一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料及其應(yīng)用。所述飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18-20%，脂肪的質(zhì)量百分含量6-8%。所述飼料采用低脂肪比例和不含膽固醇的高熱量配方，造模方法更溫和，不僅符合動物福利，更能模擬動脈粥樣硬化血管損傷患病人群的飲食習(xí)慣，更有利于疾病和藥物的研究。以所述高熱量飼料長時(shí)間慢性誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化模型，更符合人類患病群體的年齡體征情況和飲食生活習(xí)慣，與人類發(fā)病過程更接近，造模過程更緩和，模型更穩(wěn)定?？勺鳛榻抵翱箘用}粥樣硬化新藥成藥性研究的理想動物模型，服務(wù)于藥物評價(jià)及臨床前研究。
【專利說明】一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，涉及一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料及其應(yīng)用。
技術(shù)背景
[0002]動脈粥樣硬化是以膽固醇和膽固醇脂為主要成分的脂質(zhì)在動脈及其分支的動脈壁內(nèi)膜或內(nèi)膜下沉著，同時(shí)伴有中層平滑肌細(xì)胞移行至內(nèi)膜下增生，使內(nèi)膜增厚，形成粥樣黃色或灰黃色斑塊，造成血管損傷。造成動脈粥樣硬化的原因可分內(nèi)因外因。內(nèi)因有遺傳因素，如家族性的糖尿病、冠心病，以及性別年齡的因素:隨著年齡的增長，動脈粥樣硬化形成的速度也加快。在性別上，女性在更年期前受卵巢激素保護(hù)，很少發(fā)生動脈粥樣硬化。外因有諸如高血壓、高血脂、吸煙、肥胖、運(yùn)動太少、心理緊張以及糖尿病。
[0003]隨著我國社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及人民生活水平的日益提高，心血管疾病以及代謝性疾病如高血壓、糖尿病和高血脂已經(jīng)成為人們健康的最大殺手。其中，全世界每天因高血脂癥引發(fā)的心腦血管疾病死亡人數(shù)近3600人之多，我國每年因高血脂引起的高血壓、腦梗、中風(fēng)、心梗、偏癱、致殘、致死人數(shù)以每年遞增12%的速度上升。而有研究表明，高血脂、高血糖和胰島素抵抗均能增加動脈粥樣硬化風(fēng)險(xiǎn)。近幾年動脈粥樣硬化的發(fā)病率年齡已由中老年向中青年方向發(fā)展，且發(fā)病率逐年上升。中青年是國家和諧建設(shè)的主力軍，社會的中流砥柱。每年動脈粥樣硬化的發(fā)病給國家和家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，已引起醫(yī)藥衛(wèi)生部門及國家中央的高度重視。
[0004]國家“十二五”新增課題申報(bào)指南新藥研究開發(fā)關(guān)鍵技術(shù)研究明確寫出:應(yīng)針對多因素復(fù)雜疾病如腫瘤、心腦血管病、神經(jīng)退行性疾病等防治藥物的研發(fā)需求，研究并建立更靈敏、更可靠、更快捷的早期成藥性評價(jià)的新技術(shù)和新模型，評價(jià)一批創(chuàng)新藥物品種。但是因?yàn)榉N屬的差異，將傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)動物如小型動物及目前廣泛應(yīng)用的嚙齒類動物模型作為研究對象評價(jià)新藥，其正常生理指標(biāo)與人類相去甚遠(yuǎn)，穩(wěn)定的具有相似發(fā)病機(jī)理的動物模型的建立與驗(yàn)證與臨床不盡相同。且以嚙齒類動物為對象進(jìn)行的傳統(tǒng)動物實(shí)驗(yàn)獲得的藥代動力學(xué)、藥效學(xué)和安全性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對臨床用藥的指導(dǎo)意義有限，致使花費(fèi)了大量研究費(fèi)用后，藥物卻不能通過臨床試驗(yàn)或臨床應(yīng)用后出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，危及用藥人群生命安全。
[0005]以恒河猴這一非人靈長類種屬作為研究對象，建立合適的動物模型進(jìn)行新藥的篩選、ρκ/ro研究以及新藥臨床前試驗(yàn)意義重大。這得益于非人靈長類與人類生理結(jié)構(gòu)、功能及相關(guān)疾病診治指標(biāo)的相似性。藥物作用于非人靈長類動物而得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果能更好地轉(zhuǎn)化，指導(dǎo)臨床研究。因此建立非靈長類動物模型動脈粥樣硬化模型成為治療研究與臨床前藥物評價(jià)的迫切需要。
