相關(guān)申請的交叉參考

本申請要求2014年11月25日提交的美國臨時申請no.62/084,278的權(quán)益，所述申請的整體在本文中通過引用并入。

本公開屬于利用組合物對食物和硬表面進行抗微生物處理的領(lǐng)域，所述組合物包含無機酸、有機酸或其組合；銅(ii)鹽；和緩沖鹽、洗滌劑或其組合。

背景技術(shù)：

毒性水平的細菌、病毒和寄生蟲(“病原體”)對表面的污染是一個重大的顧慮。食品工業(yè)中使用的抗微生物組合物必須不僅能夠減少表面病原體的數(shù)量，它們還必須對人類消費來說是安全的。另外，抗微生物組合物不應有害地影響被處理的食物或表面的質(zhì)量。用在食物和表面上的抗微生物組合物還應該容易施加并比較便宜，以確保它們對于預期的產(chǎn)出來說是經(jīng)濟的。

因此，對于安全、有效、易于施加、并且在經(jīng)濟/商業(yè)上可行的抗微生物組合物，存在著需求。本公開涉及這些和其他重要的需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本公開提供了組合物，其包含無機酸、有機酸或其組合；銅(ii)鹽；和緩沖鹽、洗滌劑或其組合。還描述了利用這些組合物減少表面上病原體數(shù)量的方法。

一般性說明和以下詳細說明只是本發(fā)明示例性和解釋性的而不是限制性的，本發(fā)明如權(quán)利要求書所限定的。鑒于本文中提供的本發(fā)明的詳細說明，本發(fā)明的其他方面對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將是顯而易見的。

附圖說明

圖1描繪了用本公開的組合物配制的洗滌水樣品在ph2.2下的各個試驗的結(jié)果(214個數(shù)據(jù)點)。

圖2描繪了在45°f下加速儲存期測試的結(jié)果。用含有本公開的組合物的抗微生物溶液處理，與標準次氯酸處理相比，實現(xiàn)了主動腐爛(activedecay)降低大約30％。

圖3描繪了來自經(jīng)六周時間采取的250個隨機樣品的實際萵苣葉表面上的有機負荷的測量結(jié)果(以apccfu計)。用本公開的組合物或用標準次氯酸處理對萵苣葉樣品進行處理，所述標準次氯酸處理是農(nóng)產(chǎn)品行業(yè)中普遍使用的，并包含檸檬酸和氯的組合。

具體實施方式

通過結(jié)合形成本公開的一部分的附圖和實施例參考以下詳細說明，可以更容易理解本發(fā)明。要理解，本發(fā)明不限于在本文中描述和/或顯示的具體的裝置、方法、應用、條件或參數(shù)，而且在本文中使用的術(shù)語只是出于通過舉例的方式描述特定實施方式的目的，并不意圖限制請求保護的發(fā)明。還有，在說明書(包括權(quán)利要求書)中使用時，無數(shù)量限制的指稱物包括復數(shù)形式，并且對特定數(shù)值的指稱至少包括該特定值，除非上下文另有明確規(guī)定。當表述值的范圍時，另一種實施方式包括從一個特定值和/或到另一個特定值。類似地，當通過利用先行詞“約”將值表述為近似值時，應理解，所述特定值形成另一種實施方式。所有范圍都是包括性的和可組合的。

要領(lǐng)會，為了清楚起見在本文中在分開的實施方式的背景下描述的本發(fā)明的某些特征，也可以在單一實施方式中組合提供。相反，為了簡潔起見在單一實施方式的背景下描述的本發(fā)明的各種特征，也可以分開或以任何子組合提供。另外，對以范圍陳述的值的指稱包括在該范圍內(nèi)的每個和各個值。

