殺蟲劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供來自子囊菌門真菌的殺蟲脂質(zhì)和脂質(zhì)部分、以及包含這些脂質(zhì)和脂質(zhì)部分的組合物及其制備方法。也提供使用脂質(zhì)和脂質(zhì)部分或者包含所述的脂質(zhì)以及任選的1種或多種殺蟲劑或昆蟲致病劑(包括昆蟲致病性的真菌)的組合物用于昆蟲(例如致植物病的昆蟲)的生物控制的方法。
【專利說明】殺蟲劑及其應(yīng)用
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明一般地涉及生物學(xué)領(lǐng)域，更特別地某些實施方案涉及由絲狀真菌制備的脂質(zhì)、包含所述的脂質(zhì)的組合物、和該脂質(zhì)和組合物作為生物控制劑的用途。也提供使用所述脂質(zhì)和包含脂質(zhì)的組合物控制昆蟲(包括致植物病的昆蟲)的方法。
[0002]發(fā)明背景
[0003]控制昆蟲和昆蟲種群的能力對于人和動物健康、農(nóng)業(yè)和大范圍的經(jīng)濟(jì)活動而言是非常重要的。例如，昆蟲是大量的重要人類疾病的傳病媒介:蚊子是瘧疾、西尼羅河病和登革熱的傳病媒介，蜱是立克次氏體病(例如斑疹傷寒、非洲蜱咬熱和萊姆病)的傳病媒介，跳蚤是鼠疫的傳病媒介。類似地，由昆蟲害蟲和病原菌(統(tǒng)稱為“植物病原體”)導(dǎo)致的植物病害或損失對于基于植物的農(nóng)業(yè)和工業(yè)是重要的經(jīng)濟(jì)成本。損失可能通過在收獲前和收獲后的產(chǎn)品損壞、植物自身的損失、或通過生長和生產(chǎn)能力的降低而上升。
[0004]在傳統(tǒng)上，通過化學(xué)殺蟲劑的使用、也可以通過使用物理方法(例如誘捕、挖掘、屏障)已經(jīng)進(jìn)行了昆蟲例如植物害蟲和病原菌的大規(guī)?？刂??；瘜W(xué)藥品的使用帶來大量的弊端。昆蟲例如植物害蟲和病原菌久而久之能夠并且已經(jīng)發(fā)展了對化學(xué)藥品的耐受性，產(chǎn)生了耐藥性種群。實際上，對殺蟲劑的耐受是對基于植物的農(nóng)業(yè)和工業(yè)(例如園藝工業(yè))的生存的最大挑戰(zhàn)。
[0005]借助大量的經(jīng)濟(jì)上重要的致植物病的昆蟲對該問題進(jìn)行具體說明。已經(jīng)報道，世界范圍內(nèi)西花薊馬的 種群對大多數(shù)種類的殺蟲劑有耐藥性，所述的殺蟲劑包括以下實例:乙酰甲胺磷、阿巴美丁、氯螨硫磷、硫丹、滅多蟲、滅梭威、氧樂果、定菌磷和氟胺氰菊酯。在新西蘭的洋蔥薊馬的種群已經(jīng)發(fā)展出對溴氰菊酯的耐藥性，并且已經(jīng)報道當(dāng)?shù)氐姆N群對二嗪農(nóng)和敵敵畏有耐藥性。已經(jīng)報道在美國的洋蔥薊馬對許多殺蟲劑有耐藥性(Grossman, 1994)。報道了溫室粉虱已經(jīng)發(fā)展出對有機(jī)氯、有機(jī)磷酸鹽、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯殺蟲劑的耐藥性(例如 Georghioul981、Anis&Brennanl982、Elhag&Hornl983、Wardlowl985、和Hommesl986)。也已經(jīng)報道了對新型殺蟲劑稻風(fēng)凈和氟苯脲的耐藥性(Gorman 等人 2000)。
[0006]化學(xué)殘留可以造成環(huán)境危害，并且提升健康擔(dān)憂。在過去20年中對生物控制(例如微生物殺蟲劑)的興趣的重新興起直接源自于對化學(xué)毒性的關(guān)注的公眾壓力。生物控制給出了控制植物病原體的替代方法，其可能比目前的方法更加有效和特異性，并且減少對化學(xué)藥品的依賴。將這些生物控制方法視為對化學(xué)殺蟲劑的“天然”代替，其具有更高的公共接受度、減少的環(huán)境污染和增加的持續(xù)性的優(yōu)點。
[0007]生物控制的機(jī)制是多種多樣的。已經(jīng)證明有效的一種機(jī)制是使用拮抗性微生物例如細(xì)菌來控制致植物病的昆蟲。例如，在新西蘭的奧克蘭，大規(guī)模產(chǎn)生的蘇云金桿菌能夠使用該細(xì)菌-殺蟲劑用于控制著色的蘋果蛾。
[0008]然而，生物控制劑(BCA)的成功應(yīng)用的實例極少，迄今為止BCA尚未得到大量的種植者接受并且可能已經(jīng)意識到是不經(jīng)濟(jì)的。
[0009]因此需要用于有效地控制昆蟲(包括致植物病的昆蟲)的試劑和方法，特別是起效更快、控制昆蟲的效力增加、施用所需要的頻率較低或強(qiáng)度較低、較低的成本、或比目前可用的殺蟲劑的最終毒性低的試劑。
[0010]因此，本發(fā)明的目的是滿足該需求，從而提供I種或多種可用于控制昆蟲和昆蟲種群(包括致植物病的昆蟲)的試劑和方法，或者至少向公眾提供可用的選擇。
[0011]發(fā)明概沭
[0012]本發(fā)明 提供殺蟲脂質(zhì)及其制備方法。這些脂質(zhì)與已知的殺蟲劑的不同之處在于存在新類型的殺蟲劑。
[0013]因此，在第一方面，本發(fā)明涉及來自子囊菌門真菌的I種或多種殺蟲脂質(zhì)或者I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分。
[0014]在某些實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)是非酸性脂質(zhì)。在某些實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分是非酸性部分。
[0015]在某些示例性的實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)或者I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分是殺昆蟲的。
[0016]在第二方面，本發(fā)明涉及分離的、純化的或者基本上純的來自子囊菌門真菌的殺蟲脂質(zhì)。
[0017]在一個示例性的實施方案中，本發(fā)明涉及分離的、純化的或者基本上純的來自子囊菌門真菌的殺蟲非酸性脂質(zhì)。
[0018]在第三方面，本發(fā)明涉及包含來自子囊菌門真菌的I種或多種殺蟲脂質(zhì)或者I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分的組合物。
[0019]在第四方面，本發(fā)明涉及分離的、純化的或者基本上純的來自子囊菌門真菌的殺蟲脂質(zhì)部分。
[0020]在一個示例性的實施方案中，本發(fā)明涉及分離的、純化的或者基本上純的來自子囊菌門真菌的殺蟲非酸性脂質(zhì)部分。
[0021]本發(fā)明提供組合物和制劑，其包含I種或多種本文所公開的脂質(zhì)、以及至少I種農(nóng)業(yè)上可接受的載體，包括包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)和I種或多種真菌的組合物和制劑。這些組合物可以是產(chǎn)生該脂質(zhì)的細(xì)胞的細(xì)胞提取物、細(xì)胞混懸液、細(xì)胞勻漿、細(xì)胞溶菌產(chǎn)物、細(xì)胞上清液、細(xì)胞濾液、或細(xì)胞碎片。在某些示例性的實施方案中，組合物包含來自子囊菌門真菌的非酸性脂質(zhì)部分。在某些示例性的實施方案中，組合物富集I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，例如通過純化或添加。在其他的示例性的實施方案中，組合物包含I種或多種添加的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。例如，在一個實施方案中，組合物是如上所述的細(xì)胞提取物、細(xì)胞混懸液、細(xì)胞勻漿、細(xì)胞溶菌產(chǎn)物、細(xì)胞上清液、細(xì)胞濾液、或細(xì)胞碎片，向其中加入本發(fā)明的I種或多種脂質(zhì)或者I種或多種脂質(zhì)部分。
[0022]在另一方面，本發(fā)明提供制備對昆蟲(例如吸囁式昆蟲、或鞘翅目、雙翅目或鱗翅目昆蟲)具有殺蟲活性的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法。該方法通常包括從合適的細(xì)胞培養(yǎng)物(例如I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物，例如巴西安白僵菌(Beauveria bassiana)菌株K4B3細(xì)胞的培養(yǎng)物)分離出I種或多種本文所述的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。在某些實施方案中，細(xì)胞正在或已經(jīng)在能夠支持菌絲生長的條件下生長。這些脂質(zhì)可以從細(xì)胞培養(yǎng)物或上清液或者從來源于細(xì)胞培養(yǎng)物的孢子懸液分離出來并且以天然的形式使用，或者可以為了特定的應(yīng)用而適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行純化或濃縮。[0023]本發(fā)明也提供控制昆蟲種群的方法。該方法通常包括使種群接觸殺蟲有效量的本文所述的脂質(zhì)(包括非酸性脂質(zhì))或本文所述的脂質(zhì)部分(包括非酸性脂質(zhì)部分)。這些方法可以用于在設(shè)定的區(qū)域內(nèi)殺死或降低目標(biāo)昆蟲的數(shù)量，或者可以預(yù)防性地施用于環(huán)境區(qū)域從而防止被易感的昆蟲侵染。
[0024] 在另一方面，本發(fā)明提供生產(chǎn)生物控制組合物的方法，所述的方法包含:
[0025]提供I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物，
[0026]維持培養(yǎng)物在適合于產(chǎn)生至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的條件下；和
[0027]i)將至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與載體組合，或
[0028]ii)將至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與I種或多種本文所述的昆蟲致病性的真菌組合，或
[0029]iii)從真菌分離出至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，或
[0030]iv)至少部分地純化或分離出至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，或
[0031]V)⑴至(iv)中的2項或更多項的任意組合。
[0032]本發(fā)明進(jìn)一步涉及本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或者本發(fā)明的組合物用于控制I種或多種昆蟲、例如I種或多種致植物病的昆蟲的應(yīng)用。
[0033]在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供控制I種或多種昆蟲的方法，該方法包含使I種或多種昆蟲與本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其功能性變體接觸。
[0034]本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于控制I種或多種昆蟲、例如I種或多種致植物病的昆蟲的方法，該方法包含向植物或其周圍環(huán)境施用本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其功能性變體，以及任選的至少I種本文所述的昆蟲致病性的真菌。
[0035]在另一個方面，本發(fā)明提供完全地或部分地逆轉(zhuǎn)昆蟲對I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑的耐藥性的方法，該方法包含使昆蟲接觸本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
[0036]任選地，該方法包含使昆蟲接觸本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分以及I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑、或其任意的組合。
[0037]在多種實施方案中，所給予的I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑是與昆蟲有抵抗力的或預(yù)期有抵抗力的或變得有抵抗力的物質(zhì)相同。
[0038]在另一方面，本發(fā)明提供控制I種或多種已經(jīng)與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分接觸的昆蟲的方法，該方法使用有效控制所述的I種或多種昆蟲的量的殺蟲劑或昆蟲致病劑。
[0039]所述的I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑可以在本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的給藥之前、同時或之后進(jìn)行給藥。因此，I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分和I種或多種殺蟲劑或昆蟲致病劑的給藥可以是同時的、先后的或獨立的。
[0040]在另一個方面，本發(fā)明提供完全地或部分地逆轉(zhuǎn)昆蟲對I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑的耐藥性的方法，該方法包含使I種或多種昆蟲接觸I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分和本發(fā)明的昆蟲致病性的真菌，以及任選的另一種殺蟲劑或昆蟲致病劑。
[0041]在一個實施方案中，該方法包含使I種或多種昆蟲接觸昆蟲致病性的真菌以及I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)。
[0042]以下實施方案可能涉及本文的任意方面。[0043]在一個實施方案中，至少I種真菌是糞殼菌(Sordariomycetes)綱，其包括I種或多種以下亞綱的真菌:
[0044]肉座菌(Hypocreomycetidae)亞綱，例如I種或多種冠囊菌目、肉座菌目、黑孢殼目(Melanosporales)、或小囊菌目(Microascales)的真菌；糞殼菌亞綱，包括I種或多種團(tuán)殼菌目、美球菌目、刺球菌目(Chaetosphaeriales)、Coniochaetales、間座殼菌目、Magnaporthales、長_殼菌目、糞殼菌目的真菌；炭角菌亞綱，包括炭角菌目的真菌和Koralionastetales、路霉目、小煤炭菌目、黑癒菌目和假毛球殼目的真菌。
[0045]在一個實施方案中，I種或多種真菌是肉座菌目，例如I種或多種生赤殼科、麥角菌科、肉座菌科、叢赤殼科、Niessliaceae或蛇形蟲草科的真菌。
[0046]在一個實施方案中，I種或多種真菌是麥角菌科，其包括I種或多種選自以下屬的真菌:[0047]針抱座囊菌屬、Ascopolyporus、Atkinsonella、Atricordycep、瘤座菌屬、Berkelella、Cavimalum、Cepsiclava、麥角菌屬、CordycepioideusΛ 冬蟲夏草屬、
Dussiella、香柱屬、Epicrea、Helminthascus、HctcroepichiocHyperdermium、Hypocrella、Konradia、LoculistromaΛ Metacordyceps、Moelleriella、MycomalmusΛMyriogenospora> Neobarya、Neoclaviceps、Neocordyceps、 Par^])ichlTO%Phytocordyceps、PodocreI la、Regiocrel la、Romanoa、Shimizuomyces、Sphaerocordyceps、Stereocrea、Torrubiella、Wakefieldiomyces、AkanthomycesΛ 座殼抱屬、白僵菌屬、Chaunopycnis、Coral1cytostromaΛ Culicinomyces、Drechmeria、Ephelis、Gibellula、Haptocillium、Harposporium、Hirsutella、Hymenostilbe、棒束抱屬、Lecanicillium、Mariannaeaλ 綠僵菌屬、Microhilum、Neomunkia、Neotyphodium、Nomuraea、擬青霉屬、Pochonia、Polycephalomyces、Pseudogibellula、Simplicillium、Sorosporella、Tolypocladium 或 Ustilaginoidea。
[0048]例如，I種或多種真菌是白僵菌屬，其包括例如巴西安白僵菌、布氏白僵菌、Beauveria felina、或 Beauveria globulifera 的 I 種或多種菌株。
[0049]在另一個實施方案中，I種或多種真菌是肉座菌科，其包括來自以下的屬的I種或多種真菌:
[0050]Aphysiostroma、Cladobotryum、膠霉屬、肉座菌屬、Hypocreopsis、菌寄生屬、Mycogone、肉棒菌屬(Podostroma)、Protocrea、Rogersonia、Sarawakus、瘤抱屬、泥炭蘚屬(SphaerostiIbella)、Sporophagomyces、Stephanoma 或木霉屬。
[0051]在一個實施方案中，I種或多種真菌是木霉屬，其包括以下的I種或多種:
[0052]侵占木霉、棘抱木霉、深綠木霉、黃綠木霉、澳洲康寧木霉、短?木霉、雪白木霉、加勒比木霉厄瓜多爾變種、加勒比木霉加勒比變種、低頭木霉、奶油木霉、陶瓷木霉、蠟素木霉、綠抱木霉、色精木霉、肉桂色木霉、橘綠木霉、厚木霉、奶油木霉、丁利亞木霉、多羅西木霉、平展木霉、猬木霉、愛沙尼亞木霉、可育木霉、明膠木霉、加納木霉、鉤狀木霉、哈茨木霉、旋狀木霉、交織木霉、長枝康寧木霉、康寧木霉、擬康寧木霉、長枝木霉、長毛木霉、微抱木霉、矩孢木霉、卵孢木霉、彼得森木霉、竹生木霉、洋大戟草木霉、側(cè)耳木霉、半菇木霉、多孢木霉、假康寧木霉、軟毛木霉、李氏木霉、羅杰氏木霉、俄羅斯木霉、土星孢木霉、中國木霉、彎梗木霉、木霉物種MA3642、木霉物種PPRI3559、螺旋木霉、草黃木霉、硬毛木霉、子座木霉、球座木霉、臺灣木霉、泰國木霉、革圃木霉、可可木霉、續(xù)毛木霉、毛旗木霉、綠木霉、綠色木霉、淺綠木霉；或者I種或多種肉座菌種，其包括竹生肉座菌。
