本發(fā)明屬農(nóng)作物耐鹽性的鑒定
技術領域：
：，確切地說是一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法。
背景技術：
：：菜用大豆(Vegetablesoybean)俗稱毛豆，是以鮮豆粒作為蔬菜的專用大豆類型，是我國南方地區(qū)居民喜食的傳統(tǒng)特色蔬菜。因其營養(yǎng)豐富，口味鮮美，近十年來，已發(fā)展成為頗受國際市場青睞的出口加工大宗蔬菜，栽培面積迅速擴大，僅江浙滬皖地區(qū)的年栽培面積就達500萬畝。其中春播設施栽培菜用大豆因上市早、品質優(yōu)，經(jīng)濟效益顯著，栽培面積占總面積近2/3。但是近十年來，由于我國設施蔬菜栽培面積迅速擴大，且化肥使用不當，導致土壤連作障礙尤其是土壤次生鹽漬化逐年加重；同時我國鹽漬土分布廣泛，鹽堿土面積比例過大，鹽堿土總面積超過9000萬hm2(李彬等，2005)，對菜用大豆品種的耐鹽性提出了更高要求。我國作為大豆起源中心，在長期栽培歷史過程中形成了4000多種大豆地方品種(蓋鈞鎰等2000)，因此菜用大豆地方品種資源也十分豐富，我國長江中下游地區(qū)具有大量的地方品種，特別是上海市崇明島因其獨特的自然生態(tài)環(huán)境，馴化孕育出一批具有不同性狀的菜用大豆品種資源(江曼珍等，1994)。盡管大豆為中度耐鹽植物，鹽脅迫仍是嚴重限制大豆產(chǎn)量和品質的非生物脅迫之一。耐鹽性強的植株具有可遺傳的耐鹽性狀(Wahdaetal.,1997)。因此，挖掘耐鹽大豆種質，選育耐鹽菜用大豆新品種，不僅可以克服鹽堿土對菜用大豆生產(chǎn)的限制，還對穩(wěn)定國內(nèi)外菜用大豆的市場供應、以及提高菜用大豆產(chǎn)量和經(jīng)濟效益意義重大。有關大豆或菜用大豆的耐鹽性鑒定方法的研究已經(jīng)很多報道，前人的方法多采用水培或無機基質栽培，但由于大豆屬于陸生植物，與大豆的自然生長環(huán)境或栽培條件有較大的差異，不能真實模擬大豆的生長環(huán)境。技術內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法，該鑒定方法包括以下內(nèi)容：(1)發(fā)芽期耐鹽性的鑒定：利用200mMNaCl溶液進行菜用大豆發(fā)芽試驗，測定發(fā)芽率和胚根長度，篩選獲得發(fā)芽期耐鹽性強或鹽敏感的品種資源；(2)幼苗期耐鹽性的鑒定：利用200mMNaCl溶液對基質栽培的菜用大豆幼苗進行鹽脅迫，鹽脅迫15d后，測定株高、葉面積和葉綠素含量，篩選獲得苗期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(3)結莢期耐鹽性的鑒定：采用基質栽培，利用150mMNaCl溶液對開花結莢期的菜用大豆植株進行鹽脅迫，鹽脅迫20d，于采收期測定株高、有效分枝數(shù)、單株莢數(shù)、產(chǎn)量和鮮籽粒百粒重等，篩選獲得結莢期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(4)綜合評價：根據(jù)各品種資源在發(fā)芽期、苗期和結莢期的耐鹽性表現(xiàn)，綜合篩選鑒定耐鹽或鹽敏感的品種資源。具體地說，“一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法”是根據(jù)生產(chǎn)和市場需求，利用眾多大豆種質資源對鹽脅迫耐受性的差異，創(chuàng)新建立了菜用大豆的全生育期綜合耐鹽性鑒定方法，從菜用大豆的發(fā)芽期、幼苗期和開花結莢期這三個生長階段進行耐鹽性鑒定，從而綜合評價篩選出一批耐鹽性強或鹽敏感的菜用大豆品種資源。