專利名稱：新穎的鞘脂和其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及鞘脂制備方法。而且，本發(fā)明的某些鞘脂具有大量已報道過的存在于海星細胞毒腦苷脂的稀有支鏈多不飽和鞘氨醇部份(見Kenneth L.Rinehart等人“Ophidi acerebrosidesCytotoxicGlycosphingolipids Containing a Novel Sphingosine from a Sea Star”，J.Org.Chem.，1994(59)，第144-147頁)。鞘氨醇和鞘脂對哺乳動物細胞產生很多作用(由S.Spiegel和S.Milstein論述，見J.Membrane Biol.146，225(1995))并用作蛋白激酶C的抑制劑(美國專利4,937,232)，因此，這些鞘氨醇和鞘脂對于和癌癥、類風濕性關節(jié)炎、糖尿病并發(fā)癥、中樞神經系統(tǒng)紊亂等的一些疾癥具有藥用價值。此外，鞘磷酸肌醇酯(inositolsphingophospholipids)和氨基乙基磷酸N-脂?；拾滨?ceramideaminoethylphosphonate)代表已被在卵菌亞綱的真菌上描述并證實生物活性的兩類鞘脂。來自疫霉(Phytophthora capsici)的鞘磷酸肌醇酯對于胡椒作物具有保護作用以對抗由疫霉(P.capsici)引起的致病機理(見European Joural ofBiochemistry，1990(191)，第203-209頁)。據(jù)報道來自疫霉(Phytophthora infestans)的氨基乙基磷酸N-脂?；拾滨ツ芤l(fā)作物組織中植物抗毒素的聚積(見Physiologicai and Molecular PlantPathdogy，1986(28)，第215-225頁)，該反應往往與激活抗病機理有關。本發(fā)明涉及的是以前沒有記述過的新鞘脂。
本發(fā)明的制備鞘脂的方法是新穎的，并且比起從海星中分離那些鞘脂或通過繁多的全合成步驟(例如Richard R.Schmidt等人所述，見“Sphingosines-an Oxa-Cope Rearrangement Route for Their Synthesis”，Synthesis，第868-876頁(1995年7月))來講，明顯要更方便。本發(fā)明用真菌作為所需鞘脂的方便的來源，優(yōu)選卵菌亞綱真菌，分離所需的鞘脂后，如果需要，可將該鞘脂適宜地改性為子體鞘脂，從而在水解條件下，除去母體鞘脂的原來的首基和/或脂肪酸部分以制得N-脂酰基鞘氨醇或鞘氨醇磷酸乙醇胺(Sphingosinephosphorylethandamine)。然后，可使用本領域普通技術人員公知的技術將該母體鞘脂、N-脂?；拾贝蓟蚯拾贝剂柞；掖及犯男砸灾频酶鞣N鞘氨醇骨架的子體化合物。
根據(jù)F.K.Sparrow所著“The Present Status of Classification ofBiflagellate Fungi”(見John Wiley(紐約)出版，E.B.Gareth Jones所編的Recent Adrances in Aquatic Mycology的第213-222頁(1976))，可將卵菌亞綱真菌下分為六個等級Eurychasmales、水霉目、鏈壺菌目、霜霉目、Thranstochytrials和網粘菌目。
這些卵菌亞綱真菌可使用各種天然的或化學成分確定的，固體或液體的生成介質(例如O.K.Ribeiro在A.R.G-antner Verlag(德國瓦杜茲)出版的“A Source Book of the Genus Phytophthora”中所述的那些)來培養(yǎng)。那些天然介質的實例是V-8汁介質、利馬豆介質、馬鈴薯葡萄糖介質、燕麥粒介質、豌豆汁介質、改性胡蘿卜介質、紅腎形豆粉介質、谷物粉介質、蕓苔種子提取液介質和黑麥種子提取液介質?；瘜W成分確定的介質的實例包括Ribeiro在同一參考文獻中所述的那些(79-99頁)。
本發(fā)明的實施方案之一是制備下式新鞘脂及其對映異構體和結構同分異構體的方法
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多基，所有這些既可以是直鏈又可以是支鏈；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；該方法包括的步驟為(i)培養(yǎng)合適的真菌，(ii)從所述的真菌中收集菌絲體，和(iii)從所述的菌絲體中分離鞘脂。
