一種快速建立yy超雄黃顙魚改良繁育系的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法，主要步驟為：篩選黃顙魚野生雄性親本、黃顙魚野生親本種質(zhì)資源評估、通過與現(xiàn)有YY♀交配構(gòu)建YY♂和YY♀基礎(chǔ)育種群體、YY♂和YY♀基礎(chǔ)育種群體的選育、YY♂和YY♀的測交驗證、YY♂超雄黃顙魚改良繁育系的快速擴群以及YY♂超雄黃顙魚改良繁育系的建立，重復最后一步，即可建立成所述改良繁育系。本發(fā)明的方法增加了超雄魚的遺傳多樣性，提高了受精率、孵化率與存活率，同時可以縮短育種時間，更可以批量進行，規(guī)?；a(chǎn)性狀改良的YY♂超雄魚和XY全雄魚，大大提高產(chǎn)量，增加經(jīng)濟效益。
【專利說明】一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及魚類養(yǎng)殖新品種改良及魚類生理遺傳繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，是以傳統(tǒng)群體選育、微衛(wèi)星標記、人工性逆轉(zhuǎn)、魚類性別特異性分子標記PCR檢測和測交驗證等集成技術(shù)，提高全雄黃顙魚生產(chǎn)性能的控制魚類性別及品系改良，一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃顙魚是淡水養(yǎng)殖的重要魚類。據(jù)《2013中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒》數(shù)據(jù)顯示，2012年黃顙魚養(yǎng)殖產(chǎn)量達25.7萬噸，苗種需求估計量達150億尾。但是由于黃顙魚苗種生產(chǎn)存在規(guī)模小、質(zhì)量差、市場混亂等問題，優(yōu)質(zhì)苗種的匱乏已成為目前限制黃顙魚養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展的瓶頸。
[0003]在相同的養(yǎng)殖條件下，雄性黃顙魚比同胞雌魚的生長速度快30%以上，因此，發(fā)明人發(fā)明了采用性逆轉(zhuǎn)和雌核發(fā)育持續(xù)產(chǎn)生全雄黃顙魚(專利號:ZL 200610166518.8)的方法，建立了超雄黃顙魚繁育種群(專利號:ZL 200810197519.8)。該技術(shù)體系能夠滿足全雄黃顙魚的規(guī)?；沙掷m(xù)生產(chǎn)的需要，為全雄黃顙魚新品種在全國應(yīng)用和推廣打下堅實的基礎(chǔ)。其中超雄黃顙魚繁育系的穩(wěn)定性和可靠性在全雄黃顙魚的可持續(xù)利用方面具有非常重要的地位，目前該繁育系中YY生理雌魚是來自于YY超雄魚性逆轉(zhuǎn)的產(chǎn)物，均是來自于同一家系，且均是雌核發(fā)育的后代，所以親緣關(guān)系非常近。如果超雄黃顙魚繁育系長期實施近交，可能會引起如生長性能和繁殖能力等性狀下降，表現(xiàn)出近交衰退現(xiàn)象，對全雄黃顙魚的可持續(xù)利用是不利的。
[0004]近十幾年來，科研人員通過基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)和雜交育種技術(shù)等在水產(chǎn)動物遺傳改良，新品種選育和病害控制基礎(chǔ)研究，特別是在養(yǎng)殖性狀的遺傳改良方面取得了一定進展。但是還未見結(jié)合`傳統(tǒng)群體選育、微衛(wèi)星標記、人工性逆轉(zhuǎn)、魚類性別特異性分子標記PCR檢測和測交驗證等技術(shù)，對YY超雄黃顙魚繁育系進行遺傳改良的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是來自于同一家系的繁育系會出現(xiàn)近交衰退現(xiàn)象，對全雄黃顙魚可持續(xù)利用不利而現(xiàn)有技術(shù)沒有一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法。
[0007]本發(fā)明提供的快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法，步驟如下:
(1)篩選黃顙魚野生雄性親本:從不同水域收集野生黃顙魚作為不同的地理群體，篩選出個體大、體色純正和二齡以上的雄性親本XY ?個體；
(2)黃顙魚野生親本種質(zhì)資源評估:分析步驟(1)篩選出的不同地理群體雄性親本的遺傳多樣性和地理群體間親緣關(guān)系，進行遺傳評價，篩選出遺傳多樣性最豐富的地理群體；