[0006]但是非人靈長類動物動脈粥樣硬化模型通常存在著造模周期長、模型穩(wěn)定性欠缺、模型的確立以及診治技術(shù)等相關(guān)平臺構(gòu)建的不完整等技術(shù)難點(diǎn)。國內(nèi)外皆有文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)道。Kukreja, R.等(Atherosclerosis, 1981.40(3): p.291-298.)使用 18 只雌雄各半的2.5-5.5kg體重的成年恒河猴作為造模對象,飼喂配方為蛋白質(zhì)15%、脂肪15%、碳水化合物60%、膽固醇1%，加之每天注射50mg/kg量的腎上腺素。7個(gè)月后通過殺死動物取病理檢查，發(fā)現(xiàn)其中15只恒河猴出現(xiàn)了顯著的主動脈和冠狀動脈粥樣硬化纖維性斑塊。此法為藥物干預(yù)急性造模，存在一定的模型不穩(wěn)定的問題。選取的恒河猴體重范圍不屬于動脈粥樣硬化易感群體的體重范圍，不能更好的模擬人類的發(fā)病過程。檢測方法為侵入性，不利于模型的應(yīng)用和藥物開發(fā)。國內(nèi)有使用與恒河猴同屬的食蟹猴造高血脂癥和動脈粥樣硬化模型的報(bào)道，其選用的飼料配方為蛋黃粉5%、豬油15%、膽固醇0.5%、基礎(chǔ)飼料75%，造模3個(gè)月，最后用TC、TG、和LDL-C來評價(jià)和確認(rèn)模型。同樣屬于急性造模，膽固醇總量過高對動物身體有損，并且以血脂生化指標(biāo)來表征動脈粥樣硬化，說服力不夠。
[0007]綜上所述，現(xiàn)有的非人靈長類動脈粥樣硬化模型中，大多是通過急性高膽固醇飲食短期誘導(dǎo)獲得，造模方法對動物刺激過于激烈，模型不夠穩(wěn)定，與真實(shí)的動脈粥樣硬化的臨床表現(xiàn)也有較大差異。從而限制了這類動物模型的應(yīng)用。
[0008]所以，使用先天肥胖、老齡這種種群中易感的非人靈長類個(gè)體作為研究對象，充分模擬患病人群飲食習(xí)慣，以高熱量飼料飲食長時(shí)間誘導(dǎo)為方法建立的非人靈長類動脈粥樣硬化模型，較之急性高膽固醇飲食短期誘導(dǎo)獲得的模型，造模方法更平和，模型更穩(wěn)定，在遺傳、心血管功能和脂質(zhì)代謝等方面與人類相似。目前臨床上最常用的是血生化指標(biāo)輔助多普勒彩超以及核磁共振成像(MRI)等非侵入性的影像學(xué)手段來明確診斷動脈粥樣硬化。因此，通過多普勒彩超以及3.0T MRI等無創(chuàng)性的檢測，可以更客觀地評價(jià)動脈粥樣硬化的發(fā)展程度及發(fā)生部位。由于檢測方法為非侵入性，穩(wěn)定的模型可以進(jìn)一步用于降脂及抗動脈粥樣硬化藥物的研發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]針對上述問題，本發(fā)明提供了一種全新的建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料。
[0010]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，所述飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18-20%，脂肪的質(zhì)量百分含量6-8%。低脂肪比例和不含膽固醇的高熱量配方，造模方法更溫和，不僅符合動物福利，更能模擬動脈粥樣硬化血管損傷患病人群的飲食習(xí)慣，更有利于疾病和藥物的研究。蛋白質(zhì)含量采用GB/6432-94檢測，脂肪含量采用GB/T6433-94檢測。
[0011]作為可選方式，所述飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18%，脂肪的質(zhì)量百分含量
8% ο
[0012]作為可選方式，飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏20-30份、麩皮20-30份、面粉15-20、豬油2-4份、蛋白粉5-8份、蔗糖6_10份、復(fù)合維生素5_10份、電解質(zhì)5_8份和水10-15份。所述飼料配方除了提供蛋白質(zhì)和脂肪還提供維生素和電解質(zhì)等更能模擬動脈粥樣硬化血管損傷患病人群的飲食習(xí)慣。
[0013]作為可選方式，所述飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏20份、麩皮20份、豬油4份、面粉18、蛋白粉8份、蔗糖6份、復(fù)合維生素5份、電解質(zhì)5份和水14份。