本發(fā)明的一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法，具體包括以下步驟：(1)菜用大豆發(fā)芽期耐鹽性的鑒定方法：①種子處理：挑選種皮完整、健壯飽滿均勻的種子，用5％的NaClO毒8-10min，用蒸餾水清洗3次，再將種子放置于鋪有2層濾紙的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿放20粒種子，每個品種準備10個培養(yǎng)皿，共200粒種子；②分別用200mMNaCl溶液(鹽脅迫)和蒸餾水(CK)即每個培養(yǎng)皿加NaCl溶液或蒸餾水30mL，在25℃恒溫箱進行發(fā)芽試驗，每天補充10mL，保持濕潤；③每天統(tǒng)計發(fā)芽種子數(shù)，發(fā)芽6d后統(tǒng)計各品種的發(fā)芽率、發(fā)芽(鹽害率)、胚根長度和胚根長(鹽害率)；④發(fā)芽率＝發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)×100％；發(fā)芽(鹽害率)＝[發(fā)芽率(CK)-發(fā)芽率(鹽脅迫)]/發(fā)芽率(CK)×100％；胚根(鹽害率)＝[胚根長(CK)-胚根長(鹽脅迫)]/胚根長(CK)×100％。⑤根據(jù)發(fā)芽(鹽害率)及胚根長(鹽害率)，鑒定篩選發(fā)芽期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(2)菜用大豆幼苗期耐鹽性的鑒定方法：①挑選種皮完整、飽滿均勻的種子播種于裝有普通育苗基質(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1)的花盆(直徑12cm，高11cm)，每盆播12粒，每個品種播12盆；②待對生真葉露出后間苗，拔除長勢弱的幼苗，每盆留苗5-6株；③待對生真葉展平時，澆灌200mMNaCl溶液進行鹽脅迫，每個品種鹽脅迫6盆，用澆清水為對照，每品種6盆；④分別將鹽脅迫或對照處理的花盆放置在底部不漏水的塑料盒(長×寬×高：50cm×36cm×10cm)中，每盆每次澆灌NaCl溶液或清水200mL，每隔1d澆一次，一共澆灌12次；⑤鹽脅迫20d后，測定各品種的存活率、株高、葉面積和葉綠素含量，并計算鹽害率，株高、葉面積或葉綠素含量(鹽害率)＝(CK-鹽脅迫)/CK×100％，葉綠素含量的測定參照李合生等(2000)的方法；⑥根據(jù)存活率、株高、葉面積或葉綠素含量的鹽害率，以測量第一片三出真葉的頂生葉大小(葉長×葉寬)為葉面積，鑒定篩選幼苗期耐鹽及鹽敏感的品種資源；(3)菜用大豆結莢期耐鹽性的鑒定方法：①選取種皮完整、飽滿均勻的種子種于裝有普通栽培基質(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1，每盆加15g顆粒緩釋肥)的花盆(口徑28cm，底徑23cm，高20cm)中，每個花盆種10粒，每個品種播種6盆；待幼苗第一片三出真葉展平時間苗，每盆留苗2株，正常肥水管理；③在開花結莢期用150mMNaCl處理進行鹽脅迫，每次每盆澆灌2L，每隔1d澆一次鹽溶液，脅迫20d，以澆清水為對照，3次重復；④在鼓粒期至初熟期(R6-R7)各品種的有效分枝數(shù)、株高、單株莢數(shù)、產(chǎn)量及鮮籽粒百粒重，計算鹽害率。⑤根據(jù)上述指標的鹽害率，鑒定篩選結莢期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(4)菜用大豆全生育期綜合耐鹽性評價鑒定：根據(jù)上述發(fā)芽期、幼苗期和結莢期的耐鹽性鑒定結果，綜合評價不同品種的各個時期的耐鹽性，篩選出全生育期耐鹽性較強或鹽敏感的品種資源。本發(fā)明的優(yōu)勢和特點：1、本發(fā)明根據(jù)菜用大豆在發(fā)芽期、幼苗期和開花結莢期的耐鹽性表現(xiàn)，創(chuàng)新建立了菜用大豆的全生育期耐鹽性鑒定方法，該方法可以分別從菜用大豆不同生長階段進行耐鹽性評價，鑒定結果更加全面、準確、可靠。2、本發(fā)明利用普通育苗有機基質，采用盆栽法培育菜用大豆，通過澆灌NaCl溶液模擬鹽脅迫，不僅可以就地取材，操作方便，易于管理，還符合菜用大豆或大豆的實際生長環(huán)境，比水培能更好的反應菜用大豆在鹽堿地的生長狀態(tài)，鑒定結果更具有說服力。