[0053]在多個實施方案中，I種或多種真菌是I種或多種菌株，所述的菌株選自巴西安白僵菌K4B3NMIA號V08/025855或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V1 (NMIA號NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V2(NMIA登記號NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V4(匪IA登記號NM06/00007)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B1 (匪IA登記號NM05/44595)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B2 (匪IA登記號NM06/00010)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium 1ngisporum 菌株 KT4L1 (NMIA登記號NM06/00009)或具有其鑒別特征的菌株；和玫煙色擬青霉(Paecilomycesfumosoroseus)菌株K4P1 (NMIA登記號NM06/00008)或具有其鑒別特征的菌株。
[0054]在多種實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)是非酸性脂質(zhì)。在某些實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)基本上無酸性脂質(zhì)，或者基本上無游離脂肪酸。
[0055]在多種實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分是非酸性脂質(zhì)部分。在某些實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分基本上無酸性脂質(zhì)，或者基本上無游離脂肪酸。
[0056]在多種實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分包含非酸性脂質(zhì)部分。在某些實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分基本上無酸性脂質(zhì)，或者基本上無游離脂肪酸。
[0057]在多種實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分包含至少約按重量計10%、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或 99% 的非酸性脂質(zhì)。
[0058]在多種實施方案中，在脂質(zhì)部分中的非酸性脂質(zhì)與酸性脂質(zhì)的重量比是至少約5:4、4:3、3:2、2: 1、5:3、5:2、3: 1、4: 1、或 5:1。
[0059]在I個實施方案中，所述脂質(zhì)是極性脂質(zhì)。
[0060]在多種實施方案中，I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分包含至少約按重量計10%、15、20、
25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或 99% 的極性脂質(zhì)。
[0061]在多種實施方案中，在脂質(zhì)部分中的極性脂質(zhì)與非極性脂質(zhì)的重量比是至少約5:4、4:3、3:2、2: 1、5:3、5:2、3: 1、4: 1、或 5:1。
[0062]在多種實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖4中所示的或如實施例2中所述的部分1、部分5或部分6，或具有在本文中如圖4中所示的或如實施例2中所述的部分1、部分5或部分6的鑒別特征。
[0063]在多種實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖7中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分4或部分5，或具有在本文中如圖7中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分4或部分5的鑒別特征。
[0064]在多種實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖8中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5、或部分9，或具有在本文中如圖8中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5、或部分9的鑒別特征。
[0065]在多種實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖8中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5、或部分9，或具有在本文中如圖8中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5、或部分9的鑒別特征。
[0066]在多種實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖10中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b、或部分6，或具有在本文中如圖10中所示的或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b、或部分6的鑒別特征。
[0067]在多種實施方案中，部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b、或部分6的鑒別特征是如圖12a-12f中任一所示的MALD1-TOF質(zhì)譜(MS)特征。
[0068]在I個實施方案中，脂質(zhì)部分是在本文中如圖10中所示的或如實施例2中所述的部分3，或具有在本文中如圖10中所示的或如實施例2中所述的部分3的鑒別特征。在I個實施方案中，鑒別特征是如圖13中所示的NMR譜。
[0069]在I個實施方案中，所述脂質(zhì)是以下中的一項或多項或者脂質(zhì)部分包含以下中的一項或多項或由以下中的一項或多項組成:
[0070]a.通過MS/MS具有大約在m/z86的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0071]b.通過MS/MS具有大約在m/zl47的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0072]c.通過MS/MS具有大約在m/z445的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0073]d.通過MS/MS具有大約在m/z656的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0074]e.通過MS/MS具有大約在m/z454的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0075]f.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0076]g.通過MS/MS具有大約在m/z393的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0077]h.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0078]1.通過MS/MS具有大約在m/z693的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0079]j.通過MS/MS具有大約在m/z695的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0080]k.通過MS/MS具有大約在m/z717的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0081]1.通過MS/MS具有大約在m/z531的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0082]m.通過MS/MS具有在m/z86.02的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0083]η.通過MS/MS具有在m/zl46.97的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0084]ο.通過MS/MS具有在m/z444.82的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0085]p.通過MS/MS具有在m/z655.94的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0086]q.通過MS/MS具有在m/z454.19的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0087]r.通過MS/MS具有在m/z750.66的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0088]s.通過MS/MS具有在m/z393.39的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0089]t.通過MS/MS具有在m/z750.67的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0090]u.通過MS/MS具有在m/z692.69的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0091]V.通過MS/MS具有在m/z694.72的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0092]w.通過MS/MS具有在m/z716.71的質(zhì)量的脂質(zhì)，或
[0093]X.通過MS/MS具有在m/z531.34的質(zhì)量的脂質(zhì)。
[0094]在I個實施方案中，所述脂質(zhì)或脂質(zhì)部分包含通過MS具有在m/z86.02的質(zhì)量的脂質(zhì)。在I個實施方案中，所述脂質(zhì)或脂質(zhì)部分包含通過MS具有在m/zl46.97的質(zhì)量的脂質(zhì)。
[0095]在多種實施方案中，特別是包含或來源于I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物的組合物中，組合物富含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。在某些實施方案中，相對于沒有富集的組合物(例如沒有經(jīng)過富集的培養(yǎng)物或生長介質(zhì))中所存在的量，富集是至少約1%、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95 或99% 的
富集。在其他的實施方案中，相對于沒有富集的組合物中所存在的量，富集是至少約2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、或100倍。
[0096]在某些實施方案中，通過添加進(jìn)行富集。在其他的實施方案中，相對于在正常生長條件下產(chǎn)生的，通過在有助于I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分增加產(chǎn)生的條件下(例如通過檢測生長介質(zhì)中存在如本文明確記載的脂質(zhì)部分的鑒別特征之一來證明)培養(yǎng)真菌進(jìn)行富集。
[0097]在多種實施方案中，由子囊菌門真菌獲得的或可獲得的組合物或分離物包含按重量計至少約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%的脂質(zhì)、優(yōu)選非酸性脂質(zhì)，并且有用的范圍可以在這些數(shù)值的任意兩者間進(jìn)行選擇(例如，按重量計約I至約99、約5至約99、約10至約99、約15至約99、約20至約99、約25至約99、約30至約99、約35至約99、約40至約99、約45至約99、約50至約99、約55至約99、約60至約99、約65至約99、約70至約99、約75至約99、約80至約99、約85至約99、或約90至約99%)。
[0098]應(yīng)當(dāng)理解，本文中有用的任何組合物或分離物包括由包含I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物獲得的或可獲得的組合物或分離物，并且可以從培養(yǎng)物獲得，其中I種或多種子囊菌門真菌存在于該培養(yǎng)物中或曾經(jīng)存在培養(yǎng)物中、但已經(jīng)被移除。 [0099]在I個實施方案中，本文中有用的組合物包含至少約0.001,0.005,0.01,0.05、
0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.Ul.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或lOOmg/mL的脂質(zhì)、優(yōu)選非酸性脂質(zhì)，和有用的范圍可以在這些數(shù)值的任意兩者間進(jìn)行選擇(例如，約0.01至約1.0、約0.01至約10、約0.01至約20、約0.01至約30、約0.01至約40、約0.01至約50、約0.01至約60、約0.01至約70、約0.01至約80、約0.01至約90、約0.01至約100、約0.1至約1.0、約0.1至約10、約0.1至約20、約0.1至約30、約0.1至約40、約0.1至約50、約0.1至約60、約0.1至約70、約0.1至約80、約0.1至約90、約0.1至約100、約0.7至約1.0、約0.7至約10、約0.7至約20、約0.7至約30、約0.7至約40、約0.7至約50、約0.7至約60、約0.7至約70、約0.7至約80、約0.7至約90、或約0.7至約 100mg/mL)。
[0100]生產(chǎn)I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)的示例性的真菌細(xì)胞包括于2008年10月14日以登記號VO8/025855在澳大利亞國家測量所(National Measurement Institute ofAustralia)(匪IA)保藏的巴西安白僵菌菌株K4B3、或者具有其鑒別特征的培養(yǎng)物；巴西安白僵菌菌株AM2、巴西安白僵菌菌株F480、木霉屬物種(包括木霉屬分離群1328)、和綠僵菌物種，或者具有其任一個的鑒別特征的菌株。
[0101]在I個實施方案中，本發(fā)明涉及制備殺蟲的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法，該方法包括:
[0102]提供I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物的有機(jī)溶劑提取物，
[0103]至少部分地將I種或多種酸性脂質(zhì)與I種或多種非酸性脂質(zhì)分離，和
[0104]回收I種或多種非酸性脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
[0105]在I個實施方案中，本發(fā)明涉及制備殺蟲的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法，該方法包括:
[0106]提供I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物的有機(jī)溶劑提取物，[0107]至少部分地將I種或多種極性脂質(zhì)與I種或多種非極性脂質(zhì)分離，和
[0108]回收I種或多種極性脂質(zhì)或極性脂質(zhì)部分。
[0109]在某些實施方案中，從子囊菌門真菌制備具有殺蟲活性的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法基本上如本文所述。
[0110]在I個示例性的實施方案中，有機(jī)溶劑是或包含氯仿。例如，有機(jī)溶劑包含甲醇和氯仿。
[0111]在多種實施方案中，有機(jī)溶劑是鏈烷醇，包括短鏈烷基醇，例如但不限于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、或丁醇，或者是氯仿。
[0112]在多種實施方案中，有機(jī)溶劑是農(nóng)業(yè)上可接受的載體，其包括如本文所述的載體。
[0113]在多種實施方案中，通過色譜法進(jìn)行分離，包括陰離子交換色譜法和薄層色譜法。在I個示例性的實施 方案中，陰離子交換色譜法使用DEAE-交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex)。
[0114]本發(fā)明的組合物可以被制成粉末、粉塵、小丸、顆粒、噴霧劑、乳劑、膠體、溶液等，并且可以通過常規(guī)方法例如將包含脂質(zhì)的細(xì)胞培養(yǎng)物干燥、凍干、勻化、萃取、過濾、離心、沉淀或濃縮而制備。在含有至少I種該殺蟲脂質(zhì)的示例性的組合物的某些實施方案中，月旨質(zhì)的濃度按重量計是從約1%至約99%。
[0115]優(yōu)選地，這些組合物可從I種或多種本文所述的巴西安白僵菌細(xì)胞的培養(yǎng)物獲得。示例性的殺蟲脂質(zhì)制劑可以通過包含以下步驟的方法進(jìn)行制備:在有效地產(chǎn)生菌絲體的條件下培養(yǎng)合適的巴西安白僵菌菌株K4B3細(xì)胞、提供至少部分純化的菌絲體、和從菌絲體獲得I種或多種脂質(zhì)。
[0116]在進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明提供制備殺蟲脂質(zhì)組合物的方法。在示例性的實施方案中，這些脂質(zhì)可以被配制用作殺蟲劑，并且可以用于控制環(huán)境(包括農(nóng)業(yè)環(huán)境等)中的昆蟲種群。在某些實施方案中，制劑能夠用于殺死昆蟲或昆蟲種群，其通過局部施用或者通過脂質(zhì)組合物被昆蟲攝入而實現(xiàn)。在其他的實施方案中，制劑能夠用于對抗昆蟲或昆蟲種群，其通過局部施用或者通過肽組合物被昆蟲攝食而實現(xiàn)。在某些情況中，可能需要配制本發(fā)明的脂質(zhì)用于向土壤、植物、樹、灌木等上面或附近、靠近活的植物、牲畜、住所、農(nóng)場設(shè)備、建筑物等施用。
[0117]在包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)和I種或多種真菌的組合物的各實施方案中，I種或多種真菌是以可復(fù)制地存活的形式和量。
[0118]在I個實施方案中，本發(fā)明提供組合物，其包含I種或多種如本文所述的脂質(zhì)和可從至少I種真菌獲得的孢子以及至少I種載體。
[0119]優(yōu)選地，所述的組合物是生物控制組合物，更優(yōu)選地所述的生物控制組合物是殺蟲組合物。
[0120]優(yōu)選地，所述的生物控制組合物包含至少I種農(nóng)業(yè)上可接受的載體。
[0121]優(yōu)選地，所述的至少I種載體是農(nóng)業(yè)上可接受的載體，更優(yōu)選地選自填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑、和抗氧化劑，更優(yōu)選所述的組合物包含填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑、和抗氧化劑的各自的至少一種。