[0014]作為可選方式，所述飼料被壓制成餅狀。制作成餅狀方便儲存和轉(zhuǎn)移，同時(shí)方便動物取食，較少飼喂時(shí)的浪費(fèi)，有利于對飼喂量的精確控制。
[0015]本發(fā)明還提供了一種建立動脈粥樣硬化動物模型的方法，包括以下步驟: 1)選取背景清晰的恒河猴作為模型動物；
2)每只恒河猴每天飼喂250g本發(fā)明所述的任意一種高熱量飼料；
3)連續(xù)飼喂一段周期，建立穩(wěn)定的動脈粥樣硬化恒河猴模型。
[0016]作為可選方式，在上述建立動脈粥樣硬化動物模型的方法中，步驟3)中，所述連續(xù)飼喂的周期為2年。
[0017]作為可選方式，在上述建立動脈粥樣硬化動物模型的方法中，選擇背景清晰中老年先天性肥胖恒河猴作為模型動物。優(yōu)選雄性恒河猴。這類模型動物對動脈粥樣硬化更易感，造模成功率更高，可縮短造模周期。
[0018]作為可選方式，在上述建立動脈粥樣硬化動物模型的方法中，所述作為模型動物的恒河猴年齡10-20歲，身體質(zhì)量指數(shù)BMI>30。
[0019]本說明書中公開的所有特征，或公開的所有方法或過程中的步驟，除了互相排斥的特征和/或步驟以外，均可以以任何方式組合。
[0020]本發(fā)明的有益效果:
1.本發(fā)明所述高熱量飼料，采用低脂肪比例和不含膽固醇的高熱量配方，造模方法更溫和，不僅符合動物福利，更能模擬動脈粥樣硬化血管損傷患病人群的飲食習(xí)慣，更有利于疾病和藥物的研究。
[0021]2.所述動脈粥樣硬化模型的建立方法，以高熱量飼料長時(shí)間慢性誘導(dǎo)，更符合人類患病群體的年齡體征情況和飲食生活習(xí)慣，與人類發(fā)病過程更接近，造模過程更緩和，模型更穩(wěn)定。本發(fā)明建立的動脈粥樣硬化恒河猴模型，可作為降脂及抗動脈粥樣硬化新藥成藥性研究的理想動物模型，服務(wù)于藥物評價(jià)及臨床前研究。
[0022]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1為實(shí)施例4中連續(xù)飼喂2年后的實(shí)驗(yàn)動物的右頸總動脈彩色多普勒超聲圖。
[0023]圖2為實(shí)施例4中連續(xù)飼喂2年后的實(shí)驗(yàn)動物的頸動脈核磁共振成像照片。
[0024]【具體實(shí)施方式】:
以下通過實(shí)施例的【具體實(shí)施方式】再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)當(dāng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。在不脫離本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)做的任何修改，以及根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的等同替換或者改進(jìn)，均應(yīng)包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。以下實(shí)施例中所用原料均可以從市場上購得。
[0025]實(shí)施例1制備高熱量飼料
所述飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏20份、麩皮20份、面粉18、豬油4份、蛋白粉8份、蔗糖6份、復(fù)合維生素5份、電解質(zhì)5份和水14份。所述電解質(zhì)可選NaCl、KCl、CaCl2等常用電解質(zhì)中的至少一種，復(fù)合維生素可選擇維生素A、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、維生素C、維生素D、維生素E等常用維生素進(jìn)行組合，也可采用市售的復(fù)合維生素產(chǎn)品O
[0026]將各組分均勻混合后壓制成餅狀待用。
[0027]所得飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18%，脂肪的質(zhì)量百分含量8%，蛋白質(zhì)含量按照GB/6432-94檢測，脂肪含量按照GB/T6433-94檢測。
[0028]實(shí)施例2制備高熱量飼料
所述飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏30份、麩皮20份、面粉15、豬油2份、蛋白粉5份、蔗糖10份、復(fù)合維生素10份、電解質(zhì)8份和水10份。
[0029]將各組分均勻混合后，壓制成餅狀待用。
