小花棘豆黃酮的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種小花棘豆黃酮的制備方法及應(yīng)用，包括以下步驟：(1)超臨界CO2提取小花棘豆黃酮；(2)小花棘豆黃酮制備綿羊飼料添加劑。本發(fā)明具有制有機(jī)溶劑消耗少，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，污染少，所得產(chǎn)品提取率和純度均較高的特點(diǎn)，提取得到的小花棘豆黃酮可用于增強(qiáng)綿羊免疫、抗氧化功能。
【專(zhuān)利說(shuō)明】小花棘豆黃酮的制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于畜牧養(yǎng)殖【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種小花棘豆黃酮的制備方法及應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]目前，食品的安全問(wèn)題已經(jīng)成為人們高度關(guān)注的焦點(diǎn)。其中抗生素的長(zhǎng)期濫用所帶來(lái)的藥物殘留、耐藥性及耐藥性的垂直和橫向傳播問(wèn)題也引起了人們的普遍關(guān)注。有鑒于此，飼料安全問(wèn)題越來(lái)越受到人們的重視，世界衛(wèi)生組織(WHO)已經(jīng)正式提出抗生素不可用于除人類(lèi)以外的領(lǐng)域，歐美發(fā)達(dá)國(guó)家在飼料中禁用或限用抗生素，毫無(wú)疑問(wèn)，飼用抗生素被取締的趨勢(shì)不可逆轉(zhuǎn)。其替代物的選擇已成為動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的研究熱點(diǎn)。部分營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)如生物堿、多酚、皂甙、多糖和黃酮等已應(yīng)用于飼料生產(chǎn)。其中黃酮類(lèi)化合物是自然界分布廣泛的一類(lèi)次生代謝產(chǎn)物，是藥用植物中主要的活性成分之一，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中的研究應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，該化合物能提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)；提高畜禽機(jī)體免疫力，具有抗菌消炎、提高抗氧化應(yīng)激能力和保健等作用。
[0003]小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆屬(Oxytropis)植物，在新疆分布廣泛。據(jù)蒙藥典記載，小花棘豆具有麻醉、鎮(zhèn)靜和止痛等作用。黃酮類(lèi)化合物是小花棘豆的有效成分之一，具有抗菌、抗炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用，在抗氧化及抑制脂肪酶等方面有顯著效果?？勺鳛闋I(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)直接參與激發(fā)機(jī)體抗氧化和免疫反應(yīng)，也可參與機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝活動(dòng)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成。飼料中添加小花棘豆黃酮可能會(huì)起到維持機(jī)體正?？寡趸芰Φ淖饔?，對(duì)維持動(dòng)物機(jī)體的正常生理功能，提高生產(chǎn)性能具有重要意義。到目前為止，并未有小花棘豆黃酮應(yīng)用于動(dòng)物飼料的專(zhuān)利申請(qǐng)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種小花棘豆黃酮的制備方法及應(yīng)用，是一種動(dòng)物飼料添加劑，其含有的小花棘豆黃酮具有提高動(dòng)物免疫和抗氧化功能的作用。
[0005]其具體技術(shù)方案為:
[0006]小花棘豆黃酮的制備方法，包括以下步驟:
[0007](I)小花棘豆黃酮的分離:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過(guò)20目篩后備用。采用超臨界CO2提取法，稱取適量小花棘豆粉末和2倍質(zhì)量的硅藻土，裝柱，兩端用適量的脫脂棉以防止柱子堵塞，扭緊提取池，以防止氣體泄露，將提取池放于加熱恒溫箱中接通整個(gè)提取管道，保證整個(gè)提取系統(tǒng)不存在漏氣。設(shè)定溫度、壓力、夾帶劑流速、CO2流速等參數(shù)，參數(shù)穩(wěn)定后進(jìn)行提取。提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末。
[0008](2)超臨界CO2提取法的優(yōu)化:設(shè)置提取溫度范圍為30°C、35°C、40°C、45°C、50°C、55°C、60°C和65°C ;提取壓力范圍為lOMPa、15MPa、20MPa、25MPa和30MPa ;設(shè)置提取時(shí)間范圍為 0.5h、l.0h、1.5h、2.0h,2.5h、3.0h,3.5h、4.0h,4.5h和 5.0h ;設(shè)置夾帶劑濃度為 10%,20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%和 100% ;設(shè)置夾帶劑流速為 0.lmL/min、0.2mL/min、0.3mL/min、0.4mL/min 和 0.5mL/min ;設(shè)置 CO2 流速為 0.5mL/min、l.0mL/min、
1.5mL/min、2.0mL/min 和 2.5mL/min。根據(jù) Central Composite 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程以小花棘豆黃酮提取率為響應(yīng)值，得到最佳提取工藝為:提取溫度45°C，提取壓力20MPa，提取時(shí)間2.0h,夾帶劑為乙醇，夾帶劑濃度80%，夾帶劑流速0.4mL/min, CO2流速 1.5mT,/mi η η