[0122]優(yōu)選地，所述的填充劑刺激物是碳水化合物源，例如二糖，包括例如蔗糖、果糖、葡萄糖、或右旋糖，所述的防結(jié)塊劑選自滑石粉、二氧化硅、硅酸鈣、或高嶺粘土，所述的潤濕劑是脫脂奶粉，所述的乳化劑是基于大豆的乳化劑(例如卵磷脂)或基于植物的乳化劑(例如單二甘油酯)，和所述的抗氧化劑是谷氨酸鈉或檸檬酸。
[0123]在多種實施方案中，組合物是在超過約2周、優(yōu)選超過約I個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、更優(yōu)選超過約6個月的時間內(nèi)能夠支持真菌的復(fù)制活力或能夠保持殺蟲效力的穩(wěn)定的組合物。
[0124]在某些實施方案中，組合物包含真菌的單個菌株。在I個示例性的實施方案中，真菌是巴西安白僵菌菌株K4B3(于2008年10月14日保藏的NMIA號V08/025855)。
[0125]或者，組合物包含所述真菌的多種菌株。在I個實施方案中，組合物是生物控制組合物，其包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)、以及以可復(fù)制地存活的形式和量的I種或多種菌株、和至少I種農(nóng)業(yè)上可接受的載體，所述的菌株選自巴西安白僵菌K4B3匪IA號V08/025855或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V1 (NMIA號NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V2 (NMIA登記號NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V4(NMIA登記號NM06/00007)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B1(NMIA登記號NM05/44595)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B2 (匪IA登記號NM06/00010)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium 1ngisporum 菌株 KT4L1 (NMIA 登記號 NM06/00009)或具有其鑒別特征的菌株；和玫煙色擬青霉菌株K4P1 (NMIA登記號NM06/00008)或具有其鑒別特征的菌株。
[0126]在I個實施方案中，生產(chǎn)生物控制組合物的方法包含:
[0127]提供巴西安白僵菌K4B3V08/025855的培養(yǎng)物， [0128]維持培養(yǎng)物在適合于至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的產(chǎn)生的條件下；和
[0129]i)將至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與載體組合，或者
[0130]ii)將至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與I種或多種本文所述的昆蟲致病性的真菌組合，或者
[0131]iii)從巴西安白僵菌K4B3V08/025855分離出至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，或者
[0132]iv)從巴西安白僵菌K4B3V08/025855至少部分地純化或分離至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)，或者
[0133]V)⑴至(iv)的兩項或更多項的任意組合。
[0134]在某些實施方案中，該方法可以在維持步驟之后另外包含I個或多個細(xì)胞裂解步驟。
[0135]在多種實施方案中，通過離心或者通過過濾進(jìn)行分離。
[0136]在多種實施方案中，分離足以有效地除去超過約50%的真菌(例如巴西安白僵菌K4B3V08/025855)，超過約55%、超過約60%、超過約65%、超過約70%、超過約75%、超過約80%、超過約85%、超過約90%、超過約95%、超過約99%或者約100%的真菌，例如約100%的巴西安白僵菌K4B3V08/025855。
[0137]因此，在I個特別關(guān)注的實施方案中，該方法包含提供巴西安白僵菌K4B3V08/025855的培養(yǎng)物、維持培養(yǎng)物在適合于至少I種分泌的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分產(chǎn)生的條件下、和從巴西安白僵菌K4B3V08/025855分離出至少I種分泌的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。[0138]優(yōu)選地，載體是農(nóng)業(yè)上可接受的載體，優(yōu)選地至少I種載體選自填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑和抗氧化劑，更優(yōu)選地所述的組合物包含填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑和抗氧化劑的各自至少一種。
[0139]在多種實施方案中，致植物病的昆蟲是半翅目。
[0140]優(yōu)選地，所述的I種或多種致植物病的昆蟲選自蚊子、蛾(包括小菜蛾)、薊馬(纓翅目)、蚜蟲、木虱、介殼蟲或粉虱(半翅目)。
[0141]在I個實施例中，本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或者其功能性變體可以存在于本文所述的組合物中。
[0142]在I個實施方案中，組合物包含2種或更多種本發(fā)明的脂質(zhì)。 [0143]在多種實施方案中，組合物包含至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)，以及:
[0144]i)至少I種白僵菌素；
[0145]ii)至少 I 種類白僵菌素(bassianolide)；
[0146]iii)至少I種昆蟲致病性的真菌；
[0147]iv)以上(i)至(iii)中的任意兩項或更多項。
[0148]在I個實施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)或組合物直接施用于植物或其周圍環(huán)境。例如，本發(fā)明的組合物與溶劑混合或者被乳化(例如用水)并且如本文所述的進(jìn)行施用。
[0149]在I個實施方案中，本發(fā)明提供用于控制I種或多種昆蟲(例如I種或多種致植物病的昆蟲)的方法，所述的方法包含向植物或其周圍環(huán)境施用本發(fā)明的組合物。
[0150]在多種實施方案中，預(yù)防性地施用本發(fā)明的脂質(zhì)或組合物，例如在植物被植物病原體感染或暴露于植物病原體之前。在其他的實施方案中，當(dāng)確定感染或者存在病原體時施用組合物，例如當(dāng)植物被植物病原體感染或暴露于植物病原體時、或者當(dāng)植物病原體存在于植物或其周圍環(huán)境中時。
[0151]優(yōu)選地，在施用前，組合物與水混合至約0.5gm/L至約10gm/L的脂質(zhì)的最終濃度、和更優(yōu)選地至約lgm/L的最終濃度。
[0152]優(yōu)選地，在施用前，摻入干燥保護(hù)劑(例如Deep Fried?、Fortune?或FortunePlus?)至約lml/L的最終濃度。
[0153]對于包含I種或多種昆蟲致病性的真菌的組合物，示例性的濃度范圍是從約IxlO2至約IxlO12孢子/ml、從約IxlO2至約IxlO11孢子/ml、從約IxlO2至約IxlO10孢子/ml、從約IxlO2至約IxlO9孢子/ml、從約IxlO3至約IxlO9孢子/ml、從約IxlO4至約IxlO9孢子/ml、優(yōu)選地從約IxlO5至約5xl08、和更優(yōu)選地約IxlO6至約2xl08孢子/ml。在某些實施方案中，在施用時，組合物包含至少IO7孢子/ml、至少約5xl07孢子/ml、或至少IO8孢子/ml ο
[0154]在多種實施方案中，當(dāng)I種或多種真菌存在于組合物中時，本發(fā)明的組合物可以以從約IxlO8至約IxlO15感染單位(IU)/公頃、從約IxlO9至約IxIO15IU/公頃、從約IxlO10至約IxIO15IU/公頃、從約IxlO11至約IxIO15IU/公頃、優(yōu)選從約IxlO10至約IxIO14IU/公頃、更優(yōu)選從約5Χ10 10至約IxIO14IU/公頃、更優(yōu)選約IxlO11至約5xlOnIU/公頃的比率施用。
[0155]在I個實施方案中，感染單位是孢子、例如內(nèi)生孢子，并且組合物以從約IxlO8至約IxlO15孢子/公頃、從約IxlO9至約IxlO15孢子/公頃、從約IxIOki至約IxlO15孢子/公頃、從約IxlO11至約IxlO15孢子/公頃、優(yōu)選從約IxIOki至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選從約5Χ10-至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選約IxlO11至約5χ10η孢子/公頃的比率施用。
[0156]方便地，通過以約IO8孢子/ml或更多配制所述的組合物并且以約IL/公頃的比率施用所述的組合物能夠?qū)崿F(xiàn)這樣的施用比率。如本文所述，通過將組合物溶解于更大體積的農(nóng)業(yè)上可接受的溶劑(例如水)中能夠方便地實現(xiàn)該施用比率。
[0157]優(yōu)選地，組合物在施用之前與水混合。在I個實施方案中，組合物與水混合并且以至少約100L水/Ha、以至少約150L/Ha、以至少約200L/Ha、以至少約250L/Ha、以至少約300L/Ha、以至少約350L/Ha、以至少約400L/Ha、以至少約450L/Ha、或以至少約500L/Ha施用。在優(yōu)選的實施方案中，在施用之前組合物與水混合至約IxlO11至約5χ10η孢子每500L水的最終濃度，并且以500L/公頃的比率施用。 [0158]優(yōu)選地，通過噴霧進(jìn)行所述的施用。
[0159]優(yōu)選地，包含巴西安白僵菌菌株K4B3(匪IA登記號V08/025855)或具有其鑒別特征的培養(yǎng)物的組合物以從約IxIOici至約IxlO15孢子/公頃、優(yōu)選從約IxlO12至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選從約5xl012至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選約1-3χ1013孢子/公頃的比率施用。
[0160]方便地，通過以約IO7孢子/毫克或更多配制所述的組合物、并且以約Ikg/公頃的比率施用所述的組合物能夠?qū)崿F(xiàn)該施用比率。如本文所述，通過將組合物溶解于更大體積的農(nóng)業(yè)上可接受的溶劑(例如水)中能夠方便地實現(xiàn)該施用比率。
[0161]本發(fā)明可應(yīng)用于任意的植物或其周圍環(huán)境。在某些實施方案中，示例性的植物是單子葉或雙子葉植物，例如苜蓿、大麥、蕓苔、玉米、棉花、亞麻、木棉花、花生、馬鈴薯、燕麥、大米、黑麥、高粱、大豆、甜菜、甘蔗、向日葵、煙草、番爺、小麥、草皮草、牧草、漿果、水果、豆類、蔬菜、觀賞植物、灌木、仙人掌、肉質(zhì)植物和樹。
[0162]在進(jìn)一步舉例說明的實施方案中，植物可以是任意的植物，其包括選自茄目的植物(包括來自以下科的植物:旋花科、田基麻科、山醋李科、茄科和尖瓣花科)、和選自天門冬目的植物(包括來自以下科的植物:石蒜科、天門冬科、芳香草科、香水花科、澳韭蘭科、矛花科、仙茅科、鳶尾科、鳶尾蒜科、毛石蒜科、蘭科、藍(lán)星科、刺葉樹科和血劍草科)。
[0163]對于本發(fā)明涉及的領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，在不背離如所附權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的范圍的情況下，本發(fā)明的結(jié)構(gòu)和不同的實施方案和應(yīng)用中的許多變化不言自明。本文中所公開的和描述的僅僅是舉例說明性的并且其在任何意義上不是限制性的。
[0164]在引用專利說明書、其他的外部文獻(xiàn)、或其他的信息來源的說明書中，這通常是為了提供用于討論本發(fā)明的特征的背景。除非另有特別說明，對這些外部文獻(xiàn)的引用不以任何形式解釋為承認(rèn)這些文獻(xiàn)或這些信息來源是現(xiàn)有技術(shù)或構(gòu)成本領(lǐng)域的公知常識的部分。
[0165]引用本文所公開的數(shù)字范圍(例如I至10)也包含引用該范圍內(nèi)的所有有理數(shù)(例如1U.1、2、3、3.9、4、5、6、6.5、7、8、9和10)和該范圍內(nèi)的任意的有理數(shù)范圍(例如2至8、1.5至5.5、和3.1至4.7)，因此，已清楚地公開了本文所公開的所有范圍的所有亞范圍。上述這些僅僅是具體描述的例子，在最低值和最高值之間的數(shù)值的所有可能的組合都被認(rèn)為在本申請中以相似的方式進(jìn)行了清楚的說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0166]圖1表示被離心分離的材料的薄層色譜(TLC)。分析2個不同的樣品載荷和脂質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品(右邊道)。
[0167]圖2表示與起始原料相比的酸性/非酸性部分的TLC。酸性(A)部分主要表現(xiàn)出強(qiáng)的脂肪酸帶，而非酸性(NA)部分含有大量其他的脂質(zhì)帶。
[0168]圖3表示酸性/非酸性部分的生物分析結(jié)果。
[0169]圖4表示6種色譜部分的TLC。右側(cè)表示使用最優(yōu)化顯示所有脂質(zhì)的條件的部分
1、5和6的重復(fù)。
[0170]圖5表示6種色譜部分的生物分析結(jié)果。
[0171]圖6表示11種甲醇色譜部分的TLC。
[0172]圖7表示色譜部分的生物分析結(jié)果。
[0173]圖8表示來自制備型TLC板I的部分的分析型TLC。
[0174]圖9表示制備型TLC部分(來自板I)的生物分析結(jié)果。
[0175]圖10表示來自制備型TLC板2的部分的分析型TLC。
[0176]圖11表示制備型TLC部分(來自板2)的生物分析結(jié)果。
[0177]圖12 表示部分 2、3、4b、5a、5b 的 MALD1-TOF MS (由上到下)。
[0178]圖13表示部分3的低質(zhì)量范圍MS譜。
[0179]圖14表示針對蚜蟲的生物實驗結(jié)果。
[0180]圖15表示來自K4B3菌絲體培養(yǎng)物(多個菌管)的氯仿提取物針對蚜蟲的生物實驗。
[0181]圖16表示針對蚜蟲的生物實驗結(jié)果。
[0182]圖17表示針對小菜蛾的生物實驗結(jié)果。
[0183]圖18表示在從如本文的實施例5所述的巴西安白僵菌菌株AM2、F480和K4B3提取的總脂質(zhì)的生物實驗中，在20個小時(在20°C)桃蚜的累積死亡率％。樣本1-9是K4B3脂質(zhì)的各部分。
[0184]圖19表示在來自如本文中實施例5所述的巴西安白僵菌菌株K4B3(白僵菌屬)、木霉菌和綠僵菌的各脂質(zhì)部分的生物實驗中，在21個小時(在20°C)桃蚜的死亡率％。K4B3-脂質(zhì)I和K4B3-脂質(zhì)2是來自同一批培養(yǎng)物的重復(fù)分離物，以甲醇為陰性對照。
[0185]圖20表示圖19和如本文實施例5中所述的生物實驗中桃蚜的累積死亡率％。
[0186]圖21表示在來自如本文中實施例5所述的巴西安白僵菌菌株K4B3(白僵菌屬)、木霉菌和綠僵菌的各種脂質(zhì)部分的生物實驗中小菜蛾幼蟲的累積死亡率％。
[0187]圖22表示在來自如本文中實施例5所述的巴西安白僵菌菌株K4B3(FS和Beaublast)和木霉菌的各種脂質(zhì)部分的生物實驗中在21個小時(在20°C )桃蚜的死亡率％。所測試的部分包括甲醇提取的(-MeOH)部分和氯仿提取的(_氯仿)部分，以甲醇和水作為陰性對照。
[0188]發(fā)明詳沭
[0189]本發(fā)明部分地涉及分離自子囊菌門真菌的多種菌株(包括白僵菌物種和木霉菌物種)的I種或多種脂質(zhì)以及這些脂質(zhì)在控制昆蟲(例如致植物病的昆蟲)中的應(yīng)用，其中所述I種或多種脂質(zhì)具有對抗昆蟲(例如致植物病的昆蟲)的效力。
[0190]定義
[0191] 如本文所用的術(shù)語“生物控制劑”(BCA)是指是或來源于生物學(xué)物質(zhì)的試劑，所述的生物制劑用作I種或多種有機(jī)體、通常是I種或多種病原體、例如I種或多種植物病原體(例如致植物病的昆蟲)的拮抗劑，或者能夠控制I種或多種病原體、例如I種或多種植物病原體。拮抗可以采用多種形式。在I種形式中，生物控制劑可以僅僅用作驅(qū)蟲劑。在另一種形式中，生物控制劑可以提供不利于病原體的環(huán)境。在進(jìn)一步的、優(yōu)選的形式中，生物控制劑可以寄生、致殘、致不育、阻止生長、阻止傳播或散布、和/或殺死病原體。因此，拮抗機(jī)制非限制性地包括抗生、寄生、固定、不育和毒性。因此，來源于或者用作I種或多種病原昆蟲的拮抗劑的試劑能夠被稱為具有昆蟲致病性的效力或殺蟲活性。而且，作為昆蟲(包括致植物病的昆蟲)的拮抗劑的生物控制劑能夠被稱為昆蟲致病劑。
[0192] 如本文所用，“生物控制組合物”是包含或包括至少I種作為I種或多種病原體(例如I種或多種植物病原體)的生物控制劑的組合物。這些控制劑非限制性地包括用作驅(qū)蟲劑的試劑、提供不利于病原體的環(huán)境的試劑、和致殘、致不育和/或殺死病原體的試劑。
[0193]因此，如本文所用，“抗致植物病的組合物”是包含或包括至少I種作為I種或多種植物病原體的拮抗劑的試劑的組合物。在本文中認(rèn)為該組合物具有抗致植物病的效力。
[0194]如說明書中所用的術(shù)語“包含”是指“至少部分地由其組成”。當(dāng)解釋本說明書中的包括術(shù)語“包含”的每一個語句時，除了該術(shù)語所引導(dǎo)的特征之外的特征也可以存在。相關(guān)的術(shù)語(例如“包括”和“含有”)以相同的方式解釋。
[0195]如本文所用的術(shù)語“控制”通常包括防止、減少或根除由I種或多種病原體引起的感染(例如由I種或多種植物病原體引起的感染)，或者抑制感染的比例和范圍，例如減少在植物或其周圍環(huán)境中或上的植物病原體種群，其中該感染或種群的防止或減少相對于未經(jīng)處理的感染或種群是統(tǒng)計學(xué)上顯著的。也包括治愈性的處理方法。優(yōu)選地，通過增加病原體種群的死亡率實現(xiàn)該控制。
[0196]術(shù)語“昆蟲致病性的活性”或“昆蟲致病性的效力”在本文中可互換使用，并且其是指某些試劑(例如某些微生物或來源于某些微生物的試劑)對抗I種或多種致病昆蟲、例如I種或多種致植物病的昆蟲的能力。
[0197]在多種實施方案中，所述的昆蟲致病性的效力是寄生和致殘、致不育、阻止生長或殺死I種或多種昆蟲、例如致植物病的昆蟲的能力，優(yōu)選在與昆蟲接觸的14天之內(nèi)，更優(yōu)選在7天內(nèi)，更優(yōu)選在7天內(nèi)殺死I種或多種致植物病的昆蟲的能力。或者，所述的昆蟲致病性的效力是支持或促進(jìn)I種或多種昆蟲致病性的微生物、例如昆蟲致病性的真菌的生長的能力。
[0198]因此，如本文所用的“昆蟲致病性的組合物”通常是包含或包括至少I種作為I種或多種致病昆蟲的拮抗劑的試劑的組合物。在本文中認(rèn)為該組合物具有昆蟲致病性的效力。