[0030]所得飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為20%，脂肪的質(zhì)量百分含量6%，蛋白質(zhì)含量按照GB/6432-94檢測，脂肪含量按照GB/T6433-94檢測。
[0031]實(shí)施例3制備高熱量飼料
所述飼料按重量份計(jì)的組成為:18份蛋白質(zhì)，60份碳水化合物，8份脂肪和14份水。將各組分均勻混合，壓制成餅狀待用。
[0032]實(shí)施例4動脈粥樣硬化動物模型的建立 動物入選、檢疫及飼養(yǎng)
選取背景清晰健康成年恒河猴60只，每只動物單籠飼養(yǎng)，動物室保持溫度為19-26°C，濕度為60%±20%，每小時(shí)通風(fēng)次數(shù)為10次，每天保持光照為12h。將實(shí)驗(yàn)動物分為3組，每組20只，分別給予實(shí)施例1-3中制備的高熱量飼料，每天每只給予高熱量飼料250g，自由飲水。
[0033]評價(jià)方法及結(jié)果(檢測周期可選擇每月I次)
(I)血脂相關(guān)生化指標(biāo)的長期動態(tài)監(jiān)測
在造1旲的兩年時(shí)間內(nèi)，多次進(jìn)彳丁血脂相關(guān)生化指標(biāo)TC、TG、LDL-C等的檢測。每次檢測為動物禁食12h后，上午9點(diǎn)至10點(diǎn)靜脈肘正中靜脈采血Iml于含有分離膠的微量采血管中，4°C靜置30min,離心分取血清,通過Beckman-Coulter全自動生化分析儀對血清進(jìn)行生化分析。將分析結(jié)果與種群長期積累的血脂正常范圍對比，確證高脂血癥并輔助影像學(xué)指標(biāo)判斷(見表1)。
[0034]表1恒河猴飼喂高熱量飼料后血液TC、TG、LDL-C指標(biāo)的檢測
【權(quán)利要求】
1.一種建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，其特征在于，所述飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18-20%,脂肪的質(zhì)量百分含量6_8%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，其特征在于，所述飼料中蛋白質(zhì)的質(zhì)量百分含量為18%，脂肪的質(zhì)量百分含量8%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，其特征在于，所述飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏20-30份、麩皮20-30份、面粉15-20、豬油2_4份、蛋白粉5-8份、蔗糖6-10份、復(fù)合維生素5-10份、電解質(zhì)5-8份和水10-15份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，其特征在于，所述飼料按重量份計(jì)的組成為:豆柏20份、麩皮20份、面粉18、豬油4份、蛋白粉8份、蔗糖6份、復(fù)合維生素5份、電解質(zhì)5份和水14份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的高熱量飼料，其特征在于，所述飼料被壓制成餅狀。
6.一種建立動脈粥樣硬化動物模型的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)選取恒河猴作為模型動物； 2)每只恒河猴每天飼喂250g如權(quán)利要求1-5所述的任意一種高熱量飼料； 3)連續(xù)飼喂一段周期，建立穩(wěn)定的動脈粥樣硬化恒河猴模型。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的方法，其特征在于，步驟3)中，所述連續(xù)飼喂的周期為2年。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的方法，其特征在于，選擇背景清晰的中老年先天性肥胖恒河猴作為模型動物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的建立動脈粥樣硬化動物模型的方法，其特征在于，所述作為模型動物的恒河猴年齡10-20歲，身體質(zhì)量指數(shù)BMI>30。
【文檔編號】A01K67/02GK103815128SQ201410057583
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月20日
【發(fā)明者】曾文, 龔立, 畢鳳均, 申渝波, 楊遵遠(yuǎn) 申請人:四川普萊美生物科技有限公司