本發(fā)明涉及煙草種植領(lǐng)域，更具體地，涉及一種特比萘芬制劑及其在提高煙葉角鯊烯含量中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

角鯊烯是一種脂質(zhì)不皂化物，為一種多不飽和烯烴(三十碳六烯)，最初是從鯊魚的肝油中發(fā)現(xiàn)的，1914年被命名為Squalene，其化學(xué)名稱為2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，屬開鏈三萜，又稱魚肝油萜，參與人體膽固醇合成并能促進(jìn)新陳代謝，具有提高體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無毒性的具有防病治病作用的海洋生物活性物質(zhì)。

角鯊烯廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)。在動(dòng)物中以深海鯊魚肝臟中含量最高，主要是深海的鎧鯊、小刺鯊、緣吻田氏鯊、新西蘭烏鯊肝臟中，而其它江海鯊魚的角鯊烯含量很低，普遍低于1.5％。在植物中則以橄欖油、莧菜子油和棕櫚油中含量最高，如橄欖油含有角鯊烯150～700mg/100g，米糠油中其含量為332mg/100g。深海鯊魚是珍貴的保護(hù)動(dòng)物，再加上其低生長率和低繁殖力，易過度捕撈，導(dǎo)致含角鯊烯的動(dòng)物資源缺乏。目前發(fā)現(xiàn)含有角鯊烯的植物資源蓄積量少，開發(fā)利用有一定的難度。因而限制了角鯊烯的生產(chǎn)和使用。

現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)有公開從羅漢果、尾巨桉、糯米香茶、煙草等植物中提取角鯊烯。也有人報(bào)道從煙草廢料中提取出角鯊烯見201110058487.5；因此植物中提取角鯊烯將是未來獲得角鯊烯的一個(gè)重要途徑。然而在各種植物中，角鯊烯的含量不高，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有研究表明可以通過在植物生長階段加入外源性物質(zhì)，提高植物中角鯊烯含量的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種特比萘芬制劑及其在提高煙葉角鯊烯含量中的應(yīng)用。

在煙草的生長過程中，添加所述特比萘芬制劑，能夠提高煙葉中角鯊烯的含量。

本發(fā)明提供的特比萘芬制劑，按重量百分?jǐn)?shù)計(jì)組分組成為：特比萘芬10～20％；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯5～8％；余量為乙醇。

優(yōu)選地，特比萘芬制劑，由如下按重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬20％；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％；余量為乙醇。

特比萘芬是一種烯丙胺類抗真菌藥，具有廣譜抗真菌作用?，F(xiàn)有技術(shù)中，通過其抑制真菌細(xì)胞膜上的角鯊烯環(huán)氧化酶來發(fā)揮抗真菌作用。發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)在煙草的生長過程中，添加特比萘芬，能夠提高煙葉中角鯊烯的含量。

本發(fā)明提供了特比萘芬制劑在提高煙葉角鯊烯含量中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述特比萘芬制劑的用量為30～50克/株。更優(yōu)選為50克/株.

特比萘芬的添加方式不進(jìn)行特殊的限定，優(yōu)選地，更好地被植物吸收和利用，所述特比萘芬通過噴霧的形式添加。

優(yōu)選地，所述特比萘芬制劑為用水稀釋500～1500倍后葉面噴施。更優(yōu)選為1500倍。

優(yōu)選地，所述特比萘芬制劑在煙草株的快速生長期施用一次。

優(yōu)選地，所述特比萘芬制劑在煙草株的打頂后1周內(nèi)施用一次。

更優(yōu)選地，所述特比萘芬制劑在煙草株的快速生長期和打頂后1周內(nèi)各施用一次。

本發(fā)明所述的煙葉可以是晾曬煙或烤煙的煙葉，優(yōu)選地，所述煙葉為烤煙煙葉。

煙葉除了主要用于香煙的制備外，其會(huì)產(chǎn)生大量的如煙末、廢棄煙葉，不適用煙葉等廢品，常常只能通過降解等方式進(jìn)行處理，造成浪費(fèi)。角鯊烯是一種具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的物質(zhì)，提升煙葉中角鯊烯的含量，一定程度上也提升了煙葉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，使煙末、廢棄煙葉等廢品的利用價(jià)值得以提升。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在煙草的生長過程中，添加一定量的特比萘芬制劑，能夠提高煙葉中角鯊烯的含量，與空白對照組相比，在添加了特比萘芬后，煙葉中的角鯊烯含量明顯提升，提升了煙葉的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不對本發(fā)明的內(nèi)容做任何形式的限定。

實(shí)施例中，所用特比萘芬制劑為自配，稱取一定量的特比萘芬，溶于乙醇中，再加入一定量的表面活性劑三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯，攪拌均勻即可。

其中特比萘芬購自濟(jì)南宏方德醫(yī)藥科技有限公司；三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯購自日光化學(xué)貿(mào)易(上海)有限公司。