用在本文中時，“食物”是指人類或家養(yǎng)動物可食用的固體和液體食品。固體食品包括但不限于肉制品例如家禽制品(例如雞、鴨和火雞制品)、蛋、牛肉制品、豬肉制品和海產(chǎn)品(例如魚、貝類、甲殼動物、軟體動物、棘皮動物、海藻)。固體食品也包括農(nóng)產(chǎn)品，例如水果、蔬菜、藻類、種子、谷物、幼芽、豆莢、大豆和堅果。固體食品還包括乳制品例如硬、軟和半軟奶酪。液體食品可包括飲料(例如果汁、蘇打水)、液體乳制品(例如牛奶和奶油)、發(fā)酵飲料(例如啤酒和葡萄酒)、以及用作動物飼料的液體飼料成分和液體飼料(例如飼養(yǎng)農(nóng)場家畜和家禽的發(fā)酵液體飼料)。

用在本文中時，“硬表面”是指包括但不限于下列的表面：木(硬木和工程木)，石灰華，mdf(中密度纖維板)，膠合板，陶，混凝土，瓷，油氈，層壓材料，花崗巖，大理石，石英，皂石，不銹鋼，銅，金屬合金，鐵，塑料，磚，其他石材，石膏夾心紙板、灰泥、玻璃、卡片材料、瓦楞纖維板、紙板、橡膠、乳膠、塑料、可包括兩種或更多種上述材料的復合材料，等等。

用在本文中時，“病原體”包括細菌、病毒和寄生蟲。能用本公開的組合物減少的細菌的實例包括革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌，例如，腸道沙門氏菌(salmonellaenterica)、單核細胞增生性李斯特菌(listeriamonocytogenes)、大腸桿菌(escherichiacoli)、肉毒梭狀芽孢桿菌(clostridiumbotulinum)、難辨梭狀芽孢桿菌(clostridiumdifficile)、彎曲桿菌屬(campylobacter)、蠟樣芽胞桿菌(bacilluscereus)、副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)、霍亂弧菌(vibriocholerae)、創(chuàng)傷弧菌(vibriovulnificus)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(yersiniaenterocolitica)、志賀氏菌屬(shigella)、及其組合。能用本公開的組合物減少的腸道沙門氏菌血清型變種(salmonellaentericaserovars)包括，例如，腸炎沙門氏菌(salmonellaenteriditis)、鼠傷寒沙門氏菌(salmonellatyphimurium)、浦那沙門氏菌(salmonellapoona)、海德爾堡沙門氏菌(salmonellaheidelberg)、和鴨沙門氏菌(salmonellaanatum)。能用本公開的組合物減少的病毒的實例包括腸道病毒、諾如病毒、流感病毒、輪狀病毒、或其組合。寄生蟲的實例包括隱孢子蟲屬(cryptosporidium)、剛地弓形蟲(toxoplasmagondii)、十二指腸賈第鞭毛蟲(giardiaduodenalis)、圓孢子蟲(cyclosporacayetanensis)、旋毛形線蟲(trichinellaspiralis)、牛帶絳蟲(taeniasaginata)、豬帶絳蟲(taeniasolium)、或其組合。

在一個方面，本公開提供了組合物，其包含無機酸、有機酸或其組合；銅(ii)鹽；和緩沖鹽、洗滌劑或其組合。在優(yōu)選實施方式中，這些組合物不包含氯和氯源。例如，本發(fā)明的優(yōu)選組合物不包含次氯酸鹽例如次氯酸鈉和次氯酸鈣。

優(yōu)選的無機酸是本領(lǐng)域已知的。可用于本公開的組合物和方法中的無機酸將具有小于或等于1的pka。優(yōu)選的無機酸包括，例如，硫酸、磷酸、鹽酸、硝酸、硼酸、氫溴酸、高氯酸、氫碘酸、及其組合。在一些方面，所述無機酸是硫酸。在其他方面，所述無機酸是磷酸。在別的方面，所述無機酸是鹽酸。所述無機酸可以以使得達到如本文中所述的預定ph的任何量存在。在一些實施方式中，基于所述組合物的重量，所述無機酸以約0.1和約3wt％之間、優(yōu)選約0.1和約1wt％之間的濃度存在。

