本發(fā)明公開(kāi)了一種農(nóng)作物殺菌劑的制備方法，屬于殺菌劑制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

我國(guó)農(nóng)作物種類(lèi)多，分布范圍廣，病害的種類(lèi)相對(duì)較多。據(jù)調(diào)查，全國(guó)農(nóng)作物的各種病害有2000余種，發(fā)生嚴(yán)重的有700多種，每年農(nóng)作物病害造成的損失是巨大的，嚴(yán)重地影響了農(nóng)業(yè)的發(fā)展。雖然人們己開(kāi)發(fā)研究出了多種防治病害的藥劑，并取得了良好的防治效果，但是大部分化學(xué)農(nóng)藥會(huì)帶來(lái)較大的負(fù)面作用，尤其是農(nóng)藥對(duì)人和動(dòng)物的傷害以及對(duì)自然環(huán)境的污染等問(wèn)題，對(duì)人類(lèi)的健康和生態(tài)環(huán)境構(gòu)成了較大的威脅，如農(nóng)藥中毒以及環(huán)境污染等一系列問(wèn)題己屢見(jiàn)不鮮。人與自然和諧發(fā)展，人類(lèi)在自身發(fā)展的同時(shí)必須保護(hù)自身賴(lài)以生存的自然環(huán)境，這是人類(lèi)在進(jìn)入新世紀(jì)所面臨的一大嚴(yán)峻考驗(yàn)。因此，開(kāi)發(fā)具有高效低毒、環(huán)境友好型的綠色農(nóng)藥是農(nóng)藥研究領(lǐng)域重要發(fā)展方向。

使用現(xiàn)代殺菌劑防治植物病害是保證農(nóng)作物高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的重要措施之一。但是隨著高效、內(nèi)吸、選擇性強(qiáng)的現(xiàn)代殺菌劑被開(kāi)發(fā)和廣泛應(yīng)用，殺菌劑抗性越來(lái)越嚴(yán)重和普遍，常導(dǎo)致植物病害化學(xué)防治失敗，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)遭受巨大損失，同時(shí)殺菌劑廣譜性較差、防治效果不佳，使用過(guò)程中易造成嚴(yán)重的環(huán)境污染和資源的過(guò)度浪費(fèi)的問(wèn)題也日漸突出。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題：針對(duì)現(xiàn)有的農(nóng)作物殺菌劑廣譜性較差，防治效果不佳，長(zhǎng)期施用容易導(dǎo)致病原菌抗性增強(qiáng)、施藥量的成倍增加，且使用過(guò)程中易造成嚴(yán)重的環(huán)境污染的問(wèn)題，提供一種農(nóng)作物殺菌劑的制備方法，該方法首先將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將所得培養(yǎng)物離心處理，收集下層菌種與土豆泥、蔗糖、黃豆餅粉等混合發(fā)酵，經(jīng)高溫滅菌后收集發(fā)酵液離心處理并收集上清液，再將丁香、肉桂和蘆薈粉碎后與黃酒混合并超聲提取處理，最后將所得提取物與上清液、魚(yú)精蛋白、桐油等攪拌并包裝好，即可得到農(nóng)作物殺菌劑，多粘芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可以通過(guò)位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)和誘導(dǎo)抗性的方式，殺滅和控制病原菌，魚(yú)精蛋白具有很強(qiáng)的殺菌能力和廣譜抑菌性，本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑使用方便，可以采用浸種、灌根、噴霧處理等多種方式，且殺菌劑殺菌、防治效果顯著，有效降低了殺菌劑的使用量及抗性的發(fā)生與發(fā)展，并且能夠擴(kuò)大殺菌譜，在減少用藥成本的同時(shí)，降低了對(duì)環(huán)境的影響，具有廣闊的應(yīng)用空間。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

（1）依次稱(chēng)取10～20g葡萄糖、5～8g蛋白胨、3～5g牛肉膏和0.5～0.8g氯化鈉和800～1000mL去離子水，加入到培養(yǎng)皿中，攪拌混合均勻后，轉(zhuǎn)移至滅菌罐中，在100～110℃下高溫滅菌5～10min，制得培養(yǎng)基，隨后按8～12%接種量將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基置于搖床中，在35～45℃、120～140r/min下培養(yǎng)12～24h；

