荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種荷松草的組織培 養(yǎng)育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 荷松草是利用國(guó)外蘆竹草原株細(xì)胞培育而成的高科技品種，是草中之王。荷松草 是一種低成本、高投入的種植：種植一次，收獲20年，不需每年耕種；生長(zhǎng)周期短，產(chǎn)量高； 熱值高，纖維產(chǎn)出率高；適應(yīng)性廣，耐旱、耐澇、耐瘠薄土地?？蓮V泛用于燃燒發(fā)電、造紙制 板、環(huán)境修復(fù)、輕化工業(yè)、飼料養(yǎng)殖行業(yè)等。荷松草無(wú)花粉、無(wú)果實(shí)，不能有性繁殖，無(wú)性繁殖 如扦插也很困難。因此，通過(guò)植物組織培養(yǎng)的方法，對(duì)荷松草進(jìn)行離體快繁育苗，可滿足生 產(chǎn)上的迫切需要。荷松草的組織培養(yǎng)育苗技術(shù)在國(guó)內(nèi)外還未見有研究的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，針對(duì)荷松草無(wú)花 粉、無(wú)果實(shí)，不能有性繁殖，無(wú)性繁殖也很困難的問(wèn)題，建立實(shí)用、高效的荷松草組培育苗的 無(wú)性快繁技術(shù)。
[0005] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是通過(guò)對(duì)荷松草的外植體進(jìn)行滅菌處理，以控制其菌污染率 在7%以內(nèi)。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種荷松草的組織培養(yǎng)育 苗方法，以荷松草帶1個(gè)節(jié)間腋芽的莖段做外植體，并用75%酒精浸泡消毒30-40S后，用 0. 1% HgCl2浸泡20-22min，洗凈后作為莖段外植體進(jìn)行外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0007] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將荷松草的莖段外植體接種于誘 導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)10-12天得萌發(fā)腋芽，培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度為1200LUX，光照 時(shí)間為10小時(shí)/天，其中，
[0008] 所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS，1. 5-4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤，0· 1-0. 3mg/L吲哚丁 酸，0· 05-0. 5mg/L GA3, 5. 5g/L 瓊脂，30g/L 蔗糖，pH 值調(diào)至 5. 8。
[0009] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將誘導(dǎo)培養(yǎng)所得萌發(fā)腋芽從莖段 外植體上分割下，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)至少一個(gè)周期，所述增殖培養(yǎng)的一個(gè)周期為 30-40天，培養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度為1500Lux，光照時(shí)間為12小時(shí)/天，其中，
[0010] 所述繼代培養(yǎng)基的配方為：MS，4. 0-6. Omg/L 6-芐氨基嘌呤，0· 2-1. Omg/L CPPU， 0· 15-0. 3mg/L 吲噪丁酸，0· 05-0. lmg/L 萘乙酸，6g/L 瓊脂，30g/L 鹿糖，pH 值調(diào)至 5. 9。 [0011] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，所述萌發(fā)腋芽從莖段外植體上分 割下后，經(jīng)過(guò)3個(gè)連續(xù)周期的增殖培養(yǎng)。
[0012] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將增殖培養(yǎng)后所得無(wú)根苗轉(zhuǎn)入生 根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)30天得生根苗，培養(yǎng)溫度為21-25°c，光照強(qiáng)度為1500-2000LUX，光照 時(shí)間為12小時(shí)/天，其中，
[0013] 所述生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS，0. 5-1. 5mg/L吲哚丁酸，1. 0-2. Omg/L萘乙酸， 0· 1-1. Omg/L 多效唑，0· 3-0. 6g/L 活性炭，6. 5g/L 瓊脂，25g/L 蔗糖，pH 值調(diào)至 6. 0。
[0014] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將所述生根苗置于室內(nèi)自然光下 煉苗3-5天，然后移栽30天后即得供大田種植的組培苗，移栽基質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)、珍珠巖和 黃泥中的至少兩種，所述營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)為泥炭蘚、碳化稻谷殼、腐殖酸和吸水石按照質(zhì)量比為 50 : 25-28 : 10-12 : 3 組成。
[0015] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，所述移栽基質(zhì)為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)和珍珠 巖以質(zhì)量比為2:1混合得到。
[0016] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，荷松草的莖段經(jīng)HgCl2浸泡洗凈后 在溫度為32°C的第一浸泡液中浸泡8-10min，再將荷松草的莖段取出，每個(gè)莖段噴涂0. 5mL 的噴霧劑，其中，
[0017] 所述第一浸泡液的制備方法如下：先將15-17重量份生地和15-17重量份丹皮磨 粉后加入其總重量的20倍的水煮沸30-35min，過(guò)濾后冷卻至室溫得第一濾液，再將1-2重 量份辣椒素和3-5重量份魔芋精粉加入到所述第一濾液中混勻得所述第一浸泡液；
[0018] 所述噴霧劑的制備方法如下：將12-15重量份洋蔥和17-20重量份蕨菜切段后磨 碎，采用體積分?jǐn)?shù)為55%的乙醇溶液提取3次，合并提取液得第一提取液，再將所述第一提 取液加入其體積的5倍的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液混合均勻得所述噴霧劑。