在優(yōu)選的實施方案中，制備式(I)鞘脂的方法包括在步驟(i)中培養(yǎng)合適的卵菌亞綱真菌，該式(I)中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基、或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈，又可以是支鏈的。
在更優(yōu)選的實施方案中，制備式(I)鞘脂的方法中X是(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈，又可以是支鏈的。
在最優(yōu)選的實施方案中，制備式(I)鞘脂的方法中X是支鏈的(C14-C18)三烯基或直鏈的(C11-C15)烯基，以及R8a是直鏈的(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。
以下實施例用以說明本發(fā)明，但是這些實施方案的范圍并不局限于此。實施例1從腐霉(Pythinm ultimum)分離和鑒定鞘脂將從美國式培養(yǎng)收集(American Type Culture Collection)得到的腐霉(Pythinm ultimum)(ATCC 26083)保存在馬鈴薯葡萄糖瓊脂中(Difco Laboratories)。用直徑7mm的菌絲體接種棒取自馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物生長邊緣，接種到直徑9cm，裝有20ml液體天冬酰胺-蔗糖培養(yǎng)基(Erwin，D.D.Katznelson，K.，(1971)CanadianJournal of Microbiology 7，第15頁)的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)皿在25℃用轉動搖床以60轉/分鐘搖動培養(yǎng)48小時。然后，通過用玻璃纖維濾器過濾收集菌絲體，水洗并冷凍干燥。
如實施例4所述提取和分離如式(IA)所示的來自腐霉(Pythinmultimum)的主要鞘脂。以本領域普通技術人員公知的方法通過質譜分析和核磁共振測定式(IA)鞘脂的結構。在該鞘脂的脂肪酸成分中發(fā)現(xiàn)多相性。
式(IA)鞘脂
實施例2從疫霉(Phytophthora infestans)分離和鑒定鞘脂將疫霉(Phytophthora infestans)(A1菌株)保存在豌豆汁培養(yǎng)基或黑麥A瓊脂中(見C.E.Caten和J.L.Jinks，(1968)，Canadian Journalof Botany 46，第329頁)。通過把283g凍豌豆放入1升蒸餾水中高壓滅菌，劇烈攪拌高壓滅菌了的豌豆并用沙罩過濾制得豌豆汁培養(yǎng)基。將20g瓊脂加入濾液后再次高壓滅菌，而后倒入培養(yǎng)皿。用直徑7mm的菌絲體接種捧取自豌豆汁培養(yǎng)或黑麥A瓊脂的培養(yǎng)物的生長邊緣，接種到直徑9cm，裝有20ml液體天冬酰胺-蔗糖培養(yǎng)基中。將培養(yǎng)皿在25℃用轉動搖床以60轉/分鐘搖動培養(yǎng)20天。然后，在玻璃纖維濾器上過濾以收集菌絲，水洗并冷凍干燥。
如實施例4所述，提取和分離如式(IB)所示的來自疫霉(Phytophthora infestans)的主要鞘脂。在該鞘脂的脂肪酸成分中發(fā)現(xiàn)多相性。以本領域普通技術人員共知的方法通過質譜分析和核磁共振測得該鞘脂的結構。
式IB鞘脂
實施例3從疫霉(Phytophthora capsici)分離和鑒定鞘脂將疫霉(Phytophthora capsici)(ATCC 15399)保存在pH值為7.0，每升含有200mlV-8汁、4gCaCO3和20g瓊脂的V-8-汁瓊脂中。用直徑7mm的菌絲體接種捧取自V8-汁瓊脂培養(yǎng)的培養(yǎng)物的生長邊緣，接種到直徑9cm，含有20ml液體天冬酰胺-蔗糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)皿在25℃用轉動搖床以60轉/分鐘搖動培養(yǎng)96小時。然后，在玻璃纖維濾器上過濾收集菌絲體，水洗并冷凍干燥。
從疫霉(Phytophthora capsici)中分離與上式(IA)和(IB)一樣的兩種主要鞘脂如實施例4所述。實施例4類脂提取和色譜分離方法通過在20×200mm的裝有Teflon蓋的螺旋蓋試管中，用Polytron均化器(Brinkman)均化30秒，使用氯仿(8ml)、甲醇(16ml)、水(4.6ml)從如實施例1、2和3所制的冷凍干燥的真菌細胞(200mg)中提取鞘脂。均化后，另外加入氯仿(8ml)和水(8ml)。通過倒置30次混合提取液并以70xg兩次離心該提取液10分鐘以分離諸相。將較低的氯仿相除去，在氮氣下蒸發(fā)后，再溶解于1ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)，并用玻璃棉過濾。