（2）培養(yǎng)結(jié)束，將培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，在1000～1200r/min下離心30～40min，收集下層菌種，再依次稱(chēng)取30～40g土豆泥、10～15g蔗糖、3～5g黃豆餅粉、1～3g磷酸氫二鈉、0.3～0.5g硫酸鎂和800～1000mL去離子水，攪拌混合后置于發(fā)酵罐中，取6～8g上述下層菌種加入到發(fā)酵罐中，在25～35℃下發(fā)酵3～4天，發(fā)酵結(jié)束，升溫至100～110℃高溫滅菌5～10min，隨后收集發(fā)酵液，并置于離心機(jī)中，在5000～6000r/min下離心30～40min，收集上清液，備用；

（3）稱(chēng)取10～20g丁香、6～8g肉桂和8～12g蘆薈加入到粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，隨后加入到燒杯中，并加入100～200mL黃酒，攪拌混合均勻后，置于超聲波振蕩儀中，在180～200W下超聲提取1～2h，隨后過(guò)濾，收集濾液，并減壓蒸餾至原體積的1/2，得到提取物；

（4）按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取80～90份步驟（2）備用的上清液、20～30份上述提取物、10～15份魚(yú)精蛋白、6～8份十二烷基二甲基芐基氯化銨、10～20份桐油、3～5份單硬脂酸甘油酯、1～3份蓖麻油聚氧乙烯醚、30～40份檸檬酸和3～5份殼聚糖，攪拌20～30min后，包裝，即可得到農(nóng)作物殺菌劑。

本發(fā)明的應(yīng)用方法是：按質(zhì)量比0.5：1000～0.8：1000將本發(fā)明制得的殺菌劑與清水混合均勻，隨后利用噴霧機(jī)對(duì)水稻葉面噴霧處理，殺菌劑每畝作物施用量為10～20g即可。經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)95%以上，施用于葉面后藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)30～40天，對(duì)農(nóng)作物灌根殺菌其藥效可長(zhǎng)達(dá)4～6個(gè)月，連續(xù)施用1～3個(gè)月后，作物發(fā)病率減少80～90%，防治效果明顯。

本發(fā)明的有益效果是：

（1）本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑使用方便，殺菌效果顯著，適用于各種農(nóng)作物的根系，同時(shí)也可以施用于農(nóng)作物葉面及收獲儲(chǔ)藏期；

（2）本發(fā)明制得的農(nóng)作物具有廣譜殺菌的作用，使得一種殺菌劑能同時(shí)防治多種植物病害，提供了一種快捷、有效的防治手段，且本發(fā)明有效較少了殺菌劑的用量，在降低病原菌的抗藥性的同時(shí)避免了殺菌劑對(duì)環(huán)境造成的污染。

具體實(shí)施方式

首先依次稱(chēng)取10～20g葡萄糖、5～8g蛋白胨、3～5g牛肉膏和0.5～0.8g氯化鈉和800～1000mL去離子水，加入到培養(yǎng)皿中，攪拌混合均勻后，轉(zhuǎn)移至滅菌罐中，在100～110℃下高溫滅菌5～10min，制得培養(yǎng)基，隨后按8～12%接種量將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基置于搖床中，在35～45℃、120～140r/min下培養(yǎng)12～24h；待培養(yǎng)結(jié)束，將培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，在1000～1200r/min下離心30～40min，收集下層菌種，再依次稱(chēng)取30～40g土豆泥、10～15g蔗糖、3～5g黃豆餅粉、1～3g磷酸氫二鈉、0.3～0.5g硫酸鎂和800～1000mL去離子水，攪拌混合后置于發(fā)酵罐中，取6～8g上述下層菌種加入到發(fā)酵罐中，在25～35℃下發(fā)酵3～4天，發(fā)酵結(jié)束，升溫至100～110℃高溫滅菌5～10min，隨后收集發(fā)酵液，并置于離心機(jī)中，在5000～6000r/min下離心30～40min，收集上清液，備用；再稱(chēng)取10～20g丁香、6～8g肉桂和8～12g蘆薈加入到粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，隨后加入到燒杯中，并加入100～200mL黃酒，攪拌混合均勻后，置于超聲波振蕩儀中，在180～200W下超聲提取1～2h，隨后過(guò)濾，收集濾液，并減壓蒸餾至原體積的1/2，得到提取物；最后按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取80～90份上述步驟備用的上清液、20～30份上述提取物、10～15份魚(yú)精蛋白、6～8份十二烷基二甲基芐基氯化銨、10～20份桐油、3～5份單硬脂酸甘油酯、1～3份蓖麻油聚氧乙烯醚、30～40份檸檬酸和3～5份殼聚糖，攪拌20～30min后，包裝，即可得到農(nóng)作物殺菌劑。

