一種食用菌液體菌種及其生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種食用菌液體菌種的生產(chǎn)方法，其中，所述生產(chǎn)方法包括以下步驟：步驟一：將食用菌菌種接種于PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，培養(yǎng)后分離獲得活化菌絲體；步驟二：將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天獲得由菌絲體和固態(tài)木屑培養(yǎng)基組成的恢復(fù)培養(yǎng)物1；步驟三：將恢復(fù)培養(yǎng)物1粉碎至粒徑為20-40目后以3-4cm的厚度平鋪在淺盤中密封培養(yǎng)2-3天，獲得恢復(fù)培養(yǎng)物2；步驟四：將恢復(fù)培養(yǎng)物2搗碎至粒徑不大于0.5cm的小塊后加無(wú)菌水打漿，再與濃度為0.15-0.2％的瓊脂溶液接觸混勻。本發(fā)明所提供的方法操作簡(jiǎn)單、不需要復(fù)雜的培養(yǎng)設(shè)備，生產(chǎn)效率高。利用本發(fā)明所提供的方法制備獲得的食用菌液體菌種具有質(zhì)量穩(wěn)定、菌種強(qiáng)壯、退化慢、宜于保藏運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種食用菌液體菌種及一種液體菌種的生產(chǎn)方法食用菌液體菌種的 生產(chǎn)方法。 一種食用菌液體菌種及其生產(chǎn)方法

【背景技術(shù)】
[0002] 在現(xiàn)有的食用菌栽培技術(shù)中，通常使用固體菌種進(jìn)行生產(chǎn)，傳統(tǒng)的固體菌種存在 食用菌菌種的生產(chǎn)周期長(zhǎng)、菌種用量大、生產(chǎn)成本高、菌絲萌發(fā)速度慢的缺陷，不適合香菇 在大規(guī)模生產(chǎn)中應(yīng)用。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中普遍應(yīng)用的液體菌種是利用液體培養(yǎng)基在生物發(fā)酵罐中通過(guò)深層培 養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的。液體菌種雖然克服了傳統(tǒng)固態(tài)菌種生產(chǎn)周期長(zhǎng)、成本高的缺陷，但是仍存在 液體發(fā)酵生產(chǎn)設(shè)備投資大、污染難控制、菌絲老化快、菌種變異等一系列不適宜香菇大規(guī)模 工業(yè)化作業(yè)的缺陷。
[0004] 目前國(guó)內(nèi)外已有的固體液化菌種生產(chǎn)方法中，均是采用的木屑或紙漿做培養(yǎng)基， 由于木屑或紙漿內(nèi)，主要成分僅是木質(zhì)素和纖維素，蛋白及微量元素等含量低、纖維長(zhǎng)，致 使菌種生長(zhǎng)弱和很難稀釋均勻，制備時(shí)間長(zhǎng)，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此有必要開發(fā)一種新 的，生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單、投資少、技術(shù)操作要求低，易于掌握、菌種質(zhì)量穩(wěn)定、生長(zhǎng)快、適宜工業(yè)化 生產(chǎn)的食用菌液體菌種制備方法和新的液體菌種。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有的木屑固體和液體食用菌菌種及其制備方法中所存在 的上述缺陷，提供一種新的，生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單、投資少、技術(shù)操作要求低，易于掌握、菌種質(zhì)量 穩(wěn)定、生長(zhǎng)快、適宜工業(yè)化生產(chǎn)的食用菌液體菌種制備方法和新的液體菌種。
[0006] 本發(fā)明提供了一種新的香菇液體菌種制備方法，及用該方法制備的液體菌種。
[0007] 為達(dá)到以上目的本發(fā)明提供了一種食用菌液體菌種的生產(chǎn)方法，其中，所述生產(chǎn) 方法包括以下步驟：
[0008] 步驟一：將食用菌菌種接種于PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，培養(yǎng)后分離獲得活化菌絲 體；