3、本發(fā)明對菜用大豆耐鹽性評價主要以幼苗期耐鹽性為基準，輔以發(fā)芽期及結莢期的耐鹽性表現(xiàn)，一方面可以僅以幼苗期耐鹽性為標準來評價耐鹽性差異，另一方面可以兼具發(fā)芽期、幼苗期和結莢期的綜合耐鹽表現(xiàn)，篩選全生育期耐鹽的品種資源?？傊景l(fā)明利用普通育苗基質培育菜用大豆幼苗，在幼苗對生真葉展開時澆灌NaCl溶液模擬鹽脅迫，接近菜用大豆的實際生長環(huán)境，不僅能更好地反映植株在鹽堿地的生長狀態(tài)，而且可以就地取材，操作簡便，易于管理。因此，本發(fā)明利用200mMNaCl在發(fā)芽期和苗期對菜用大豆耐鹽性進行綜合鑒定，輔以結莢期耐鹽性評價，是一種菜用大豆全生育期耐鹽性狀的快速有效、可靠鑒定方法。具體實施方式以下結合實施例詳細敘述本發(fā)明的具體實施內(nèi)容和方法，但本發(fā)明并不限于此。實施例1：(1)菜用大豆發(fā)芽期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選利用200mMNaCl溶液模擬鹽脅迫，對來自上海市崇明島的10份菜用大豆地方品種(青牛踏扁、黃牛踏扁、粗八月白、細八月白、烏大青、烏毛豆、骨粒青、綠皮豆、小安黃、五早豆)、4份自選育品種(青酥五號、VS11-5、VS13-2、Z-7-5)以及3個引進品種(蘇鮮四號、浙鮮豆五號、八月白)，一共17個菜用大豆品種資源進行發(fā)芽期耐鹽性鑒定。每個品種精選200粒種皮完整、飽滿均勻的種子，用5mMNaClO溶液消毒10min，再用蒸餾水清洗3次。每20粒種子放置在鋪有2層濾紙的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿加蒸餾水或NaCl溶液30mL，置于25℃恒溫箱進行發(fā)芽試驗，每天補充水或NaCl溶液10mL。發(fā)芽6d后，測定每個品種的發(fā)芽率和胚根長度，計算鹽害率，檢測結果見表1。正常條件下不同品種之間的發(fā)芽率有較大的差異，鹽脅迫抑制了所有品種的發(fā)芽，抑制了胚根的伸長。用200mMNaCl處理6d后，‘蘇鮮四號’、‘青酥五號’、‘早綠皮豆’和‘烏大青’發(fā)芽受到鹽害的程度分別高達57.32％、50.6％、47.78％和45.05％；而‘骨粒青’、‘VS13-2’、‘五早豆’和‘浙鮮豆五號’受到的鹽害程度較低，分別為5.26％、5.21％、6.25％和12.37％，相對發(fā)芽率較高。在正常條件下發(fā)芽6d后，不同品種之間的胚根長度不同，其中‘VS13-2’、‘浙鮮豆五號’、‘細八月白’和‘八月白’的胚根長度超過6cm，而‘黃牛踏扁’、‘青牛踏扁’、‘粗八月白’等胚根伸長較慢，長度短于2.5cm。用200mMNaCl處理6d后，僅‘粗八月白’和‘青牛踏扁’受鹽害程度較低，鹽害率為42.88％和46.74％，其余品種的鹽害率高達60％～80％，胚根伸長受到了嚴重抑制。根據(jù)鹽脅迫對菜用大豆的發(fā)芽率和胚根長度的影響，篩選獲得了發(fā)芽期耐鹽性較強的菜用大豆品種資源‘骨粒青’、‘VS13-2’、‘青牛踏扁’和‘細八月白’，鹽敏感的品種資源‘烏大青’、‘早綠皮豆’、‘蘇鮮四號’和‘VS11-5’等。表1鹽脅迫對菜用大豆發(fā)芽率和胚根長度的影響(2)菜用大豆幼苗期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選采用普通有機基質栽培，每個塑料花盆(直徑11cm，高12cm)中播種健壯飽滿的種子10-12粒，每個品種播種12盆。在對生真葉露出后間苗，每盆留壯苗5-6株，在對生真葉展開時澆灌200mMNaCl溶液，以澆清水做對照，每品種處理6盆。分別將鹽脅迫或對照處理的花盆放置在底部不漏水的塑料盒(長×寬×高：50cm×36cm×10cm)中，每盆每次澆灌NaCl溶液或清水200mL，每隔1d澆一次，一共澆灌7次，鹽脅迫12d后測定各品種的存活率、株高、葉面積和葉綠素含量，以第一片三出真葉的頂生葉大小(葉長×葉寬)作為葉面積，計算鹽害率，鑒定17個菜用大豆品種的幼苗期耐鹽性，結果見表2。