通過半制備HPLC分離全部類脂提取物(6-20mg每/ml)。該柱(10×250mm)含有10微米、60埃的LiChrosorb Silica，流動相梯度為A)己烷、B)異丙醇和C)0.04％三乙胺水溶液，流速為5ml/min。分別對應％A/％B/％C的線性梯度時間表為0min，100/0/0；8min，100/0/0；13min；95/5/0；18min，85/15/0；23min，40/60/0；61min，40/51/9；76min，40/51/9；81min，40/60/0；86min，100/0/0；100min，100/0/0。四梯度HHPLC系統(tǒng)是Hewlett Packard Model 1050。注射器是裝有1.0ml固定線圈的Rheodine 7125型。柱中的流出物質被Valco“T”分流，其中97％的試樣被收集本試管中，3％的試樣被在40℃操作的，用20psi氮氣作霧化氣體的Varex MarkII蒸發(fā)光散射檢測器所檢測。在這些條件下，在保留時間為48 min時洗脫磷脂酰乙醇胺，在約49min時收集來自疫霉(Phytophthora infestans)的N-脂?；拾贝?PE(式IB鞘脂)，在約50min時收集來自腐霉(Pythium ultimum)的N-脂?；拾贝?PE(式IA鞘脂)。來自疫霉(Phytophthora capsici)的類脂含兩個N-脂?；拾贝?PE峰，在49min時收集其一(式IB)且在50min時收集其二(式IA)。
本發(fā)明的第二種實施方案是關于從用前面實施方案中所述方法制備的新鞘脂，制備鞘氨醇、鞘氨醇磷酸乙醇胺和N-脂酰基鞘氨醇的方法。這些鞘氨醇、鞘氨醇磷單乙醇胺和N-脂酰基鞘氨醇作為用以制備其后的公認新穎的、有用的鞘脂的化合物，是非常有用的。
于是，本實施方案提供的制備鞘氨醇、鞘氨醇磷酸乙醇胺和N-脂?；拾贝嫉姆椒?，包括步驟(i)培養(yǎng)合適的真菌，(ii)從所述的真菌中收集菌絲體，(iii)從所述的菌絲體中分離式(I)鞘脂
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有基團這些既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；和(iv)通過選擇性水解將所述的鞘酯改性以形成(a)式(II)鞘氨醇及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈烷基、烯基或多烯基；(b)式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈烷基、烯基或多烯基；或(c)式(IV)N-脂酰基鞘氨醇及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈烷基、烯基或多烯基。
在優(yōu)選的實施方案中，制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺或式(IV)N-脂?；拾贝嫉姆椒òㄔ诓襟E(i)中培養(yǎng)合適的卵菌亞綱真菌，這些式中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈，又可以是支鏈的。
在更優(yōu)選的實施方案中，制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺或式(IV)N-脂酰基鞘氨醇的方法中X是(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些既可以是直鏈，又可以是支鏈的。
在最優(yōu)選的實施方案中，制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺或式(IV)N-脂?；拾贝嫉姆椒ㄖ蠿是支鏈(C14-C18)三烯基或直鏈的(C11-C15)烯基，和R8a是直鏈(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。
以下化合物可被制造并用以說明本發(fā)明優(yōu)選實施方案的范圍，但是所述范圍并不局限于此。
式IIA鞘氨醇
式IIR鞘氨醇
式IIIA鞘氨醇磷酸乙醇胺
式IIIB鞘氨醇磷酸乙醇胺
式IVAN-脂?；拾贝?