優(yōu)選的有機酸是本領(lǐng)域已知的。可用于本公開的組合物和方法中的有機酸將具有1和7之間的pka。有機酸包括檸檬酸、抗壞血酸、乳酸、乙酸、過乙酸、甲酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、草酸、蘋果酸、苯甲酸、碳酸、苯酚、尿酸、?；撬?、對甲苯磺酸、三氟甲磺酸、氨甲基膦酸、及其組合。在一些方面，所述有機酸是檸檬酸。在其他方面，所述有機酸是抗壞血酸。在別的方面，所述有機酸是乳酸。在一些方面，所述有機酸是乙酸。在一些方面，所述有機酸是過乙酸。所述有機酸可以以使得達到如本文中所述的預定ph的任何量存在。在一些實施方式中，基于所述組合物的重量，所述有機酸以約0.1和約3wt％之間或約0.1和約2wt％之間、優(yōu)選約0.1和約1wt％之間的濃度存在。

本公開的組合物可包括無機酸或無機酸的組合。本公開的組合物可包括有機酸或有機酸的組合。本公開的組合物可包括無機酸和有機酸的混合物。在包含無機酸的混合物、有機酸的混合物、或無機酸和有機酸的混合物的那些實施方式中，酸的總量足以達到如本文中所述的預定ph。在一些實施方式中，基于所述組合物的重量，所述酸的組合在約0.1和約3wt％之間、約0.1和約2wt％之間、優(yōu)選約0.1和約1wt％之間的濃度下。

優(yōu)選的銅(ii)鹽包括硫酸銅(ii)、氯化銅(ii)、溴化銅(ii)等。優(yōu)選的銅(ii)鹽是硫酸銅(ii)，特別優(yōu)選的是五水合硫酸銅(ii)。在一些方面，所述銅(ii)鹽是氯化銅(ii)。在其他方面，所述銅(ii)鹽是溴化銅(ii)。銅(ii)鹽的組合也在本公開的范圍內(nèi)。

用于本公開的組合物中的所述銅鹽的濃度可由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定并且是能夠在被處理的特定表面上達到病原體減少的有效量。例如，所述銅鹽的濃度可以是最高1000ppm、在500和1000ppm之間、100和500ppm之間、或1和100ppm之間。根據(jù)本公開，用于本公開的組合物中的所述銅鹽的濃度在約1ppm和約80ppm之間、約1ppm和約70ppm之間、約1ppm和約60ppm之間、約1ppm和約50ppm之間、約1ppm和約40ppm之間、約1ppm和約30ppm之間、約1ppm和約20ppm之間、約1ppm和約15ppm之間、約1ppm和約10ppm之間、約3ppm和約10ppm之間、或約35ppm和約40ppm之間。本公開的其他優(yōu)選組合物包含約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、or100ppm的所述銅(ii)鹽。在一些實施方式中，所述銅(ii)鹽的濃度對水果和蔬菜應用來說在約1和19ppm之間，或者對肉、海鮮和/或家禽應用來說在約1和小于60ppm之間。

用于本公開的優(yōu)選的緩沖鹽包括硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉、硫酸鈣、及其組合。硫酸鈉、硫酸銨和硫酸鈣是特別優(yōu)選的緩沖鹽。在一些方面，所述緩沖鹽是硫酸銨。在其他方面，所述緩沖鹽是硫酸鈉。在一些方面，所述緩沖鹽是氯化鈉。在其他方面，所述緩沖鹽是硫酸鈣。

優(yōu)選的洗滌劑包括在美國食品藥品監(jiān)督管理局(u.s.foodanddrugadministration)優(yōu)選通常認為安全的濃度下的組合物。在本公開的范圍內(nèi)，“洗滌劑”是指表面活性劑或表面活性劑的混合物。用于本公開的組合物的特別優(yōu)選的洗滌劑包括十二烷基硫酸鹽、正烷基苯十二烷基硫酸鹽、烷基聚糖苷、月桂基硫酸鈉、聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯80)、及其組合。特別優(yōu)選的烷基聚糖苷包括烷基聚葡糖苷、癸基聚葡萄糖、月桂基聚葡萄糖、及其組合。