(3)構(gòu)建YY^和YY早基礎(chǔ)育種群體:步驟(2)篩選出的地理群體雄性親本XY ^，與現(xiàn)有YY早卵子交配，子代(含XY ?和YY ? )形成YY t雄性基礎(chǔ)育種群體；部分子代(含XY t和YY ?)用雌激素進行人工性逆轉(zhuǎn)(逆轉(zhuǎn)成XY早和YY早)，形成YY早雌性基礎(chǔ)育種群體；
(4)ΥΥ?和YY早基礎(chǔ)育種群體的選育:步驟(3)獲得的兩個基礎(chǔ)育種群體均培育至冬片階段，分別淘汰小個體50%，留下的培育至春片再淘汰小個體50% ;留下來的個體用X染色體特異標記引物進行基因型PCR鑒定，剔除含有X染色體的黃顙魚，留YY ?和YY早備用，強化培育作為候選親魚；
(5)YY ?和YY早的測交驗證:候選親魚YY ?與XX早交配，候選親魚YY早與XY ?交配，篩選測交后代中均為100%雄魚的家系，獲取改良YY ^和改良YY早品系；
(6)YY ?超雄黃顙魚改良繁育系的快速擴群:取步驟(5)的改良YY ?和改良YY早進行交配、改良YY ^和現(xiàn)有YY早進行交配、或改良YY早和現(xiàn)有YY ^進行交配，獲得100%的YY ^超雄黃顙魚；
(J)Ti ?超雄黃顙魚改良繁育系的建立:取步驟(6)的100% YY ?超雄黃顙魚，在魚苗開口時，取一部分YY ?超雄魚按步驟(3)，用雌激素誘導性逆轉(zhuǎn)成為YY早生理雄魚；將YY ^超雄魚和YY早生理雌魚養(yǎng)至性成熟后，再進行交配，持續(xù)生產(chǎn)YY ^超雄魚；
重復步驟(7)，建立成YY超雄魚改良繁育系。
[0008]其中步驟(5)測交篩選的方法:候選雌魚(含有XY早和YY早)，和普通雄魚(XY古)測交，如果是YY早，則后代均為雄性(基因型為YY或ΧΥ，各占約50%)，如果是XY早，則后代有1/4雌魚(基因型XX占25%為雌魚；基因型XY占50%，YY占25，均為雄魚);候選雄魚(含有XY ?和YY ^ )，和普通雌魚(XX早)測交，如果是YY ^，后代均為雄性(基因型XY),如果是XY ?，后代有1/2雄魚(基因型XX占50%為雌魚，基因型XY占50%為雄魚)。
[0009]其中所述現(xiàn)有YY早和現(xiàn)有YY ^均為現(xiàn)有技術(shù)已知，例如專利號ZL200810197519.8公開的方法建立的超雄魚繁育系中的生理雌魚YY早和超雄魚YY古。
[0010]優(yōu)選地，步驟(1)中每個水域收集的野生黃顙魚不低于1000尾，篩選出的雄性親本XY ?不低于200尾。數(shù)量越多，越可以維持種群的遺傳多態(tài)性。
[0011]優(yōu)選地，步驟(2)采用微衛(wèi)星標記技術(shù)進行遺傳多樣性和地理群體間親緣關(guān)系。
[0012]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
1.引入野生種質(zhì)資源，同時建立多個改良YY超雄黃顙魚繁育系，增加了超雄魚的遺傳多樣性，提高了受精率、孵化率與存活率。
[0013]2.利用原有的YY生理雌魚，并結(jié)合了染色體性別特異分子標記和測交驗證技術(shù)，只需2代就可以建立超雄魚改良系，它適用于雄性配子異型魚類超雄魚改良繁育體系的建立。該技術(shù)比專利ZL 200810197519.8中的技術(shù)縮短了一代育種時間，可見，這種繁育種群的方法是快速的、有效的。
[0014]3.有明顯的經(jīng)濟和社會效益:由于采用了 YY早生理雌魚和YY ^超雄魚交配法，可以迅速獲得大量的改良YY ?超雄魚，產(chǎn)品可批量進行，改良YY ?超雄魚與普通XX雌魚交配，規(guī)模化生產(chǎn)性狀改良的XY全雄黃顙魚，大大提高產(chǎn)量，增加經(jīng)濟效益。
【專利附圖】

【附圖說明】[0015]圖1為Y Y超雄黃顙魚繁育系改良方法技術(shù)原理圖。
[0016]圖2為Y Y超雄黃顙魚繁育系改良工序流程方框圖。
【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好地理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。
[0018]請參照圖1和圖2，實施例中所述的“現(xiàn)有YY早”和“現(xiàn)有YY 可以選用專利號ZL 200810197519.8公開的方法建立的超雄魚繁育系中的生理雌魚YY早和超雄魚YY古。
[0019]1.篩選黃顙魚野生親本:從長江上游、長湖、洞庭湖、珠江水系、淮河、黑龍江、黃河等不同水域收集野生黃顙魚作為不同的地理群體，每個地理群體捕撈約1000尾野生黃顙魚，進行首次篩選，挑選個體較大、體色純正和二齡以上的雄親本XY ^個體，數(shù)量200尾以上(由于捕撈的是成魚，可以直接從外形上進行雌雄區(qū)分)，篩選方法也可以采用其他不傷害魚體的現(xiàn)有技術(shù)。