實(shí)例1

首先依次稱(chēng)取10g葡萄糖、5g蛋白胨、3g牛肉膏和0.5g氯化鈉和800mL去離子水，加入到培養(yǎng)皿中，攪拌混合均勻后，轉(zhuǎn)移至滅菌罐中，在100℃下高溫滅菌5min，制得培養(yǎng)基，隨后按8%接種量將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基置于搖床中，在35℃、120r/min下培養(yǎng)12h；待培養(yǎng)結(jié)束，將培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，在1000r/min下離心30min，收集下層菌種，再依次稱(chēng)取30g土豆泥、10g蔗糖、3g黃豆餅粉、1g磷酸氫二鈉、0.3g硫酸鎂和800mL去離子水，攪拌混合后置于發(fā)酵罐中，取6g上述下層菌種加入到發(fā)酵罐中，在25℃下發(fā)酵3天，發(fā)酵結(jié)束，升溫至100℃高溫滅菌5min，隨后收集發(fā)酵液，并置于離心機(jī)中，在5000r/min下離心30min，收集上清液，備用；再稱(chēng)取10g丁香、6g肉桂和8g蘆薈加入到粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，隨后加入到燒杯中，并加入100mL黃酒，攪拌混合均勻后，置于超聲波振蕩儀中，在180W下超聲提取1h，隨后過(guò)濾，收集濾液，并減壓蒸餾至原體積的1/2，得到提取物；最后按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取80份上述步驟備用的上清液、20份上述提取物、10份魚(yú)精蛋白、6份十二烷基二甲基芐基氯化銨、10份桐油、3份單硬脂酸甘油酯、1份蓖麻油聚氧乙烯醚、30份檸檬酸和3份殼聚糖，攪拌20min后，包裝，即可得到農(nóng)作物殺菌劑。

本實(shí)例操作簡(jiǎn)便，使用時(shí)，按質(zhì)量比0.5：1000將本發(fā)明制得的殺菌劑與清水混合均勻，隨后利用噴霧機(jī)對(duì)水稻葉面噴霧處理，殺菌劑每畝作物施用量為10g即可。經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)97%，施用于葉面后藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)30天，對(duì)農(nóng)作物灌根殺菌其藥效可長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月，連續(xù)施用1個(gè)月后，作物發(fā)病率減少80%，防治效果明顯。