[0009] 步驟二：將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天獲得由菌絲體和固 態(tài)木屑培養(yǎng)基組成的恢復(fù)培養(yǎng)物1 ;
[0010] 步驟三：將恢復(fù)培養(yǎng)物1粉碎至粒徑為20-40目后以3-4cm的厚度平鋪在淺盤中 密封培養(yǎng)2-3天，獲得恢復(fù)培養(yǎng)物2 ;
[0011] 步驟四：將恢復(fù)培養(yǎng)物2搗碎至粒徑不大于0. 5cm的小塊后加無(wú)菌水打漿，再與濃 度為0. 15-0. 2 %的瓊脂溶液接觸混勻。
[0012] 優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基的組成成分包括：固態(tài)木屑和營(yíng)養(yǎng)液；相對(duì)于100g的固態(tài)木 屑，營(yíng)養(yǎng)液的添加量為110-120g ;所述營(yíng)養(yǎng)液的組成成分包括麩皮水、蔗糖、磷酸二氫鉀和 硫酸鎂。更為優(yōu)選的，相對(duì)于l〇〇g的培養(yǎng)物2,無(wú)菌水的用量為220-280ml，瓊脂溶液的用 量為 4800-5200ml。
[0013] 優(yōu)選的，所述固態(tài)木屑為辣木木屑。
[0014] 優(yōu)選的，相對(duì)于l〇〇g的恢復(fù)培養(yǎng)物2,無(wú)菌水的用量為200-300ml，瓊脂溶液的用 量為 4500-5500ml。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種食用菌液體菌種，其中，該菌種是利用本發(fā)明所提供的食用 菌液體菌種生產(chǎn)方法生產(chǎn)獲得的。
[0016] 本發(fā)明所提供的液體菌種的培養(yǎng)方法操作簡(jiǎn)單、不需要復(fù)雜的培養(yǎng)設(shè)備在降低生 產(chǎn)成本的同時(shí)提高了生產(chǎn)效率。
[0017] 利用本發(fā)明所提供的方法制備獲得的液體菌種具有質(zhì)量穩(wěn)定、菌種強(qiáng)壯、不退化 變異、宜于長(zhǎng)期保藏和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體 實(shí)施方式僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0019] 本發(fā)明提供一種食用菌液體菌種的生產(chǎn)方法，其中，所述生產(chǎn)方法包括以下步 驟：
[0020] 步驟一：將食用菌菌種接種于PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，培養(yǎng)后分離獲得活化菌絲 體；
[0021] 步驟二：將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天獲得由菌絲體和固 態(tài)木屑培養(yǎng)基組成的恢復(fù)培養(yǎng)物1 ;
[0022] 步驟三：將恢復(fù)培養(yǎng)物1粉碎至粒徑為20-40目后以3_4cm的厚度平鋪在淺盤中 密封培養(yǎng)2-3天，獲得恢復(fù)培養(yǎng)物2 ;
[0023] 步驟四：將恢復(fù)培養(yǎng)物2搗碎至粒徑不大于0. 5cm的小塊后加無(wú)菌水打漿，再與濃 度為0. 15-0. 2 %的瓊脂溶液接觸混勻。
[0024] 在本發(fā)明所提供的方法中，所述食用菌菌種為食用菌栽培領(lǐng)域中常用的菌種，例 如，所述食用菌菌種為香菇菌種、平菇菌種、杏鮑菇菌種、口蘑菌種、金針菇菌種或木耳菌 種。
[0025] 特別優(yōu)選的情況下，所述食用菌菌種為香燕（Lentinula edodes(Berk. )Pegler.) 菌種。例如，所述食用菌菌種可以為香菇菌種808、135、中香68,慶科20、9015、9319或 241-4。優(yōu)選的情況下，所述食用菌菌種為香菇菌種808、慶科20、9015 ;特別優(yōu)選的情況下， 所述食用菌菌種為香菇菌種慶科20。
[0026] 在本發(fā)明中，對(duì)步驟一中將食用菌菌種接種于PDA培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)的方法沒(méi) 有特別的限制，可以按照本領(lǐng)域常規(guī)使用的菌種活化培養(yǎng)方法進(jìn)行。例如可以在無(wú)菌條 件下用接種針挑取食用菌菌種在PDA斜面培養(yǎng)基上劃線接種?；罨囵B(yǎng)的條件可以為在 24-26 °C下培養(yǎng)15天獲得活化菌絲體。
