一種生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法。本發(fā)明通過(guò)獲取單體精卵、適時(shí)處理受精卵、檢測(cè)幼蟲倍性等技術(shù)環(huán)節(jié)，創(chuàng)造了一種以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法，可以獲得100％香港牡蠣三倍體。本發(fā)明采用單體精卵優(yōu)選、配對(duì)，有效的消除了以往牡蠣三倍體誘導(dǎo)過(guò)程中混合精卵同步性差的缺陷，獲得的同步性較高的合子。本發(fā)明顛覆了傳統(tǒng)上以30-50％出現(xiàn)第一極體作為處理時(shí)間點(diǎn)，處理20min為最佳時(shí)間段的固定思維模式；而是以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)，采用A+1/3B作為處理時(shí)間點(diǎn)，B+C作為處理時(shí)間段，回避了溫度等外界環(huán)境條件對(duì)其處理的影響，可以成功的誘導(dǎo)出香港牡蠣全三倍體。
【專利說(shuō)明】一種生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明屬于海洋農(nóng)業(yè)中貝類遺傳育種【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法。

【背景技術(shù)】
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[0002]我國(guó)是牡蠣養(yǎng)殖大國(guó)，09-13年產(chǎn)量均在350-380萬(wàn)噸左右；而香港牡蠣(Crassostrea hongkongensis)的產(chǎn)量在130萬(wàn)噸左右，它占牡販產(chǎn)量的30%,養(yǎng)殖貝類產(chǎn)量的12%，海水養(yǎng)殖總產(chǎn)量的7%，世界產(chǎn)量的21%以上(中國(guó)漁業(yè)年鑒，2014)。香港牡蠣分布于我國(guó)的廣東、廣西、福建，是暖溫性近岸生長(zhǎng)的一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的貝類，喜好高溫低鹽環(huán)境，其肉味鮮美，富含蛋白質(zhì)及其多種人體必需氨基酸，被譽(yù)為“海洋中的牛奶”，是一種重要的海洋生物資源。它具有個(gè)體大、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者青睞；除鮮食、加工成蠔干、蠔豉外，還是華南沿海牡蠣深加工高端產(chǎn)品(牡蠣高值提取物、牡蠣保健膠囊、牡蠣鈣等)的重要原料。
[0003]自Stanley等(1980)最早采用細(xì)胞松弛素B(CB)處理美洲牡販(C.virginica)受精卵，得到8個(gè)月三倍體子代以來(lái)，貝類三倍體育種技術(shù)備受重視。三倍體貝類具生長(zhǎng)快、個(gè)體大、育性差、品質(zhì)好、繁殖季節(jié)死亡率低等優(yōu)勢(shì)。之后在長(zhǎng)牡蠣(C.gigas) (Allen等，1986 ；Guo等，1996 ;于瑞海等，2000 ;王昭萍等,2004 ;孔靜等，2011)、食用牡販(Ostreaedulis) (Gendreau 等，1990)、悉尼巖牡蟲厲(Saccostrea commercialis) (Nell, 1995)和葡萄牙牡販(C.angulata)(曾志楠等，1994)等牡販中也相繼成功誘導(dǎo)出三倍體，但是幾乎尚未見(jiàn)到香港牡蠣多倍體育種的相關(guān)報(bào)道。
[0004]牡蠣多倍體誘導(dǎo)育種已經(jīng)發(fā)展了 30多年，學(xué)者們成功培育出長(zhǎng)牡蠣四倍體，通過(guò)四倍體與二倍體雜交獲得全三倍體(Piferrer等，2009)。但是對(duì)于尚未獲得四倍體的牡蠣物種而言，直接誘導(dǎo)三倍體仍然是主要的多倍體生產(chǎn)方法，傳統(tǒng)的誘導(dǎo)方法仍存在著倍化率不高，且可操作穩(wěn)定性較差等不足。


【發(fā)明內(nèi)容】

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[0005]本發(fā)明的目的是為了解決傳統(tǒng)三倍體制作方法中存在的誘導(dǎo)率較低，且倍化率不穩(wěn)等缺陷，從而提出了一種以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法，可以生產(chǎn)出100%香港牡蠣三倍體。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便、實(shí)用性強(qiáng)、高效易行等優(yōu)點(diǎn)，這為香港牡蠣三倍體培育及其四倍體生產(chǎn)奠定了堅(jiān)實(shí)理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。
[0006]本發(fā)明的生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0007]a、獲取單體卵子:在香港牡蠣繁殖季節(jié)(4-8月)，以同一個(gè)地理群體的作為核心群體為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量> 5000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本；收集單體卵子，在鹽度為15-20ppt海水中浸泡30-60min，待其生發(fā)泡破裂完全后，再用新鮮鹽度為15-20ppt海水清洗卵子，得到單體卵液。卵子反復(fù)利用新鮮海水清洗2-3次，其形態(tài)為圓形或橢圓形；
[0008]b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度15-20ppt海水中激活10-15min ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的個(gè)體作為雄性親本，收集單體精子；
[0009]c、適時(shí)處理受精卵:將單體精子加入單體卵液中，控制每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子，卵子密度控制在< 5萬(wàn)個(gè)/mL，在此期間，溫度控制在25-32°C，鹽度控制在15_24ppt，其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10%第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10%卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C，選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)采用常規(guī)方法處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放，處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，完后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得香港牡蠣三倍體D形幼蟲。
