代生物技術(shù)將無機(jī)硒化合物轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒化合物使其毒性大幅降低，并使生物活性得到了較大的提高。
2.本發(fā)明所述的有機(jī)硒酵母的生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉。
3.有機(jī)硒酵母不僅可以用于治療慢性砷中毒，還可以應(yīng)用于預(yù)防由于慢性砷中毒引起的遠(yuǎn)期惡性化改變；也就是說該硒酵母不僅具有化學(xué)治療作用，還具有化學(xué)預(yù)防作用。
4.目前，普通菌種只能在5PPM的條件下生產(chǎn)，所產(chǎn)酵母中的硒含量為500PPM左右；而本發(fā)明的硒酵母在50PPM的條件下生產(chǎn)，酵母中的有機(jī)硒含量超過95％，硒含量可以達(dá)到4000PPM以上，因此，可以大大減少成品制劑中硒酵母原料的用量，也就降低了生產(chǎn)的成本。
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步地描述本發(fā)明，以促進(jìn)對(duì)本發(fā)明更深入地理解。但是本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員在本發(fā)明精神的指引下，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改或改進(jìn)，均屬顯而易見。本發(fā)明的保護(hù)范圍在權(quán)利要求書中提出。
將前述的菌種分別接種于150ml的基質(zhì)中，在搖床上于28℃，振幅為80次/分的條件下培養(yǎng)2天進(jìn)行復(fù)蘇，然后將復(fù)蘇了的各菌種分別接種在含硒量為5、50、100、200、300、400和500PPM的平面培養(yǎng)基上，在30℃條件下培養(yǎng)3天，選取其中3個(gè)在硒濃度較高的培養(yǎng)基上尚可生長(zhǎng)的菌種作為復(fù)選菌種。
a.將選取的復(fù)選菌種接種在10PPM硒的平面培養(yǎng)基中，在30℃條件下培養(yǎng)3天；然后轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中，以相同的條件繼續(xù)培養(yǎng)3天；然后再轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況旺盛為止。
b.將在10PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為50PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
c.將在50PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為100PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
d.將在100PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為200PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
e.將在200PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為300PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
f.將在300PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為400PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
g.將在400PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為500PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止。
h.選取在500PPM的硒環(huán)境下仍可正常生長(zhǎng)的菌種，即得到本發(fā)明所述的耐高硒菌種。
權(quán)利要求
1.一種耐高硒菌種(Saccharomyces cerevisiae)，其保藏號(hào)為CGMCC N0.0454。
2.一種耐高硒菌種(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC NO.0454的制備方法，其特征在于，所述的耐高硒菌種通過菌種初選、復(fù)選和馴化培養(yǎng)過程制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的菌種初選過程的菌種選用啤酒酵母或白酒酵母。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的復(fù)選過程選取2或3個(gè)在硒濃度較高的培養(yǎng)基上尚可生長(zhǎng)的菌種作為復(fù)選菌種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的馴化培養(yǎng)過程為a.將選取的復(fù)選菌種接種在10PPM硒的平面培養(yǎng)基中，在28℃—30℃條件下培養(yǎng)3天；然后轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中，以相同的條件繼續(xù)培養(yǎng)3天；然后再轉(zhuǎn)移到另一新的10PPM相同的平面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況旺盛為止；b.將在10PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為50PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；c.將在50PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為100PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；d.將在100PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為200PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；e.將在200PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為300PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；f.將在300PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為400PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；g.將在400PPM硒培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定的菌種轉(zhuǎn)移到含硒量為500PPM的培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天；如a步驟的方法，重復(fù)上述步驟2次，直到菌種長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定為止；h.選取在500PPM的硒環(huán)境下仍可正常生長(zhǎng)的菌種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，復(fù)選菌種從10PPM硒培養(yǎng)基上馴化結(jié)束至轉(zhuǎn)移到含硒量為50PPM的培養(yǎng)基上以前，在含硒量為20PPM、30PPM、40PPM的培養(yǎng)基上分別重復(fù)馴化步驟一次或幾次。
7.一種權(quán)利要求1所述的耐高硒菌種在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種耐高硒菌種,通過菌種初選、復(fù)選和馴化培養(yǎng)過程制得;該菌種具有較高生物活性且其毒性大幅度降低,所述的耐高硒菌種可以在50PPM的硒培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)。本發(fā)明還提供所述的耐高硒菌種的制備方法以及所述的耐高硒菌種在防治砷中毒的藥中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N1/16GK1330139SQ00109218
公開日2002年1月9日 申請(qǐng)日期2000年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月15日
發(fā)明者侯少范, 王五一, 楊林生, 李德珠 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院地理研究所