[0027] 在本發(fā)明中，將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基的方法沒(méi)有特別的限制，可以 按照本領(lǐng)域常規(guī)的接種方法進(jìn)行。本發(fā)明中，對(duì)于步驟二中固態(tài)木屑培養(yǎng)基的容器沒(méi)有特 別的限制，容器可以為透明袋或玻璃瓶。
[0028] 在本發(fā)明所提供的方法中，將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基的接種比例為 3-5%，優(yōu)選的情況下，接種的比例為3. 5-4. 5%。當(dāng)所述食用菌菌種為香菇時(shí)，接種的比例 為4%。
[0029] 在本發(fā)明所提供的方法中，步驟二中培養(yǎng)的條件為在26_28°C下密封培養(yǎng)72-75 小時(shí)，培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)室的濕度控制在40%。
[0030] 在本發(fā)明所提供的方法中，所述固態(tài)木屑培養(yǎng)基的原料包括：固態(tài)木屑和營(yíng)養(yǎng)液； 相對(duì)于l〇〇g的固態(tài)木屑，營(yíng)養(yǎng)液的添加量為110-120g ;所述營(yíng)養(yǎng)液的組成成分包括麩皮 水、蔗糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂。
[0031] 特別優(yōu)選的情況下,所述固態(tài)木屑為辣木的木屑。辣木為落葉喬木類木本植物， 中文學(xué)名為辣木，拉丁學(xué)名為Moringa oleifera Lam屬于衛(wèi)矛目、辣木科、辣木屬、辣木種。 辣木樹被證實(shí)是含有豐富高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的植物，具有以下優(yōu)點(diǎn)：蛋白質(zhì)含量高、不含膽固醇、 礦物質(zhì)豐富、維生素含量高，能夠?yàn)槭秤镁L(zhǎng)提供生長(zhǎng)所必須的多種養(yǎng)分，使食用菌菌種 生長(zhǎng)健壯。特別的，本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，辣木材料含有辣木素及鳳尾辣木素 的生物堿，因此在將辣木木屑用作香菇菌絲的培養(yǎng)基時(shí)可增強(qiáng)菌種的抗雜菌力；此外，辣木 木屑中含有低分子水溶性蛋白，這些溶解在水體中的蛋白對(duì)附近的固體懸浮顆粒有較大吸 附力，食用菌的菌絲片段易被吸附集中，本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，由于辣木的纖維短、物質(zhì) 比重輕容易被快速稀釋均勻和懸浮，因此在使用辣木木屑制備液體菌種時(shí)能夠達(dá)到快速制 備液體菌種的目的。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用辣木木屑制作的液體菌種與采用其他木屑的 液體菌種相比具有更高的活力。
[0032] 在本發(fā)明所提供的方法中，所述營(yíng)養(yǎng)液的配置方法為：用濃度為9-11%的麩皮水 在80?93°C保溫1小時(shí)后用4層紗布過(guò)濾獲得濾液，再將濾液與蔗糖、磷酸二氫鉀和硫酸 鎂接觸，調(diào)整PH調(diào)至6. 0后滅菌；
[0033] 其中，相對(duì)于100g的麩皮水，蔗糖的添加量為1. 8-2. 2g、磷酸二氫鉀的添加量為 0· 18-0. 22g、硫酸鎂的添加量為0· 08-0. 12g。
[0034] 在本發(fā)明所提供的方法中，所述辣木木屑的顆粒為20-40目。
[0035] 本發(fā)明中，生產(chǎn)器具、容器、培養(yǎng)基的滅菌要求和方法與本領(lǐng)域常規(guī)的方法相同， 例如所述固態(tài)木屑培養(yǎng)基可以在121°C下高溫濕熱滅菌3h后冷卻至28°C。
[0036] 通過(guò)步驟二的培養(yǎng)后，菌絲基本布滿培養(yǎng)基獲得由菌絲體和固態(tài)木屑培養(yǎng)基所組 成的恢復(fù)培養(yǎng)物1 ;從培養(yǎng)瓶/袋中取出恢復(fù)培養(yǎng)物1，在無(wú)菌條件下?lián)v碎至粒徑為20-40 目的顆粒后將搗碎的顆粒平鋪在培養(yǎng)淺盤中，為了使菌絲體更好的進(jìn)行呼吸作用，所述顆 粒在淺盤中的厚度為2-6厘米，優(yōu)選的，為3-4厘米。