由表2可知，與正常條件(CK)相比，17個品種的株高、葉面積和葉綠素含量在不同程度上均受到了鹽脅迫的抑制。用200mMNaCl處理12d后，‘烏毛豆’、‘蘇鮮四號’、‘VS11-5’和‘VS13-2’的株高受鹽害程度較高，鹽害率分別為35.62％、30.86％、27.62％和26.88％；而‘青牛踏扁’、‘小安黃’和‘青酥五號’受鹽害程度較低，鹽害率分別為13.53％、16.67％和18.14％。由表2可知鹽脅迫嚴重抑制了菜用大豆葉片的生長，‘烏大青’、‘八月白’和‘黃牛踏扁’的鹽害率高達72.9％、68.09％和64.13％；而‘早綠皮豆’、‘Z-7-5’和‘VS13-2’的鹽害率較低，低于50％。用200mMNaCl處理12d后，‘青牛踏扁’、‘烏大青’、‘八月白’、‘粗八月白’和‘蘇鮮四號’的葉綠素含量顯著減少；而‘骨粒青’、‘浙鮮豆五號’、‘烏毛豆’和‘VS13-2’的鹽害率較低，葉綠素含量相對較高。因此，綜合考慮各品種在鹽脅迫12d后的株高、葉面積和葉綠素含量的變化，篩選鑒定到苗期耐鹽性品種‘浙鮮豆五號’、‘五早豆’、‘VS13-2’和‘骨粒青’，鹽敏感品種‘烏大青’、‘蘇鮮四號’、‘黃牛踏扁’和‘烏毛豆’。表2鹽脅迫對菜用大豆株高、葉面積和葉綠素含量的影響(3)菜用大豆結莢期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選根據(jù)上述發(fā)芽期和幼苗期的耐鹽性鑒定結果，選取了耐鹽性不同的10個品種用于結莢期耐鹽性鑒定。采用普通有機基質栽培(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1，每盆加15g顆粒緩釋肥)，每個塑料花盆(口徑28cm，底徑23cm，高20cm)中播種健壯飽滿種子10粒，每個品種播6盆，第一片三出真葉展平時間苗，每盆留苗2株，正常肥水管理。在開花結莢期用150mMNaCl處理進行鹽脅迫，每次每盆澆灌2L，每隔1d澆一次鹽溶液，脅迫20d，以澆清水為對照。在鼓粒盛期至初熟期(R6-R7)測定各品種的有效分枝數(shù)、株高、單株莢數(shù)、產(chǎn)量及鮮籽粒百粒重，計算鹽害率，對10個品種的耐鹽性進行了篩選鑒定，結果見表3和表4。由表3可以看出，用150mMNaCl澆灌20d后，10個品種的有效分枝數(shù)和株高都有不同程度的減少，其中‘蘇鮮四號’、‘烏大青’和‘青牛踏扁’受鹽害程度最重，有效分枝減少了1個，株高受到的鹽害率接近20％；而‘骨粒青’、‘浙鮮豆五號’和‘VS13-2’受鹽害程度較輕，有效分枝數(shù)和株高減少不明顯。表3鹽脅迫對菜用大豆生長的影響由表4可知，鹽脅迫20d后，各品種的單株莢數(shù)、產(chǎn)量和鮮籽粒百粒重均有不同程度的降低，其中，‘烏大青’、‘蘇鮮四號’的單株莢數(shù)和產(chǎn)量降低了約30％，‘細八月白’、‘VS13-2’、‘骨粒青’和‘浙鮮豆五號’的莢數(shù)和產(chǎn)量降低程度較?。弧逶缍埂?、‘烏大青’和‘蘇鮮四號’的百粒重降低了15％以上，而‘細八月白’的百粒鮮重僅降低了約7％，‘VS13-2’、‘骨粒青’和‘青酥五號’降低了約10％。因此，綜合考慮這10個品種在鹽脅迫下的生長情況和產(chǎn)量指標，篩選鑒定到結莢期耐鹽品種‘VS13-2’、‘骨粒青’、‘細八月白’、‘浙鮮豆五號’，以及鹽敏感品種‘烏大青’、‘蘇鮮四號、‘早綠皮豆’。表4鹽脅迫對菜用大豆產(chǎn)量的影響(4)菜用大豆全生育期綜合耐鹽性的鑒定評價根據(jù)上述17個菜用大豆的發(fā)芽期和幼苗期耐鹽表型，發(fā)現(xiàn)在發(fā)芽期表現(xiàn)耐鹽的品種，在幼苗期的耐鹽性也較強，且發(fā)芽期表現(xiàn)鹽敏感的品種在幼苗期的耐鹽性也比較弱。并根據(jù)結莢期的耐鹽表現(xiàn)，可以篩選鑒定出在發(fā)芽期、有效期和結莢期均表現(xiàn)耐鹽或鹽敏感的菜用大豆品種資源。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3