[0199]術(shù)語“殺蟲活性”和“殺蟲效力”在本文中可互換使用，并且其是指某些試劑(例如來源于某些微生物的試劑)致殘、致不育、阻止生長或殺死I種或多種昆蟲、例如I種或多種致植物病的昆蟲的能力。
[0200]在多種實施方案中，所述的殺蟲效力是致殘、致不育、阻止生長或殺死I種或多種昆蟲、例如致植物病的昆蟲的能力，優(yōu)選在與昆蟲接觸的14天之內(nèi)，更優(yōu)選在7天內(nèi)，更優(yōu)選在7天內(nèi)殺死I種或多種昆蟲的能力。
[0201]在某些實施方案中，昆蟲致病性的活性是殺蟲活性。例如本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的某些實施方案是殺蟲的。
[0202]因此，如本文所用的“殺蟲組合物”通常是包含或包括至少I種能夠致殘、致不育、阻止生長或殺死I種或多種昆蟲的試劑的組合物。在本文中認(rèn)為該組合物具有殺蟲效力。
[0203]如本文所用的關(guān)于I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分、例如關(guān)于如本文實施例中所列舉的I種或多種脂質(zhì)部分的術(shù)語“功能性變體”是指不同于具體鑒定的實體的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，例如其中刪除、取代或增加I個或多個基團(tuán)、例如I個或多個脂肪酸基團(tuán)，但是其至少部分地保持具體鑒定的實體的I種或多種生物活性，例如引發(fā)I種或多種由具體鑒定的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分引發(fā)的生物效應(yīng)的能力。功能性變體可以來自相同的物種或來自其他的物種并且可以包括同系物、相似物和同源物。
[0204]在本申請中，功能性變體將優(yōu)選地保持具體鑒定的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的至少部分的殺蟲活性。
[0205]測定由本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分引發(fā)的I種或多種生物效應(yīng)(例如殺蟲效力)的方法和實驗是本領(lǐng)域中熟知的，并且這些方法和實驗?zāi)軌蛴糜阼b別或驗證本發(fā)明的I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的I種或多種功能性變體。例如，本發(fā)明的脂質(zhì)的殺死目標(biāo)昆蟲或?qū)鼓繕?biāo)昆蟲(例如 本文實施例中所述的那些)生長的能力的實驗適合于鑒別I種或多種脂質(zhì)的功能性變體。
[0206]如本文所用的術(shù)語“鑒別特征”是指參照實體所具有的和可測定的I個或多個屬性，例如包括物理化學(xué)特征、例如光譜圖上存在或不存在特定的峰、在色譜分析中存在或不存在具有給定的遷移率或洗脫譜的化合物或部分，例如在TLC上存在或不存在具有給定遷移率的帶。
[0207]如本文所用的術(shù)語“脂質(zhì)”包括高度減少的富碳物質(zhì)，其不溶于水并且包含I種或多種脂肪酸、具有長度范圍通常為4-36個碳原子的烴鏈的羧酸。脂質(zhì)包括三?；视?、磷脂(包括甘油磷脂和鞘磷脂)、糖脂和甾醇。
[0208]如本文所用的術(shù)語“脂質(zhì)部分”包括包含I種或多種脂質(zhì)、游離脂肪酸或者兩者均有的組合物，其中該部分包含未分離的原料中所存在的總脂質(zhì)的亞組或由該亞組組成。一般地，脂質(zhì)部分將具有可測定和可鑒別的組成，例如特征性的色譜圖或質(zhì)譜圖。脂質(zhì)部分的實例在本文中呈現(xiàn)。
[0209]如本文所用的術(shù)語“植物”不僅包括整株植物，而且擴(kuò)展到植物的部分、切割物以及植物產(chǎn)品，其包括根、葉、花、種子、莖、愈合組織、堅果和水果、鱗莖、塊莖、球莖、谷粒、切割物、根狀莖或嫩芽，并且包括任意的植物材料，不論是種植前、生長期間和收獲時或之后?？梢允芤嬗诒景l(fā)明的應(yīng)用的植物涵蓋大范圍的農(nóng)業(yè)和園藝作物。本發(fā)明的組合物也特別適合于應(yīng)用于有機(jī)生產(chǎn)系統(tǒng)。
[0210]當(dāng)用作殺蟲劑(例如殺蟲脂質(zhì)或昆蟲致病性的真菌菌株)時，術(shù)語“保持殺蟲效力”或“保持昆蟲致病性的效力”和語法上意義相同的詞及其衍生詞是為了表示具有有用的殺蟲或昆蟲致病性的活性的試劑。優(yōu)選地，保持的活性是原始活性的至少約35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100%，并且有用的范圍可以在這些數(shù)值的任意兩者間選擇(例如從約35至約100%、從約50至約100%、從約60至約100%、從約70至約100%、從約80至約100%和從約90至約100%)。例如，本發(fā)明的優(yōu)選的脂質(zhì)功能性變體或成分應(yīng)該保持殺蟲活性，即保持特定的原始脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的殺蟲活性的至少約35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100%。因此，本文所述的脂質(zhì)部分之一的功能性變體(例如在實施例中列舉的脂質(zhì)部分的變體)應(yīng)該保持相應(yīng)的脂質(zhì)部分的殺蟲活性的至少約35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、99或100%。類似地，本發(fā)明的優(yōu)選的組合物能
夠支持維持其所包含的昆蟲致病劑的有效的昆蟲致病性的活性，并且能夠被稱為理想地保持昆蟲致病性的活性直至使用本文所研究的方法進(jìn)行施用。
[0211]如本文所用，當(dāng)用于本發(fā)明的組合物時術(shù)語“穩(wěn)定的”是指組合物能夠支持殺蟲或昆蟲致病性的效力達(dá)若干周，優(yōu)選地約1、約2、約3、約4、優(yōu)選地約5、更優(yōu)選地約6個月或更長時間。例如，當(dāng)用于另外包含I種或多種昆蟲致病性的真菌的組合物時，術(shù)語“穩(wěn)定的”是指組合物能夠支持昆蟲致病性的真菌的復(fù)制生存性達(dá)若干周，優(yōu)選地約1、約2、約3、約4、優(yōu)選地約5、更優(yōu)選地約6個月或更長時間。
[0212]包括特定菌株的同系物或變種的“具有[特定菌株]的鑒別特征的菌株”或“具有[特定菌株]的鑒別特征的培養(yǎng)物”密切地相關(guān)于(即享有共同的祖先)或者來源于特定的菌株，但是通常在I個或多個基因型或表型特征中不同于該特定菌株。變種通?？赏ㄟ^遺傳差別的評估來鑒別。同系物通過遺傳、生物化學(xué)和形態(tài)學(xué)差異的程度的評估和使用分類學(xué)方法(包括例如分析，例如遺傳分類學(xué))來鑒別。然而，具有[特定菌株]的鑒別特征的菌株(包括特定菌株的同系物和變種)將保持昆蟲致病性的效力，將不同于其他的菌株，并且使用本文所述的技術(shù)可鑒別為親本的同系物或變種。[0213]當(dāng)用于接受本發(fā)明的真菌、方法和組合物的植物時，術(shù)語“周圍環(huán)境”包括毗鄰或鄰近植物或其根、塊莖等的土壤、水、落葉層和/或生長介質(zhì)、鄰近的植物、所述植物的切割物、支撐物、向植物給予的水、和包衣(包括種子包衣)。其進(jìn)一步包括貯藏、包裝或加工材料，例如保護(hù)涂層、盒子和包裝紙、和種植、養(yǎng)護(hù)或收割設(shè)備。
[0214]植物病原體的控制
[0215]本發(fā)明考慮許多國家的園藝部門(包括例如美國、新西蘭和歐洲的許多國家的園藝部門)面臨在致植物病的昆蟲害蟲中增加的殺蟲劑耐藥性的問題。在某些管理制度下由管理制度障礙導(dǎo)致的新的化學(xué)殺蟲劑的可用性降低加重了這種情況。
[0216]作為生物控制劑的來源于真菌的殺蟲脂質(zhì)的應(yīng)用為該問題提供了解決方案。有效的生物控制劑能夠根據(jù)其致殘或殺死目標(biāo)致植物病的昆蟲或昆蟲種群的能力進(jìn)行選擇。在有益的條件下，致植物病的昆蟲(例如蚜蟲、薊馬和粉虱)可能感染植物及其周圍環(huán)境(包括土壤、落葉層、鄰近植物、支撐物等)。可以施用來源于真菌的殺蟲脂質(zhì)和由其衍生的試劑來致殘和/或殺死致植物病的昆蟲，從而防止或限制病原體的致病能力。在該領(lǐng)域中，來源于真菌的殺蟲脂質(zhì)的有效性經(jīng)常因此依賴于其在各種氣候條件下保持殺蟲效力的能力，例如被濕潤期和干燥所阻斷。來源于昆蟲致病性的真菌的試劑(例如本文所述的脂質(zhì))的有效性通常不需要維持存活，而是需要維持殺蟲效力。
[0217]根據(jù)本發(fā)明有效對抗昆蟲(例如致植物病的昆蟲)并且因此適合于使用的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分被鑒定為相對于對照處理(本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體與對照進(jìn)行比較)能以統(tǒng)計學(xué)上顯著的量而有效地減少目標(biāo)昆蟲的種群的物質(zhì)。這些脂質(zhì)或脂質(zhì)部分能夠被視為具有殺蟲效力。如本文所述，目標(biāo)昆蟲的種群的減少可能依賴于各種拮抗機(jī)制。例如，脂質(zhì)可以致殘、致不育、抑制生長或發(fā)育、和/或優(yōu)選地殺死致植物病的昆蟲，或者可以支持或促進(jìn)同時存在的I種或多種昆蟲病原微生物(例如與本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分一起存在于組合物中的昆蟲致病性的真菌(不論是分別地、同時地或先后地施用))的生長和昆蟲致病性的效力。就其本身而言，本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分可以實現(xiàn)或者支持昆蟲病原微生物(例如昆蟲致病性的真菌)的寄生、致殘、致不育和/或優(yōu)選地殺死致植物病的昆蟲的能力。本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分也可以通過提供不利于致植物病的昆蟲的環(huán)境(例如將I種或多種真菌施用于植物或其周圍環(huán)境)來減少目標(biāo)昆蟲的種群。在該實施方案中，脂質(zhì)或脂質(zhì)部分可以被認(rèn)為用作驅(qū)蟲劑并且在植物或其周圍環(huán)境的鄰近地區(qū)減少目標(biāo)昆蟲的有效種群。
[0218]在I個實施方案中，脂質(zhì)是如本文所定義的功能性變體。
[0219]優(yōu)選地，合適的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其功能性變體表現(xiàn)出約5%殺蟲效力、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、更優(yōu)選至少約50%的殺蟲效力，其表示為相對于對照處理的相關(guān)昆蟲種類的種群的百分比減少。通過舉例說明，本文所述的方法用于鑒別有效對抗各種目標(biāo)昆蟲的白僵菌屬的脂質(zhì)部分分離物，而類似于本文所述方法的方法能夠用于其它的真菌和昆蟲種類。
[0220]盡管對于被視為適合于用作生物控制劑的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的殺蟲效力是主要的必備條件，但是脂質(zhì)或脂質(zhì)部分可以具有另外的適合于用作生物控制劑的特征。
[0221]例如，脂質(zhì)或脂質(zhì)部分應(yīng)該能夠以有效的形式貯存合理的時間，最終使其作為生物控制劑以有效的形式和濃度被施用于目標(biāo)植物或其周圍環(huán)境。
[0222]本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分和組合物可以包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的I種或多種功能性變體，或者本發(fā)明的方法可以使用I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或 脂質(zhì)部分的I種或多種功能性變體，包括本文中所舉例的那些。月旨質(zhì)或脂質(zhì)部分與其功能性變體的組合也是有用的。
[0223]分離脂質(zhì)的方法
[0224]生產(chǎn)和分離I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的示例性的方法如本文中所記載。其包括從I種或多種子囊菌門真菌(例如白僵菌物種(包括例如巴西安白僵菌K4B3)或者木霉菌物種)的培養(yǎng)物分離出I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
[0225]或者，本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，包括其功能性變體，可以使用本領(lǐng)域中熟知的脂質(zhì)合成方法進(jìn)行制備。
[0226]包含昆蟲致病性的真菌的組合物
[0227]如果在某些管理制度下并非不可能，那么昆蟲致病性的真菌的引入常常是有問題的、昂貴的和不切實際的。例如，由于管理和法律禁止，在某國之外的國家可獲得的昆蟲致病性的真菌對于該國內(nèi)的園藝師可能是不可獲得的。因此，本發(fā)明認(rèn)為鑒別和制備具有來自這些真菌的昆蟲致病性的效力或者能夠支持或促進(jìn)昆蟲致病性的真菌(或者其他的昆蟲病原微生物)的生長并能夠幫助這些昆蟲病原微生物在各種環(huán)境條件下繁榮、或者兩者兼有的試劑具有顯著的優(yōu)勢。
[0228]所述真菌的分離物可以方便地從環(huán)境獲得，包括例如從植物、其周圍環(huán)境，和從所述的植物的病原體獲得。在某些實施方案中，所述真菌的分離物可以從目標(biāo)昆蟲、或者從將要隨后施用包含所述真菌的生物控制劑或包含所述真菌的組合物的植物物種(或周圍環(huán)境)獲得。
[0229]測定在不同條件下所述真菌的生長的方法(包括不同的溫度和在不同的介質(zhì)或其他底物上)是本領(lǐng)域中熟知的。同樣地，測定本發(fā)明的脂質(zhì)對真菌生長的正面影響(例如，與不存在所述的脂質(zhì)時所發(fā)現(xiàn)的情況相比，存在脂質(zhì)時所述真菌的毒性或昆蟲致病性的效力增加)的方法也是本領(lǐng)域中熟知的。本文記載了測定本發(fā)明的脂質(zhì)在各種溫度或者在各種植物、環(huán)境或目標(biāo)有機(jī)體上影響真菌生長的能力的方法的實例。
[0230]盡管昆蟲致病性的效力是分離物被認(rèn)為適合于用作生物控制劑的主要必備條件，但是真菌分離物應(yīng)該具有另外的適合于用作生物控制劑的特征。
[0231]例如，真菌應(yīng)該能夠以可存活的形式貯存理合的時間，最終使其作為生物控制劑以有效的形式和濃度被施用于目標(biāo)植物或其周圍環(huán)境。
[0232]當(dāng)真菌因為其適合于用作生物控制劑而被施用于植物或其周圍環(huán)境時，其也應(yīng)該能夠達(dá)到感染閾值。如本文所用，感染閾值是指真菌在目標(biāo)植物或其周圍環(huán)境建立從而具有昆蟲致病性的效力所需的真菌濃度。應(yīng)當(dāng)理解，為了達(dá)到感染閾值，真菌的某些分離物可能需要以幾乎不現(xiàn)實的或不可行的高比率施用。而且，不論其施用的濃度或比率如何，某些真菌分離物可能不能達(dá)到感染閾值。合適的昆蟲致病性的真菌當(dāng)以不小于IOltl孢子/公頃的比率施用時、或者以不小于IO7孢子每毫克組合物的濃度(此時所述的組合物以約lkg/1000L/公頃的比率施用)施用時能夠達(dá)到感染閾值。
[0233]測定感染閾值的方法是本領(lǐng)域中熟知的，并且這些方法的實例在本文中呈現(xiàn)。在某些實施方案中，感染閾值能夠直接測定，例如通過分析I個或多個從目標(biāo)植物、其周圍環(huán)境、和/或所述植物的病原體獲得的樣本和測定所述的樣本中真菌是否存在或真菌的量。在其他的實施方案中，感染閾值能夠間接測定，例如通過觀察I種或多種致植物病的昆蟲的種群數(shù)量的減少。也包括這些方法的組合。 [0234]巴西安白僵菌是土壤生的真菌，其攻擊幼蟲和成蟲，包括例如蝗蟲、蚜蟲、薊馬、蛾和若干其他種類。通常，巴西安白僵菌能夠從昆蟲尸體分離出來，例如蚜蟲、蛀蟲和薊馬，并且也可以從土壤分離出來。示例性的昆蟲致病性的巴西安白僵菌菌株K4B3可以用于本發(fā)明的某些實施方案，并且出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約于2008年10月14日將其保藏于澳大利亞國家測量所(匪IA,前身是澳大利亞政府分析實驗室(AGAL))，ISuakinStreet, Pymble,新南威爾士，澳大利亞。分離群已經(jīng)被授予保藏編號V08/025855。
[0235]因此，在I個方面本發(fā)明提供方法和組合物，其包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)、或者I種或多種對其編碼的多核苷酸、以及復(fù)制可存活的形式和量的巴西安白僵菌菌株K4B3, NMIA號V08/025855、或具有菌株K4B3, NMIA號V08/025855的鑒別特征的白僵菌。
[0236]巴西安白僵菌菌株K4B3是特別有效的生物控制劑，其能夠存活于間斷的潮濕期、干燥，并且能夠寄生、致殘和殺死田野中的致植物病的昆蟲，例如但不限于蚜蟲、毛蟲、粉風(fēng)、蛾、瓦螨屬小蟲、蝶和薊馬。
[0237]在本發(fā)明的其他實施方案中，巴西安白僵菌K4B3可以用于制備包含I種或多種本文所鑒別的脂質(zhì)的組合物。
[0238]在I個實施方案中，方法包含維持巴西安白僵菌K4B3V08/025855的培養(yǎng)物在適合于至少I種脂質(zhì)的產(chǎn)生的條件下；和從巴西安白僵菌K4B3V08/025855分離出至少I種脂質(zhì)。
[0239]在I個實施方案中，組合物包含2種或更多種如本文所述的脂質(zhì)。顯然，這些脂質(zhì)與白僵菌屬已知的殺蟲劑(例如白僵菌素、白僵菌素-F和類白僵菌素)不具有顯著的同一性或同源性。在I個實施方案中，組合物是包含2種或更多種如本文所述的脂質(zhì)的協(xié)同組合物。
[0240]在另一個實施方案中，組合物另外包含少于約lmgL—1白僵菌素，少于約0.5mgL_1白僵菌素、少于約0.1mgL-1白僵菌素、少于約0.05mgL_1白僵菌素、少于約0.01mgL-1白僵菌素、少于約0.005mgL_1白僵菌素、少于約0.0OlmgL-1白僵菌素、少于約0.0005mgL_1白僵菌素或少于約0.0OOlmgr1白僵菌素。
[0241]在另一個實施方案中，組合物另外包含少于約lmgL—1白僵菌素-F，少于約0.5mgL_1白僵菌素-F、少于約0.1rngL-1白僵菌素-F、少于約0.0SmgL—1白僵菌素-F、少于約0.01mgL-1白僵菌素-F、少于約0.005mgL_1白僵菌素-F、少于約0.0OlmgL-1白僵菌素-F、少于約0.0OOSmgr1白僵菌素-F或少于約0.0OOlmgr1白僵菌素-F。
