一種葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，具體指在花期前后進行葉面噴施尖孢鐮刀菌菌素來提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法。
【背景技術】
[0002]菝葜為百合科菝葜屬的一種多年生落葉攀援灌木，于2010年正式收載于《中國藥典》，具有祛風利濕、解毒散淤等功效，可用于筋骨酸痛、小便淋漓、帶下量多、疔瘡癰腫。菝葜主要以地下生長的塊根入藥，以菝葜原料藥材研制的中藥制劑用于治療慢性盆腔炎、附件炎，療效顯著，市場需求較大。
[0003]菝葜中最主要的藥效成分為薯蕷皂苷元，《中國藥典》規(guī)定其含量不得低于0.04%，一般來說，薯蕷皂苷元含量越高則品質(zhì)越好。菝葜塊根中薯蕷皂苷元的含量受產(chǎn)地影響較大，部分地區(qū)出產(chǎn)的菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量超過藥典標準上百倍，但也有一些地區(qū)出產(chǎn)的菝葜塊根達不到藥典要求，導致這些地區(qū)生產(chǎn)的菝葜幾乎沒有藥用價值。如果提供一種過程簡單，成本低廉的提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，就能有效提高菝葜塊根的品質(zhì)。
[0004]真菌提取物可用作誘導子來提高植物細胞培養(yǎng)過程中次生代謝物的產(chǎn)量，有利于快速提高植物有效成分的含量指標，如國外Asada M等人發(fā)現(xiàn)在細胞培養(yǎng)基中添加真菌提取物等明顯提高薄荷細胞中薄荷醇的含量。通過篩選適合的菌素，將這種菌素應用于菝葜的種植，如果能有效提高菝葜塊根薯蕷皂苷元含量，則不僅具有重要的理論意義，也具備很強的實用價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術問題就是克服現(xiàn)有技術的不足，通過葉面噴施尖孢鐮刀菌菌素，提供一種能有效提高菝葜塊根薯蕷皂苷元含量的方法。
[0006]本發(fā)明包括以下幾個步驟:
(1)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，28°C-35°c、轉(zhuǎn)速120rpm-160 rpm，培養(yǎng)48-72 h獲得種子液；將種子液以體積比5%_10%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度28°C -35°C、轉(zhuǎn)速120 rpm-160 rpm，發(fā)酵培養(yǎng)時間為4d_5d ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素；
(2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.05-0.1%的水溶液，配好的溶液在花期前后1-2個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每1-3天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
[0007]所述種子培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蒸餾水1000ml、pH6-7、121°C滅菌20 min得到種子培養(yǎng)液。
[0008]所述擴大發(fā)酵培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯150g_200g、工業(yè)蛋白胨15g-20g、葡萄糖 15g-20g、氯化鉀 0.05g -0.lg、硫酸鈉 lg_l.5g、硫酸鎂 lg_l.5g、碳酸 1?lg-2g、加水定容至1000 ml，調(diào)節(jié)pH值6-7，121°C滅菌20 min得到擴大發(fā)酵培養(yǎng)液。
[0009]通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量即有明顯提升，菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的薯蕷皂苷元含量高出10%-20%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。
[0010]本發(fā)明所應用的尖孢鐮刀菌既有市售，有條件的單位也可自行分離，很容易獲得，菌素的制備也不復雜；所用試劑和材料均為常用試劑和材料，價格較低；所采用的噴施方法較為簡單，噴施的次數(shù)不多，周期也不長，一年只需噴施兩個月左右，在不需要太多投入的條件下就能實現(xiàn)，而由于噴施帶來的效益卻很顯著，有效提高了菝葜塊根的藥用價值。該方法還便于進行產(chǎn)業(yè)化、規(guī)模化和標準化實施，市場應用前景廣闊。
【具體實施方式】
[0011]以下對提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法進行詳細說明。
[0012]實施例1
(I)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，29°C、轉(zhuǎn)速150rpm，培養(yǎng)50h獲得種子液；將種子液以體積比7%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度30°C、轉(zhuǎn)速125 rpm,發(fā)酵培養(yǎng)時間為4.1d ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素。
[0013](2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.08%的水溶液，配好的溶液在花期前后1.1個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每I天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
[0014]通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量即有明顯提升，菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的薯蕷皂苷元含量高出10.8%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。
[0015]實施例2
(1)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，34°C、轉(zhuǎn)速130rpm,培養(yǎng)60 h獲得種子液；將種子液以體積比8%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度30°C、轉(zhuǎn)速140rpm，發(fā)酵培養(yǎng)時間為5d ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素；
(2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.09%的水溶液，配好的溶液在花期前后1.5個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每2天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
[0016]所述種子培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蒸餾水1000ml、pH6.8、121°C滅菌20 min得到種子培養(yǎng)液。