本公開的組合物可以包含無機酸、有機酸或其組合、銅(ii)鹽、和緩沖鹽，同時不包含洗滌劑。本公開的其他組合物可以包含無機酸、有機酸或其組合；銅(ii)鹽；和洗滌劑，同時不包含緩沖鹽。本公開的別的組合物可以包含無機酸、有機酸或其組合；銅(ii)鹽；緩沖鹽；和洗滌劑。

根據(jù)本公開，基于所述組合物的重量，所述緩沖鹽和/或洗滌劑在所述組合物中各自以0.01wt％和0.5wt％之間、0.01wt％和0.4wt％之間、0.01wt％和0.3wt％之間、0.01wt％和0.25wt％之間、0.01wt％和0.20wt％之間、0.01wt％和0.15wt％之間、或0.01wt％和0.10wt％之間的濃度存在。緩沖鹽和/或洗滌劑的優(yōu)選量將本公開的含水組合物的ph保持在預選的范圍內(nèi)。緩沖鹽和/或洗滌劑的優(yōu)選量也可以控制表面張力變化，從而允許提高表面上病原體的減少。本公開的其他優(yōu)選組合物包含基于所述組合物的重量，各自在約0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.30、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.40、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、或1wt％的濃度下的緩沖鹽和/或洗滌劑。緩沖鹽和/或洗滌劑的優(yōu)選量可以在低ph水平下提供降低的感官損害并可以提供苛性降低、毒性降低、和人類工作者更安全的操作，這些尚未在本領(lǐng)域中使用的現(xiàn)有組合物中觀察到。

本公開的一些組合物基本上由如本文中所述的無機酸、銅(ii)鹽、以及緩沖鹽和/或洗滌劑組成。也就是說，本公開設想了組合物，其包含如本文中所述的無機酸、銅(ii)鹽、和緩沖鹽和/或洗滌劑，以及只有不重大影響在本文中公開的發(fā)明的基本和新穎特征的那些附加材料，例如水。優(yōu)選地，這些組合物不包含氯和氯源例如次氯酸鹽。

本公開的一些組合物基本上由如本文中所述的有機酸、銅(ii)鹽、以及緩沖鹽和/或洗滌劑組成。也就是說，本公開設想了組合物，其包含如本文中所述的有機酸、銅(ii)鹽、和緩沖鹽和/或洗滌劑，以及只有不重大影響在本文中公開的發(fā)明的基本和新穎特征的那些附加材料，例如水。優(yōu)選地，這些組合物不包含、或含有微量的氯和氯源例如次氯酸鹽。

在某些實施方式中，包含有機酸例如抗壞血酸的本公開組合物將具有抗氧化性質(zhì)。在其他實施方式中，所述組合物還可以包含非有機酸抗氧化劑。fda通常認為安全的抗氧化劑是本領(lǐng)域中已知的，并包括例如植物提取物?？梢砸栽诩s0.01wt％和約1.0wt％之間、約0.01wt％和約0.2wt％之間、約0.01wt％和約0.15wt％之間、約0.01wt％和約0.10wt％之間、或約0.01wt％和約0.05wt％之間的濃度包含所述抗氧化劑。

在一些實施方式中，本發(fā)明的優(yōu)選組合物是非氧化性的，并可以不包含或含有微量的臭氧、過乙酸、二氧化氯和次氯酸鹽。本公開的非氧化性組合物對于水再循環(huán)應用來說是有利的，并可以產(chǎn)生顯著的節(jié)水。