[0242]在另一個實施方案中，組合物另外包含少于約lmgL—1的類白僵菌素、少于約0.5mgL_1的類白僵菌素、少于約0.1mgL-1的類白僵菌素、少于約0.05mgL_1的類白僵菌素、少于約0.01mgL-1的類白僵菌素、少于約0.005mgL_1的類白僵菌素、少于約0.0OlmgL-1的類白僵菌素、少于約0.0005mgL_1的類白僵菌素或少于約0.0OOlmgL-1的類白僵菌素。
[0243]在多種實施方案中，組合物是協(xié)同組合物，其包含I種或多種如本文所述的脂質(zhì)、以及I種或多種白僵菌素(例如白僵菌素_A、白僵菌素-D、白僵菌素-E或白僵菌素-F)或I種或多種類白僵菌素、或其任意組合。
[0244]例如，組合物另外包含多于約0.1rngL-1的白僵菌素、多于約0.5mgL_1的白僵菌素、多于約lmgL—1的白僵菌素、多于約SmgL—1的白僵菌素、多于約IOmgL4的白僵菌素、多于約50mgL_1的白僵菌素或多于約lOOmgL—1的白僵菌素。
[0245]在另一個實施例中，組合物另外包含多于約0.1mgr1的類白僵菌素、多于約0.5mgL_1的類白僵菌素、多于約lmgL—1的類白僵菌素、多于約SmgL—1的類白僵菌素、多于約IOmgL-1的類白僵菌素、多于約SOmgL—1的類白僵菌素或多于約lOOmgL—1的類白僵菌素.[0246]在另一個實施方案中，組合物是協(xié)同組合物，其包含I種或多種如本文所述的脂質(zhì)和I種或多種如本文所述的昆蟲致病性的真菌、以及I種或多種白僵菌素(例如白僵菌素-A、白僵菌素-D、白僵菌素-E或白僵菌素-F)或I種或多種類白僵菌素、或其任意組合。
[0247]本發(fā)明的巴西安白僵菌菌株K4B3可以單獨使用，或者與本文所述的其他的昆蟲致病性的真菌組合使用。其他的昆蟲致病性的真菌的實例更詳細(xì)地記載于下文中。
[0248]巴西安白僵菌菌株K4B1分離自新西蘭的Bombay的松林內(nèi)的蛀蟲幼蟲。出于專利程序的目的，根據(jù)布達(dá)佩斯條約，該巴西安白僵菌分離群已經(jīng)于2005年3月16日被保藏于澳大利亞國家測量所，ISuakin Street, Pymble,新南威爾士，澳大利亞。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM05/44595。
[0249]巴西安白僵菌分離群K4B1表現(xiàn)出對薊馬成蟲的偏好，并且對薊馬幼體和蛹、蚜蟲和粉虱也是致病性的。K4B1的分生孢子形成奶油狀聚集體。
[0250]巴西安白僵菌分離群K4B2分離自新西蘭的Aka Aka平原中的向日葵上的鱗翅目毛蟲。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該巴西安白僵菌分離群已經(jīng)于2006年3月3日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM06/00010。
[0251]巴西安白僵菌分離群K4B2表現(xiàn)出對毛蟲(包括大豆尺蠖毛蟲以及粉蝶和粘蟲毛蟲)的偏好。該分離群對 薊馬幼體、成蟲和蛹、蚜蟲和粉虱也是致病性的。K4B2的分生孢子形成黃色粉塵狀聚集體。
[0252]NMIA 號 V08/025855、NMIA 號 NM05/44595、NMIA 號 NM06/00010 和巴西安白僵菌的其他合適的分離群可以與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或片段組合使用，并且是特別有效的生物控制劑，其能夠存活于間斷的潮濕期、干燥，并且能夠寄生、致殘和殺死田野中的致植物病的昆蟲，例如但不限于蚜蟲、毛蟲、粉虱、蛾、瓦螨屬小蟲和薊馬。巴西安白僵菌的這些分離群殺死粉虱、薊馬和蚜蟲的程度通常與常用的如上所述的殺蟲劑一樣好。對這些殺蟲劑的耐藥性已經(jīng)發(fā)生；在這些和其他情況中，包含巴西安白僵菌分離群的組合物或使用巴西安白僵菌分離群的方法提供了昆蟲控制的有效替代方案。在植物病害的控制中的有效活性以及沒有發(fā)現(xiàn)任何由巴西安白僵菌引起的植物病原性，證明這些物種的分離群具有用作生物控制劑的理想屬性。
[0253]以前尚未描述過木霉屬物種的任何殺蟲活性或作用。木霉培養(yǎng)物通常在25_30°C快速生長，但在35°C將不生長。起初菌落在培養(yǎng)基(例如玉米粉右旋糖瓊脂(CMD))上是透明的或者在更豐富的培養(yǎng)基(例如馬鈴薯右旋糖瓊脂(PDA))上是白色的。菌絲體通常在CMD上是不明顯的，分生孢子通常在I周內(nèi)形成綠色或黃色或較少見的白色的致密或松散的簇。黃色色素可以被分泌到瓊脂中，特別是在PDA上。某些物種產(chǎn)生特征性的甜味或“椰子”氣味。 [0254]分生孢子梗高度分枝，因此其難以定義或測量，其松散地或致密地簇生，通常形成于不同的同心環(huán)中或者沿著缺乏的氣生菌絲生長。分生孢子梗的主要分枝產(chǎn)生可以成對或不成對的橫向側(cè)枝，最長的分枝遠(yuǎn)離末端并且通常從靠近末端的主軸上直接產(chǎn)生瓶狀小梗。分枝可以再分枝，二級分枝經(jīng)常是成對的并且最長的二級分枝最接近主軸。所有一級和二級分枝以相對于主軸90°或接近90°產(chǎn)生。具有成對的分枝的典型的木霉分生孢子梗呈現(xiàn)金字塔形外觀。通常，分生孢子梗終止于I個或幾個瓶狀小梗中。在某些物種(例如多孢木霉)中，主要的分枝被長的、單一的或分枝的、鉤形的、直的或彎曲的、有隔膜的、薄壁的、不育的或末端能育的延伸終止。主軸可以與瓶狀小梗的基底有相同的寬度或者其可以更寬得多。
[0255]瓶狀小梗通常在中部增大，但可以是圓柱形的或近球形的。瓶狀小?？梢砸韵鄬τ谳喰误w的其他成員呈90°的角度保持在輪形體中，或者其可以是各種畫筆狀的(膠枝霉樣)。瓶狀小?？梢栽趯挼闹鬏S上密集地簇生(例如多孢木霉、鉤狀木霉)或者其可以是獨生的(例如長枝木霉)。
[0256]分生孢子通常顯得干燥的，但是在某些物種中其可以包含在澄明的綠色或黃色液滴中(例如綠木霉、暗黃木霉)。大多數(shù)物種的分生孢子是橢圓形的，3-5Χ2-4μπια/W=>1.3);球形的分生孢子(L/W〈1.3)是罕見的。分生孢子通常是光滑的，但是已知在幾個物種中是有結(jié)節(jié)的精細(xì)扁平化的分生孢子。
[0257]聚囊粘菌屬是由也具有典型的木霉膿包的某些物種形成的。聚囊粘菌屬通過其獨特的分生孢子梗而被識別，該分生孢子梗輪生分枝并且在每一個瓶狀小梗的末端在澄明的綠色液滴中產(chǎn)生分生孢子。
[0258]原膜孢子可以由所有物種產(chǎn)生，但是在CMD上在20°C在10天內(nèi)并非所有物種都產(chǎn)生原膜孢子。原膜孢子通常是單室近球形的并且終止短菌絲；其也可以在菌絲細(xì)胞內(nèi)形成。某些物種的原膜孢子是多室的(例如子座木霉)。[0259]Lecanicillium muscarium是具有廣泛宿主范圍(包括同翅類昆蟲和其他的節(jié)肢動物群)的昆蟲致病性的真菌。Lmuscarium被認(rèn)為是物種綜合體，其包括各種形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征的分離群。通常，L.muscarium能夠分離自昆蟲尸體(例如姆蟲、薊馬、粉風(fēng)和粉介殼蟲)，并且也可分離自土壤。
[0260] Lecanicillium muscarium菌株K4V1分離自新西蘭的Pukekohe的溫室番爺作物中的粉風(fēng)。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該L.muscarium分離群已經(jīng)于2005年3月16日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM05/44593。
[0261]K4V1具有其他的鑒別特征:在粉虱介殼蟲上60%分生孢子1.0x1.0微米，在薊馬幼體(幼蟲)上30%分生孢子2.0x1.0微米，在薊馬蛹上10%分生孢子2.5x1.3微米。在稀少地起皺的菌絲體菌體的下方，菌絲體菌體非常容易地從瓊脂移除。
[0262]L.muscarium菌株K4V2分離自新西蘭的Ruakaka的黃瓜溫室中的粉風(fēng)。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該L.muscarium分離群已經(jīng)于2005年3月16日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM05/44594。
[0263]K4V2具有其他的鑒別特征:50%分生孢子2.0x1.5 μ m, 30%分生孢子2.0x1.0ym,20%分生孢子1.0x1.0 μ m，對粉虱成蟲致病，同時芽生孢子對蚜蟲致病。在經(jīng)常起皺的菌絲體菌體的下方，菌絲體菌體難以從瓊脂表面移除。
[0264]L.muscarium菌株K4V4分離自戶外有機(jī)番爺作物。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該L.muscarium分離群已經(jīng)于2006年3月3日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM06/00007。
[0265]K4V4具有其他的鑒別特征:50%分生孢子1.0x0.5 μ m,對粉虱介殼蟲和成蟲致病，在低濕度65-75%、高溫28-32°非常有攻擊性。通常V.1>75%。50%分生孢子0.5x0.5 μ m。在稀少地起皺的菌絲體菌體的下方，菌絲體菌體在培養(yǎng)基中擴(kuò)散糕黃色至淺橙色色素。
[0266]NMIA 號 NM05/44593、NMIA 號 NM05/44594、NMIA 號 NM06/00007 和 L.muscarium 的其他合適的分離群可以與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或功能性變體組合使用，并且是特別有效的生物控制劑，其能夠存活于間斷的潮濕期、干燥，并且能夠寄生、致殘和殺死田野中的致植物病的昆蟲，例如但不限于蚜蟲、粉虱、粉介殼蟲、瓦螨屬小蟲和薊馬。
[0267]Lecanicillium 1ngisporum是特別對姆蟲致病的昆蟲致病性的真菌。Lecanicillium 1ngisporum菌株KT4L1 分離自 Franklin, Auckland,新西蘭的大麥草屑植物中的姆蟲。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該L.1ongisporum分離群已經(jīng)于2006年3月3日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM06/00009。
[0268]分離群KT4L1具有以下鑒別特征:100%分生孢子6.0x2.1 μ m,菌絲體菌體米色至黃色，生長極快，其可以被描述為稠度起伏不定的。菌絲體菌體擴(kuò)散淺紅棕色至瓊脂。
[0269]NMIA號NM06/00009和L.1ongisporum的其他合適的分離群可以與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或功能性變體組合使用，并且是特別有效的生物控制劑，其能夠存活于間斷的潮濕期、干燥，并且能夠寄生、致殘和殺死田野中的致植物病的昆蟲，例如蚜蟲。
[0270]玫煙色擬青霉菌是在感染和死亡的昆蟲中、和在某些土壤中發(fā)現(xiàn)的昆蟲致病性的真菌。玫煙色擬青霉菌通常感染粉虱、薊馬、蚜蟲和毛蟲。
[0271]玫煙色擬青霉菌的K4P1菌株分離自新西蘭Runciman的卷心菜上出現(xiàn)的小菜蛾毛蟲。出于專利程序的目的根據(jù)布達(dá)佩斯條約該玫煙色擬青霉菌分離群已經(jīng)于2006年3月3日被保藏于澳大利亞國家測量所。分離群已經(jīng)被授予保藏編號NM06/00008。
[0272]NMIA號NM06/00008和玫煙色擬青霉菌的其他合適的分離群可以與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或功能性變體組合使用，并且是特別有效的生物控制劑，其能夠存活于間斷的潮濕期、干燥，并且能夠寄生、致殘和殺死田野中的致植物病的昆蟲，例如但不限于粉虱、瓦螨屬小蟲和鱗翅目毛蟲。
[0273]如上所述，許多植物致病昆蟲已經(jīng)發(fā)展出對大量殺蟲劑的耐藥性；在這些和其他情況中，任選地包含或與其共同給予I種或多種真菌分離群(例如上述的那些)的本發(fā)明的組合物提供昆蟲控制的有效替代方案。在植物病害控制中的有效活性以及沒有發(fā)現(xiàn)任何由這些試劑引起的植物病原性，證明本發(fā)明的脂質(zhì)和當(dāng)存在這些物種的真菌分離群時具有用作生物控制劑的理想屬性。
[0274]本發(fā)明提供組合物，其包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其功能性變體、以及I種或多種昆蟲致病性的真菌和至少I種載體。
[0275]組合物可以包括昆蟲致病性的真菌的多種菌株，并且在某些實施方案中，多種菌株可以用于靶向于大量的致植物病物種、或大量的不同發(fā)育階段的單一植物病原體、或其組合。例如致植物病的昆蟲的蛹形式可以用I種真菌菌株進(jìn)行靶向，而致植物病的昆蟲的成蟲形式可以也能夠用另一種真菌菌株進(jìn)行靶向，其中兩種菌株都包含于本發(fā)明的組合物中。在其他的實施方案中，優(yōu)選3種或更少的菌株，并且經(jīng)常優(yōu)選單一的菌株。
[0276]合適地，組合物包含真菌，所述的真菌選自Lecanicillium muscarium菌株K4V1(NMIA登記號NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V2(NMIA登記號NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V4(匪IA登記號NM06/00007)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B1 (匪IA登記號NM05/44595)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B2 (匪IA登記號NM06/00010)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium 1ngisporum 菌株 KT4L1 (NMIA登記號NM06/00009)或具有其鑒別特征的菌株；和玫煙色擬青霉菌株K4P1 (匪IA登記號NM06/00008)或具有其鑒別特征的菌株。
[0277]特別關(guān)注包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體和Lecanici 11 iummuscarium菌株K4Vl(NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株的組合物、包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體和Lecanicillium muscarium菌株K4V2 (NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株的組合物、和包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體和Lecanicillium muscarium菌株K4V1 (NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株的組合物、包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體和Lecanicillium muscarium菌株K4V2 (NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株的組合物。
[0278]包含昆蟲致病性的真菌的組合物的實例是本領(lǐng)域中熟知的，并且包括如在例如Mycotech公司的W095/10597(以PCT/US94/11542公開)、由農(nóng)業(yè)部長代表的美國的W02003/043417(以 PCT/US2002/037218 公開)、McCabe 等人的美國專利號 4，530，834 和Wright等人的美國專利申請?zhí)?0/657,982(以US2004/0047841公開)中所述的那些，將每一個以其整體引入本文作為參考。
[0279]為了適合施用于植物或其周圍環(huán)境，所述的至少I種載體是農(nóng)業(yè)上可接受的載體，更優(yōu)選地是選自填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑和抗氧化劑，更優(yōu)選地所述的組合物包含填充劑刺激物、防結(jié)塊劑、潤濕劑、乳化劑和抗氧化劑的至少之一。優(yōu)選地，所述的填充劑刺激物是碳水化合物源，例如二糖，包括例如蔗糖、果糖、葡萄糖、或右旋糖，所述的防結(jié)塊劑選自滑石粉、二氧化硅、硅酸鈣、或高嶺粘土，所述的潤濕劑是脫脂奶粉，所述的乳化劑是基于大豆的乳化劑(例如卵磷脂)或基于植物的乳化劑(例如單二甘油酯)，和所述的抗氧化劑是谷氨酸鈉或檸檬酸。然而，可以用本領(lǐng)域中熟知的其他實例替換，條件是保持組合物支持殺蟲或昆蟲致病性的效力和在必要時的真菌活力的能力。
[0280]優(yōu)選地，所述的組合物是生物控制組合物。需要有效地作為生物控制劑的組合物中所存在的本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的濃度可根據(jù)植物的最終用途、生理調(diào)節(jié)；病原體感染的類型(包括昆蟲物種)、濃度和程度；溫度、季節(jié)、濕度、生長季的階段和植物齡；所施用的常規(guī)殺蟲劑或其他處理(包括殺真菌劑)的數(shù)量和類型而變化；植物處理(例如脫葉和剪枝)都可以在配制組合物中考慮在內(nèi)。
[0281]殺蟲組合物
[0282]脂質(zhì)組合物和應(yīng)用的方法
[0283]發(fā)明人考慮本文所公開的脂質(zhì)組合物將發(fā)現(xiàn)作為用于局部和/或系統(tǒng)的施用于農(nóng)作物、草、水果和蔬菜、草地、樹和/或觀賞植物的BCA組合物的特別的應(yīng)用。或者，本文所公開的脂質(zhì)可以被配制成用于殺死昆蟲或控制昆蟲種群的噴霧劑、粉塵、粉末、或者其他水制劑、粉化劑或氣霧劑。本文所公開的脂質(zhì)組合物可以預(yù)防性地使用，或者一旦認(rèn)為在特定的環(huán)境中目標(biāo)昆蟲將被處理就可以將其投放到環(huán)境。脂質(zhì)組合物可以包含單個的脂質(zhì)或者可以含有本文所公開的脂質(zhì)的各種組合。
[0284]不論施用的方法 ，以殺蟲有效量施用活性脂質(zhì)部分的量，其將因這些因素而異，例如將被控制的特定的目標(biāo)昆蟲、將被處理的特定的環(huán)境、位置、植物、作物或農(nóng)業(yè)場所、環(huán)境條件，和殺蟲活性脂質(zhì)組合物的施用的方法、比率、濃度、穩(wěn)定性和數(shù)量。制劑也可以因氣候條件、環(huán)境因素、和/或施用的頻率和/或昆蟲感染的嚴(yán)重性而異。
[0285]通過配制I種或多種脂質(zhì)、其功能性變體或其功能性片段、任選地連同真菌細(xì)胞和/或孢子懸液、連同需要的農(nóng)業(yè)上可接受的載體，可以制備所述的組合物。組合物可以在投放前用合適的方法(例如低壓凍干、冷凍干燥、烘干)或在水性載體、介質(zhì)或合適的稀釋劑(鹽水或其他緩沖液)中進(jìn)行配制。配制的組合物可以是粉塵或顆粒狀材料、或者油(植物或礦物)混懸液、或水或油/水乳劑的形式、或者作為可濕潤的粉末、或者組合任意其他的適合于農(nóng)業(yè)應(yīng)用的載體材料。合適的農(nóng)業(yè)載體能夠是固體或液體并且是本領(lǐng)域中熟知的。術(shù)語“農(nóng)業(yè)上可接受的載體”涵蓋所有通常用于殺蟲劑制劑技術(shù)中的輔料、惰性成分、分散劑、表面活性劑、增粘劑、粘合劑等；這些是殺蟲劑制劑的技術(shù)人員所熟知的。制劑可以與I種或多種固體或液體輔料混合并且通過各種方法進(jìn)行制備，例如通過使用常規(guī)的制劑技術(shù)使殺蟲組合物與合適的輔料均勻地進(jìn)行混合、攙合/或研磨。