實(shí)例2

首先依次稱(chēng)取15g葡萄糖、7g蛋白胨、4g牛肉膏和0.7g氯化鈉和900mL去離子水，加入到培養(yǎng)皿中，攪拌混合均勻后，轉(zhuǎn)移至滅菌罐中，在105℃下高溫滅菌8min，制得培養(yǎng)基，隨后按10%接種量將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基置于搖床中，在40℃、130r/min下培養(yǎng)18h；待培養(yǎng)結(jié)束，將培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，在1100r/min下離心35min，收集下層菌種，再依次稱(chēng)取35g土豆泥、13g蔗糖、4g黃豆餅粉、2g磷酸氫二鈉、0.4g硫酸鎂和900mL去離子水，攪拌混合后置于發(fā)酵罐中，取7g上述下層菌種加入到發(fā)酵罐中，在30℃下發(fā)酵3.5天，發(fā)酵結(jié)束，升溫至105℃高溫滅菌8min，隨后收集發(fā)酵液，并置于離心機(jī)中，在5500r/min下離心35min，收集上清液，備用；再稱(chēng)取15g丁香、7g肉桂和10g蘆薈加入到粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，隨后加入到燒杯中，并加入150mL黃酒，攪拌混合均勻后，置于超聲波振蕩儀中，在190W下超聲提取1.5h，隨后過(guò)濾，收集濾液，并減壓蒸餾至原體積的1/2，得到提取物；最后按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取85份上述步驟備用的上清液、25份上述提取物、13份魚(yú)精蛋白、7份十二烷基二甲基芐基氯化銨、15份桐油、4份單硬脂酸甘油酯、2份蓖麻油聚氧乙烯醚、35份檸檬酸和4份殼聚糖，攪拌25min后，包裝，即可得到農(nóng)作物殺菌劑。

本實(shí)例操作簡(jiǎn)便，使用時(shí)，按質(zhì)量比0.7：1000將本發(fā)明制得的殺菌劑與清水混合均勻，隨后利用噴霧機(jī)對(duì)水稻葉面噴霧處理，殺菌劑每畝作物施用量為15g即可。經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)98%，施用于葉面后藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)35天，對(duì)農(nóng)作物灌根殺菌其藥效可長(zhǎng)達(dá)5個(gè)月，連續(xù)施用2個(gè)月后，作物發(fā)病率減少85%，防治效果明顯。

實(shí)例3

首先依次稱(chēng)取20g葡萄糖、8g蛋白胨、5g牛肉膏和0.8g氯化鈉和1000mL去離子水，加入到培養(yǎng)皿中，攪拌混合均勻后，轉(zhuǎn)移至滅菌罐中，在110℃下高溫滅菌10min，制得培養(yǎng)基，隨后按12%接種量將多粘芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并將培養(yǎng)基置于搖床中，在45℃、140r/min下培養(yǎng)24h；待培養(yǎng)結(jié)束，將培養(yǎng)物置于離心機(jī)中，在1200r/min下離心40min，收集下層菌種，再依次稱(chēng)取40g土豆泥、15g蔗糖、5g黃豆餅粉、3g磷酸氫二鈉、0.5g硫酸鎂和1000mL去離子水，攪拌混合后置于發(fā)酵罐中，取8g上述下層菌種加入到發(fā)酵罐中，在35℃下發(fā)酵4天，發(fā)酵結(jié)束，升溫至110℃高溫滅菌10min，隨后收集發(fā)酵液，并置于離心機(jī)中，在6000r/min下離心40min，收集上清液，備用；再稱(chēng)取20g丁香、8g肉桂和12g蘆薈加入到粉碎機(jī)中進(jìn)行粉碎，隨后加入到燒杯中，并加入200mL黃酒，攪拌混合均勻后，置于超聲波振蕩儀中，在200W下超聲提取2h，隨后過(guò)濾，收集濾液，并減壓蒸餾至原體積的1/2，得到提取物；最后按重量份數(shù)計(jì)，稱(chēng)取90份上述步驟備用的上清液、30份上述提取物、15份魚(yú)精蛋白、8份十二烷基二甲基芐基氯化銨、20份桐油、5份單硬脂酸甘油酯、3份蓖麻油聚氧乙烯醚、40份檸檬酸和5份殼聚糖，攪拌30min后，包裝，即可得到農(nóng)作物殺菌劑。

本實(shí)例操作簡(jiǎn)便，使用時(shí)，按質(zhì)量比0.8：1000將本發(fā)明制得的殺菌劑與清水混合均勻，隨后利用噴霧機(jī)對(duì)水稻葉面噴霧處理，殺菌劑每畝作物施用量為20g即可。經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明制得的農(nóng)作物殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率達(dá)98%，施用于葉面后藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)40天，對(duì)農(nóng)作物灌根殺菌其藥效可長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月，連續(xù)施用3個(gè)月后，作物發(fā)病率減少90%，防治效果明顯。