一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及到一種高效快速繁殖鐵皮石斛組培苗的方法。具體包括：將各個階段的激素濃度調(diào)整為最適濃度，然后將鐵皮石斛種子在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽，接著把鐵皮石斛小芽轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)成具有2～3片真葉并帶有1～2條幼根的小苗，再小苗轉(zhuǎn)移到一步成苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)成具有2～3條根、4片葉片、株高≥2.5cm、莖粗≥0.2cm的商品組培苗，最后將商品組培苗移栽至大棚內(nèi)苗床上的基質(zhì)中并培養(yǎng)至可采收。通過實施本發(fā)明，種子萌發(fā)時間短及萌發(fā)率高，芽苗生產(chǎn)快、污染低、變異少，商品組培苗粗壯、葉面展開、根系發(fā)達(dá)；從而實現(xiàn)鐵皮石斛種苗快速無毒繁育的目的。
【專利說明】 一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及到一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]金線蓮別名金線蘭、金絲草，為蘭科開唇植物花葉蘭屬多年生珍稀中草藥。它在民間使用范圍較廣，素有“藥王”、“金草”、“神草”、“鳥人參”等美稱。經(jīng)有關(guān)部門測定發(fā)現(xiàn)，金絲蓮中氨基酸組成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于國產(chǎn)和野生西洋參。幾百年來作為民間常用草藥，而且需求量越來越大。
[0003]隨著野生資源日漸匱乏，金線蓮目前只能夠依靠人工栽培來滿足市場需求。
[0004]金線蓮屬于蘭科植物，其種子發(fā)芽率很低，所以通過有性繁殖來發(fā)展繁殖金線蓮不是明智之舉。當(dāng)前通常采用的是無性繁殖，通過扦插進(jìn)行繁殖，金線蓮種苗成活率低，批量培養(yǎng)也不可行。大批量生產(chǎn)繁殖時，最行之有效的方法是通過組織培養(yǎng)來繁殖。
[0005]目前，金線蓮組培通常采用的是莖段繁殖技術(shù)，該技術(shù)的實施步驟為:莖段一消毒—初代培養(yǎng)一增殖培養(yǎng)一壯苗培養(yǎng)一生根培養(yǎng)一成品苗。但是現(xiàn)有技術(shù)存在有如下缺點(diǎn):因為莖段繁殖需經(jīng)歷脫分化和分化過程，而該過程最易發(fā)生變異；同時，由于轉(zhuǎn)接的次數(shù)之多、生長慢，成苗時間長，導(dǎo)致變異率高，很難保證種苗完全保留野生金線蓮的優(yōu)良品質(zhì)。另夕卜，由于上述工藝分步培養(yǎng)法工藝復(fù)雜，不但成苗時間長，而且容易引起組培苗污染，并導(dǎo)致組培苗污染率提高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是克服先有的技術(shù)不足而提供全新的一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法。具體是:采用金線蓮種子通過培養(yǎng)使其萌發(fā)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽，然后通過繼代培養(yǎng)變成具有I?2片真葉并帶有I?2條幼根的小苗，最后將小苗進(jìn)行一步成苗培養(yǎng)，使小苗長成具有3?4條根、3?4片葉、株高> 2.5cm、莖粗> 0.2cm的商品組培苗；本發(fā)明在實施過程中，還將種子培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、一步成苗培養(yǎng)基進(jìn)行科學(xué)合理的改良、配制。本發(fā)明實現(xiàn)了金線蓮在組培過程中縮短其生長周期、降低了污染率、還減少了轉(zhuǎn)接次數(shù)，并最終達(dá)到快速繁殖金線蓮的目的。
[0007]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
[0008]1、一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，技術(shù)方案中包括以下步驟:
[0009](I)將金線蓮蒴果頂部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于組培瓶中，然后在無菌操作臺中先用酒精浸泡30s，接著用氯化汞水溶液浸泡8min，最后用無菌水反復(fù)漂洗3?5次后即可完成消毒步驟；
[0010](2)將步驟(I)中得到金線蓮種子放置于無菌的鋁片上，用手術(shù)刀切開后播種于種子培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度1000Lux-1500Lux、光照時間為10h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽；其中，上述的種子培養(yǎng)基組成為:+6_卡基嘌呤2.5mg/L?3mg/L+萘乙酸0.5mg/L?lmg/L+白糖30g/L+ 土豆200g/L+ 瓊脂 5.lg/L ；