[0286]組合物可以包括I種或多種真菌菌株，可以包括I種或多種細(xì)菌物種，或者包括兩者。典型的細(xì)菌物種包括例如蘇云金芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、土壤桿菌或假單胞菌的物種。
[0287]油性可流動混懸液
[0288]在I個示例性的實施方案中，生物殺蟲劑組合物包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或其功能性片段的油性可流動混懸液，以及任選的I種或多種真菌細(xì)胞，其包括表達(dá)I種或多種本文所公開的新蛋白質(zhì)的I種或多種真菌細(xì)胞。
[0289]水可分散的顆粒
[0290]在另一個重要的示例性的實施方案中，生物殺蟲劑組合物包含水可分散的顆粒。該顆粒包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或其功能性片段，以及任選的I種或多種真菌細(xì)胞，其包括產(chǎn)生本文所公開的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的I種或多種真菌細(xì)胞。
[0291]粉末、粉塵和孢子制劑
[0292]在第三個重要的示例性的實施方案中，生物殺蟲劑組合物包含可濕潤的粉末、粉塵、孢子制劑、細(xì)胞碎片或膠體濃縮物。該粉末包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或其功能性片段，以及任選的I種或多種真菌細(xì)胞，其包括產(chǎn)生本文所公開的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的I種或多種真菌細(xì)胞。殺蟲組合物的這些干燥形式可以配制成遇濕立即溶解或者以控釋、緩釋、或其他時間依賴的方式溶解。這些組合物可以施用于目標(biāo)昆蟲或被目標(biāo)昆蟲攝食，并因此可用于控制既定環(huán)境中的昆蟲的數(shù)量、或這些昆蟲的傳播。
[0293]水混懸液和真菌細(xì)胞濾液或溶胞產(chǎn)物
[0294]在第四個重要的示例性的實施方案中，生物殺蟲劑組合物包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或其功能性片段的水性混懸液，以及任選的I種或多種真菌細(xì)胞，其包括能夠產(chǎn)生本文所公開的本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的I種或多種真菌細(xì)胞。該水性混懸液可以以在施用前進(jìn)行稀釋的濃縮的儲備溶液或者以即時使用的稀釋的溶液提供。
[0295]當(dāng)殺蟲組合物包含產(chǎn)生有益的脂質(zhì)的完整細(xì)胞時，這些細(xì)胞可以以多種方法進(jìn)行配制。通過與各種惰性材料(例如無機(jī)礦物質(zhì)(層狀硅酸鹽、碳酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等)或植物材料(粉末狀的玉米芯、稻殼、胡桃殼等))混合，其可以以可濕潤的粉末、顆粒或粉塵應(yīng)用。制劑可以包括展著劑-粘著劑輔料、穩(wěn)定劑、其他的農(nóng)藥添加劑、或表面活性劑。液體制劑可以是基于水的或非水的，并且可以以泡沫劑、混懸劑、可乳化的濃縮物等應(yīng)用。成分可以包括流變學(xué)試劑、表面活性劑、乳化劑、分散劑或聚合物。
[0296]或者，新的殺蟲脂質(zhì)可以通過體外天然或重組表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行制備并且被分離出來隨后用于田間施用。這些脂質(zhì)或脂質(zhì)部分可以以粗細(xì)胞溶胞產(chǎn)物、混懸液、膠體等，或者可以在配制到活性殺蟲制劑中之前進(jìn)行純化、精制、緩沖調(diào)節(jié)、和/或進(jìn)一步處理。同樣地，在某些環(huán)境下，可能需要從產(chǎn)生脂質(zhì)的培養(yǎng)物分離出脂質(zhì)或孢子，并且施用作為活性生物殺蟲組合物的這些脂質(zhì)或孢子的溶液、混懸液或膠體制劑。
[0297]多功能制劑
[0298]在某些實施方案中，例如當(dāng)需要控制多種昆蟲種類時，本文所述的殺蟲制劑也可以進(jìn)一步包含I種或多種化學(xué)殺蟲劑(例如化學(xué)殺蟲劑、殺線蟲劑、殺真菌劑、殺病毒劑、殺微生物劑、殺變形蟲劑、殺蟲劑等)和/或具有與本文所鑒定的殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分相同或不同的殺蟲活性或殺蟲特異性的I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分也可以與其他的處理組合使用，例如肥料、除草劑、抗凍劑、表面活性劑、洗滌劑、殺蟲皂、休眠油、聚合物、和/或允許在制劑的單次施用之后目標(biāo)區(qū)域長期給藥的按時間釋放或生物可降解的載體制劑。同樣地，制劑可以被制成可食的“餌”或者被制作成昆蟲“陷阱”從而允許殺蟲制劑對目標(biāo)昆蟲的喂養(yǎng)或攝食。
[0299] 本發(fā)明的殺蟲組合物也可以用于單獨地或者與I種或多種另外的殺蟲劑、農(nóng)藥、化學(xué)制品、肥料或其他化合物組合向環(huán)境場所連續(xù)的或同時的施用。
[0300]包含真菌的組合物
[0301]當(dāng)存在于用作生物控制劑的組合物中時，本發(fā)明的昆蟲致病性的真菌應(yīng)該是復(fù)制地可存活的形式。本文所用的術(shù)語復(fù)制可存活的包括真菌的菌絲體和孢子形式。例如，出于大多數(shù)目的，真菌菌株有利地以孢子(分生孢子或芽生孢子)的形式引入組合物。孢子可以從本文所述的真菌菌株獲得，并且可以使用已知的現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)。包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或其功能性變體或其功能性片段、任選地連同I種或多種真菌細(xì)胞(其包括I種或多種可從本文所述的真菌菌株獲得的孢子)構(gòu)成了本發(fā)明的進(jìn)一步的方面。組合物中真菌孢子的濃度將取決于組合物的用途。典型的濃度范圍是從約IxlO6至IxlO12孢子/ml、優(yōu)選地從約IxlO7至2xl01C1、和更優(yōu)選地IxlO7至IxlO8孢子/ml。
[0302]理論上，I個感染單位應(yīng)該足以感染宿主，但實際上需要最小量的感染單位來引發(fā)感染。通常與化學(xué)殺蟲劑一起使用的致死劑量(LD)的概念對于微生物殺蟲劑是不合適的，其中昆蟲致病性的的某些因素依賴于昆蟲致病性的真菌寄生于植物或其周圍環(huán)境。感染劑量(ID)或感染濃度(IC)的概念是更準(zhǔn)確或適用的。ID或IC是指引發(fā)感染所需的感染單位的實際量或者暴露于致死的病原體的感染單位的量。因此，施用于田間或溫室內(nèi)的對抗病原體的感染單位的量將影響控制的程度。在適當(dāng)?shù)牡攸c和正確的時間施用需要的濃度的抗致植物病真菌從而獲得害蟲的良好控制是重要的:這稱為“感染閾值”。[0303]顯然地，為施用所配制的組合物中的真菌孢子的濃度可以小于為例如貯存所配制的組合物中的真菌孢子的濃度。 申請人:已經(jīng)測定，施用本文所述的昆蟲致病性的真菌，當(dāng)以約IL/公頃的比率施用時，感染閾值是約IO7孢子/ml的可噴霧的溶液。因此，在I個實施例中，為施用所配制的組合物將優(yōu)選地具有至少約IO7孢子/ml的濃度。在另一個實施例中，為貯存所配制的組合物(例如能夠配制成適合于施用的組合物的組合物，例如可濕潤的粉末)將優(yōu)選地具有約101°孢子/毫克的濃度。顯然地，為貯存所配制的并且隨后配制成適合于施用的組合物的組合物的孢子濃度必須足以使所述的用于施用的組合物也充分地濃縮以便能夠施用從而達(dá)到感染閾值。
[0304]在某些實施方案中，組合物是能夠在超過約2周、優(yōu)選超過約I個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、更優(yōu)選超過約6個月的時間支持殺蟲效力(例如I種或多種脂質(zhì)的效力)的穩(wěn)定的組合物。為了適用于使用I種或多種昆蟲病原微生物(例如如本文所述的昆蟲致病性的真菌)的實施方案，組合物優(yōu)選地能夠在超過約6個月的時間支持昆蟲病原微生物的復(fù)制活力或昆蟲致病性的效力。
[0305]使用本領(lǐng)域中熟知的常規(guī)的固體底物和液體發(fā)酵技術(shù)，本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)能夠以足夠的量生產(chǎn)從而允許用作生物控制劑。例如本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分可以使用這些生長技術(shù)以足夠量生產(chǎn)，并且示例性的技術(shù)在本文中存在于實施例中。通常在有氧條件下在滿足有機(jī)體生長的任意溫度下進(jìn)行生長。例如對于巴西安白僵菌，優(yōu)選從10至32°C、優(yōu)選25至30°C、和最優(yōu)選23°C的溫度范圍。生長介質(zhì)的pH是微酸性至中性的，即約5.0至7.0，和最優(yōu)選5.5。對于分離群的孵育時間足以達(dá)到靜止生長期，當(dāng)在23°C孵育時約21天，并且將發(fā)生于正常的光周期。
[0306]使用營養(yǎng)膜、浸沒培養(yǎng)和大米底物培養(yǎng)技術(shù)，來自所選擇的菌株的孢子能夠大量生產(chǎn)，用于田間施用。通過本領(lǐng)域中熟知的方法可以收獲孢子，例如通過常規(guī)的過濾或沉降法(例如離心分離)，或者使用旋風(fēng)分離系統(tǒng)干燥收獲孢子。孢子能夠立即使用或在0°至6°C、優(yōu)選2°C冷凍地貯存，只要其能夠保持復(fù)制活力。然而，通常優(yōu)選當(dāng)不加入到本發(fā)明的組合物中時，在收獲后的2周內(nèi)使用。
[0307]類似地，當(dāng)需要時，由巴西安白僵菌K4B3產(chǎn)生的I種或多種脂質(zhì)可以通過本領(lǐng)域中熟知的方法從巴西安白僵菌K4B3分離出來，例如通過分離、過濾或沉降技術(shù)(例如離心分離)，不論與I個或多個細(xì)胞裂解步驟(例如對于細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì))組合與否(例如對于被分泌到生長介質(zhì)中的脂質(zhì))。
[0308]本發(fā)明的組合物也可以包括I種或多種載體，優(yōu)選I種或多種農(nóng)業(yè)上可接受的載體。在I個實施方案中，載體(例如農(nóng)業(yè)上可接受的載體)能夠是固體或液體。本文中可用的載體包括通常用于配制農(nóng)業(yè)組合物的任意的物質(zhì)。
[0309]在I個實施方案中，農(nóng)業(yè)上可接受的載體可以選自填充劑、溶劑、賦形劑、表面活性劑、助懸劑、展著 劑/粘著劑(粘合劑)、消泡劑、分散劑、潤濕劑、降漂移劑、輔助劑、輔料或其混合物。
[0310]本發(fā)明的組合物可以通過已確立的方法配制成例如濃縮物、溶液、噴霧劑、氣霧齊?、浸浴、滴劑、乳劑、可濕潤的粉末、可溶的粉末、混懸濃縮物、粉塵、顆粒、水可分散顆粒、微囊、糊劑、凝膠和其他制劑類型。
[0311]這些方法包括活性成分和農(nóng)業(yè)上可接受的載體物質(zhì)(例如填充劑、溶劑、賦形劑、表面活性劑、助懸劑、展著劑/粘著劑(粘合劑)、消泡劑、分散劑、潤濕劑、降漂移劑、輔助劑和輔料)的混合和/或研磨。
[0312]在I個實施方案中，固體載體非限制性地包括礦物質(zhì)土(例如硅酸、硅膠、硅酸鹽、滑石粉、高嶺土、活性白土、石灰石、石灰、白堊、紅玄武土、黃土、粘土、白云石、硅藻土、硫酸鋁鈣、硫酸鎂、氧化鎂、地面塑料)、肥料(例如硫酸銨、磷酸銨、硝酸銨和尿素)、和植物產(chǎn)品(例如谷物粉、樹皮粉、木粉和堅果殼粉、纖維粉等)。對于作為固體載體的顆粒劑，以下是合適的:粉碎的或分離的天然巖石(例如方解石、大理石、浮石、海泡石和白云石)；無機(jī)或有機(jī)粉的合成顆粒；有機(jī)材料的顆粒(例如鋸屑、椰殼、玉米芯、玉米皮或煙草莖)；硅藻土、磷酸三鈣、粉末化的巖石或吸附的碳黑；水溶性聚合物、樹脂、蠟；或者固體肥料。如果需要，這些固體組合物可以含有I種或多種相容的潤濕劑、分散劑、乳化劑或著色劑，當(dāng)其是固體時也可以用作稀釋劑。
[0313]在I個實施方案中，載體也可以是液體，例如水；醇類(特別是丁醇或乙二醇)及其醚或酯(特別是乙酸甲基乙二醇酯)；酮類，特別是丙酮、環(huán)己酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、或異佛爾酮；石油餾分，例如石蠟族或芳香族烴，特別是二甲苯或烷基萘；礦物或植物油；脂肪族氯代烴，特別是三氯乙烷或二氯甲烷；芳香族氯代烴，特別是氯苯；水溶性或強(qiáng)極性溶劑，例如二甲基甲酰胺、二甲亞砜或N-甲基吡咯烷酮；液化氣體；或類似的或其混合物。
[0314]在I個實施方案中，表面活性劑包括非離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑并且促進(jìn)聚集體在噴霧期間保持在溶液中的能力。
[0315]展著劑/粘著劑促進(jìn)本發(fā)明的組合物粘附于植物表面的能力。表面活性劑、展著劑/粘著劑的實例非限制性地包括吐溫和Triton (Rhom and Hass公司)、Deep Fried?、
Fortune?, Pulse、C.Baxuil?% Codacide 馨、D-C.Tate?% Supamet Oil、Βθ--1?% Penetrant >Free way > QtOWCtt?-? Fortune Plus?>Fortune Plus
Lite、Fruimec、Fruimec lite、堿金屬、堿土金屬和芳族磺酸(例如木質(zhì)素磺酸，苯酹磺酸、萘磺酸和二丁基萘磺酸)的銨鹽和脂肪酸的銨鹽，烷基和烷基芳基磺酸酯、和烷基、十二烷基醚和脂肪醇硫酸酯、和硫酸化十六烷醇、十七烷醇、和十八烷醇的鹽、脂肪醇乙二醇醚的鹽、磺化萘和萘衍生物與甲醛的縮合產(chǎn)物、萘或萘磺酸與苯酚和甲醛的縮合產(chǎn)物、聚氧乙烯辛基苯酚醚、乙氧基化異辛基苯酚、乙氧基化辛基苯酚和乙氧基化壬基苯酚、烷基酚聚乙二醇醚、三丁基苯基聚乙二醇醚、烷基芳基聚醚醇、異十三烷基醇、脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物、乙氧基化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚、乙氧基化聚氧化丙烯、月桂醇聚乙二醇醚縮醛、山梨醇酯、木素-亞硫酸廢液和甲基纖維素。在被選擇用于包含時，I種或多種農(nóng)業(yè)表面活性劑(例如吐溫)按照需要根據(jù)已知的規(guī)定包含于組合物中。
[0316]潤濕劑降低組合物中水的表面張力并因此增加可以施用的給定量的組合物的表面積。潤濕劑的實例非限制性地包括聚丙烯酸的鹽、木素磺酸的鹽、苯酚磺酸或萘磺酸的鹽、環(huán)氧乙烷與脂肪醇或脂肪酸或脂肪酯或脂肪胺的縮聚物、取代的苯酚(特別是烷基苯酚或芳基苯酚)、磺基琥珀酸酯的鹽、牛磺酸衍生物(烷基?；撬狨?、醇的磷酸酯或環(huán)氧乙烷與苯酚的縮聚物的磷酸酯、脂肪酸與多元醇的酯、或上述化合物的硫酸鹽、磺酸鹽或磷酸鹽官能衍生物。
[0317]在I個實施方案中，施用本發(fā)明的化合物或組合物的優(yōu)選方法是通過手持槍或購買的噴氣器將稀釋液或濃縮溶液噴霧。
[0318]如上所述， 本發(fā)明的組合物可以單獨或者與I種或多種其他的農(nóng)業(yè)試劑組合使用，所述的農(nóng)業(yè)試劑包括農(nóng)藥、殺蟲劑、殺螨劑、殺真菌劑或殺細(xì)菌劑(條件是這些殺真菌劑或殺細(xì)菌劑對組合物中所存在的任意的真菌或細(xì)菌不是有害的或有毒性的)、除草劑、抗生素、抗微生物劑、殺線蟲劑、殺鼠劑、昆蟲病原微生物、信息素、引誘劑、植物生長調(diào)節(jié)劑、植物激素、昆蟲生長調(diào)節(jié)劑、化學(xué)絕育劑、微生物害蟲控制劑、驅(qū)蟲劑、病毒、誘食劑、植物營養(yǎng)物、植物肥料和生物學(xué)控制。當(dāng)與其他的農(nóng)業(yè)試劑組合使用時，兩種試劑的給藥可以分開的、同時的或順序的。這些農(nóng)業(yè)試劑的具體實例是本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，并且許多容易購買得到。
[0319]植物營養(yǎng)物的實例非限制性地包括氮、鎂、鈣、硼、鉀、銅、鐵、磷、錳、鑰、鈷、硼、銅、
娃、硒、鎳、招、鉻和鋅。
[0320]抗生素的實例非限制性地包括土霉素和鏈霉素。
[0321]殺真菌劑的實例非限制性地包括以下種類的殺真菌劑:羧酰胺類、苯并咪唑類、三唑類、羥基吡啶類、二羧酰胺類、苯酰胺類、噻二唑類、氨基甲酸酯、氰基-肟類、肉桂酸衍生物、嗎啉類、咪唑類、β -甲氧基丙烯酸酯類和吡啶/嘧啶類。
[0322]殺真菌劑的進(jìn)一步的實例非限制性地包括天然殺真菌劑、有機(jī)殺真菌劑、基于硫的殺真菌劑、銅/鈣殺真菌劑和植物宿主防御的誘發(fā)劑。
[0323]天然殺真菌劑的實例非限制性地包括全乳、乳清、脂肪酸或酯化的脂肪酸。
[0324]有機(jī)殺真菌劑的實例非限制性地包括通過有機(jī)驗證標(biāo)準(zhǔn)的任意的殺真菌劑，例如生物控制劑、天然產(chǎn)物、誘發(fā)劑(某些也可以被分類為天然產(chǎn)物)、和硫和銅殺真菌劑(有限使用)。
[0325]基于硫的殺真菌劑的實例是KumulusTMDF(BASF,德國)。[0326]銅殺真菌劑的實例是ICocMe⑩2000DF (Griffin公司，USA)。
[0327]誘發(fā)劑的實例非限制性地包括殼聚糖、Bion?、BABA (DL-3-氨基_n_ 丁酸、β -氨基丁酸)和 MiIsana?(Western Farm Service, Inc., USA)。
[0328]在某些實施方案中，可以使用非有機(jī)殺真菌劑。非有機(jī)殺真菌劑的實例非限制性地包括Bravo?(用于葫蘆上的PM的控制)；Supershield? (Yates, NZ)(用于玫瑰上的葡
萄孢屬和PM的控制)；TopaS? 200EW(用于葡萄和葫蘆上的PM的控制);Flint?(用于
蘋果和葫蘆上的PM的控制)；Amistar? wg (用于谷物上的銹菌屬和PM的控制);和Captan?> Dithane?、Euparen?、Rovral?> Scala?、Shirlan?、Switch? 和 Teldor?(用于葡萄上的葡萄孢屬的控制)。