[0010]檢測(cè)幼蟲倍性:對(duì)于c步驟中獲得初孵D形幼蟲采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有幼蟲均處于三倍體狀態(tài)，無(wú)二倍體及非整倍體產(chǎn)生。
[0011]其受精卵可以正常孵化、按照該物種的常規(guī)培育方法即可獲得全三倍體子代。
[0012]所述的常規(guī)方法處理受精卵是指利用細(xì)胞松弛素B(CB)或6-二甲基氨基嘌呤處理受精卵，不包括低滲、冷熱溫度休克及靜水壓等物理方法。
[0013]本發(fā)明不同傳統(tǒng)牡蠣三倍體直接誘導(dǎo)方法，存在著以下主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn):①配對(duì)策略不同:傳統(tǒng)方法采用的混合精卵作為誘導(dǎo)對(duì)象，合子發(fā)育同步性較差；而本發(fā)明通過(guò)單體精卵配對(duì)，合子同步性非常高，近乎一致。②處理時(shí)機(jī)不同:傳統(tǒng)方法處理時(shí)間點(diǎn)在30-50%受精卵出現(xiàn)第一極體，而本發(fā)明以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)，從受精開始至10%第一極體出現(xiàn)記為時(shí)間段A，從第一極體至出現(xiàn)10%第二極體出現(xiàn)記為時(shí)間段B，從第二極體釋放至出現(xiàn)10%卵裂合子記為時(shí)間段C，在受精卵第一極體100%釋放完畢，即處理時(shí)機(jī)控制在A+1/3B效果最佳。③處理持續(xù)時(shí)間判斷方法不同:傳統(tǒng)方法處理持續(xù)時(shí)間固定為20min，使其在不同環(huán)境的三倍體出現(xiàn)了較大幅度變化，且倍化率不穩(wěn)定；而本發(fā)明以受精卵發(fā)育作為生物學(xué)指標(biāo)，以B+C時(shí)間段作為處理持續(xù)時(shí)間，一般為15-30min，有效的回避了溫度、鹽度等環(huán)境因子對(duì)其發(fā)育的影響，保證了第二極體被有效的抑制在合子內(nèi)，從而形成全三倍體。④獲得結(jié)果不同:傳統(tǒng)方法誘導(dǎo)三倍體率在60-90%變化，經(jīng)常出現(xiàn)非整倍體；而本發(fā)明三倍體率穩(wěn)定在100%，且無(wú)二倍體、四倍體及非整倍體出現(xiàn)。
[0014]本發(fā)明通過(guò)獲取單體精卵、適時(shí)處理受精卵、檢測(cè)幼蟲倍性等技術(shù)環(huán)節(jié)，創(chuàng)造了一種以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)的時(shí)間點(diǎn)定量處理方法，可以獲得100%香港牡蠣三倍體。本發(fā)明采用單體精卵優(yōu)選、配對(duì)，有效的消除了以往牡蠣三倍體誘導(dǎo)過(guò)程中混合精卵同步性差的缺陷，獲得的同步性較高的合子。本發(fā)明顛覆了傳統(tǒng)上以30-50%出現(xiàn)第一極體作為處理時(shí)間點(diǎn)，處理20min為最佳時(shí)間段的固定思維模式；而是以受精卵發(fā)育階段作為生物學(xué)指標(biāo)，采用A+1/3B作為處理時(shí)間點(diǎn)(100%第一極體釋放完畢)，B+C作為處理時(shí)間段(15-30min)，回避了溫度等外界環(huán)境條件對(duì)其處理的影響，可以成功的誘導(dǎo)出香港牡蠣全三倍體。本發(fā)明為香港牡蠣多倍體育種奠定了堅(jiān)實(shí)的理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)便，實(shí)用性強(qiáng)，高效易行等優(yōu)點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
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[0015]圖1為本發(fā)明的示意圖。上半部分為傳統(tǒng)方法，下半部分為本發(fā)明技術(shù)路線圖?！揪唧w實(shí)施方式】:
[0016]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0017]實(shí)施例1
[0018]a、獲取單體卵子:于2013年6月下旬，在中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所湛江實(shí)驗(yàn)站本地的香港牡蠣作為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體30個(gè)；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量平均為8000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本6個(gè)；收集單體卵子，在鹽度為18ppt海水中浸泡45min，待其生發(fā)泡100%完全破裂，獲得卵子。卵子利用鹽度為18ppt的新鮮海水反復(fù)清洗3次，獲得單體卵液，卵子均為圓形或橢圓形。
[0019]b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體若干個(gè)12個(gè)；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度18ppt海水中激活12min ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的6個(gè)個(gè)體作為雄性親本，獲取其單體精子。
[0020]c、適時(shí)處理受精卵:將6個(gè)單體精子加入6個(gè)單體卵液中，以每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子為宜，卵子密度為彡5萬(wàn)個(gè)/mL。在此期間，溫度為29.6V，鹽度為18ppt。其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10%第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A(10min)，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B(12min)，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10 %卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C(9min)。選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)，即受精后14min利用0.5mg/L細(xì)胞松弛素B(CB)處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放；處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，即處理21min后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得100%香港牡蠣三倍體D形幼蟲。