在特別優(yōu)選的實施方式中，本公開的組合物是含水組合物?；谑褂盟鏊芤旱奶囟☉茫鰺o機酸和/或有機酸、所述銅鹽、和所述緩沖鹽和/或洗滌劑在所述水溶液中的濃度可以變化。在一些實施方式中，水與其他組合物組分的比率為約1:1。在其他實施方式中，水與其他組合物組分的比率在1:1和2:1之間。在其他實施方式中，水與其他組合物組分的比率在約1:1和約20:1之間或約1:1和約500:1之間。在一些實施方式中，水與其他組合物組分的比率為約20:1至約500:1。在水溶液中可用于最終應用的濃度可以低于在原始固體形式中的濃度，后者可以被稀釋約500倍、約450倍、約400倍、約350倍、約300倍、約250倍、約200倍、約150倍、約100倍、約90倍、約80倍、約70倍、約60倍、約50倍、約40倍、約30倍、約20倍、約10倍、約5倍、約4倍、約3倍、或甚至約2倍。適當?shù)南♂屃靠梢曰跐饪s物強度和即將處理的物品的預期病原體負荷來選擇。

本公開的水溶液可以是中性ph(約ph7)或酸性ph(ph小于7)或弱堿性ph(ph最高約9)。在優(yōu)選實施方式中，ph在約1和7之間。在一些實施方式中，ph在約2和7之間。在其他實施方式中，ph在約3和7之間。在別的實施方式中，ph在約4和7之間。優(yōu)選地，本公開的水溶液的ph為約1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6.、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、或約9。在別的實施方式中，本公開的水溶液的ph在1.6和6.5之間、2.1和6.5之間、1.6和4.5之間、1.6和3.5之間、或2.0和3.0之間。根據(jù)本公開，取決于選定的應用，利用本領(lǐng)域已知的方法，在約5℃或約22℃下測試所述水溶液的ph。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易領(lǐng)會，本公開的水溶液的ph可以通過調(diào)節(jié)所述溶液中的酸的量來調(diào)節(jié)。

在本公開的一些實施方式中，所述組合物或者可以是固體的形式，并且可以是丸粒、顆粒、粉末、莢(pods)、其他可溶解/水溶性膜或包裝、或片劑。這些組合物包含10重量％或更少的水/水分。所述組合物可以被包裹在水溶性膜中。水溶性膜可以由例如聚乙烯醇膜、脂族聚醚膜或聚乙二醇膜形成。這樣的膜是本領(lǐng)域已知的。合適的膜將完全可溶或可分散于溫度超過約5℃的水中。所述膜將具有約0.5密耳至約5密耳的厚度，優(yōu)選約1至3密耳。所述水溶性膜可以利用例如本領(lǐng)域已知的熱或超聲密封法來密封。

在其他方面，本公開提供了減少表面上病原體數(shù)量的方法，所述方法包括將本公開的任一種組合物施加于表面。所述表面可以是食物表面或硬表面。優(yōu)選地，用于所述方法中的組合物是水溶液。所述表面可以經(jīng)由本領(lǐng)域已知的任何手段來處理。例如，在優(yōu)選實施方式中，本公開的任何組合物可以經(jīng)由噴灑、噴霧、漂洗、浸泡、浸漬、洗滌等施加于所述食物的表面?？梢允褂媒禾幚恚ㄍ耆]，不管是通過機械或手動添加、在單槽還是多槽設計中?？梢允褂脟婌F施加，并且所述噴霧施加可以由單或多噴嘴或滴灑器組成。在一些實施方式中，噴霧施加可以利用超聲波噴頭或可以與機械磨蝕相組合以提高表面積接觸。

用于所述方法中的水溶液可以在商業(yè)上可行的并且不傷害所述水溶液將要施加的表面的任何溫度下，例如，在約32°f(0℃)和212°f(100℃)之間或約32°f(0℃)和135°f(57℃)之間。所述溶液可以是冷的，例如約32°f或約38°f(約3℃)，或溫熱的，例如約135°f。在其他實施方式中，這些溶液可以是約32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、或140°f。在別的實施方式中，用于所述方法中的水溶液可以在約140和約212°f之間的溫度下。對于在硬表面上使用來說，較高的溫度可能是優(yōu)選的。

