專利名稱：一株適用于青貯燕麥的乳酸菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株青貯用乳酸菌，具體是一株適用于燕麥青貯并改善燕麥青貯飼料品質(zhì)的植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum Ps_6),屬于微生物和飼料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
燕麥為禾本科燕麥,屬一年生植物,一般分為飼用燕麥(Avena sativa)、裸燕麥(Avena nuda)和野燕麥(Avena nafaua),性喜氣候涼爽、雨量充足的環(huán)境,具有對(duì)土壤條件要求不嚴(yán)格、單位面積產(chǎn)量高等特點(diǎn)，是中國(guó)半干旱農(nóng)牧區(qū)和高海拔山區(qū)等自然條件較差地區(qū)的重要農(nóng)作物和飼料來(lái)源。燕麥作物具有生長(zhǎng)速度快、產(chǎn)量高、種植方式較靈活等特 點(diǎn)，可在干旱季節(jié)替代常用飼料飼喂動(dòng)物。目前，隨著國(guó)家農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的實(shí)施，高品質(zhì)燕麥作物的選育和燕麥對(duì)人體有益功能的不斷開發(fā)，燕麥飼料產(chǎn)業(yè)也在快速發(fā)展。青貯燕麥在反芻動(dòng)物、馬屬動(dòng)物中得到廣泛應(yīng)用。青貯是通過(guò)乳酸發(fā)酵快速降低pH值并維持厭氧環(huán)境，以利于青貯作物長(zhǎng)期保存的一種貯藏方式。與飼草晾曬成干草相比，飼草青貯可以大幅度縮短從收割到貯藏的時(shí)間，避免不良天氣造成的飼草損失，使青綠飼草的營(yíng)養(yǎng)成分得到最大限度的保存。然而燕麥水分含量高，糖分相對(duì)較低，所以一般條件下不易青貯。乳酸菌是近年來(lái)正在推廣的青貯微生物添加劑，其主要作用是有目的地調(diào)節(jié)青貯料內(nèi)微生物組成，調(diào)控青貯發(fā)酵過(guò)程，促進(jìn)乳酸菌大量繁殖，抑制有害菌活動(dòng)，更快地產(chǎn)生乳酸，促進(jìn)多糖與粗纖維的轉(zhuǎn)化，提高干物質(zhì)回收率，從而有效提高青貯飼料的質(zhì)量，具有較大潛力和廣闊的發(fā)展前景。本發(fā)明針對(duì)上述課題，對(duì)分離自自然發(fā)酵青貯飼料樣品中100株植物乳桿菌，進(jìn)行耐酸能力、產(chǎn)酸能力和生長(zhǎng)能力等一系列試驗(yàn)，篩選出一株具有耐酸、產(chǎn)酸速度快可適用于燕麥青忙飼料的植物乳桿菌(L. ρlantarum Ps_6)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一株能夠加速燕麥青貯成熟的適用于燕麥青貯飼料發(fā)酵的植物乳桿菌及其應(yīng)用。本發(fā)明的植物乳桿菌(L. plantarum Ps_6)已于2011年12月31日，在地址為中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)CGMCC No. 5685。本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一株適用于燕麥青貯飼料發(fā)酵的植物乳桿菌，其特征在于所述植物乳桿菌(L. plantarum Ps_6)是從100株植物乳桿菌中篩選出來(lái)的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已于2011年12月31日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏號(hào)=CGMCC No. 5685。所述植物乳桿菌在燕麥青貯中的應(yīng)用，具體制備方法如下原料準(zhǔn)備燕麥刈割后，保證清潔、無(wú)霉?fàn)€變質(zhì)，并將其切斷至2-3cm。
菌株活化將冷凍保存的L. plantarum Ps_6接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L. plantarum Ps_6菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0. 2g硫酸鎂、O. 05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調(diào)節(jié) pH 至 6. 5,121°C滅菌 15min。菌粉的制備將上述活化的菌種接種發(fā)酵、干燥、粉碎制成菌粉，使其活菌數(shù)達(dá)到lX1010cfu/go燕麥青貯的調(diào)制燕麥原料青貯時(shí)的水分含量控制在65%_70%，稱取IOOg燕麥原料裝入真空包裝塑料袋中(180X260cm)，將上述制備的菌粉以lX105cfu/g的接種量接種到原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。青貯燕麥的品質(zhì)檢測(cè)青貯燕麥發(fā)酵20-30天即發(fā)酵成熟后，取出部分青貯燕麥進(jìn)行微生物組成和發(fā)酵品質(zhì)分析。本發(fā)明提供的植物乳桿菌具有下述的積極效果·本發(fā)明通過(guò)乳酸菌的生長(zhǎng)特性研究、對(duì)燕麥青貯成熟和品質(zhì)的影響篩選出提高燕麥青忙品質(zhì)的菌種L. plantarum Ps_6。本發(fā)明還涉及將本發(fā)明菌種添加到青貯燕麥中發(fā)酵成熟后，青貯燕麥氣味芳香、呈黃綠色、組織結(jié)構(gòu)保持良好。經(jīng)檢驗(yàn)，在發(fā)酵前期可以快速降低PH值，乳酸菌數(shù)迅速增力口，加速發(fā)酵成熟，而且乳酸和乙酸的含量也得以提高，明顯改善了青貯發(fā)酵燕麥的品質(zhì)。因此本發(fā)明所述的乳酸菌具有加速燕麥青貯成熟和提高青貯飼料品質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合不限定實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明；下述實(shí)施例只是說(shuō)明性的，并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法?！赀m用于燕麥青忙飼料發(fā)酵的植物乳桿菌，所述植物乳桿菌(L. plantarumPs-6)是從100株植物乳桿菌中篩選出來(lái)的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已于2011年12月31日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏號(hào)CGMCC No. 5685。