[0017]通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量即有明顯提升，菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的薯蕷皂苷元含量高出13.3%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。
[0018]實施例3
(I)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，31°C、轉(zhuǎn)速140rpm，培養(yǎng)70 h獲得種子液；將種子液以體積比6%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度31°C、轉(zhuǎn)速155 rpm,發(fā)酵培養(yǎng)時間為4.5d ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素；
(2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.06%的水溶液，配好的溶液在花期前后2個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每3天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
[0019]所述擴大發(fā)酵培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯180g、工業(yè)蛋白胨16g、葡萄糖17g、氯化鉀0.08g、硫酸鈉1.3g、硫酸鎂1.2g、碳酸鈣1.5g、加水定容至1000 ml，調(diào)節(jié)pH值6.3，121°C滅菌20 min得到擴大發(fā)酵培養(yǎng)液。
[0020]通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量即有明顯提升，菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的薯蕷皂苷元含量高出16.8%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。
[0021]實施例4
(1)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，33°C、轉(zhuǎn)速140rpm,培養(yǎng)65 h獲得種子液；將種子液以體積比7.5%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度34°C、轉(zhuǎn)速135 rpm，發(fā)酵培養(yǎng)時間為4.8 ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素；
(2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.07%的水溶液，配好的溶液在花期前后1.8個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每2天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
[0022]所述種子培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蒸餾水1000ml、pH6.8、121°C滅菌20 min得到種子培養(yǎng)液。
[0023]所述擴大發(fā)酵培養(yǎng)液的優(yōu)選制備方法為:馬鈴薯190g、工業(yè)蛋白胨19g、葡萄糖
18.9g、氯化鉀0.08g、硫酸鈉1.lg、硫酸鎂1.4g、碳酸1? 1.7g、加水定容至1000 ml，調(diào)節(jié)pH值6.5，121°C滅菌20 min得到擴大發(fā)酵培養(yǎng)液。
[0024]通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量即有明顯提升，菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的薯蕷皂苷元含量高出
19.2%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。
【主權(quán)項】
1.一種葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，其特征在于包含以下幾個步驟: (1)尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌接種于種子培養(yǎng)液中，28°C-35°c、轉(zhuǎn)速120rpm-160 rpm，培養(yǎng)48-72 h獲得種子液；將種子液以體積比5%_10%的接種量接于擴大發(fā)酵培養(yǎng)液，發(fā)酵溫度28°C -35°C、轉(zhuǎn)速120 rpm-160 rpm，發(fā)酵培養(yǎng)時間為4d_5d ;發(fā)酵培養(yǎng)液離心過濾后，獲得尖孢鐮刀菌菌絲體，將菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取后即得尖孢鐮刀菌菌素； (2)尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將上述尖孢鐮刀菌菌素配成0.05-0.1%的水溶液，配好的溶液在花期前后1-2個月往正在生長的菝葜進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每1-3天噴施I次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，其特征在于:所述種子培養(yǎng)液的制備方法為馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蒸飽水1000ml、pH 6_7、121°C滅菌20 min得到種子培養(yǎng)液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，其特征在于:所述擴大發(fā)酵培養(yǎng)液的制備方法為馬鈴薯150g-200g、工業(yè)蛋白胨15g-20g、葡萄糖15g-20g、氯化鉀0.05g -0.lg、硫酸鈉lg-1.5g、硫酸鎂lg_l.5g、碳酸1? lg_2g、加水定容至1000 ml，調(diào)節(jié)pH值6-7，121°C滅菌20 min得到擴大發(fā)酵培養(yǎng)液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種葉面噴施菌素提高菝葜塊根中薯蕷皂苷元含量的方法，該方法包括（1）尖孢鐮刀菌菌素的制備，將尖孢鐮刀菌經(jīng)接種和擴大培養(yǎng)得到菌絲體，將培養(yǎng)得到的菌絲體用甲醇或乙醇溶液提取得到尖孢鐮刀菌菌素；（2）尖孢鐮刀菌菌素的噴施，將尖孢鐮刀菌菌素配成0.05-0.1%的水溶液，在花期前后1-2個月進行葉面噴施，在日出前或日落后進行噴施，每1-3天噴施1次，每次噴施劑量為使葉片均勻沾有溶液。通過本方法進行葉面噴施后，當年冬天采挖的菝葜塊根薯蕷皂苷元含量比同等條件下不進行葉面噴施的高出10%-20%，薯蕷皂苷元含量提升效果十分顯著。該方法還便于進行產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；蜆藴驶瘜嵤瑧们熬皬V闊。
【IPC分類】A01C21-00, A01G7-06
【公開號】CN104823737
【申請?zhí)枴緾N201510165903
【發(fā)明人】賀建武, 陳功錫, 田啟建, 陳義光, 劉祝祥, 田向榮, 魏華, 李貴
【申請人】吉首大學
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月10日