[0009](3)小花棘豆黃酮含量的測(cè)定:采用HPLC法。色譜柱為C18 (2.l*150mm, 1.8 μ m)，流動(dòng)相為乙腈和水，柱溫30°C，流速1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品槲皮素，進(jìn)樣量I μ L。采用梯度洗脫:0min,乙腈:水=10%: 90% ；lmin,乙腈:水=10%: 90% ；3min,乙腈:水=20 %: 80 % ；6min,乙腈:水=45 %: 55 % ；8min,乙腈:水=75%: 25%。結(jié)果表明小花棘豆黃酮提取率為18.84mg/g。
[0010]小花棘豆黃酮在制備綿羊飼料添加劑中的應(yīng)用:將小花棘豆黃酮按照10-50mg/kg的比例添加入綿羊飼料中。除此以外，動(dòng)物飼料中還可以含有或不含有其它來(lái)源植物的化學(xué)化合物。將小花棘豆黃酮添加入綿羊飼料是通過(guò)制備活性成分預(yù)混物來(lái)實(shí)現(xiàn)。這種預(yù)混物含有1-10%小花棘豆黃酮和90% -89%的吸附載體。然后，將預(yù)混物與維生素、酶、礦物質(zhì)、蛋白組分、糖類(lèi)組分、脂肪組分等混合，制備成含有0.5-5%小花棘豆黃酮的飼料添加齊U。之后將該飼料添加劑按1-5%添加到飼料中。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0012]本發(fā)明所述方法有機(jī)溶劑消耗少，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，污染少，所得產(chǎn)品提取率和純度均較高，可適用于實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)化制備。本發(fā)明建立了小花棘豆黃酮應(yīng)用于綿羊飼料的新用途，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)小花棘豆資源提供了新的思路。

【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明
[0014]小花棘豆黃酮提取試驗(yàn):
[0015]為了綜合考察小花棘豆黃酮提取的影響因素，根據(jù)Central Composite中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，選取提取溫度、提取壓力、提取時(shí)間、夾帶劑濃度、夾帶劑流速和CO2流速作為考察因素，并結(jié)合多次提取的經(jīng)驗(yàn)每因素各選取幾個(gè)水平安排試驗(yàn)，小花棘豆黃酮提取率為響應(yīng)值，優(yōu)選最佳提取工藝。
[0016]表I超臨界CO2提取小花棘豆黃酮試驗(yàn)
[0017]

【權(quán)利要求】
1.小花棘豆黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)小花棘豆黃酮的分離:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過(guò)20目篩后備用；采用超臨界CO2提取法，稱取適量小花棘豆粉末和2倍質(zhì)量的硅藻土，裝柱，兩端用適量的脫脂棉以防止柱子堵塞，扭緊提取池，以防止氣體泄露，將提取池放于加熱恒溫箱中接通整個(gè)提取管道，保證整個(gè)提取系統(tǒng)不存在漏氣；設(shè)定溫度、壓力、夾帶劑流速、CO2流速的參數(shù)，參數(shù)穩(wěn)定后進(jìn)行提取；提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末； (2)超臨界CO2提取法的優(yōu)化:設(shè)置提取溫度范圍為30°C、35°C、40°C、45°C、50°C、55°C、60°C和65°C ;提取壓力范圍為lOMPa、15MPa、20MPa、25MPa和30MPa ;設(shè)置提取時(shí)間范圍為 0.5h、l.0hU.5h、2.0h,2.5h、3.0h,3.5h、4.0h,4.5h和 5.0h ;設(shè)置夾帶劑濃度為 10%,20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%和 100% ;設(shè)置夾帶劑流速為 0.lmL/min、0.2mL/min、0.3mL/min、0.4mT,/min 和 0.5mL/min ;設(shè)置 CO2 流速為 0.5mL/min、l.0mT,/miη.1.5mL/min、2.0mT,/min 和 2.5mL/min ;根據(jù) Central Composite 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程以小花棘豆黃酮提取率為響應(yīng)值，得到最佳提取工藝為:提取溫度45°C，提取壓力20MPa，提取時(shí)間2.0h,夾帶劑為乙醇，夾帶劑濃度80%，夾帶劑流速0.4mL/min, CO2流速 1.5mT,/miη ； (3)小花棘豆黃酮含量的測(cè)定:采用HPLC法；色譜柱為C18、2.1*150.ι，1.8μπι，流動(dòng)相為乙腈和水，柱溫30°C，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nn，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品槲皮素，進(jìn)樣量IuL ;采用梯度洗脫:0min,乙腈:水=10%: 90% ；lmin,乙腈:水=10%: 90% ；3min,乙腈:水=20%: 80% ；6min,乙腈:水=45%: 55% ；8min,乙腈:水=75%: 25% ；結(jié)果表明小花棘豆黃酮提取率為18.84mg/g0
2.—種權(quán)利要求1所述小花棘豆黃酮在制備綿羊飼料添加劑中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述小花棘豆黃酮在制備綿羊飼料添加劑中的應(yīng)用，其特征在于，將小花棘豆黃酮按照10-50mg/kg的比例添加入綿羊飼料中；將小花棘豆黃酮添加入綿羊飼料是通過(guò)制備活性成分預(yù)混物來(lái)實(shí)現(xiàn)；這種預(yù)混物含有1-10%小花棘豆黃酮和90% -89%的吸附載體；然后，將預(yù)混物與維生素、酶、礦物質(zhì)、蛋白組分、糖類(lèi)組分、脂肪組分混合，制備成含有0.5-5%小花棘豆黃酮的飼料添加劑；之后將該飼料添加劑按1-5%添加到飼料中。
【文檔編號(hào)】A23K1/18GK104068211SQ201410273942
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月14日
【發(fā)明者】王帥, 馬春暉, 張玲, 賈琦珍, 陳根元 申請(qǐng)人:塔里木大學(xué)