一種茄子花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基及配制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種茄子花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基及配制方法，具體設(shè)及一種可W顯著提高茄 子花藥培養(yǎng)效率的花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其配制方法，屬于農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 茄子（Solanum melongene L.)，別名落蘇、伽、酪酥、昆侖瓜、小瀟等，是茄科茄屬 W漿果為產(chǎn)品的一年生草本植物。茄子起源于亞洲東南的印度、細甸及其臨近的熱帶地區(qū)。 古印度為最早的馴化地，至今印度仍有茄子野生種和近源種。茄子除鮮食外，還可W加工制 成醬茄子、騰茄或茄子干等。茄子果實富含人體所需的蛋白質(zhì)、維生素、粗纖維和礦物質(zhì)等， 特別是其中富含的維生素 P在果蔬中含量最高，可W增加毛細血管的彈性和細胞間的黏力， 防止微血管破裂，特有的維生素 D可W降低血液中的膽固醇含量，經(jīng)常食用茄子可防止動脈 硬化和屯、血管疾病，還能增強肝臟生理功能，預(yù)防多種肝臟疾病，是一種良好的保健蔬菜。
[0003] 茄子在全世界都有分布，W亞洲最多，占世界總產(chǎn)量的74%。茄子在我國栽培歷史 悠久，類型品種繁多，是我國非常重要的果菜類蔬菜，在我國南北各地普遍栽培，2005年種 植面積達到105.4萬公頃，栽培面積在蔬菜作物中排第四位，產(chǎn)量居世界之首，是我國夏秋 的主要栽培蔬菜之一。茄子除了作為一種重要的果菜類蔬菜外，在遺傳育種、細胞學(xué)等方面 也是很重要的研究對象，因此，開展茄子育種一直是蔬菜育種領(lǐng)域的重點工作。
[0004] 我國的茄子育種方式一直W來都W常規(guī)雜交育種為主，周期長、見效慢，不能切實 滿足生產(chǎn)上對茄子良種的迫切需求，單倍體育種是解決運一問題的重要的育種方法之一。 單倍體育種可W大大提高育種選擇的效率，縮小育種群體的規(guī)模，并縮短育種年限?；ㄋ幣?養(yǎng)和小抱子培養(yǎng)是獲得單倍體的主要途徑。經(jīng)花藥培養(yǎng)得到的花粉株系間性狀變異幅度 大，超親現(xiàn)象和出現(xiàn)特殊優(yōu)良性狀的頻率要顯著高于常規(guī)育種，株系內(nèi)性狀整齊，世代間穩(wěn) 定性強，通過花藥或小抱子培養(yǎng)選育出的自交系具有高度的純和性，W此配制的雜交組合 往往具有更強的雜種優(yōu)勢。
[0005] 茄子花藥培養(yǎng)的研究開始于20世紀70年代初。1973年Raina和Lyer通過花藥培養(yǎng) 經(jīng)愈傷組織獲得了茄子單倍體植株。同年，我國的王紀方等通過培養(yǎng)茄子花藥也成功的獲 得了純合的單倍體植株。1975年北京市農(nóng)科院蔬菜所單倍體育種組W六葉茄、九葉茄為材 料經(jīng)花藥培養(yǎng)同樣獲得了單倍體植株，經(jīng)花藥培養(yǎng)培育出品種尤丹茄一號，該品種已在生 產(chǎn)上推廣應(yīng)用。1987年，Tuberosa R等進行茄子花藥培養(yǎng)試驗，成功地通過胚狀體途徑成 苗，得到了單倍體植株。1996年，Miyoshi通過直接培養(yǎng)游離小抱子的方法，經(jīng)愈傷組織途徑 獲得了再生植株;2004年，連勇等W四倍體茄子為材料進行了游離小抱子培養(yǎng)，獲得了再生 植株;2007年，孫振英等利用茄子離體小抱子培養(yǎng)技術(shù)，通過愈傷組織途徑再生獲得了茄子 二倍體栽培種的再生植株。