在優(yōu)選實施方式中，施加包括將所述表面浸沒足夠的時間以確保所述組合物在所述表面上和/或內(nèi)的充分覆蓋和/或滲透。浸沒時間可以是最多例如5分鐘，最多約4分鐘、最多約3分鐘，最多約2分鐘，或最多約1分鐘。也設想了浸沒時間少于1分鐘，并在某些較低的ph水平下可以短達兩秒。優(yōu)選的浸沒時間在約2秒和約180秒之間，約2秒和約120秒之間，約2秒和約90秒之間，約2秒和約60秒之間，約2秒和約45秒之間，或約2秒和約30秒之間。

本公開的組合物有效減少表面上的病原體即微生物、病毒或寄生蟲的數(shù)量。也就是說，與沒有用本公開的組合物處理的表面相比，用本公開的組合物處理表面降低了細菌、病毒和/或寄生蟲在所述表面上的生長和/或繁殖(例如，通過殺滅這樣的細菌、病毒和/或寄生蟲或大大減緩所述細菌、病毒和/或寄生蟲的生長)。例如，與沒有用本公開的組合物處理的表面相比，本公開的組合物有效地將病原體數(shù)量減少約10％。在其他實施方式中，當與沒有用本公開的組合物處理的表面相比時，本公開的組合物在減少表面上的病原體方面的有效性高約20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、110％、120％、130％、140％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、300％、400％、500％或更高。與已經(jīng)用標準的氯和檸檬酸處理進行處理的表面相比，本公開的組合物有效地將病原體數(shù)量減少約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、或約90％。

混濁條件增加病原體產(chǎn)生食源性疾病的風險。本公開的組合物有效減少病原體數(shù)量，即使在混濁條件下，例如在食品加工設施處。

提供以下實施例來說明本文中描述的組合物、方法和性質(zhì)。所述實施例僅僅是說明性的，并不打算將本公開局限于其中闡述的材料、條件或方法參數(shù)。

實施例

實施例1：通用細菌測定法

利用制造商的說明書(vivionebiosciences，llc，pinebluff，ar)進行vivionerapid-b儀器啟動。按照制造商的說明書進行性能驗證來驗證性能和鑒別任何潛在的問題。然后將rapid-b系統(tǒng)準備好用于運行通用細菌總平板計數(shù)測定法。然后基于測試方案制備處理溶液。溶液以99:1接種；意味著將99ml處理溶液與1ml的菌禽淋冼液(bacterialbirdrinse)組合，產(chǎn)生10^-2稀釋液。利用無菌緩沖蛋白胨水進行連續(xù)稀釋(通常使用10^-3稀釋)以放大稀釋倍數(shù)。通過將570μl的無菌緩沖蛋白胨水、330μl的tpc(總平板計數(shù))試劑、和來自待測試的稀釋管的100μl組合到反應管中，來制備樣品。這個過程將樣品額外稀釋10^-1(因此10^-4是所測試的總稀釋度)。將樣品反應管放置15分鐘，定期渦旋。打開在所述vivione機器上的通用細菌方案，并按照vivionebiosciences手冊中的指示確認操作設置。15分鐘后，將所述反應管放在樣品臂上并移動到運行位置以開始分析。一旦樣品運行后，將所述臂返回到?jīng)_洗位置以允許在完成后進行沖洗。

實施例2：綠葉蔬菜的處理使腐爛延遲

用本公開的抗微生物組合物配制洗滌水，在此稱為組合物a或組合物ps+，并在浸槽中用于處理收獲后的綠葉蔬菜。還測試了用標準氯和檸檬酸處理進行處理的洗滌水以進行比較。所述洗滌水樣品各自在大約38°f的溫度下用于浸槽中，并用于在紊流水中對綠葉蔬菜處理三十(30)秒，從所述綠葉蔬菜的表面直接取超過250個樣品以獲得結(jié)果。

組合物a包含低pka值的無機酸(硫酸)，與35-40ppm的五水合硫酸銅(銅離子9-10ppm)、緩沖鹽(0.5％硫酸銨)在38°f下在水中組合。所述洗滌水溶液的ph是2.2。

