一種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法與應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物種苗繁殖領(lǐng)域，具體涉及一種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法與 應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 兜蘭（Paphiopedilum Pfitzer)為蘭科兜蘭屬所有植物的統(tǒng)稱，又稱為仙履蘭、拖 鞋蘭等，屬于蘭科（Orchidaceae)中的一個較為原始的類群，全屬約有76種，主要分布于亞 種熱帶地區(qū)至太平洋島_，生長在熱帶雨林下，地生或附生。其中杏黃兜蘭（P. armeniacum) 和白花兜蘭（P. emersonii)為我國特有種。全屬均列入《野生動植物瀕危物種國際貿(mào)易公 約（CITES)》1級保護的珍稀瀕危物種，同時也是我國一級保護珍稀植物。（羅毅波等，2003)
[0003] 兜蘭花型獨特，株型娟秀，色彩艷麗，花期長，是全球范圍內(nèi)最受歡迎的蘭花種類 之一。兜蘭的栽培和育種歷史悠久，發(fā)展至今已擁有數(shù)量巨大的雜交品種，在全世界范圍內(nèi) 擁有最為眾多的愛好者。兜蘭的傳統(tǒng)繁殖方式為分株繁殖，繁殖速度極慢，利用外植體擴增 的組培技術(shù)雖有一些報道，但還不能進行產(chǎn)業(yè)化運行。種子的離體非共生萌發(fā)技術(shù)，是目前 全球范圍內(nèi)普遍采用的兜蘭種苗生產(chǎn)技術(shù)。兜蘭種子微小，不含胚乳，自然條件下其萌發(fā)需 要與真菌共生，且萌發(fā)率極低。針對兜蘭屬的離體非共生萌發(fā)技術(shù)雖早有研究，但普遍存在 萌發(fā)數(shù)量低，萌發(fā)狀況不穩(wěn)定等問題；其無性繁殖，即克隆更是十分困難；故兜蘭的商業(yè)化 生產(chǎn)主要通過人工授粉獲得果實，并進行種子的離體非共生萌發(fā)獲得實生苗的方式獲得種 苗；受限于種子的萌發(fā)率低和穩(wěn)定性差，規(guī)模生產(chǎn)具有一定的難度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺點，本發(fā)明的首要目的在于提供一種兜蘭種子萌發(fā) 培養(yǎng)基。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，該 培養(yǎng)方法能夠有效提高兜蘭種子的離體非共生萌發(fā)的萌發(fā)率，有效縮短萌發(fā)所用時間。
[0006] 本發(fā)明的再一目的在于提供上述兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基的應用。
[0007] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：
[0008] -種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0009] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下：
[0011] 所述的胺鮮酯的含量優(yōu)選為1~8毫克/升；
[0012] 所述的胺鮮酯的含量進一步優(yōu)選為8毫克/升；
[0013] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，包含如下步驟：
[0014] 將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，在22°C、黑暗的條件下培養(yǎng)至種子萌 發(fā)；
[0015] 所述的兜蘭種子優(yōu)選為紅魔帝兜蘭種子；
[0016] 所述的兜蘭種子優(yōu)選通過如下方式獲得：選擇授粉后180天（180DAP)的兜蘭果 實，經(jīng)過表面消毒后，切開果實，獲得兜蘭種子；
[0017] 所述的表面消毒的方式優(yōu)選為采用0. 1% (w/v)的升汞溶液浸泡7~15分鐘，期 間多次搖動，以保證表面消毒的效果；
[0018] 所述的培養(yǎng)的時間優(yōu)選為50天；
[0019] 所述的將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基具體的操作為：將兜蘭種子撒播在已 滅菌的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面；
[0020] 所述胺鮮酯化學名稱為乙酸二乙胺基乙醇脂（Diethyl Aminoethyl Hexanoate)， 分子式 C12H25NO2，分子量 215. 33, CAS 編號為 10369-83-2 ;
[0021] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基在兜蘭繁殖領(lǐng)域中的應用；
[0022] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果：
[0023] (1)本發(fā)明提供的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基成分簡單、成本低，米用1/4MS培養(yǎng)基為基 礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過降低大量元素的離子濃度，有利于兜蘭種子萌發(fā)，提高兜蘭種子離體非共生 萌發(fā)率。
[0024] (2)本發(fā)明在1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)上，通過添加適量的胺鮮酯可顯著提高兜蘭種 子萌發(fā)率并縮短萌發(fā)時間，其中萌發(fā)率高達90%以上，添加過高或過低的胺鮮酯均不利于 兜蘭種子的萌發(fā)。
[0025] (3)本發(fā)明在1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)上，通過添加活性炭、蛋白胨、胺鮮酯聯(lián)合作用 于種子，有效吸附種子產(chǎn)生的酚類、醌類物質(zhì)，抑制褐化，打破種子的休眠，促進種子萌發(fā)， 顯著縮短萌發(fā)時間。
[0026] (4)本發(fā)明提供了一種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，該方法具有 操作簡便、成本低、提高種子離體非共生萌發(fā)的萌發(fā)率的效果，可以用于兜蘭的大規(guī)模繁殖 生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。 [0028] 實施例1
[0029] -種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0030] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下：
[0031]
[0032] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0033] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內(nèi)種子作為外植體材料，進行無菌播種；
[0034] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面；
[0035] (3)將接種后的培養(yǎng)瓶置于22°C、黑暗條件下培養(yǎng)50天，當種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入 20001UX的光照條件下培養(yǎng)至有2片真葉形成，即可轉(zhuǎn)接；
[0036] 本實施例兜蘭種子的萌發(fā)率為27. 2%。
[0037] 實施例2