式IVB N-脂?；拾贝?
用實施例5-10所述的方法可由鞘脂IA和IB制備上述的鞘氨醇IIA和IIB，鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIA和IIIB和N-脂?；拾贝糏VA和IVB；并以此來說明本發(fā)明，而本發(fā)明的范圍并不局限于此。實施例5將IA轉化為IIA通過在甲醇HCl(1N)中，按照Gaver，R.C.，和Sweeley，C.C.的方法(見J.Am.Oil Chem.Soc.42294-298(1965))進行甲醇分解將鞘脂IA轉化為鞘氨醇IIA。甲醇分解后，通過在室溫的氮氣中蒸發(fā)而除去甲醇和HCl。將水解產物再溶于1ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)后，注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)中，從而從起始物料和其它污染物質中純化鞘氨醇IIA。在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為34分時洗脫鞘氨醇IIA。實施例6將IB轉化為IIB通過在甲醇HCl(1N)中，按照Gaver，R.C.，和Sweeley，C.C.的方法(見J.Am.Oil Chem.Soc.42294-298(1965))進行分解將鞘脂IB轉化為鞘氨醇IIB。甲醇分解后，在室溫下氮氣中蒸發(fā)以除去甲醇和HCl。將水解產物再溶于1m1氯仿/甲醇(85/15，體積比)后，注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)中，從而從起始物料和其它污染物質中純化鞘氨醇IIB。在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為36分時洗脫鞘氨醇IIB。實施例7將IA轉化為IIIA將鞘脂IA轉化為鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIA，既可通過a)按照Neuenhofer，S.，Schwarzmann，G.，Egge，H.，Sandhoff，K.的方法(見Biochemistry 24525-529(1985))加堿水解，又可通過b)按照Ito，M.，Kurita，T.，和Kita，K.的方法(見J.Bio1.Chem.270370-374(1995))用鞘脂N-脂?；拾贝糔-脫?；高M行加酶水解。通過將水解產物再溶于1ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)并注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)以從起始物料和其它污染物質中純化鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIA。在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為54分時洗脫鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIA。實施例8將IB轉化為IIIB將鞘脂IB轉化為鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIB，既可通過a)按照Neuenhofer，S.，Schwarzmann，G.，Egge，H.，Sandhoff，K.的方法(見Biochemistry 24525-529(1985))加堿水解，又可通過b)按照Ito，M.，Kurita，T.，和Kita，K.的方法(見J.Biol.Chem.270370-374(1995))用鞘脂N-脂?；拾贝糔-脫酰基酶進行加酶水解。通過將水解產物再溶于1ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)并注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)以從起始物料和其它污染物質中純化鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIB。在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為55分時，洗脫鞘氨醇磷酸乙醇胺IIIB。
實施例9將IA轉化為IVA按照Morrison，W.R.的方法(見Biochim.Biophys.Acta 176537-546(1969))，通過用磷脂酶處理將鞘脂IA轉化為N-脂?；拾贝糏VA。通過將水解產物再溶于1ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)并注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)以從起始物料和其它污染物質中純化N-脂?；拾贝糏VA在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為22分時，洗脫N-脂酰基鞘氨醇IVA。實施例10將IB轉化為IVB按照Morrison，W.R.的方法(見Biochim.Biophys.Acta 176537-546(1969))，通過用磷脂酶處理將鞘脂IB轉化為N-脂酰基鞘氨醇IVB。通過將水解產物再溶于1 ml氯仿/甲醇(85/15，體積比)并注入初次純化鞘脂IA時述及的半制備HPLC系統(tǒng)以從初始物料和其它污染物質中純化N-脂?；拾贝糏VB。在該HPLC系統(tǒng)中，保留時間約為23分時洗脫N-脂?；拾贝糏VB。