組合物ps+包含低pka值的無機酸(硫酸)，與35-40ppm的五水合硫酸銅(銅離子9-10ppm)、緩沖鹽(0.05％硫酸銨)和表面活性劑(烷基聚糖苷)在38°f下在水中組合。所述洗滌水溶液的ph是2.2。

用組合物a或用標準氯和檸檬酸處理對綠葉蔬菜進行處理。處理之后，檢查所述綠葉蔬菜的感官特征和可見的腐爛并經(jīng)由總平板計數(shù)(tpc)測量微生物負荷。結(jié)果被概括在表1中。

表1

對于用組合物a處理的產(chǎn)品來說，在第0天時的tpc水平大大降低(7,268對比208,217)。第7天時，所述tpc仍然大大低于標準處理，同時提供改善的相對質(zhì)地、顏色和氣味。第15天時，tpc保持顯著低于標準處理，并且在質(zhì)地、顏色、氣味、腐爛和商業(yè)應用的可接受性方面具有大大改善的差異。14至16天后，可見的腐爛增加，主要在切口不齊和受擠壓的葉子切割端，然而水平仍然較低，并且具有優(yōu)異的質(zhì)地、顏色、氣味和腐爛。在未受損傷的葉子中的氧化變色明顯減少。標準氯處理的葉子在10至14天時開始顯示出總體衰敗并伴有組織損傷。在標準氯處理的產(chǎn)品中繼發(fā)腐爛的窩迅速進展，而在用組合物a處理的產(chǎn)品中的腐爛(即使在第20天時)仍然只與個別葉子相關(guān)。

用組合物ps+配制的洗滌水樣品在ph2.2下進行處理。后續(xù)的試驗顯示總平板計數(shù)(tpc)顯著減少。圖1中顯示了在ph2.2下各個試驗的結(jié)果(214個數(shù)據(jù)點)。結(jié)果證明，相比于20ppm氯在ph6.0下的優(yōu)化氯化處理，在所有試驗中tpc降低92％。所述降低通常在食源性疾病風險最高的最混濁條件期間是最高的。

圖2顯示了在45°f下加速保存期測試的結(jié)果。用含有組合物ps+的抗微生物溶液處理，與標準次氯酸處理相比，實現(xiàn)了主動腐爛降低大約30％。雖然不希望被任何特定理論約束，但據(jù)推測，這種降低可以歸功于在開始處理時大幅減少的病原體負荷。

實施例3：用本公開的抗微生物組合物配制的洗滌水中沒有生物體

在處理收獲后的綠葉蔬菜后，對實施例2中所用的含有組合物ps+的洗滌水進行酵母和霉菌測試以及總平板計數(shù)(tpc)測試。對于酵母和霉菌，測量集落形成單位(cfu)/ml。使用的檢測限為1cfu/ml。用組合物ps+處理的三十(30)個洗滌水樣品中，29個產(chǎn)生<1cfu/ml的檢測，1個產(chǎn)生等于檢測限1cfu/ml的報告結(jié)果。標準氯處理的洗滌水表明，酵母<10cfu/ml，霉菌為平均55cfu/ml，并且tpc為平均3,172。

實施例4：通過暴露于本公開的抗微生物組合物，病原性生物體顯著減少

將攻擊培養(yǎng)物以預定濃度和暴露時間暴露于實施例2中使用的組合物a和組合物ps+，然后計數(shù)。將所述攻擊生物體在暴露之前的群體與暴露后存在的群體進行比較，以確定各組合物的殺菌能力。

評價下列攻擊微生物：

金黃色葡萄球菌(atcc#6538)

單核細胞增生性李斯特菌(atcc#7646)

大腸桿菌o157：h7(atcc#35150)

腸道沙門氏菌鴨血清型變種(salmonellaentericaserovaranatum)(atcc#9270)

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(“mrsa”)(atcc#33592)