對照處理：

選一小區(qū)田，烤煙品種為云煙87，栽煙60株，按照15株/行排列，行株距為1m×0.5m。整個(gè)生育期間未施用任何殺蟲藥劑，其它栽培管理措施同常規(guī)大田生產(chǎn)。隨機(jī)選擇煙草株進(jìn)行如下處理，在快速生長期和打頂后1周僅噴施清水；每個(gè)處理的數(shù)量為30株。

實(shí)施例1

選一小區(qū)田，烤煙品種為云煙87，栽煙60株，按照15株/行排列，行株距為1m×0.5m。整個(gè)生育期間未施用任何殺蟲藥劑，其它栽培管理措施同常規(guī)大田生產(chǎn)。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在快速生長期噴施稀釋500倍的特比萘芬制劑水溶液(稀釋前特比萘芬制劑的用量為30g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯5％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

煙葉成熟后，選取3株煙草，每株的全部葉片洗凈，用紗布吸干表面水分，去掉中脈，105℃殺青15min，60℃烘干至恒重，粉碎，過40目篩，所得樣品用于測定煙葉中角鯊烯含量。

煙葉中角鯊烯的絕對含量的測定

稱取上述所得煙葉粉末20g用濾紙包裹裝入索氏提取器內(nèi)，同時(shí)水浴溫度恒定為75℃，加入200mL石油醚(60～90℃)回流加熱4h，用無水硫酸鈉干燥石油醚層，取石油醚提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋轉(zhuǎn)至干，得黃色煙葉提取物，用石油醚定溶至50mL，利用氣相色譜，采用內(nèi)標(biāo)法測定出煙葉中角鯊烯的絕對含量(mg/Kg)。

氣相色譜條件如下：HP-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，柱溫150℃，程序升溫15℃/min至290℃，恒溫15min；載氣為高純He；進(jìn)口溫度300℃；分流比20∶1；溶劑切除1.5min；進(jìn)樣量0.5μL。

煙氣中角鯊烯的相對含量的測定

參照文獻(xiàn)(GC/MS法檢測24種烤煙煙氣中角鯊烯含量[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,39(3):105-107.)，利用煙草熱解吸裝置獲得煙葉粉末的煙氣石油醚提取物：煙葉粉末在煙草熱解吸裝置中燃燒，燃燒時(shí)產(chǎn)生的煙氣在真空泵的作用下被抽吸進(jìn)密封的裝有石油醚的錐形瓶中，煙氣中的成分被石油醚吸收。

然后利用GC/MS對提取的煙氣中的成分進(jìn)行分析測定：根據(jù)Nist標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索到定性結(jié)果，根據(jù)質(zhì)譜的總離子流圖確定其百分含量，按照質(zhì)譜儀自帶的工作站軟件進(jìn)行歸一化測定，得到煙氣中角鯊烯的相對百分含量(％)。

其質(zhì)譜條件如下：GC/MS接口溫度290℃；離子源溫度235℃；電離方式EI源；電離電壓70eV；質(zhì)量掃描范圍30～500amu；SCAN(全掃描)檢測。

測試結(jié)果如下表1所示。

實(shí)施例2

煙苗種植及角鯊烯提取和檢測見實(shí)施例1。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在煙草打頂后1周噴施稀釋1000倍的特比萘芬制劑(稀釋前特比萘芬制劑的用量為40g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

測試結(jié)果如下表1所示。

實(shí)施例3

煙苗種植及角鯊烯提取和檢測見實(shí)施例1。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在煙草快速生長期和打頂后1周各噴施稀釋1500倍的特比萘芬制劑(稀釋前特比萘芬制劑的用量為50g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬10％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

測試結(jié)果如下表1所示。

實(shí)施例4：

煙苗種植及角鯊烯提取和檢測見實(shí)施例1。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在快速生長期噴施稀釋500倍的特比萘芬制劑(稀釋前特比萘芬制劑的用量為30g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

測試結(jié)果如下表1所示。

實(shí)施例5：

煙苗種植及角鯊烯提取和檢測見實(shí)施例1。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在煙草打頂后1周噴施稀釋1000倍的特比萘芬制劑(稀釋前特比萘芬制劑的用量為40g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

測試結(jié)果如下表1所示。

實(shí)施例6：

煙苗種植及角鯊烯提取和檢測見實(shí)施例1。

對每株煙草株進(jìn)行如下處理，在煙草快速生長期和打頂后1周各噴施稀釋1500倍的特比萘芬制劑(稀釋前特比萘芬制劑的用量為50g，由以下重量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：特比萘芬20％、三(月桂醇聚醚-4)磷酸酯8％、余量為乙醇)。隨機(jī)選擇30株。

測試結(jié)果如下表1所示。

表1角鯊烯測試結(jié)果

可以看出，在煙草快速生長期和打頂后1周各噴施1次特比萘芬制劑后，煙葉中的角鯊烯含量得到顯著提升。