專利名稱：一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法。
背景技術(shù)：
裸花紫珠(Callicarpa nudifIora)是一種重要的藥用植物,根和葉藥用，有止血止痛、散瘀消腫、驅(qū)風(fēng)祛濕之功能，可治創(chuàng)傷出血、嘔血、咳血、消化道出血、拔牙出血、跌打損傷、風(fēng)濕痹痛等癥。裸花紫珠的種籽結(jié)實率較低，出苗率更低，分株繁育苗的系數(shù)又很小，無法滿足生產(chǎn)的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠 外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規(guī)?；a(chǎn)提供了可靠的技術(shù)途徑的組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法，包括以下步驟(I)、選擇外植體利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體；(2)、接種培養(yǎng)切取消毒后的裸花紫珠I 2 Cm長的單節(jié)莖段，將其放置在促進莖段側(cè)芽萌發(fā)和生長的接種培養(yǎng)基上，該接種培養(yǎng)基為WPM基本培養(yǎng)基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O. 5mg/L 的 IBA ；(3)、擴繁培養(yǎng)當側(cè)芽長到I Cm以上時，切下側(cè)芽轉(zhuǎn)移到擴繁培養(yǎng)基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環(huán)境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節(jié)莖段擴繁；(4)、生根培養(yǎng)選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度；(5)、煉苗移栽取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)基質(zhì)，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培基質(zhì)濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。本發(fā)明對外植體的采集、消毒方法、分化、增殖和生根培養(yǎng)基的篩選、移栽基質(zhì)的選擇及培養(yǎng)過程中環(huán)境條件等方面進行了控制。采用選擇外植體、接種培養(yǎng)、擴繁培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽方法，建立了一套完整的裸花紫珠的組培快繁技術(shù)體系，使分化率達到100%，月增殖系數(shù)達到4. 95，生根率達到93. 7%，移栽成活率達到90%以上。本發(fā)明方法簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規(guī)?；a(chǎn)提供了可靠的技術(shù)途徑。
具體實施例方式本發(fā)明一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法，包括以下步驟(I)、選擇外植體 利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體；(2)、接種培養(yǎng)切取消毒后的裸花紫珠I 2 Cm長的單節(jié)莖段，將其放置在促進莖段側(cè)芽萌發(fā)和生長的接種培養(yǎng)基上，該接種培養(yǎng)基為WPM基本培養(yǎng)基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O. 5mg/L 的 IBA ；(3)、擴繁培養(yǎng)當側(cè)芽長到I Cm以上時，切下側(cè)芽轉(zhuǎn)移到擴繁培養(yǎng)基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環(huán)境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節(jié)莖段擴繁；(4)、生根培養(yǎng)選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度；(5)、煉苗移栽取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)基質(zhì)，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培基質(zhì)濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。表I外置體芽誘導(dǎo)實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計
外置體數(shù)(個)分化出側(cè)芽的外置體數(shù)(個) 分化率(％)
ΤδΟΤδΟ100
表2側(cè)芽實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計
權(quán)利要求
1.一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)、選擇外植體 利用扦插繁殖少量的裸花紫珠，定期噴灑殺菌劑，待新枝長至15 25 Cm，取兩三節(jié)長的莖段，剪下后放入消毒過的密封玻璃瓶中密封，拿到超凈工作臺，用75%酒精浸15 30秒，再用O. 1%升汞消毒5 7分鐘，最后用無菌水沖洗5 7次，作為裸花紫珠組培快繁的外植體； (2)、接種培養(yǎng) 切取消毒后的裸花紫珠I 2 cm長的單節(jié)莖段，將其放置在促進莖段側(cè)芽萌發(fā)和生長的接種培養(yǎng)基上，該接種培養(yǎng)基為WPM基本培養(yǎng)基附加O. I I. Omg/L的6-BA和O. 05 O.5mg/L 的 IBA ； (3)、擴繁培養(yǎng) 當側(cè)芽長到I cm以上時，切下側(cè)芽轉(zhuǎn)移到擴繁培養(yǎng)基中進行組培苗的分化和增殖，該擴繁培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加O. I I. 5mg/L的BA和O. I I. Omg/L的IBA，并將組培苗放置于光照強度為2500LX，溫度為28±2°C的環(huán)境下，每日光照10小時，25 30d，當苗長至3 cm 6 cm時，再取單節(jié)莖段擴繁； (4)、生根培養(yǎng) 選取步驟(3)中增殖的2 3 cm的健壯組培苗放入生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基附加O. 05 2. Omg/L的IBA，增強光照時間和光照強度； (5)、煉苗移栽 取出步驟(4)中生根成功的組培苗，放在自然光下煉苗I周，再打開瓶口放3 5天，然后洗凈培養(yǎng)基，放入O. 2%高錳酸鉀浸泡I 2分鐘，取出涼干后，栽入培養(yǎng)基質(zhì)，然后再蓋一層塑料拱膜，每天都要讓其通風(fēng)排氣，保持培基質(zhì)濕潤，濕度在80 85%，待其長到5 8片新葉移栽大田。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組織培養(yǎng)快速繁殖裸花紫珠的方法。本發(fā)明對外植體的采集、消毒方法、分化、增殖和生根培養(yǎng)基的篩選、移栽基質(zhì)的選擇及培養(yǎng)過程中環(huán)境條件等方面進行了控制。采用選擇外植體、接種培養(yǎng)、擴繁培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽方法，建立了一套完整的裸花紫珠的組培快繁技術(shù)體系，使分化率達到100％，月增殖系數(shù)達到4.95，生根率達到93.7％，移栽成活率達到90％以上。本發(fā)明方法簡便易行，程序簡單，功效高，有效的抑制了裸花紫珠外植體的污染和褐化，提高了組培苗的分化率，增殖速度快，生根率高，成活率高，成本低，為裸花紫珠種苗的規(guī)?；a(chǎn)提供了可靠的技術(shù)途徑。
文檔編號A01H4/00GK102870678SQ20121039253
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月16日
發(fā)明者王效寧, 朱紅林, 陳健曉, 孟衛(wèi)東, 齊蘭 申請人:海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所