從凍干制品根據(jù)制造商的說明書(美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(“atcc”)，manassas，va)或從儲存的平板制備所述培養(yǎng)物。將所述培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到胰蛋白酶大豆肉湯(trypticsoybroth)(tsb，neogen，lansing，mi)中并在35±2℃溫育24±2小時。溫育之后，將所述培養(yǎng)物離心(multifugex1r，thermoscientific，waltham，ma)，在無菌蛋白胨水中洗滌并重懸浮至它的原始體積。將所述培養(yǎng)物在胰蛋白酶大豆瓊脂(trypticsoyagar)(tsa，neogen)上以適當?shù)南♂尪蠕伆澹源_定實際的終濃度。

將所述培養(yǎng)物暴露于各消毒劑，組合物a和組合物ps+，其用無菌di水稀釋到ph2.2或1.3。準備含有99ml各消毒劑的單獨的250ml錐形燒瓶，以及含有99mlbutterfield氏磷酸鹽稀釋液(bpb)的完全相同的燒瓶作為對照。將消毒劑燒瓶溫和旋轉(zhuǎn)以產(chǎn)生殘留液體運動，然后在各燒瓶的中央添加1ml等份的測試培養(yǎng)物，在接種期間避開所述燒瓶的頸和側(cè)面兩處。將每個燒瓶旋轉(zhuǎn)1分鐘以徹底混合內(nèi)容物，然后將所述混合物的1ml份添加到9ml卵磷脂中和溶液管中，所述卵磷脂中和溶液按照aoac國際(rockville，md)官方方法^sm960.09(清毒劑的殺菌和凈化消毒作用)制備，所述方法為了所有目的在本文中通過引用并入。對于bpb對照，利用相同的攻擊接種體重復該程序。

在處理和中和后，用胰蛋白胨葡萄糖提取物瓊脂(tryptoneglucoseextractagar)(tgea，neogen)，將樣品以直至10^-6的連續(xù)稀釋度傾倒鋪板(中和管作為10^-1處理)。將tgea板在36±1℃溫育27±3小時。溫育后，利用quebec菌落計數(shù)器(#3325型，reicherttechnologies，depew，ny)對平板進行計數(shù)。記錄對處理和未處理樣品觀察到的菌落數(shù)量。

將每個樣品觀察到的原始計數(shù)轉(zhuǎn)化為log10cfu/ml。將所述處理樣品中存在的攻擊生物體的量與對照樣品中存在的量比較，以確定各攻擊生物體的對數(shù)減少。

測試結(jié)果在表2中示出。

表2

測試證實了顯著的抗微生物減少，其中當將銅離子與洗滌劑添加進行組合時，觀察到了協(xié)同效應。當與銅和洗滌劑組合時，無機酸或有機酸在用結(jié)合鹽緩沖時產(chǎn)生了顯著的抗微生物能力而沒有感官損害。

實施例5–相比于傳統(tǒng)組合物方法，通過使用本發(fā)明公開的組合物控制有機負荷激增

相比于傳統(tǒng)的處理，本公開的組合物表現(xiàn)出顯著的有機負荷激增抑制。圖3顯示了來自經(jīng)六周時間采取的250個隨機樣品的實際萵苣葉表面上的有機負荷的測量結(jié)果(以apccfu計)。用實施例2的組合物ps+或用標準次氯酸處理對萵苣葉樣品進行處理。這對于降低能夠引起高水平病原體的意外激增的可能性來說是特別重要的，所述高水平病原體可能導致食源性疾病。

當在本文中對物理性質(zhì)例如分子量或化學性質(zhì)例如化學式使用范圍時，意在包括針對其中的具體實施方式的范圍的所有組合和子組合。

本文件中引用或描述的各專利、專利申請和出版物的公開內(nèi)容在此以其整體通過引用并入本文中。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將領(lǐng)會，對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式可做出許多變化和修改，而且這樣的變化和修改可在不背離本發(fā)明的精神下做出。因此，權(quán)利要求書意欲覆蓋落在本發(fā)明的真正精神和范圍內(nèi)的所有這種等同變體。