所述植物乳桿菌在燕麥青貯中的應(yīng)用，具體制備方法如下原料準(zhǔn)備燕麥刈割后，保證清潔、無(wú)霉?fàn)€變質(zhì)，并將其切斷至2-3cm。菌株活化將冷凍保存的L. plantarum Ps-6接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L. plantarum Ps-6菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0· 2g硫酸鎂、O. 05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調(diào)節(jié) pH 至 6. 5,121°C滅菌 15min。菌粉的制備將上述活化的菌種接種發(fā)酵、干燥、粉碎制成菌粉，使其活菌數(shù)達(dá)到lX1010cfu/go燕麥青貯的調(diào)制燕麥原料青貯時(shí)的水分含量控制在65%_70%，稱取IOOg燕麥原料裝入真空包裝塑料袋中(180X260cm)，將上述制備的菌粉以lX105cfu/g的接種量接種到原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。青貯燕麥的品質(zhì)檢測(cè)青貯燕麥發(fā)酵20-30天即發(fā)酵成熟后，取出部分青貯燕麥進(jìn)行微生物組成和發(fā)酵品質(zhì)分析。微生物組成分析包括乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌、霉菌、一般細(xì)菌和大腸桿菌的計(jì)數(shù)。稱取IOg發(fā)酵成熟的青貯飼料，加入90ml滅菌水，充分震蕩，再用滅菌水以十倍稀釋法對(duì)樣品進(jìn)行梯度稀釋，分別選取適當(dāng)?shù)南♂屢?00 μ L涂布于大腸菌群顯色培養(yǎng)基(BlueLight Broth)、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(Potato Dextrose Agar)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NutrientsAgar)和梭狀芽孢桿菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基(Clostridia Count Agar)上,并置于30°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，其中梭狀芽孢桿菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基需要厭氧培養(yǎng)，以此分別對(duì)乳酸菌、大腸菌群、酵母菌、霉菌、好氧細(xì)菌和梭狀芽孢桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。取原液進(jìn)行pH、有機(jī)酸和氨態(tài)氮的測(cè)定，并取適量青貯飼料置于65°C烘箱中風(fēng)干至恒重，測(cè)定其含水量。表I燕麥青貯30天后的微生物組成
權(quán)利要求
1.一株適用于燕麥青貯飼料發(fā)酵的植物乳桿菌，其特征在于所述植物乳桿菌 (Lactobacillus pi ant arum Ps_6)是從100株植物乳桿菌中篩選出來(lái)的耐酸、產(chǎn)酸能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快得乳酸菌；該菌菌株已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)CGMCC No. 5685。
2.如權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌的應(yīng)用，其特征在于包括下列步驟原料準(zhǔn)備燕麥刈割后，保證清潔、無(wú)霉?fàn)€變質(zhì)，并將其切斷至2-3cm ；菌株活化將冷凍保存的L. plantarum Ps-6接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L. plantarum Ps-6菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、O. 2g硫酸鎂、O. 05g硫酸錳加入IOOOmL蒸餾水，調(diào)節(jié)pH 至 6. 5,121°C滅菌 15min ；菌粉的制備將上述活化的菌種接種發(fā)酵、干燥、粉碎制成菌粉，使其活菌數(shù)達(dá)到 lX1010cfu/go燕麥青貯的調(diào)制燕麥原料青貯時(shí)的水分含量控制在65%-70%，稱取IOOg燕麥原料裝入真空包裝塑料袋中(180X260cm)，將上述制備的菌粉以lX105cfu/g的接種量接種到原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵；青貯燕麥的品質(zhì)檢測(cè)青貯燕麥發(fā)酵20-30天即發(fā)酵成熟后，取出部分青貯燕麥進(jìn)行微生物組成和發(fā)酵品質(zhì)分析。
3.將本發(fā)明菌種添加到青貯燕麥中發(fā)酵成熟后,青貯燕麥氣味芳香、呈黃綠色、組織結(jié)構(gòu)保持良好。經(jīng)檢驗(yàn)，在發(fā)酵前期可以快速降低PH值，乳酸菌數(shù)迅速增加，加速發(fā)酵成熟， 而且乳酸和乙酸的含量也得以提高，明顯改善了青貯發(fā)酵燕麥的品質(zhì)。因此本發(fā)明所述的乳酸菌具有加速燕麥青貯成熟和提高青貯飼料品質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)。
全文摘要
加速燕麥青貯成熟和改善燕麥青貯品質(zhì)的一株適用于燕麥青貯飼料發(fā)酵的植物乳桿菌及其應(yīng)用。技術(shù)方案是其特征在于所述植物乳桿菌(L.plantarum Ps-6)是從100株植物乳桿菌中篩選出來(lái)的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已于2011年12月31日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)CGMCC No.5685。本發(fā)明還公開了其應(yīng)用方法。
文檔編號(hào)A23K3/02GK102994421SQ20121045098
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者于潔, 高鵬飛 申請(qǐng)人:北京和美科健生物技術(shù)有限責(zé)任公司