[0037] 在步驟三的培養(yǎng)過(guò)程中，要始終保持密封黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度恒定在26_28°C之 間，培養(yǎng)的濕度為40 。
[0038] 在通過(guò)步驟三獲得恢復(fù)培養(yǎng)物2后再次在無(wú)菌條件下將恢復(fù)培養(yǎng)物2搗碎至粒徑 不大于0. 5cm的小塊，然后將無(wú)菌水打漿，無(wú)菌水的溫度為常溫1：，打漿的條件為在4000? 8000rpm/min的轉(zhuǎn)速下打漿25-35s獲得均勻的懸濁液。
[0039] 在本發(fā)明所提供的方法中，濃度為0. 1-0. 2%的瓊脂溶液為高溫滅菌后冷卻至溫 度為25_30°C的瓊脂溶液。
[0040] 本發(fā)明對(duì)于將打漿獲得的懸濁液與瓊脂溶液混合的方法沒(méi)有特別的限制，只要能 夠使得二者充分的混合均勻即可。所述接觸混勻的溫度條件為常溫。
[0041] 在本發(fā)明所提供的方法中，相對(duì)于lOOg的恢復(fù)培養(yǎng)物2,無(wú)菌水的用量為 200-300ml，瓊脂溶液的用量為3000-10000ml。優(yōu)選的情況下，相對(duì)于100g的恢復(fù)培養(yǎng)物 2,無(wú)菌水的用量為220-280ml，瓊脂溶液的用量為4500-5500ml。
[0042] 在步驟四所述的接觸混勻步驟后即可獲得產(chǎn)品食用菌液體菌種，所述食用菌液體 菌種的儲(chǔ)存條件可以為在4°C下低溫貯存。
[0043] 本發(fā)明還提供了一種食用菌液體菌種，其中該食用菌液體菌種是利用本發(fā)明所提 供的食用菌液體菌種生產(chǎn)方法生產(chǎn)獲得的。
[0044] 優(yōu)選的，所述食用菌液體菌種為香菇液體菌種。
[0045] 特別優(yōu)選的，所述食用菌液體菌種為香菇菌種慶科20的液體菌種。
[0046] 本發(fā)明所提供的食用菌液體菌種中，以所述食用菌液體菌種的總重量為基準(zhǔn)，液 體菌種中的食用菌菌種的重量為1-3%。
[0047] 本發(fā)明所提供的食用菌液體菌種在4°C下的儲(chǔ)存時(shí)間為300-600天，在不高于 28 °C的溫度下，保存時(shí)間最低為80天。
[0048] 下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明所提供的方法進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0049] 以下實(shí)施例中，
[0050] 食用菌菌種來(lái)源為香燕菌種（(Lentinula edodes (Berk. ) Pegler.)菌株名稱為中 香68,慶科20。
[0051] 實(shí)施例中所使用的培養(yǎng)基的制備方法為，將辣木木屑（木屑顆粒取20-40目之間 的部分）和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1. 2混合配制，營(yíng)養(yǎng)液的配方是用10%的麩皮水在80?93°C 保溫1小時(shí)后用4層紗布過(guò)濾所得，每100ml濾液中加2克蔗糖、0. 2克磷酸二氫鉀、0. 1 克硫酸鎂、pH調(diào)至6. 0。然后將培養(yǎng)基在121°C滅菌30min，再在無(wú)菌條件冷卻至30°C下使 用。
[0052] 液體菌種中固體菌種含量的檢測(cè)依照食用菌菌種通用技術(shù)要求NY/T1742-2009 規(guī)定的方法進(jìn)行。
[0053] 菌絲萌發(fā)率的檢測(cè)方法為：將食用菌液體菌種按稀釋法涂布PDA培養(yǎng)平板中， 培養(yǎng)并統(tǒng)計(jì)萌發(fā)的菌落數(shù)。具體的，取1克培養(yǎng)物于含l〇〇ml無(wú)菌水的500ml三角瓶，在 1250rpm用磁力攪拌子攪拌1小時(shí)得母液（標(biāo)記為10°)，取母液lml和9ml無(wú)菌水充分混 合后得稀釋液1 (標(biāo)記為ΚΓ1)，取lml稀釋液1加入9ml無(wú)菌水充分混合后得稀釋液2 (標(biāo) 記為ΚΓ2)，用〇. lml稀釋液2涂布于90mmPDA培養(yǎng)皿，25°C培養(yǎng)7天計(jì)數(shù)萌發(fā)菌落點(diǎn)數(shù)為 X，X/Y即菌絲萌發(fā)率。