[0020]2.黃顙魚種質(zhì)資源調(diào)查和種質(zhì)遺傳評價:運用微衛(wèi)星標記技術(shù)，研究不同地理群體黃顙魚種質(zhì)資源的遺傳多樣性和不同地理群體之間的親緣關(guān)系，進行不同地理群體黃顙魚種質(zhì)遺傳評價，篩選不同地理群體相應(yīng)的遺傳標記，并選擇遺傳多樣性最豐富的群體I個，為YY超雄黃顙魚繁育品系改良育種奠定基礎(chǔ)。
[0021]具體分析方法:
按常規(guī)方法從不同地理群體黃顙魚尾鰭樣品中提取基因組DNA，樣品數(shù)量為40尾以上。根據(jù)目前所報道的文獻設(shè)計10對微衛(wèi)星多態(tài)性引物(見表1)，進行PCR擴增反應(yīng)，反應(yīng)體系為 25μ L:2.5μ L 10XPCR buffer,2.0μ L 25mM MgCl2, IU Taq DNA聚合酶，0.5yL10 mM dNTPs，0.5“]?上下游引物，20叩DNA，加雙蒸水至25 μ L。擴增條件為:94°C 30s，退火30s，72°C 30s，循環(huán)數(shù)為40。PCR產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠檢測，鑒定有擴增產(chǎn)物后再用12%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE電泳)檢測，銀染，并用凝膠成像系統(tǒng)對凝膠進行拍攝并保存圖片。通過與DN A分子量標準(pBR322DNA/MspI)比較來判讀等位基因大小。
【權(quán)利要求】
1.一種快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法，其特征在于，步驟如下: (1)篩選黃顙魚野生雄性親本:從不同水域收集野生黃顙魚作為不同的地理群體，篩選出個體大、體色純正和二齡以上的雄性親本XY ?個體； (2)黃顙魚野生親本種質(zhì)資源評估:分析步驟(1)篩選出的不同地理群體雄性親本的遺傳多樣性和地理群體間親緣關(guān)系，進行遺傳評價，篩選出遺傳多樣性最豐富的地理群體； (3)構(gòu)建YY?和YY早基礎(chǔ)育種群體:步驟(2)篩選出的地理群體雄性親本XY ?，與現(xiàn)有YY早卵子交配，子代形成YY ?雄性基礎(chǔ)育種群體；部分子代用雌激素進行人工性逆轉(zhuǎn)，形成YY早雌性基礎(chǔ)育種群體； (4)ΥΥ?和YY早基礎(chǔ)育種群體的選育:步驟(3)獲得的兩個基礎(chǔ)育種群體均培育至冬片階段，分別淘汰小個體50%，留下的培育至春片再淘汰小個體50% ;留下來的個體用X染色體特異標記引物進行基因型PCR鑒定，剔除含有X染色體的黃顙魚，留YY ?和YY早備用，強化培育作為候選親魚； (5)YY ?和YY早的測交驗證:候選親魚YY ?與XX早交配，候選親魚YY早與XY ?交配，篩選測交后代中均為100%雄魚的家系，獲取改良YY ^和改良YY早品系； (6)YY ?超雄黃顙魚改良繁育系的快速擴群:取步驟(5)的改良YY ?和改良YY早進行交配、改良YY ?和現(xiàn)有YY早進行交配、或改良YY早和現(xiàn)有YY ^進行交配，獲得100%的YY ^超雄黃顙魚； (J)Ti ?超雄黃顙魚改良繁育系的建立:取步驟(6)的100% YY ?超雄黃顙魚，在魚苗開口時，取一部分YY ?超雄魚按步驟(3)，用雌激素誘導性逆轉(zhuǎn)成為YY早生理雄魚；將YY ^超雄魚和YY早生理雌魚養(yǎng)至性成熟后，再進行交配，持續(xù)生產(chǎn)YY ^超雄魚； 重復步驟(7)，建立成YY超雄魚改良繁育系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法，其特征在于，步驟(I)中每個水域收集的野生黃顙魚不低于1000尾，篩選出的雄性親本XY ?不低于200尾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速建立YY超雄黃顙魚改良繁育系的方法，其特征在于，步驟(2)采用微衛(wèi)星標記技術(shù)進行遺傳多樣性和地理群體間親緣關(guān)系分析。
【文檔編號】A01K61/00GK103798169SQ201410057631
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月20日
【發(fā)明者】劉漢勤, 陳宏溪, 徐江, 侯昌春, 陳麗慧 申請人:武漢百瑞生物技術(shù)有限公司