[0038] -種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0039] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下：
[0041] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0042] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內(nèi)種子作為外植體材料，進行無菌播種；
[0043] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面。
[0044] (3)將接種后的培養(yǎng)瓶置于22°C、黑暗條件下培養(yǎng)50天，當種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入 20001UX的光照條件下培養(yǎng)至有2片真葉形成，即可轉(zhuǎn)接；
[0045] 本實施例兜蘭種子的萌發(fā)率為90. 1 %。
[0046] 實施例3
[0047] -種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0048] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下：
[0049]
[0050] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0051] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內(nèi)種子作為材料，進行無菌播種；
[0052] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面。
[0053] (3)將接種后的培養(yǎng)瓶置于22°C、黑暗條件下培養(yǎng)50天，當種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入 20001UX的光照條件下培養(yǎng)至有2片真葉形成，即可轉(zhuǎn)接；
[0054] 本實施例兜蘭種子的萌發(fā)率為4. 2%。
[0055] 對照實施例
[0056] -種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0057] 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下：
[0059] -種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
[0060] (1)外植體的獲得：在紅魔帝兜蘭植株開花時，選取長勢好的植株作為親本進行 人工授粉，授粉后180天采收果實，以果實內(nèi)種子作為材料，進行無菌播種；
[0061] (2)將步驟⑴采收后的果實置于0. 10% (w/v)的升汞溶液中進行消毒12分鐘， 期間多次搖動，以保證表面消毒的效果；然后用無菌水漂洗3次；在超凈工作臺中切開果 實，將種子撒在已滅菌的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面。
[0062] (3)將接種后的培養(yǎng)瓶置于22°C、黑暗條件下培養(yǎng)50天，當種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入 20001UX的光照條件下培養(yǎng)至有2片真葉形成，即可轉(zhuǎn)接；
[0063] 本實施例兜蘭種子的萌發(fā)率為2. 6%。
[0064] 上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于：以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基； 所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包含的組分及其含量如下： 純椰汁 100毫升/升 活性炭 1克/升 蛋白胨 0.5克/升 胺鮮酯 1~16毫克/升。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于： 所述的胺鮮酯的含量為1~8毫克/升。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于： 所述的胺鮮酯的含量為8毫克/升。4. 一種提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于包含如下步驟： 將兜蘭種子接入權(quán)利要求1~3任一項所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，在22°C、黑暗的 條件下培養(yǎng)至種子萌發(fā)。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述的兜蘭種子為紅魔帝兜蘭種子。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述的兜蘭種子通過如下方式獲得：選擇授粉后180天的兜蘭果實，經(jīng)過表面消毒后， 切開果實，獲得兜蘭種子。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述的表面消毒的方式為采用〇. 1% w/v的升汞溶液浸泡7~15分鐘。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述的培養(yǎng)的時間為50天。9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高兜蘭種子離體非共生萌發(fā)率的培養(yǎng)方法，其特征在于： 所述的將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基具體的操作為：將兜蘭種子撒播在已滅菌 的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基表面。10. 權(quán)利要求1~3所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基在兜蘭繁殖領(lǐng)域中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物種苗繁殖領(lǐng)域，具體涉及一種兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法與應用。所述的兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基以1/4MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基；還包含的組分及其含量如下：純椰汁100毫升/升；活性炭1克/升；蛋白胨0.5克/升；胺鮮酯1～16毫克/升。所述的培養(yǎng)方法，包含如下步驟：將兜蘭種子接入兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，在22℃、黑暗的條件下培養(yǎng)至種子萌發(fā)。該兜蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法大幅度提高了萌發(fā)率，提高了生產(chǎn)效率。
【IPC分類】A01G31/00
【公開號】CN105325274
【申請?zhí)枴緾N201510732333
【發(fā)明人】譚劍鋒, 劉偉, 劉運權(quán), 王燕君, 韓一航
【申請人】華南農(nóng)業(yè)大學, 廣州華農(nóng)大生物技術(shù)開發(fā)有限公司
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年10月30日