在本發(fā)明的實施方案之三中，提供了制備式V第二代或子體鞘脂或其對映異構體或結構同分異構體的方法
其中R5是氫原子，羥基，巰基，氨基，單取代的氨基，二取代的氨基或二取代的氨基的兩個取代基與其連接的氮原子一起形成3至7元的含氮雜環(huán)，OC(O)R6或OR6，或與其連接的碳一起連接形成酮基；R6是(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基；Q是不必進一步限定的任何有機基，磷酸酯或取代的磷酸酯，或膦酸或取代的膦酸；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與連接的氮原子一起形成硝基或3至7元的含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)烷基、(C2-C23)烯基、(C4-C23)多烯基、(C2-C23)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個藥學上可接受的常規(guī)取代基(如鹵素、硝基、羥基等)所取代；該方法所包括的步驟為第二種實施方案的步驟(i)、(ii)、(iii)和(iv)，和(v)使式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺或式(IV)N-脂?；拾贝寂c一種或多種合適的有機反應劑反應以形成式(V)子體鞘脂。
在優(yōu)選的實施方案中，該方法所制備的式(V)子體鞘脂或其對映異構體或結構同分異構體中R5是氫原子，羥基，巰基，氨基，單取代的氨基，二取代的氨基，OC(O)R6或OR6，或與碳一起連接形成酮基；
R6是(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個藥學上可接受的常規(guī)取代基(如鹵素、硝基、羥基等)所取代；Q是氫原子，羥基，巰基、NR1R2，甲酰基，鏈烷酰基，OC(O)R6，OR6，磷酸酯或取代的磷酸酯，膦酸或取代的膦酸，核苷，多核苷酸，多核苷，氨基酸，肽，糖或多糖；R1和R2分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R7，C(O)OR7，或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元含氮雜環(huán)；R7是烷基、烯基、炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個藥學上可接受的常規(guī)取代基(如鹵素、硝基、羥基等)所取代；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)、(C2-C23)烯基、(C4-C23)多烯基、(C2-C23)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個藥學上可接受的常規(guī)取代基(如鹵素、硝基、羥基等)所取代。
在更優(yōu)選的實施方案中，該方法所制備的式(V)子體鞘脂中Q選自羥基、甘氨酰基、精氨酰基、賴氨?；?、半乳糖基、硫酸半乳糖基、葡糖基、肌醇、乳糖基、三聚己糖基、磷酸膽堿、磷酸乙醇胺、GalNAc-Gal-Glc、Gal-Gal-Glc、Sia-Gal-Glc、
在最優(yōu)選的實施方案中，該方法所制備的式(V)子體鞘脂中Q是葡糖基，R8是CH(OH)-C(H2)nCH3和n是11至21。
GalNAc表示N-乙酰半乳糖胺；Glc表示葡萄糖；Gal表示半乳糖；和Sia表示唾液酸。三聚己糖表示由例如半乳糖、葡萄糖、甘露糖等的三個己糖組成的多糖。全部包含D和L異構體。
通過該最后一個實施方案的方法制備的化合物的實例包括如下，但并不局限于此
本發(fā)明的實施方案之四所提供的方法包括在藥學上可接受的載體存在下，用治療有效量的式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)化合物接觸哺乳動物細胞以抑制蛋白激酶C，從而起到抗炎或抗腫瘤的作用。
本發(fā)明的實施方案之五所提供的方法包括在農學上可接受的載體的存在下，用農學有效量的式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)化合物處理作物以提供抗作物病致微生物的保護作用。
權利要求
1.制備通式(I)鞘脂及其對映異構體和結構同分異構體的方法，
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)鏈烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；該方法包括的步驟為(i)培養(yǎng)合適的真菌，(ii)從所述的真菌收集菌絲體，和(iii)從所述的菌絲體中分離鞘脂。
2.按照權利要求1制備通式(I)鞘脂的方法，其中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈，又可以是支鏈的；該方法包括在步驟(i)中培養(yǎng)合適的卵菌亞綱真菌。
3.按照權利要求2制備通式(I)鞘脂的方法，其中X是(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈的，又可以是支鏈的。