[0329]殺蟲劑的實例非限制性地包括腈嘧菌酯、聯(lián)苯三唑醇、萎銹靈、Cu20、霜脲氰、環(huán)丙唑醇、cyprodinil、dichlofluamid、惡醚唑、烯唑醇、epoxiconazole、拌種咯、咯菌臆、fluquiconazole、氟娃唑、粉唑醇、呋霜靈、guazatin、己唑醇、惡霉靈、伊米薩利、亞胺唑、種菌唑、kresoxim-甲基、代森猛鋅、甲霜靈、R-甲霜靈、葉菌唑、惡霜靈、稻痕酯、配那唑、紋枯脲、丙氯靈、丙環(huán)唑、pyroquilone、SSF-109、spiroxamin、戍唑醇、噻苯達(dá)唑、tolifluamid、咪唑嗪、三唑酮、三唑醇、粉銹胺、滅菌唑和烯效唑。
[0330]本文所述的真菌菌株以外的生物控制劑的實例是包含奧德曼細(xì)基格孢(Ulocladium oudemansii)的 BotryZen? 生物控制劑。
[0331]組合物也可以包含寬范圍的添加劑，例如穩(wěn)定劑和用于增強(qiáng)活性成分的滲透劑和所謂“壓力”添加劑從而改善孢子活力、萌發(fā)和存活性,例如氯化鉀、甘油、氯化鈉和葡萄糖。添加劑也可以包括在長期貯存中輔助維持微生物活性的組合物，例如未精煉的玉米油和含有在外層的油和蠟以及在內(nèi)層的水、海藻酸鈉和分生孢子的混合物的所謂的轉(zhuǎn)化乳劑。
[0332]本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，重要的是，所用的任何添加劑的量不干擾生物控制劑的效力。
[0333] US5780023中提供了包括載體、防腐劑、表面活性劑和潤濕劑、展著劑和營養(yǎng)物的合適的組合物的實例，將其全部引入本文作為參考。
[0334] 申請人:也已經(jīng)確定許多常用的殺真菌劑當(dāng)其存在時不會不利地影響如本文所述的昆蟲致病性的真菌。因此包含所述真菌的本發(fā)明的組合物也可以包括這些殺真菌劑?；蛘?，在控制程序中，組合物可以與這些殺真菌劑聯(lián)合、但分開使用。
[0335]本發(fā)明也提供生產(chǎn)包含I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其I種或多種功能性變體和I種或多種本文所述的昆蟲致病性的真菌的組合物的方法，所述的方法包含提供所述的昆蟲致病性的真菌的有復(fù)制活力的形式、并且將所述的昆蟲致病性的真菌的所述的有復(fù)制活力的形式與I種或多種本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或其功能性變體和至少I種農(nóng)業(yè)上可接受的載體組合。
[0336]組合物可以制備成多種形式。I種制劑包含粉末形式的本發(fā)明的組合物，其可以噴粉到植物或其周圍環(huán)境上。在進(jìn)一步的形式中，組合物與稀釋劑(例如水)混合從而形成噴霧劑、泡沫劑、凝膠或滴劑并且使用已知的方法進(jìn)行恰當(dāng)?shù)厥┯?。在目前?yōu)選的實施方案中，使用加壓噴霧器以約lgm/L或者在不少于1000L水/公頃中以約l_3kg/公頃，將如上配制的組合物與水進(jìn)行混合。優(yōu)選地，作為UV和干燥保護(hù)劑以約lml/L將De印Fried?或Fortune Plus?加入到組合物中。包含L.muscarium、L.1ongisporum或玫煙色擬青霉菌的組合物能夠以相似的方式施用。
[0337]也可以使用為其他的施用方法(例如注射、摩擦或刷)配制的組合物，其實際上可以是任意的已知的本領(lǐng)域的方法。組合物向植物周圍或環(huán)境(例如土壤、水或種子包衣)的間接施用是潛在上可能的。
[0338] 如上所述，本發(fā)明的組合物的濃度可以根據(jù)最終用途、植物的生理條件；病原體感染的類型(包括昆蟲種類)、濃度和程度；溫度、季節(jié)、濕度、生長季的階段和植物年齡；所施用的常規(guī)的殺蟲劑或其他處理(包括殺真菌劑)的數(shù)量和類型；和植物處理(例如摘葉子和剪枝)而變化，包括施用如本文所述的昆蟲致病性的真菌的本發(fā)明的組合物從而成為有效的生物控制劑。
[0339]其他的施用技術(shù)(包括噴粉、噴灑、土壤浸泡、土壤注射、種子包衣、幼苗包衣、葉噴霧、吹氣、蒙上薄霧、霧化、熏蒸、氣溶膠化等)也是可行的并且可以在某些情況下是必需的，例如導(dǎo)致根或莖感染的昆蟲，或者用于施用于精美植物或裝飾植物。
[0340]本發(fā)明的殺蟲組合物也可以配制用于預(yù)防性施用于區(qū)域，并且在某些情況下可以施用于寵物、家畜、動物墊草、或在農(nóng)場設(shè)備中或周圍、谷倉、住所或農(nóng)業(yè)或工業(yè)設(shè)施等。[0341 ] 用于環(huán)境的、系統(tǒng)的、局部的或葉上施用的殺蟲組合物的濃度根據(jù)具體制劑的性質(zhì)、施用的方法、環(huán)境條件和殺生物活性的程度而有很大變化。通常，在所施用的制劑中存在的生物殺蟲組合物的濃度是按重量計至少約1%并且可以達(dá)到并包括按重量計約99%。脂質(zhì)組合物的干燥制劑可以是按脂質(zhì)或脂質(zhì)部分組合物的重量計從約1%至約99%或更多，而液體制劑可以通常包含按重量計從約1%至約99%或更多的活性成分。就其本身而論，各種制劑是可制備的，其包括包含按重量計從約5%至約95%或更多的殺蟲脂質(zhì)的那些制劑，包括包含按重量計從約10%至約90%或更多的殺蟲脂質(zhì)的那些制劑。很自然地，包含按重量計從約15%至約85%或更多的殺蟲脂質(zhì)的組合物、和包含按重量計從約20%至約80%或更多的殺蟲脂質(zhì)的制劑也認(rèn)為落入本文的范圍內(nèi)。
[0342]在其中包含含有殺蟲脂質(zhì)的完整的真菌細(xì)胞的組合物的情況中，制劑將通常含有從約IO4至約IO8個細(xì)胞/mg，盡管在某些實施方案中可能需要使用包含從約IO2至約IO4個細(xì)胞/mg的制劑，或者當(dāng)需要更高濃度的制劑時，也可以配制包含從約IO8至約IOltl或IO11個細(xì)胞/mg的組合物。或者，可以制備細(xì)胞糊劑、孢子濃縮物、或者脂質(zhì)或脂質(zhì)部分混懸濃縮物，其含有從約IO12至IO13個細(xì)胞/mg活性脂質(zhì)的當(dāng)量，并且這些濃縮物可以在施用之前進(jìn)行稀釋。
[0343]在I種或多種所需要的施用中，上述的殺蟲制劑可以向特定的植物或目標(biāo)區(qū)域給藥，典型的田間施用比率每公頃范圍在從約50g/公頃至約500g/公頃的活性成分的數(shù)量級，或者可以使用從約500g/公頃至約1000g/公頃。在某些情況中，甚至可能需要以從約1000g/公頃至約5000g/公頃或更多的活性成分的施用比率向目標(biāo)區(qū)域施用殺蟲制劑。事實上，認(rèn)為在從約50g活性脂質(zhì)/公頃至約10，OOOg/公頃的范圍內(nèi)的所有施用比率都可用于使用該殺蟲制劑的目標(biāo)昆蟲害蟲的管理、控制和殺滅中。因此，在上文所述的殺害蟲制劑的某些農(nóng)業(yè)、工業(yè)和馴養(yǎng)的應(yīng)用中，可以使用約100g/公頃、約200g/公頃、約300g/公頃、約400g/公頃、約500g/公頃、約600g/公頃、約700g/公頃、約800g/公頃、約900g/公頃、約Ikg/公頃、約1.1kg/公頃、約1.2kg/公頃、約1.3kg/公頃、約1.4kg/公頃、約1.5kg/公頃、約1.6kg/公頃、約1.7kg/公頃、約1.8kg/公頃、約1.9kg/公頃、約2.0kg/公頃、約2.5kg/公頃、約3.0kg/公頃、約3.5kg/公頃、約4.0kg/公頃、約4.5kg/公頃、約6.0kg/公頃、約7.0kg/公頃、約8.0kg/公頃、約8.5kg/公頃、約9.0kg/公頃、和甚至達(dá)到并且包括約10.0kg/公頃或更高的活性脂質(zhì)的比率。
[0344]例如，在某些應(yīng)用中，包含本文所述真菌的組合物可以以從約IxlOw至約IxlO15孢子/公頃、優(yōu)選從約IxlO12至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選從約5xl012至約IxlO14孢子/公頃、更優(yōu)選約1-3χ1013孢子/公頃的比率使用。
[0345]在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供用于控制I種或多種致植物病的昆蟲的方法，所述的方法包含向植物或其周圍環(huán)境施用本文所述的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
[0346]在I個實施方案中，施用I種或多種如本文所例舉的脂質(zhì)部分以及I種或多種如本文所述的其他的昆蟲致病性的真菌。
[0347]優(yōu)選地，所述的I種或多種其他的真菌選自巴西安白僵菌菌株K4B3 (NMIA登記號V08/025855)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V1 (NMIA登記號NM05/44593)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V2 (NMIA登記號NM05/44594)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium muscarium菌株K4V4(NMIA登記號NM06/00007)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B1(NMIA登記號NM05/44595)或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株K4B2 (匪IA登記號NM06/00010)或具有其鑒別特征的菌株；Lecanicillium 1ngisporum 菌株 KT4L1 (NMIA 登記號 NM06/00009)或具有其鑒別特征的菌株；和玫煙色擬青霉菌株K4P1 (匪IA登記號NM06/00008)或具有其鑒別特征的菌株。
[0348]此外，在控制過程中可以使用本發(fā)明的多種脂質(zhì)，不論其是否與具有對抗I種或多種致植物病的昆蟲物種的活性的昆蟲致病性的真菌的多種菌株組合。
[0349]幼小的幼苗通常非常容易受來自昆蟲害蟲的損害影響。因此，考慮在顯露之前本發(fā)明的組合物向剛剛種植的作物施用，正如在顯露時施用。
[0350]也考慮在作物周期中相同或不同的時間重復(fù)的施用。可以在季節(jié)早期或晚期施用本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)、包含本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)的組合物。這可以是開花或結(jié)果期間。也可以在收獲之前或收獲之后立即施用本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或包含本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)的組合物從而迅速寄生到壞死或老化的葉、果實、莖、機(jī)械收割的莖等，以便防止昆蟲寄生。也可以在冬季向休眠的植物施用本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或本發(fā)明的組合物從而延緩昆蟲在休眠組織上的生長。
[0351]施用可以在萌芽之前或之后以及收獲之前和之后。然而,處理優(yōu)選在開花和收獲之間進(jìn)行。為了增強(qiáng)效力，優(yōu)選本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或本發(fā)明的組合物的多次施用(例如在開花至結(jié)果的階段2至6次施用)。
[0352]在雨后也應(yīng)當(dāng)考慮本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或組合物的再施用。使用昆蟲傳染性預(yù)測模型或感染分析數(shù)據(jù)，BCA的施用也能夠及時應(yīng)對昆蟲感染風(fēng)險期。
[0353]在各種示例性的實施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分和包含這些脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的組合物對于其以能夠達(dá)到殺蟲效力的劑量比率所施用的植物或植物周圍環(huán)境不是有害的。
[0354]在目前優(yōu)選的實施方案中，以溶液施用本發(fā)明的殺蟲脂質(zhì)或包含殺蟲脂質(zhì)的組合物，例如如上所述的，使用加壓噴霧器進(jìn)行。植物部分應(yīng)該被輕輕地噴灑直至其恰好用完之前?？梢韵蛑参锏娜我獠糠趾?或其周圍環(huán)境進(jìn)行施用，例如向整個植物株冠、向株冠中的花和發(fā)育的果實聚集的區(qū)域、或向植物莖和/或鄰近根、塊莖等或者在其周圍的土壤、水或生長介質(zhì)。
[0355]優(yōu)選地，組合物是穩(wěn)定的。如本文所用，術(shù)語“穩(wěn)定的”是指組合物能夠支持殺蟲效力若干周，優(yōu)選約1、約2、約3、約4、優(yōu)選約5、更優(yōu)選約6個月或者更長。優(yōu)選地，組合物不需貯存在特定的條件(例如冷藏或冷凍)下就是穩(wěn)定的。
[0356]所施用的組合物控制致植物病的昆蟲。致植物病的昆蟲對許多收獲前和收獲后的疾病負(fù)責(zé)，所述的疾病攻擊植物部分并且降低生長率、開花、結(jié)果、生產(chǎn)并且可能導(dǎo)致受害的植物死亡。如本文所用，致植物病的昆蟲包括其本身是植物病原體的昆蟲、和可以作為其他植物病原體例如致植物病的真菌和細(xì)菌的媒介的昆蟲。應(yīng)當(dāng)理解，通過控制作為其他植物病原體的媒介的宿主昆蟲，植物病的發(fā)生率和/或嚴(yán)重性能夠降至最低。
[0357]影響許多生長于新西蘭的重要園藝作物的主要的致植物病的昆蟲實例呈現(xiàn)于下表1中。
[0358]表1.主要的昆蟲害蟲
[0359]
【權(quán)利要求】
1.1種或多種來自子囊菌門真菌的分離的、純化的、或基本上純的殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
2.權(quán)利要求1的殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)或脂質(zhì)部分是I種或多種非酸性脂質(zhì)或非酸性脂質(zhì)部分、或包含I種或多種非酸性脂質(zhì)或非酸性脂質(zhì)部分、或者由I種或多種非酸性脂質(zhì)或非酸性脂質(zhì)部分組成。
3.權(quán)利要求1或2的脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分基本上不含酸性脂質(zhì)。
4.權(quán)利要求1-3中任意一項的脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分基本上不含游離脂肪酸。
5.權(quán)利要求1-4中任意一項的脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分是以下任意I項或多項或具有以下任意1項或多項的鑒別特征: a.在本文中如圖4中所示或如實施例2中所述的部分1、部分5或部分6； b.在本文中如圖7中所示或如實施例2中所述的部分2、部分4或部分5； c.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分.9 ； d.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分.9 ； e.在本文中如圖10中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b或部分6。
6.權(quán)利要求1-5中任意一項的脂質(zhì)部分，其中部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b或部分6的鑒別特征是如圖12a至12f的任一所示的MALD1-TOF質(zhì)譜(MS)圖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項的脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分是在本文中如圖10中所示或如實施例2中所述的部分3、或具有在本文中如圖10中所示或如實施例2中所述的部分3的鑒別特征。
8.權(quán)利要求7的脂質(zhì)部分，其中鑒別特征是如圖13中所示的NMR譜。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項的脂質(zhì)，其中脂質(zhì)是以下之一: a.通過MS/MS具有大約在m/z86的質(zhì)量的脂質(zhì),或 b.通過MS/MS具有大約在m/zl47的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 c.通過MS/MS具有大約在m/z445的質(zhì)量的脂質(zhì),或 d.通過MS/MS具有大約在m/z656的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 e.通過MS/MS具有大約在m/z454的質(zhì)量的脂質(zhì),或 f.通過MS/MS 具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 g.通過MS/MS具有大約在m/z393的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 h.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 i.通過MS/MS具有大約在m/z693的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 j.通過MS/MS具有大約在m/z695的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 k.通過MS/MS具有大約在m/z717的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 l.通過MS/MS具有大約在m/z531的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 m.通過MS/MS具有在m/z86.02的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 η.通過MS/MS具有在m/zl46.97的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 ο.通過MS/MS具有在m/z444.82的質(zhì)量的脂質(zhì)，或P.通過MS/MS具有在m/z655.94的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 q.通過MS/MS具有在m/z454.19的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 r.通過MS/MS具有在m/z750.66的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 s.通過MS/MS具有在m/z393.39的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 t.通過MS/MS具有在m/z750.67的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 u.