[0021]d、檢測(cè)幼蟲倍性:對(duì)于c步驟中獲得初孵D形幼蟲采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有幼蟲均處于三倍體狀態(tài)，無(wú)二倍體及非整倍體產(chǎn)生。在此之后，按照該物種的常規(guī)培育方法飼養(yǎng)全三倍體子代。
[0022]實(shí)施例2
[0023]a、獲取單體卵子:于2014年5月下旬，在中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所湛江實(shí)驗(yàn)站以珠海群體的香港牡蠣作為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體25個(gè)；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量平均為12000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本5個(gè)；收集單體卵子，在鹽度為20ppt海水中浸泡30min，待其生發(fā)泡100%完全破裂，得到卵子。卵子利用鹽度為20ppt的新鮮海水反復(fù)清洗3次，得到單體卵液，卵子均為圓形或橢圓形。
[0024]b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體若干個(gè)10個(gè)；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度20ppt海水中激活15min ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的5個(gè)個(gè)體作為雄性親本，獲取其單體精子。
[0025]c、適時(shí)處理受精卵:將5個(gè)單體精子加入5個(gè)單體卵液中，以每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子為宜，卵子密度為彡5萬(wàn)個(gè)/mL。在此期間，溫度為27.5°C，鹽度為20ppt。其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10%第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A(12min)，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B(15min)，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10%卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C(10min)。選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)，即受精后17min利用0.5mg/L細(xì)胞松弛素B處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放；處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，即處理25min后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得100%香港牡蠣三倍體D形幼蟲。
[0026]d、檢測(cè)幼蟲倍性:對(duì)于c步驟中獲得初孵D形幼蟲采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有幼蟲均處于三倍體狀態(tài)，無(wú)二倍體及非整倍體產(chǎn)生。在此之后，按照該物種的常規(guī)培育方法飼養(yǎng)全三倍體子代。
[0027]實(shí)施例3
[0028]a、獲取單體卵子:于2014年5月上旬，在廣西貝類綜合試驗(yàn)站以茅尾海群體的香港牡蠣作為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體27個(gè)；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量平均為6000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本9個(gè)；收集單體卵子，在鹽度為16ppt海水中浸泡40min，待其生發(fā)泡100%完全破裂，獲得卵子。卵子利用鹽度為16ppt的新鮮海水反復(fù)清洗3次，卵子均為圓形或橢圓形。
[0029]b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體若干個(gè)15個(gè)；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度16ppt海水中激活lOmin ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的9個(gè)個(gè)體作為雄性親本，獲取單體精子。
[0030]c、適時(shí)處理受精卵:將9個(gè)單體精子分別加入9個(gè)單體卵液中，以每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子為宜，卵子密度為彡5萬(wàn)個(gè)/mL。在此期間，溫度為25.4°C，鹽度為16ppt。其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10 %第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A (14min)，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B(18min)，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10%卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C(12min)。選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)，即受精后20min利用0.5mg/L細(xì)胞松弛素B處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放；處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，即處理30min后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得100%香港牡蠣三倍體D形幼蟲。