4.按照權利要求3的制備通式(I)鞘脂的方法，其中X是支鏈的(C14-C18)三烯基或直鏈的(C11-C15)烯基，和R8a是直鏈的(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。
5.通式(I)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基。
6.按照權利要求5的化合物，其中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈的，又可以是支鏈的。
7.按照權利要求6的化合物，其中X是(C10-C20)烷基或(C10-C20)多烯基，且所有這些既可以是直鏈的，又可以是支鏈的。
8.按照權利要求7的化合物，其中X是支鏈的(C14-C18)三烯基或直鏈的(C11-C15)烯基，和R8a是直鏈的(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。
9.制備鞘氨醇、鞘氨醇磷酸乙醇胺和N-脂?；拾贝?，及其對映異構體和結構同分異構體的方法，包括步驟(i)培養(yǎng)合適的真菌；(ii)從所述真菌中收集菌絲體；(iii)從所述菌絲體中分離鞘脂。
其中P4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；以及(iv)通過選擇性水解將該鞘脂改性以形成(a)式(II)鞘氨醇及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(b)式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；或(c)式(IV)N-脂?；拾贝技捌鋵τ钞悩嬻w和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基。
10.按照權利要求9制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺和式(IV)N-脂?；拾贝嫉姆椒?，其中X是(C10-C20)烷基、(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈，又可以是支鏈的；該方法包括在步驟(i)中培養(yǎng)合適的卵菌亞綱真菌。
11.按照權利要求10制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺和式(IV)N-脂酰基鞘氨醇的方法，其中X是(C10-C20)烯基或(C10-C20)多烯基，且所有這些基團既可以是直鏈的，又可以是支鏈的。
12.按照權利要求11制備式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺和式(IV)N-脂?；拾贝嫉姆椒?，其中X是支鏈的(C14-C18)三烯基或直鏈的(C11-C15)烯基和R8a是直鏈的(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基。
13.制備通式V第二代或子體鞘脂及其對映異構體和結構同分異構體的方法
其中R5是氫原子，羥基，巰基，氨基，單取代的氨基，二取代的氨基或二取代的氨基的兩個取代基與連接的氮原子一起形成3至7元的含氮雜環(huán)，OC(O)R6或OR6，或與連接的碳原子一起形成酮基；R6是(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基；Q是不必進一步限定的任何有機基、磷酸酯或取代的磷酸酯，或膦酸或取代的膦酸；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元的含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)烷基，(C2-C23)烯基，(C4-C23)多烯基、(C2-C23)炔基，芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代；該方法包括的步驟為(i)培養(yǎng)合適的真菌；(ii)從所述的真菌中收集菌絲體；(iii)從所述的菌絲體中分離通式(I)鞘脂
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(iv)通過選擇性水解將所述鞘脂改性以形成(a)式(II)鞘氨醇及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(b)式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；或(c)式(IV)N-脂?；拾贝技捌鋵τ钞悩嬻w和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；以及(v)使式(II)鞘氨醇、式(III)鞘氨醇磷酸乙醇胺或式(IV)N-脂酰基鞘氨醇與一種或多種合適的有機反應劑反應以形成所需的式(V)子體鞘脂。