[0011](3)將步驟⑵得到的金線蓮小芽轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度3000LuX-3500LuX、光照時間為llh/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小芽變成具有I?2片真葉并帶有I?2條幼根的小苗；其中，上述中繼代培養(yǎng)基組成為:MS+6-卡基嘌呤
3.5mg/L ?4mg/L+ 萘乙酸 0.5mg/L ?lmg/L+ 白糖 30g/L+ 土豆 200/L+ 瓊脂 5.lg/L ；
[0012](4)將步驟(3)中得到的小苗轉(zhuǎn)移到一步成苗培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度3000LuX-3500LuX、光照時間為12h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小苗長成具有3?4條根、3?4片葉、株高彡2.5cm、莖粗彡0.2cm的商品組培苗；其中，上述中一步成苗培養(yǎng)基組成為:+6_卡基嘌呤0.5mg/L?lmg/L+萘乙酸2.5mg/L?3mg/L+白糖20g/L+ 土豆 200g/L+ 瓊脂 5.lg/L。
[0013]2、所述的一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，技術(shù)方案中的酒精體積濃度為75%。
[0014]3、所述的一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，技術(shù)方案中的氯化鈣水溶液濃度為0.1%。
[0015]本發(fā)明既有如下優(yōu)點(diǎn):
[0016]1、本發(fā)明所提出的種子培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、一步成苗培養(yǎng)基的制備方法科學(xué)合理。
[0017]2、通過實施本發(fā)明，不但克服了現(xiàn)有金線蓮組培利用莖段繁殖時工藝流程復(fù)雜、生長周期長、變異率高等缺陷，而且還實現(xiàn)了一步成苗，具有生長周期短、變異率低、工藝簡易的效果。
[0018]3、通過實施本發(fā)明，采用改良后的培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)野生金線蓮種子形成原球莖，在原球莖階段實現(xiàn)連續(xù)增殖培養(yǎng)8次不發(fā)生種苗變異，再利用增殖后的原球莖培育成苗，較利用種子為外植體直接誘導(dǎo)繁育可增上百倍的種苗數(shù)量，大大提高了繁殖率。
[0019]4、通過實施本發(fā)明，是將叢芽、壯苗、生根培養(yǎng)過程集中在同一個組培瓶內(nèi)完成，簡化了工藝步驟，有效解決了傳統(tǒng)組培工藝因多次轉(zhuǎn)接培養(yǎng)容易引起組培苗污染的問題。
[0020]5、通過實施本發(fā)明，不但減少轉(zhuǎn)接次數(shù)、降低污染率，而且縮短生長周期，最終達(dá)到快速繁殖金線蓮的目的，更有利于金線蓮工廠化、規(guī)?；?、集約化地繁殖生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的方法進(jìn)一步說明。
[0022]一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，【具體實施方式】如下:
[0023]1、將金線蓮蒴果頂部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于組培瓶中，然后在無菌操作臺中先用體積濃度為75%的酒精浸泡30s，接著用濃度為0.1%的氯化汞水溶液浸泡8min，最后用無菌水反復(fù)漂洗3?5次后即完成整個消毒步驟。
[0024]2、配制種子培養(yǎng)基:
[0025](I)培養(yǎng)基組成:+6-卡基嘌呤2.5mg/L?3mg/L+萘乙酸0.5mg/L?lmg/L+白糖30g/L+ 土豆 200g/L+ 瓊脂 5.lg/L ；
[0026](2)將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，并按常規(guī)方法進(jìn)行滅菌，滅菌后及時取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用。
[0027]3、在無菌環(huán)境下將經(jīng)過消毒處理的金線蓮種子放置于無菌的鋁片上，用手術(shù)刀切開后播種于種子培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度1000Lux-1500Lux、光照時間為10h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽。
[0028]4、配制繼代培養(yǎng)基:
[0029](I)培養(yǎng)基組成:MS+6_卡基嘌呤3.5mg/L?4mg/L+萘乙酸0.5mg/L?lmg/L+白糖 30g/L+ 土豆 200/L+ 瓊脂 5.lg/L ；
