一種杉木組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種杉木組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]mi Cunninghamia為我國(guó)南方特有的主要造林樹(shù)種。其生長(zhǎng)快、材質(zhì)軟、紋理直、易加工、用途多，是我國(guó)南方最重要的商品材種之一。近年來(lái)隨著集體林權(quán)制度改革的推進(jìn)和商品材價(jià)格的上漲，林農(nóng)經(jīng)營(yíng)杉木的積極性加大，杉木經(jīng)營(yíng)水平和良種意識(shí)的不斷提高，對(duì)杉木良種壯苗的需求日益增加，因此，如何快速擴(kuò)繁杉木優(yōu)良基因型顯得十分必要。
[0003]近年來(lái)生物工程技術(shù)的快發(fā)展，尤其是組培快繁體系的建立，為林木的無(wú)性選育提供了一定的技術(shù)支撐。利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行珍稀瀕危物種及優(yōu)良品系樹(shù)種繁育，具有加速育種、縮短繁殖過(guò)程、節(jié)省空間、減少勞動(dòng)、周年生產(chǎn)等特點(diǎn)。而目前杉木主要采用扦插、嫁接和播種等傳統(tǒng)方式進(jìn)行育苗，存在育苗成本高，苗木長(zhǎng)勢(shì)不好、參差不齊、良種潛力未能得到充分發(fā)揮等缺點(diǎn)，使得目前杉木優(yōu)質(zhì)壯苗的供應(yīng)還無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求。為了滿足市場(chǎng)對(duì)杉木苗的巨大需求，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了杉木離體再植株，建立杉木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，不僅能有效地克服杉木傳統(tǒng)育苗中的一些缺缺陷，而且對(duì)繁育出的無(wú)性系苗木在保持母本的優(yōu)良性狀起到一定的作用，有利于杉木優(yōu)良無(wú)性系苗木的規(guī)模化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種杉木組培快繁方法，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了杉木離體再植株，建立杉木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種杉木組培快繁方法，包括以下的步驟:
(I)外植體采集及消毒:采取杉木樹(shù)樁基部形態(tài)表征一致的當(dāng)年生萌動(dòng)狀態(tài)的飽滿嫩枝作為外植體，在流水下沖洗I?3h，浸泡于3%?5%洗衣粉溶液5?10分鐘，用軟毛刷3%?5%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗60?90min，用蒸餾水沖洗3-5次，于超凈工作臺(tái)中以75%?80%乙醇溶液浸泡20?60s，無(wú)菌水沖洗3?5次，再用含有0.01?0.05%吐溫-20的0.1?0.5%升汞溶液消毒5?15min，無(wú)菌水沖洗3?5次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。
[0006](2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)步驟(I)處理后的嫩枝剪成約1.5cm的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000?20001x，置于培養(yǎng)溫度為23?25°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。
[0007](3)叢生芽增殖:將步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為1000?20001χ，置于培養(yǎng)溫度為23?25°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)40天后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽數(shù)。
[0008](4)生根培養(yǎng):將步驟(3)增殖中獲得的植株(無(wú)根嫩梢2?3cm)從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x,置于培養(yǎng)溫度為23?25°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)生根情況。
[0009](5)煉苗移栽:將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下4?5天后，打開(kāi)瓶蓋2?3天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，在1000倍的生物菌劑中浸泡5?lOmin，然后移栽至盛有所設(shè)計(jì)的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽I株生根苗。置于帶有遮陰網(wǎng)的自動(dòng)噴霧的塑料大棚內(nèi)保溫保濕(溫度控制在15?35°C，濕度應(yīng)保持在75%?85%左右，避免陽(yáng)光直射)，移栽30天后統(tǒng)計(jì)成活率。
[0010]上述步驟(2)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.1?1.0mg/L NAA+3.0?8.0mg/L6-BA+1.0 ?3.0mg/L ΚΤ+0.5 ?1.5g/L AC+20 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊月旨，pH 為5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.1?0.5mg/L 2，4-D+2.0?5.0mg/L6-BA+0.1 ?1.0mg/L ΝΑΑ+0.5 ?1.5g/L AC+ 15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:ffhite+0.1?1.0mg/L NAA+1.0?3.0mg/LIBA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0013]上述步驟(5)所述的移栽培養(yǎng)基質(zhì)為由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠=1:1:1:1混合而成基質(zhì)。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:杉木(Cunninghamia lanceolaie)為我國(guó)南方特有的主要造林樹(shù)種。近年來(lái)隨著集體林權(quán)制度改革的推進(jìn)和商品材價(jià)格的上漲，林農(nóng)經(jīng)營(yíng)杉木的積極性加大，杉木經(jīng)營(yíng)水平和良種意識(shí)的不斷提高，對(duì)杉木良種壯苗的需求日益增加。而目前杉木主要采用扦插、嫁接和播種等傳統(tǒng)方式進(jìn)行育苗，存在育苗成本高，苗木長(zhǎng)勢(shì)不好、參差不齊、良種潛力未能得到充分發(fā)揮等缺點(diǎn)，使得目前杉木優(yōu)質(zhì)壯苗的供應(yīng)還無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求。為了滿足市場(chǎng)對(duì)杉木苗的巨大需求，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了杉木離體再植株，建立杉木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，可以保持杉木無(wú)性系母本的優(yōu)良性狀，有利于杉木優(yōu)良無(wú)性系苗木的規(guī)?；a(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0016]實(shí)施例1
(I)外植體采集及消毒:采取杉木樹(shù)樁基部形態(tài)表征一致的當(dāng)年生萌動(dòng)狀態(tài)的飽滿嫩枝作為外植體，在流水下沖洗2h，浸泡于3%洗衣粉溶液5min，用軟毛刷3%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗60min，用蒸餾水沖洗3次，于超凈工作臺(tái)中以75%乙醇溶液浸泡20s，無(wú)菌水沖洗5次，再用含有0.01%吐溫-20的0.1%升汞溶液消毒5min,無(wú)菌水沖洗3次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。
[0017](2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)步驟(I)處理后的嫩枝剪成約1.5cm的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x，置于培養(yǎng)溫度為23°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后誘導(dǎo)率達(dá)100%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.2mg/L NAA+5.0mg/L 6-BA+l.5mg/L KT+0.8g/L AC+25g/L 蔗糖 +5.0g/L 瓊脂，pH為 5.5。
[0018](3)叢生芽增殖:將步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x，置于培養(yǎng)溫度為23°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)40天后芽數(shù)9個(gè)以上。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.2mg/L2，4-D+3.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0g/L AC+ 25g/L 蔗糖 +4.5g/L 瓊脂，pH 為 5.5。
[0019](4)生根培養(yǎng):將步驟(3)增殖中獲得的植株(無(wú)根嫩梢2?3cm)從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為