專利名稱：金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及農業(yè)科學領域，尤其是一種金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法。
背景技術：
我國蘭科(Orchidaceae)開唇蘭屬ClffoeciocAiJiAs BI.)有23種左右,其中部分種全草民間作藥用，為珍稀名貴中藥材，通稱金線蓮。金線蓮為多年生地生草本植物，現(xiàn)研究開發(fā)的有金線蘭roxburghii (Wall.) Lindl.),又名花葉開唇蘭；臺iMi^nAnoectochilus formosanus Hayata)又名金線蓮(臺灣植物志)、臺灣金線蓮(臺灣植物志、臺灣蘭科植物彩色圖志)\頭匕金錢SHAnoectochiIus xingrenensis Z. H. Tsiet X. H. Jin)等。民間多用于治療糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，有“藥王”“金草”之稱。據(jù)研究報道，金線蓮富含有多糖、微量元素、強心苷類、氨基酸、有機酸、留體化合物、黃酮類化合物、生物堿等多種成分，其中生物堿有較強的生物活性，如鎮(zhèn)痛等。藥效學研究證實了 金線蓮全草水煎液具有優(yōu)良的降血糖作用，所含豐富的微量元素、氨基酸、多糖等具有抗衰老、提高機體免疫能力的作用。金線蓮種子在野外只有在真菌共生的情況下才能萌發(fā)，萌發(fā)率極低。由于市場需求巨大，野生金線蓮受到竭澤而漁式的采挖，已造成野生資源的枯竭。近年來，金線蓮組培技術和人工種植技術獲得突破，通過叢生芽培養(yǎng)等組培技術可獲得大量種苗。金線蓮作為一種價格昂貴的保健類中藥材，產品質量和安全更為重要，現(xiàn)有組培技術均添加植物激素，會造成激素富集到金線蓮種苗中，由于人工種植金線蓮從種植到采收的時間較短，激素殘留難以解決，產品質量達不到有機產品的標準。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，它在培養(yǎng)過程中不添加任何激素，能獲得綠色的優(yōu)質金線蓮種苗，產品能達到有機標準。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，包括以下步驟 步驟一、種子無菌萌發(fā)將金線蓮蒴果進行消毒處理后取出種子，將取出的種子接種于
培養(yǎng)基I上進行培養(yǎng)，至種子萌發(fā)成原球莖；
步驟二、原球莖增殖分化將種子萌發(fā)形成的原球莖轉到培養(yǎng)基II上進行增殖分化培
養(yǎng);
步驟三、壯苗生根在原球莖分化出芽長至I. 5 2. 5cm高時，轉入培養(yǎng)基III上進行壯苗生根培養(yǎng)，當苗長到5 6cm高、根長2 3cm時進行煉苗移栽。步驟一中所述的培養(yǎng)基I為1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為6g/L，PH為5. 8。步驟二中增殖分化培養(yǎng)基II為MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 Ig/L,瓊脂為6g/L，馬鈴薯汁為100 150g/L, PH為5. 8。步驟三中壯苗生根培養(yǎng)基III為MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 Ig/L,瓊脂為6g/L，馬鈴薯汁為50 100g/L,香蕉泥為100 150g/L, PH為5. 8。
所有的培養(yǎng)條件均為溫度為25±2°C，光照為1500 2500Lx，光照時間為12h/d0由于采用了上述技術方案，與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明采用“種子一原球莖一種苗”的技術路線，在培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基不加入任何激素，在保證金線蓮種子能快速出苗的基礎上，又能保證廣出的種苗不會殘留超標，能為生廣金線蓮有機廣品提供優(yōu)質種苗。本發(fā)明方法簡單，易于產業(yè)化，使用效果好。
具體實施例方式
具體實施例方式金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，包括以下步驟
步驟一、種子無菌萌發(fā)在金線蓮開花后，選擇健壯的植株，通過人工輔助受粉獲得蒴
果，在受粉5個月后，蒴果尖部開如變黃時即可取下進行播種，暫時不用的蒴果可對表面進行消毒，用保鮮袋保存于冰箱里；將用于播種的金線蓮蒴果用自來水洗凈，用75%的酒精表面消毒30s，再用O. 1%的升汞液消毒15min，無菌水沖洗5次，再浸入95%的酒精ls，取出后于酒精燈上點燃，燒盡表面酒精后，在超凈工作臺上剖開蒴果取出種子，將取出的種子接種于1/2MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，培養(yǎng)20天胚開始萌發(fā)，變綠，逐步膨大成原球莖。采用的1/2MS培養(yǎng)基中，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為4 6g/L，PH為5. 8 ;