[0054] 顆粒片段濃度的檢測(cè)方法為：取1克培養(yǎng)物于含100ml無(wú)菌水含磁的500ml三角 瓶，在1250rpm下用磁力攪拌子攪拌1小時(shí)得母液（標(biāo)記為10°)，取母液lml和9ml無(wú)菌水 充分混合后得稀釋液1 (標(biāo)記為ΚΓ1)，取lml稀釋液1加入9ml無(wú)菌水充分混合后得稀釋液 2 (標(biāo)記為ΚΓ2)取0. lml稀釋液2于血球計(jì)數(shù)載玻片上計(jì)數(shù)得顆粒片段數(shù)Y，則每克培養(yǎng)物 2含顆粒片段為YX104。
[0055] 實(shí)施例1
[0056] 本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明所提供的利用食用菌液體菌種生產(chǎn)方法。
[0057] 將香菇菌種（慶科20)接種到PDA培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)取得到菌絲體；再將菌絲體 按4%的比例轉(zhuǎn)接到固態(tài)木屑培養(yǎng)基中，置于25°C下發(fā)酵培養(yǎng)30天，得到100g菌絲體塊狀 培養(yǎng)物；在無(wú)菌條件下，將塊狀培養(yǎng)物搗碎成粒徑不大于0. 5cm的小塊的粉狀顆粒培養(yǎng)物， 將粉狀顆粒培養(yǎng)物以3-4cm的厚度平鋪在培養(yǎng)盤內(nèi)密封、避光、恒溫25°C培養(yǎng)3天；培養(yǎng)結(jié) 束后在無(wú)菌條件下將培養(yǎng)物搗碎至粒徑不大于〇. 5cm的小塊，在25-28°C下加入250ml無(wú)菌 水以5000rpm/min的轉(zhuǎn)速下打楽30s混合均勻后制備得母液，再用濃度為0. 2%的瓊脂溶液 4750ml和制備得的母液混合而得5000ml香菇液體稀釋菌種1。
[0058] 實(shí)施例2
[0059] 本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明所提供的利用食用菌液體菌種生產(chǎn)方法。
[0060] 采用與實(shí)施例1相同的方法制備香菇液體菌種，不同的是，0. 2%的瓊脂溶液的添 加量為4500ml。
[0061] 獲得香菇液體稀釋菌種2。
[0062] 實(shí)施例3
[0063] 本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明所提供的利用食用菌液體菌種生產(chǎn)方法。
[0064] 采用與實(shí)施例1相同的方法制備香菇液體菌種，不同的是，0. 2%的瓊脂溶液的添 加量為5500ml。
[0065] 獲得香菇液體稀釋菌種3。
[0066] 實(shí)施例4
[0067] 本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明所提供的利用食用菌液體菌種生產(chǎn)方法。
[0068] 采用與實(shí)施例1相同的方法制備香菇液體菌種，不同的是，所使用的菌種為香菇 菌種808。
[0069] 獲得香菇液體稀釋菌種4。
[0070] 實(shí)施例5
[0071] 本實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明所提供的利用食用菌液體菌種生產(chǎn)方法。
[0072] 采用與實(shí)施例1相同的方法制備香菇液體菌種，不同的是，所使用的菌種為中香 68 〇
[0073] 獲得香菇液體稀釋菌種5。
[0074] 對(duì)比例1
[0075] 本對(duì)比例用于說(shuō)明現(xiàn)有的食用菌液體菌種的制備方法。
[0076] 用慶科20菌種（試管PDA)接0· 3X0. 5 (cm)大小的菌種快5塊于2000ml三角瓶 (內(nèi)含1500ml不加瓊脂的PDA配方的液體營(yíng)養(yǎng)液和1個(gè)攪拌子）中，25°C靜置培養(yǎng)48小 時(shí)后置于磁力攪拌機(jī)上，750rpm，15min-0N，45min-0FF間隙攪拌培養(yǎng)192小時(shí)后制備得液 體母種1500ml，將液體母接入50L罐（內(nèi)含40L已滅菌營(yíng)養(yǎng)液）。罐營(yíng)養(yǎng)液配方為：2000 克麩皮加50L水煮沸半小時(shí)后4層紗布過(guò)濾得濾液40L，在40L濾液中加入蔗糖800克、磷 酸二氫鉀80克、硫酸鎂40克、菜籽油10ml。121°C 30min滅菌后夾套進(jìn)冷水冷卻至罐壓 0. 035MPa時(shí)通入無(wú)菌空氣攪拌，至罐溫到28°C時(shí)火焰封口接入1500ml液體母種（接種量 3. 75%，v/v)，開始的36小時(shí)罐壓0. 045MPa (通氣比為0. 15:1，v/v)，36-72小時(shí)期間罐壓 0. 035MPa (通氣比為 0. 5: 1，v/v)，72-120 小時(shí)期間罐壓 0. 025-0. 03MPa (通氣比為 1:1，v/ v)。培養(yǎng)120小時(shí)后獲得香菇液體菌種6