[0019] 優(yōu)選的是，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將增殖培養(yǎng)后所得無(wú)根苗轉(zhuǎn)入生 根培養(yǎng)基之前，將無(wú)根苗置于第二浸泡液中浸泡5-8min，所述第二浸泡液為20-30mL的過(guò) 氧化氫銀離子復(fù)合劑溶液和15mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 2%的竹醋液水溶液組成，其中，每1L所述 過(guò)氧化氫銀離子復(fù)合劑溶液中含有120_130ug銀離子。
[0020] 本發(fā)明解決了荷松草因無(wú)種子不能有性繁殖而常規(guī)無(wú)性繁殖困難且效率低的難 題，為荷松草在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用的規(guī)模化育苗提供了極其有效的方法，至少包括以下有益 效果：
[0021] 1)本發(fā)明采用荷松草帶1個(gè)節(jié)間腋芽的莖段作外植體，誘導(dǎo)出芽率高，且采用酒 精和氯化汞溶液進(jìn)行外植體消毒滅菌，控制其菌污染率在7%以內(nèi)；
[0022] 2)本發(fā)明的誘導(dǎo)培養(yǎng)腋芽萌發(fā)率在90%以上，繼代培養(yǎng)過(guò)程中芽增殖倍數(shù)每代 在5倍以上，生根培養(yǎng)過(guò)程中生根率達(dá)95%，組培苗移栽成活率在90%以上；
[0023] 3)初代培養(yǎng)之前，將外植體經(jīng)過(guò)第一浸泡液浸泡和噴灑噴霧劑，將外植體的菌污 染率控制到1. 4%以內(nèi)，同時(shí)也提高了誘導(dǎo)培養(yǎng)腋芽萌發(fā)率，達(dá)94%;其中，生地具有抗真菌 作用和促進(jìn)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的作用，丹皮具有抗炎癥和抑菌的作用，還能提高外植體的免疫力，促 進(jìn)其代謝和生長(zhǎng)，辣椒素具有抑菌和刺激外植體生長(zhǎng)的作用，魔芋精粉中含有天然的抗菌 素，可以在外植體表面形成抗菌膜，防止細(xì)菌浸染，洋蔥中含有具有抑菌作用的大蒜素，蕨 菜具有抑制細(xì)菌、促進(jìn)外植體生長(zhǎng)的作用；
[0024] 4)無(wú)根苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基之前將其置于含有過(guò)氧化氫銀離子復(fù)合劑和竹醋液的 溶液中浸泡，可以提高生根率和組培苗的移栽成活率，其中，過(guò)氧化氫銀離子具有顯著的抑 菌和防感染的作用，而竹醋液既促進(jìn)根的生長(zhǎng)，又具有一定程度的抑菌作用。
[0025] 本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本 發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書 文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0027] 需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施方案中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所 述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0028] 實(shí)施例1 :
[0029] -種荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，以荷松草帶1個(gè)節(jié)間腋芽的莖段做外植體，并 用75%酒精浸泡消毒30s后，用0. 1% HgCl2浸泡20min，洗凈后作為莖段外植體進(jìn)行外植 體的誘導(dǎo)培養(yǎng)。
[0030] 其中，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將荷松草的莖段外植體接種于誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)10天得萌發(fā)腋芽，培養(yǎng)溫度為23°C，光照強(qiáng)度為1200LUX，光照時(shí)間為10 小時(shí)/天，其中，
[0031 ] 所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS，1. 5mg/L 6-芐氨基嘌呤，0. lmg/L吲哚丁酸， 0. 05mg/L GA3, 5. 5g/L瓊脂，30g/L蔗糖，pH值調(diào)至5. 8,其中本發(fā)明中的GA3為赤霉素中的 一種。
[0032] 其中，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將誘導(dǎo)培養(yǎng)所得萌發(fā)腋芽從莖段外植 體上分割下，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)一個(gè)周期，所述增殖培養(yǎng)的一個(gè)周期為30天，培 養(yǎng)溫度為25°C，光照強(qiáng)度為1500LUX，光照時(shí)間為12小時(shí)/天，其中，
[0033] 所述繼代培養(yǎng)基的配方為：MS，4. Omg/L 6-芐氨基嘌呤，0· 2mg/L CPPU，0· 15mg/L 吲哚丁酸，〇. 〇5mg/L萘乙酸，6g/L瓊脂，30g/L蔗糖，pH值調(diào)至5. 9，其中本發(fā)明中的CPPU為 細(xì)胞分裂素類的一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，其生理活性高于一般嘌呤型細(xì)胞分裂素。
[0034] 其中，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將增殖培養(yǎng)后所得無(wú)根苗轉(zhuǎn)入生根培 養(yǎng)基中生根培養(yǎng)30天得生根苗，培養(yǎng)溫度為21°C，光照強(qiáng)度為1500LUX，光照時(shí)間為12小 時(shí)/天，其中，
[0035] 所述生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS，0. 5mg/L吲噪丁酸，1. Omg/L萘乙酸，0. lmg/L多 效唑，0. 3g/L活性炭，6. 5g/L瓊脂，25g/L蔗糖，pH值調(diào)至6. 0。
[0036] 其中，所述的荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，將所述生根苗置于室內(nèi)自然光下煉苗3 天，然后移栽30天后即得供大田種植的組培苗。
[0037] 實(shí)施例2 :
[0038] -種荷松草的組織培養(yǎng)育苗方法，以荷松草帶1個(gè)節(jié)間腋芽的莖段做外植體，并 用75 %酒精浸泡消毒35s后，用0. 1% HgCl2浸泡21min