14.按照權利要求13制備式(V)子體鞘脂及其對映異構體和結構同分異構體的方法，其中R5是氫原子，羥基、巰基、氨基、單取代的氨基，二取代的氨基，OC(O)R6或OR6，或與其連接的碳一起形成酮基；R6是(C1-C6)烷基，(C2-C6)烯基，(C2-C6)炔基，芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代；Q是氫原子，羥基，巰基，NR1R2，甲酰基，鏈烷酰基，OC(O)R6，OR6，磷酸酯或取代的磷酸酯，膦酸或取代的膦酸，核苷，多核苷酸，多核苷，氨基酸，肽，糖或多糖；R1和R2分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R7、C(O)OR7，或與其連接氮原子一起形成硝基或3至7元含氮雜環(huán)；R7是烷基、烯基、炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)烷基，(C2-C23)烯基，(C4-C23)多烯基，(C2-C23)炔基，芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代。
15.按照權利要求14制備式(V)子體鞘脂的方法，其中Q選自羥基、甘氨?；⒕滨；①嚢滨；?、半乳糖基、硫酸半乳糖基、葡糖基、肌醇、乳糖基、三聚己糖基、磷酸膽堿、磷酸乙醇胺、GalNAc-Gal-Glc，Gal-Gal-Glc，Sia-Gal-Glc，
16.按照權利要求15制備式(V)子體鞘脂的方法，其中Q是葡糖基，R8是CH(OH)-(CH2)nCH3和n是11-21。
17.一種方法，該方法包括在藥學上可接受的載體存在下，用治療有效量的(i)式(I)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(ii)式(II)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(iii)式(III)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(iv)式(IV)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；或(v)式(V)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R5是氫原子、羥基、巰基、氨基，單取代的氨基，二取代的氨基或二取代的氨基的兩個取代基與其連接的氮原子一起形成3至7元的含氮雜環(huán)，OC(O)R6或OR6，或與其連接的碳一起形成酮基；R6是(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基；Q是不必進一步限定的任何有機基、磷酸酯或取代的磷酸酯，膦酸或取代的膦酸；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元的含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)烷基、(C2-C23)烯基，(C4-C23)多烯基，(C2-C23)炔基，芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代；與細胞接觸以抑制蛋白激酶C，從而起到抗炎或抗腫瘤的作用。
18.一種方法，該方法包括在農學可接受載體的存在下，用農學有效量的(i)式(I)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(ii)式(II)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(iii)式(III)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中X是支鏈或直鏈的烷基、烯基或多烯基；(iv)式(IV)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R4a是C(O)R8a；R8a是(C13-C23)烷基、(C13-C23)烯基或(C13-C23)多烯基，所有這些基團既可以是直鏈又可以是支鏈的；(v)式(V)化合物及其對映異構體和結構同分異構體
其中R5是氫原子，羥基，巰基，氨基，單取代的氨基，二取代的氨基或二取代的氨基的兩個取代基與其連接的氮原子一起形成3至7元的含氮雜環(huán)，OC(O)R6或OR6，或與其連接的碳一起連接形成酮基；R6是(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳烷基或雜環(huán)烷基；Q是不必進一步限定的任何有機基、磷酸酯或取代的磷酸酯，或膦酸或取代的膦酸；R3和R4分別獨立地是氫原子，低級烷基，C(O)R8，C(O)OR8或與其連接的氮原子一起形成硝基或3至7元的含氮雜環(huán)；R8是(C1-C23)烷基，(C2-C23)烯基，(C4-C23)多烯基、(C2-C23)烷基，芳烷基或雜環(huán)烷基，它們是成環(huán)的、支鏈或直鏈的，并且可被一個或多個例如鹵素、硝基、羥基等藥學上可接受的常規(guī)取代基所取代；處理作物以提供抗致病微生物的保護作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了制備新鞘脂和其它第二代的鞘氨醇母體化合物的方法，該方法包括培養(yǎng)合適的真菌，從這些真菌收集菌絲體和從菌絲體中分離鞘脂。該鞘氨醇骨架物料抑制蛋白激酶C，具有抗炎或抗腫瘤作用；此外，這些鞘氨醇母體物料對作物具有抗致病微生物的保護作用。
文檔編號A01N57/12GK1163312SQ9710371
公開日1997年10月29日 申請日期1997年3月25日 優(yōu)先權日1997年3月25日
發(fā)明者羅伯特·阿瑟·莫羅, 戴維·漢密爾頓·揚, 小羅納德·羅斯 申請人:羅姆和哈斯公司