[0077] 測(cè)試?yán)?-6
[0078] 檢測(cè)實(shí)施例1-5與對(duì)比例1中制備獲得的液體菌種1-6中固體菌種含量、菌絲萌
【權(quán)利要求】
1. 一種食用菌液體菌種的生產(chǎn)方法，其中，所述生產(chǎn)方法包括以下步驟： 步驟一：將食用菌菌種接種于PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，培養(yǎng)后分離獲得活化菌絲體； 步驟二：將活化菌絲體接種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基中培養(yǎng)28-32天獲得由菌絲體和固態(tài)木 屑培養(yǎng)基組成的恢復(fù)培養(yǎng)物1 ; 步驟三：將恢復(fù)培養(yǎng)物1粉碎至粒徑為20-40目后以3-4cm的厚度平鋪在淺盤中密封 培養(yǎng)2-3天，獲得恢復(fù)培養(yǎng)物2 ; 步驟四：將恢復(fù)培養(yǎng)物2搗碎至粒徑不大于0. 5cm的小塊后加無(wú)菌水打漿，再與濃度為 0. 15-0. 2 %的瓊脂溶液接觸混勻。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其中，所述培養(yǎng)基的組成成分包括：固態(tài)木屑和營(yíng) 養(yǎng)液；相對(duì)于l〇〇g的固態(tài)木屑，營(yíng)養(yǎng)液的添加量為110_120g ;所述營(yíng)養(yǎng)液的組成成分包括 麩皮水、蔗糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，所述固態(tài)木屑為辣木木屑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，相對(duì)于100g的恢復(fù)培養(yǎng)物2,無(wú)菌水的 用量為200-300ml，瓊脂溶液的用量為4500-5500ml。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，所述食用菌菌種為香菇菌種、平菇菌種、 杏鮑菇菌種、口蘑菌種、金針菇菌種或木耳菌種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)方法，其中，所述食用菌菌種為香菇菌種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1、2和6中任意一項(xiàng)所述的生產(chǎn)方法，其中，所述營(yíng)養(yǎng)液的配置方法 為：用濃度為9-11 %的麩皮水在80?93°C保溫1小時(shí)后用4層紗布過(guò)濾獲得濾液，再將濾 液與蔗糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂接觸，調(diào)整PH調(diào)至6. 0后滅菌； 其中，相對(duì)于l〇〇g的麩皮水，蔗糖的添加量為1. 8-2. 2g、磷酸二氫鉀的添加量為 0· 18-0. 22g、硫酸鎂的添加量為0· 08-0. 12g。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生產(chǎn)方法，其中，在步驟四中，所述接觸混勻的溫度條件 為24-26°C，加無(wú)菌水打漿的條件為在4000?8000rpm/min的轉(zhuǎn)速下打漿25-35s。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1、2和6中任意一項(xiàng)所述的生產(chǎn)方法，其中，在步驟二中，將菌絲體接 種于固態(tài)木屑培養(yǎng)基的接種比例為3-5%。
10. -種食用菌液體菌種，其特征在于，該菌種是利用權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)所提供 的食用菌液體菌種生產(chǎn)方法生產(chǎn)獲得的。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104106370SQ201410244283
【公開日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】黃偉 申請(qǐng)人:保山富群農(nóng)業(yè)科技有限公司