[0006] 茄子花藥培養(yǎng)研究雖取得了較大進展，但在理論和應(yīng)用上仍存在一些問題。至今， 關(guān)于茄子小抱子由配子體發(fā)育途徑向抱子體途徑轉(zhuǎn)變，進而形成單倍體植株的發(fā)育調(diào)控機 理尚不明確，培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件間相互作用關(guān)系不清楚，茄子花藥培養(yǎng)愈傷組織、不定 芽誘導(dǎo)率低的問題仍然不能很好的解決，運嚴重的影響著茄子花藥培養(yǎng)技術(shù)的進一步發(fā) 展。因此，加快茄子花培育種機理研究，開發(fā)出花藥愈傷誘導(dǎo)率分化率更高的培養(yǎng)基，具有 重要的現(xiàn)實需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是針對目前茄子花培育種中花藥誘導(dǎo)愈傷組織效率較低的現(xiàn)狀，提 供了一種茄子花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基及配制方法。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過W下方式實現(xiàn)的： 一種茄子花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基及配制方法，其特征在于:所述培養(yǎng)基的組成為： 大量元素：KN03 1800~2000mg/L，NH4N〇3 1600~1700mg/L，K出P〇4 650~750mg/L， MgS〇4.7出0 350~400mg/L，CaCl2.2出0 400~480mg/l; 微量元素：MnS〇4.4出0 20~25mg/L，ZnS〇4.7出0 8.0~9.0mg/L，曲B03 11 ~13mg/L，KI 0.75~0.85mg/L，CuS〇4.5此0 0.02~0.03mg/L，CoCl.細2〇 0.02~0.03mg/L，NaMo〇4.2出0 0.2~0.3mg/X; 鐵鹽及絡(luò)合劑：FeS〇4.7出0 50~60mg/L，化2-邸TA.2出0 70~80mg/L; 有機成分:肌醇230~270mg/L，維生素 BI 0.45~0.55mg/L，維生素 B6 0.45~0.55mg/ L，維生素 C 40~50mio1/L，煙酸0.45~0.55mg/L，葉酸0.25~0.35mg/L，絲氨酸55~ 65mg/L，丙氨酸 14~18mg/l; 無機添加物:AgN〇3 7.5~8.5mg/L，活性炭1.6~2.0g/L; 植物生長調(diào)節(jié)劑：2,4-D 0.45~0.55mg/L，IAA 0.35~0.45mg/L，ZT 0.35~0.45mg/L; 生理活性物質(zhì)：馬鈴馨提取液45~55g/L，挪乳23~27g/l; 碳源:葡萄糖45~55g/L，纖維二糖18~22g/l; 凝固劑及其它添加物：植物凝膠4.7~5.3g/L，甘露醇35~45g/L，水解蛋白0.9~ l.lg/Lo
[0009] 所述的培養(yǎng)基的組分的最佳含量為： 大量元素：KN03 1900mg/L，NH4N〇3 1650mg/L，K此P〇4 700mg/L，MgS〇4.7此0 375mg/L， CaCl2.2出0 440mg/L; 微量元素：MnS〇4.4H2〇 22.5mg/L，ZnS〇4.7此0 8.5mg/L，曲B03 12mg/L，KI 0.8mg/L， 化504.5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1.6出0 0.025111邑/1，船]\1〇04.2出0 0.25111邑/1; 鐵鹽及絡(luò)合劑:FeS〇4.7出0 55mg/L，化2-邸TA.2出0 75mg/L; 有機成分:肌醇250mg/L，維生素 BI 0.5mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，維生素 C 8mg/L，煙 酸 0.5mg/L，葉酸 0.3mg/L，絲氨酸 60mg/L，丙氨酸 16mg/l; 無機添加物:AgN〇3 8mg/L，活性炭1.8g/l; 植物生長調(diào)節(jié)劑：2,4-D 0.5mg/L，IAA 0.4mg/L，ZT 0.4mg/L; 生理活性物質(zhì)：馬鈴馨提取液50g/L，挪乳25g/l; 碳源:葡萄糖50g/L，纖維二糖20g/l; 凝固劑及其它添加物:植物凝膠5g/L，甘露醇40g/L，水解蛋白Ig/L。