步驟二、原球莖增殖分化當原球莖長至在培養(yǎng)基表面形成致密的顆粒狀后，轉到培養(yǎng)基II上及時進行增殖分化培養(yǎng)；轉接的次數(shù)和時間視情況而定，主要依據(jù)一是當培養(yǎng)瓶里的原球莖或芽過密時要及時轉瓶，確保有足夠的生長空間；二是培養(yǎng)超過3個月或培養(yǎng)基明顯減少，養(yǎng)分不足時要及時轉瓶；增殖分化培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基II為MS培養(yǎng)基，其中蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L,瓊脂為4 6g/L，馬鈴薯汁為100 150g/L, PH為5. 8 ；步驟三、壯苗生根當金線蓮芽長至2 3cm時，及時轉入培養(yǎng)基III進行壯苗生根培養(yǎng)；接種要選擇生長一致的芽接在一瓶，芽之間的間距I. 5cm，確保有足夠的生長空間；培養(yǎng)基III為MS培養(yǎng)基，其中蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為4 6g/L，馬鈴薯汁為50 100g/L,香蕉泥為 100 150g/L, PH 為 5. 8 ；
步驟四、煉苗移栽當苗長至5 6cm，根長2 3cm時，將培養(yǎng)瓶移到常溫大棚煉苗10天左右，從瓶里小心將苗取出，清洗干凈植株上的培養(yǎng)基后進行移栽；種植基質以草炭土或腐殖土為最佳；
以上所有的培養(yǎng)條件均為溫度為25±2°C，光照為1500 2500Lx，光照時間為12h/
d0培養(yǎng)基配制可用自來水、純凈水或深井水。瓊脂用量可根據(jù)其質量酌情調整，有的瓊脂粉每升用4g就足夠了，蔗糖用食用白砂糖。馬鈴薯汁和香蕉泥的制備選品質較好不變質的馬鈴薯，將皮削凈，去除芽眼，切成適當小塊，用家用打漿機打出汁液(要過濾汁液)；香蕉泥直接用打漿機打碎即可。MS培養(yǎng)基的配制(見表I )，1/2MS培養(yǎng)基的配制在MS的基礎上大量元素減半，微量元素及其他不變(見表2)
表 I MS (Murashige 和 Skoog, 1962)培養(yǎng)基
權利要求
1.一種金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，其特征在于包括以下步驟 步驟一、種子無菌萌發(fā)將金線蓮蒴果進行消毒處理后取出種子，將取出的種子接種于培養(yǎng)基I上進行培養(yǎng)，至種子萌發(fā)成原球莖； 步驟二、原球莖增殖分化將種子萌發(fā)形成的原球莖轉到培養(yǎng)基II上進行增殖分化培養(yǎng); 步驟三、壯苗生根在原球莖分化出芽長至I. 5 2. 5cm高時，轉入培養(yǎng)基III上進行壯苗生根培養(yǎng)，當苗長到5 6cm高、根長2 3cm時進行煉苗移栽。
2.根據(jù)權利要求I所述的金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，其特征在于步驟一中所述的培養(yǎng)基I為1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為6g/L，PH為 5. 8。
3.根據(jù)權利要求I所述的金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，其特征在于步驟二中增殖分化培養(yǎng)基II為MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為6g/L，馬鈴薯汁為100 150g/L, PH為5. 8。
4.根據(jù)權利要求I所述的金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，其特征在于步驟三中壯苗生根培養(yǎng)基III為MS培養(yǎng)基，蔗糖為30g/L，活性炭為O. 5 lg/L，瓊脂為6g/L，馬鈴薯汁為50 100g/L,香蕉泥為100 150g/L, PH為5. 8。
5.根據(jù)權利要求I所述的金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，其特征在于所有的培養(yǎng)條件均為溫度為25±2°C，光照為1500 2500Lx，光照時間為12h/d。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種金線蓮無激素種苗快繁有機生產方法，包括以下步驟步驟一、種子無菌萌發(fā)將金線蓮蒴果進行消毒處理后取出種子，將取出的種子接種于培養(yǎng)基Ⅰ上進行培養(yǎng)，至種子萌發(fā)成原球莖；步驟二、原球莖增殖分化將種子萌發(fā)形成的原球莖轉到培養(yǎng)基Ⅱ上進行增殖分化培養(yǎng)；步驟三、壯苗生根在原球莖分化出芽長至1.5～2.5cm高時，轉入培養(yǎng)基Ⅲ上進行壯苗生根培養(yǎng)，當苗長到5～6cm高、根長2～3cm時進行煉苗移栽。本發(fā)明采用“種子→原球莖→種苗”的技術路線，在培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基不加入任何激素，在保證金線蓮種子能快速出苗的基礎上，又能保證產出的種苗不會殘留超標，能為生產金線蓮有機產品提供優(yōu)質種苗。
文檔編號A01H4/00GK102884982SQ201210426579
公開日2013年1月23日 申請日期2012年10月31日 優(yōu)先權日2012年10月31日
發(fā)明者羅曉青, 張顯波 申請人:貴州省亞熱帶作物研究所