[0031]d、檢測(cè)幼蟲倍性:對(duì)于c步驟中獲得初孵D形幼蟲采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有幼蟲均處于三倍體狀態(tài)，無(wú)二倍體及非整倍體產(chǎn)生。在此之后，按照該物種的常規(guī)培育方法飼養(yǎng)全三倍體子代。
[0032]實(shí)施例4
[0033]a、獲取單體卵子:于2014年7月上旬，在廣西貝類綜合試驗(yàn)站以茅尾海群體的香港牡蠣作為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體21個(gè)；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量平均為5000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本4個(gè)；收集單體卵子，在鹽度為15ppt海水中浸泡60min，待其生發(fā)泡100%完全破裂，獲得卵子。卵子利用鹽度為15ppt的新鮮海水反復(fù)清洗3次，卵子均為圓形或橢圓形。
[0034]b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體若干個(gè)12個(gè)；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度15ppt海水中激活lOmin ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的4個(gè)個(gè)體作為雄性親本，獲得單體精子。
[0035]c、適時(shí)處理受精卵:將4個(gè)單體精子分別加入4個(gè)單體卵液中，以每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子為宜，卵子密度為彡5萬(wàn)個(gè)/mL。在此期間，溫度為31.8°C，鹽度為15ppt。其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10%第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A(8min)，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B(10min)，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10%卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C(7min)。選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)，即受精后11.3min利用450 μ mol/L的6- 二甲基氨基嘌呤^DMAP)處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放；處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，即處理17min后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得100%香港牡蠣三倍體D形幼蟲。
[0036]d、檢測(cè)幼蟲倍性:對(duì)于c步驟中獲得初孵D形幼蟲采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所有幼蟲均處于三倍體狀態(tài)，無(wú)二倍體及非整倍體產(chǎn)生。在此之后，按照該物種的常規(guī)培育方法飼養(yǎng)全三倍體子代。
【權(quán)利要求】
1.一種生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量分析方法，其特征在于，包括以下步驟: a、獲取單體卵子:在香港牡蠣繁殖季節(jié)，以同一個(gè)地理群體的作為核心群體為材料，選取成熟的3-5齡香港牡蠣雌性個(gè)體；以卵子數(shù)量和質(zhì)量雙重指標(biāo)進(jìn)行選擇，挑選出發(fā)育整齊，卵子數(shù)量> 5000萬(wàn)個(gè)，卵膜完整，卵黃積累呈現(xiàn)為深黃色的個(gè)體作為雌性親本；收集單體卵子，在鹽度為15-20ppt海水中浸泡30-60min，待其生發(fā)泡破裂完全后，再用新鮮的鹽度為15-20ppt海水清洗卵子，得到單體卵液。 b、獲取單體精子:以a步驟中的核心群體為材料，篩選出2-3齡的雄性個(gè)體；之后對(duì)其精子質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，篩選出顯微鏡下> 30%精子活動(dòng)的個(gè)體，在鹽度15-20ppt海水中激活10-15min ;之后再次鏡檢，以> 90%精子活動(dòng)的個(gè)體作為雄性親本，收集單體精子； C、適時(shí)處理受精卵:將單體精子加入單體卵液中，控制每個(gè)卵子周邊有3-8個(gè)精子，卵子密度控制在< 5萬(wàn)個(gè)/mL，在此期間，溫度控制在25-32°C，鹽度控制在15_24ppt，其中，從精子加入開始，至發(fā)現(xiàn)10%第一極體放出的時(shí)間段設(shè)置為A，從第一極體至發(fā)現(xiàn)10%第二極體放出的時(shí)間段設(shè)置為B，從第二極體至發(fā)現(xiàn)10%卵裂個(gè)體的時(shí)間段設(shè)置為C，選擇在(A+1/3B)時(shí)間點(diǎn)采用常規(guī)方法處理受精卵，抑制受精卵第二極體排放，處理持續(xù)時(shí)間為(B+C)，完后將其放置于正常海水中孵化，即可以獲得全香港牡蠣三倍體幼蟲。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量分析方法,其特征在于，所述的常規(guī)方法處理受精卵是指利用細(xì)胞松弛素B或6- 二甲基氨基嘌呤處理受精卵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)香港牡蠣全三倍體的時(shí)間點(diǎn)定量分析方法,其特征在于，所述的用新鮮的鹽度為15-20ppt海水清洗卵子，清洗次數(shù)為2-3次。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK104255586SQ201410403580
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年8月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月15日
【發(fā)明者】張躍環(huán), 喻子牛, 蘇家齊, 張揚(yáng), 李軍, 李瓊珍 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所