通過MS/MS具有在m/z692.69的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 V.通過MS/MS具有在m/z694.72的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 w.通過MS/MS具有在m/z716.71的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 X.通過MS/MS具有在m/z531.34的質(zhì)量的脂質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項的脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分包含以下一種或多種或由以下一種或多種組成: a.通過MS/MS具有大約在m/z86的質(zhì)量的脂質(zhì),或 b.通過MS/MS具有大約在m/zl47的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 c.通過MS/MS具有大約在m/z445的質(zhì)量的脂質(zhì),或 d.通過MS/MS具有大約在m/z656的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 e.通過MS/MS具有大約在m/z454的質(zhì)量的脂質(zhì),或 f.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 g.通過MS/MS具有大約在m/z393的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 h.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 1.通過MS/MS具有大約在m/z693的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 j.通過MS/MS具有大約在m/z695的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 k.通過MS/MS具有大約在m/z717的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 1.通過MS/MS具有大約在m/z531的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 m.通過MS/MS具有在m/z86.02的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 η.通過MS/MS具有在m/zl46.97的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 ο.通過MS/MS具有在m/z444.82的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 P.通過MS/MS具有在m/z655.94的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 q.通過MS/MS具有在m/z454.19的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 r.通過MS/MS具有在m/z750.66的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 s.通過MS/MS具有在m/z393.39的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 t.通過MS/MS具有在m/z750.67的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 u.通過MS/MS具有在m/z692.69的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 V.通過MS/MS具有在m/z694.72的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 w.通過MS/MS具有在m/z716.71的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 X.通過MS/MS具有在m/z531.34的質(zhì)量的脂質(zhì)。
11.根據(jù)權(quán)利要求ι-?ο中任意一項的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，其中所述的子囊菌門真菌選自:在2008年10月14日在澳大利亞國家測量所(匪IA)以登記號V08/025855保藏的巴西安白僵菌菌株K4B3、或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株AM2或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株F480或具有其鑒別特征的菌株；1種或多種木霉屬物種，包括木霉屬分離群1328或具有其鑒別特征的菌株；和I種或多種綠僵菌物種。
12.組合物，其包含來自子囊菌門真菌的I種或多種殺蟲脂質(zhì)或I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分、以及至少I種載體。
13.組合物，已經(jīng)向該組合物加入來自子囊菌門真菌的I種或多種殺蟲脂質(zhì)或I種或多種殺蟲脂質(zhì)部分、以及至少I種載體。
14.權(quán)利要求12或13的組合物，其中組合物是或包含來自子囊菌門真菌培養(yǎng)物的培養(yǎng)物、細(xì)胞提取物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞勻漿、細(xì)胞溶胞產(chǎn)物、細(xì)胞上清液、細(xì)胞濾液、細(xì)胞碎片或生長介質(zhì)。
15.權(quán)利要求12-14中任意一項的組合物，其還另外包含從子囊菌門真菌獲得的孢子。
16.權(quán)利要求15的組合物，其包含從真菌獲得的孢子，所述的真菌選自:在2008年10月14日在澳大利亞國家測量所(匪IA)以登記號V08/025855保藏的巴西安白僵菌菌株K4B3、或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株AM2或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株F480或具有其鑒別特征的菌株；1種或多種木霉屬物種，包括木霉屬分離群1328或具有其鑒別特征的菌株；和I種或多種綠僵菌物種。
17.權(quán)利要求16的組合物，其包含從巴西安白僵菌菌株K4B3獲得的孢子。
18.根據(jù)權(quán)利要求12-17中任意一項的組合物，其包含來自真菌的I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，所述的真菌選自:在2008年10月14日在澳大利亞國家測量所(匪IA)以登記號V08/025855保藏的巴西安白僵菌菌株K4B3、或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株AM2或具有其鑒別特征的菌株；巴西安白僵菌菌株F480或具有其鑒別特征的菌株；1種或多種木霉屬物種，包括木霉屬分離群1328或具有其鑒別特征的菌株；和I種或多種綠僵菌物種。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的組合物，其包含來自巴西安白僵菌菌株K4B3的I種或多種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分。
20.根據(jù)權(quán)利要求12-19中任意一項的組合物，其包含I種或多種脂質(zhì)部分，其中脂質(zhì)部分是以下任意I項或多項或具有以下任意I項或多項的鑒別特征: a.在本文中如圖4中所示或如實施例2中所述的部分1、部分5或部分6； b.在本文中如圖7中所示或如實施例2中所述的部分2、部分4或部分5； c.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分9 ； d.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分9； e.在本文中如圖10中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b或部分6。
21.根據(jù)權(quán)利要求12-20中任意一項的組合物，其中組合物富含非酸性脂質(zhì)。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的組合物，其中富集在I種或多種脂質(zhì)部分中存在的I種或多種脂質(zhì)，所述的脂質(zhì)部分是以下任意I項或多項或具有以下任意I項或多項的鑒別特征: a.在本文中如圖4中所示或如實施例2中所述的部分1、部分5或部分6； b.在本文中如圖7中所示或如實施例2中所述的部分2、部分4或部分5； c.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分. 9 ； d.在本文中如圖8中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4、部分5或部分.9 ； e.在本文中如圖10中所示或如實施例2中所述的部分2、部分3、部分4b、部分5a、部分5b或部分6。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的組合物，其中富集以下的I種或多種: a.通過MS/MS具有大約在m/z86的質(zhì)量的脂質(zhì),或 b.通過MS/MS具有大約在m/zl47的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 c.通過MS/MS具有大約在m/z445的質(zhì) 量的脂質(zhì),或 d.通過MS/MS具有大約在m/z656的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 e.通過MS/MS具有大約在m/z454的質(zhì)量的脂質(zhì),或 f.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 g.通過MS/MS具有大約在m/z393的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 h.通過MS/MS具有大約在m/z751的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 i.通過MS/MS具有大約在m/z693的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 j.通過MS/MS具有大約在m/z695的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 k.通過MS/MS具有大約在m/z717的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 l.通過MS/MS具有大約在m/z531的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 m.通過MS/MS具有在m/z86.02的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 η.通過MS/MS具有在m/zl46.97的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 ο.通過MS/MS具有在m/z444.82的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 P.通過MS/MS具有在m/z655.94的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 q.通過MS/MS具有在m/z454.19的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 r.通過MS/MS具有在m/z750.66的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 s.通過MS/MS具有在m/z393.39的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 t.通過MS/MS具有在m/z750.67的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 u.通過MS/MS具有在m/z692.69的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 V.通過MS/MS具有在m/z694.72的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 w.通過MS/MS具有在m/z716.71的質(zhì)量的脂質(zhì)，或 X.通過MS/MS具有在m/z531.34的質(zhì)量的脂質(zhì)。
24.根據(jù)權(quán)利要求21-23中任意一項的組合物，其中相對于未富集的組合物中所存在的量，富集至少約 1%、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、.80、85、90、95 或 99%。
25.用于控制I種或多種昆蟲的方法，所述的方法包含使I種或多種昆蟲與權(quán)利要求.1-11中任意一項的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或根據(jù)權(quán)利要求12-24中任意一項的組合物相接觸。
26.用于控制I種或多種昆蟲的方法，所述的方法包含向植物或其周圍環(huán)境施用權(quán)利要求1-11中任意一項的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或根據(jù)權(quán)利要求12-24中任意一項的組合物。
27.生產(chǎn)生物控制組合物的方法，所述的方法包含: 提供I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物，維持培養(yǎng)物在適合于至少I種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的產(chǎn)生的條件下；和i.將至少I種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與載體組合，或者 ii.將至少I種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分與I種或多種昆蟲致病性的真菌或其培養(yǎng)物組合，或者 iii.從真菌分離出至少I種脂質(zhì)或脂質(zhì)部分，或者 iv.至少部分地純化或分離出至少I種本發(fā)明的脂質(zhì)，或者 V.(i)至(iv)中的兩項或更多項的任意的組合。
28.權(quán)利要求27的方法，其中脂質(zhì)部分的脂質(zhì)是如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分、包含如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分、或者由如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分組成。
29.制備殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法，所述的方法包含: 提供I種或多種子 囊菌門真菌的培養(yǎng)物的有機(jī)溶劑提取物， 至少部分地將I種或多種非酸性脂質(zhì)與I種或多種酸性脂質(zhì)分離，和 回收I種和多種非酸性脂質(zhì)和脂質(zhì)部分。
30.制備殺蟲脂質(zhì)或脂質(zhì)部分的方法，所述的方法包含: 提供I種或多種子囊菌門真菌的培養(yǎng)物的有機(jī)溶劑提取物， 至少部分地將I種或多種極性脂質(zhì)與I種或多種非極性脂質(zhì)分離，和 回收I種或多種極性脂質(zhì)或極性脂質(zhì)部分。
31.權(quán)利要求29或30的方法，其中有機(jī)溶劑是鏈烷醇或是氯仿，所述的鏈烷醇包括短鏈烷基醇、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、或丁醇。
32.權(quán)利要求29-31中任意一項的方法，其中回收的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分是如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分、包含如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分、或者由如權(quán)利要求2-11中任意一項所請求保護(hù)的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分組成。
33.完全地或部分地逆轉(zhuǎn)昆蟲對I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑的耐藥性的方法，所述的方法包含使昆蟲與權(quán)利要求1-11中任意一項的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或根據(jù)權(quán)利要求12-24中任意一項的組合物相接觸。
34.權(quán)利要求33的方法，其包含使昆蟲與脂質(zhì)或脂質(zhì)部分以及I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑、或其任意組合相接觸。
35.權(quán)利要求33的方法，其中所給予的I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑與昆蟲具有耐藥性或預(yù)測具有或變得具有耐藥性的試劑相同。
36.控制I種或多種昆蟲的方法，所述的昆蟲已經(jīng)與權(quán)利要求1-11中任意一項的脂質(zhì)或脂質(zhì)部分或根據(jù)權(quán)利要求12-24中任意一項的組合物接觸，所述的方法包含使I種或多種昆蟲與足以控制所述的I種或多種昆蟲的量的殺蟲劑或昆蟲致病劑接觸。
37.權(quán)利要求36的方法，其中在給予脂質(zhì)或脂質(zhì)部分之前、同時或之后給予I種或多種殺蟲劑或者I種或多種昆蟲致病劑。
38.權(quán)利要求33-37中任意一項的方法，其中組合物包含昆蟲致病性的真菌，以及任選的另一種殺蟲劑或昆蟲致病劑。
【文檔編號】A01N63/04GK103957714SQ201280025343
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2012年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月25日
【發(fā)明者】S·R·福特, T·R·格拉瑞 申請人:百奧泰利加控股有限公司