[0010]所述的培養(yǎng)基配方的配制抑值為：5.6~6.0，最佳配制抑值為5.8。
[0011]所述的培養(yǎng)基的配制方法包括如下步驟： (1) 配制母液 大量元素、微量元素、鐵鹽及絡(luò)合劑母液分別配制成ioaooao倍的母液;肌醇單獨配 制成40倍母液，其它有機成分配制成500倍母液；IAA和ZT分別將稱量好后用少量無水酒精 溶解，然后用熱的蒸饋水定容，2,4-D稱量好后加入Imol/L的NaOH,磁力攬拌器攬拌IOh即溶 解，2，4-D、ZT和IAA母液均配制成0.5g/L; 所有母液預(yù)先配制，4 °C冷藏保存?zhèn)溆茫琁AA需用棟色容量瓶裝，避光保存； (2) 制備生理活性物質(zhì) 馬鈴馨提取液的制備：將馬鈴馨塊莖洗凈后稱取50g，帶皮切成碎片，加入100mL蒸饋 水，煮沸20min，用4~6層紗布過濾靜置，待沉淀后將取上清液； 挪乳的提取:將新鮮挪汁從挪殼中取出放入容器中，加熱至80°C左右，稍靜置后過濾至 密封塑料瓶中，-20°C冷藏保存?zhèn)溆茫?(3) 配制培養(yǎng)液 先在燒杯中加入一些蒸饋水，分別量取所需量的大量元素、微量元素、鐵鹽及絡(luò)合劑、 肌醇母液、有機成分母液加入燒杯中，將稱量好的AgN〇3、活性炭、薦糖、纖維二糖、甘露醇、 水解蛋白、馬鈴馨提取液和挪乳加入燒杯中，攬拌溶解定容至IL后用P的十調(diào)節(jié)pH值； (4) 培養(yǎng)液加熱溶解與分裝 將稱量好的植物凝膠加入配好的培養(yǎng)液中，用電爐加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攬 拌，直到液體呈透明狀后停止加熱，稍微冷卻后，按照25ml培養(yǎng)基/瓶分裝入100mLS角瓶 中，封口膜密封，扎緊； (5) 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌 將S角瓶置于溫度為12rC、壓力為15k化高壓蒸汽條件下滅菌20min，而后降溫至55°C 左右取出，置于超凈工作臺中； (6) 培養(yǎng)基內(nèi)添加 IAA 按照25ml培養(yǎng)基/瓶的用量計算需加入的IAA母液用量，無菌操作下加入已滅菌的IAA 母液，趁熱搖勻，密封后自然冷卻。
[0012] 所述步驟6中的IAA母液的滅菌方法為：用滅菌的0.22WI1的微孔濾膜無菌操作，過 濾滅菌。
[0013] 本發(fā)明所述的培養(yǎng)基具有高效率地誘導(dǎo)茄子花藥產(chǎn)生花粉愈傷、培養(yǎng)基褐化輕的 優(yōu)點，可W顯著提高茄子花藥培養(yǎng)效率，加快茄子花培育種進程。
【具體實施方式】
[0014] 下面結(jié)合實施案例對本發(fā)明作進一步說明，而非限制本發(fā)明。
[001引實施例1 (1)配制母液 大量元素母液：按照培養(yǎng)基中大量元素的配方:KN03 1900mg/L，NH4W)3 1650mg/L， K出P04 700mg/L，MgS04,7出0 375mg/L，CaCl2,2出0 440mg/L配制大量元素母液，各成分溶解 在一起，配制為10倍的母液； 微量元素母液：按照培養(yǎng)基中微量元素的配方:MnSCk ? 4出0 22.5mg/L，ZnS04 ? 7出0 8.5111邑/1^，出803 12111邑/1^，1(10.8111邑/1^，化504.5出0 0.025111邑/1^，〔0〔1.6出0 0.025111邑/1^，胞1004 ? 2出O 0.25mg/L配制微量元素母液，各成分溶解在一起，配制為100倍的母液； 鐵鹽及絡(luò)合劑母液:按照培養(yǎng)基中鐵鹽及絡(luò)合劑的配