[0030](2)將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，并按常規(guī)方法進(jìn)行滅菌，滅菌后及時取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用。
[0031]5、在無菌環(huán)境下將萌發(fā)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽的金線蓮轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度3000Lux-3500Lux、光照時間為llh/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小芽變成具有I?2片真葉并帶有I?2條幼根的小苗。
[0032]6、配制一步成苗培養(yǎng)基:
[0033](I)培養(yǎng)基組成:+6-卡基嘌呤0.5mg/L?lmg/L+萘乙酸2.5mg/L?3mg/L+白糖20g/L+ 土豆 200g/L+ 瓊脂 5.lg/L ；
[0034](2)將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，并按常規(guī)方法進(jìn)行滅菌，滅菌后及時取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用。
[0035]7、在無菌環(huán)境下將具有1-2片真葉并帶有I?2條幼根的金線蓮小苗轉(zhuǎn)移到一步成苗培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度3000Lux-3500Lux、光照時間為12h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小苗長成具有3?4條根、3?4片葉、株高彡2.5cm、莖粗彡0.2cm的商品組培苗。
【權(quán)利要求】
1.一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，其特征包括以下步驟: (1)將金線蓮蒴果頂部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于組培瓶中，然后在無菌操作臺中先用酒精浸泡30s，接著用氯化汞水溶液浸泡8min，最后用無菌水反復(fù)漂洗3?5次后即可完成消毒步驟； (2)將步驟(I)中得到金線蓮種子放置于無菌的鋁片上，用手術(shù)刀切開后播種于種子培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度1000Lux-1500Lux、光照時間為10h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)I個月后種子萌發(fā)形成原球莖并進(jìn)一步形成小芽；其中，上述的種子培養(yǎng)基組成為:+6_卡基嘌呤2.5mg/L?3mg/L+萘乙酸0.5mg/L?lmg/L+白糖30g/L+ 土豆200g/L+ 瓊脂 5.lg/L ； (3)將步驟(2)得到的金線蓮小芽轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度彡60%、光照強(qiáng)度3000LuX-3500LuX、光照時間為llh/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小芽變成具有I?2片真葉并帶有I?2條幼根的小苗；其中，上述中繼代培養(yǎng)基組成為:MS+6-卡基嘌呤3.5mg/L ?4mg/L+ 萘乙酸 0.5mg/L ?lmg/L+ 白糖 30g/L+ 土豆 200/L+ 瓊脂 5.lg/L ； (4)將步驟(3)中得到的小苗轉(zhuǎn)移到一步成苗培養(yǎng)基中，在25±3°C、濕度<60%、光照強(qiáng)度3000LuX-3500LuX、光照時間為12h/d的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，I個月后小苗長成具有3?4條根、3?4片葉、株高彡2.5cm、莖粗彡0.2cm的商品組培苗；其中，上述中一步成苗培養(yǎng)基組成為:+6_卡基嘌呤0.5mg/L?lmg/L+萘乙酸2.5mg/L?3mg/L+白糖20g/L+ 土豆200g/L+ 瓊脂 5.lg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，其特征在于:步驟(I)中所述的酒精體積濃度為75%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效快速繁殖金線蓮組培苗的方法，其特征在于:步驟(I)中所述的氯化鈣水溶液濃度為0.1%。
【文檔編號】A01H4/00GK104160956SQ201310185366
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年5月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月20日
【發(fā)明者】潘俊宇, 潘素芬, 翟全瓊, 張雄森, 黃云輝, 梁燊 申請人:廣西俊宇原生本草生物科技有限公司