專利名稱：一種解淀粉芽孢桿菌Mg116菌株及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物及 用途，更具體地說(shuō)涉及一種解淀粉芽孢桿菌OfeciJAz1Samyloli quefaci ens ) Mg 116菌株、用途及其制劑的制備方法,屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
由植物病原真菌圍小叢殼菌(67o 6 ri 77a侵染引發(fā)的炭疽病是草莓、葡萄和西瓜等經(jīng)濟(jì)作物上的主要病害，對(duì)炭疽病防治效果的高低，將直接影響到作物產(chǎn)量和種植戶的收益。炭疽病的防治當(dāng)前主要通過(guò)化學(xué)防治來(lái)防控。主要用以下化學(xué)藥劑防治卩密菌酯(azoxystrobin)、醚菌酯(kresoxim-methyl)、苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)、烯月虧菌酯(enestroburin)、卩定酰菌胺(boscalid)、多菌靈(carbendazim)、卩比唑醚菌酯(pyraclostrobin)和咪鮮胺(prochloraz)等。長(zhǎng)期以來(lái)，由于多頻次、多劑量施用化學(xué)藥齊U，造成炭疽病菌對(duì)常用化學(xué)藥劑都產(chǎn)生了不同程度的抗(耐)藥性，生產(chǎn)上屢屢出現(xiàn)防治失敗的事例。目前成功用于防治炭疽病菌的生物農(nóng)藥專用制劑還沒(méi)有。文獻(xiàn)已報(bào)道生物防治控制病害的生防菌屬(種)主要有(I)木霉菌屬真菌spp.)中的綠色木霉(Tri choderma viri de)和哈茨木霉(Tri choderma harzianum ) ； (2)芽抱桿菌屬細(xì)舊{Bacillus spp.)中的枯草芽抱桿菌Cfeci77w5·)、多粘芽抱桿菌
poIymyxa )和巨大芽抱桿菌 iBacillus megaterium') ； (3)假單胞菌屬細(xì)菌{Pseudomonasspp.)中的突光假單胞細(xì)菌fluorescens)等。雖然炭疽病菌的寄主范圍很廣，但重要的寄主作物是園藝作物，如草莓、葡萄和西瓜等。該類作物大都是應(yīng)時(shí)鮮果類，且大多為即采即食，所以對(duì)藥劑的選擇有很大的局限性。因此對(duì)炭疽病的生物防治在生產(chǎn)上具有一定迫切需求。本發(fā)明提供的可有效防治炭疽病的頡頏細(xì)菌，在現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有提及和公開(kāi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一株新分離的芽孢桿菌解淀粉芽孢桿菌(.Bacillus amyloli quefaci ens )Mgl 16菌株,該菌株可用于防治由圍小叢殼菌iGlomerellaciflgWa)侵染引發(fā)的炭疽病。同時(shí)本發(fā)明還提供用該解淀粉芽孢桿菌Mgll6菌株加工成懸浮劑的制備方法。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌(拉丁文學(xué)名為Bacillus amyloliquefaciens) Mgll6菌株，已于2010年7月8日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏單位地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏號(hào)為CGMCC No.3967。本發(fā)明的菌種具有如下特征
(I)Mgl 16菌株的細(xì)胞形態(tài)及生理生化特征(見(jiàn)表I)
表I、Mgl 16菌株細(xì)胞形態(tài)及理化特征
權(quán)利要求
1.一種解淀粉芽孢桿菌(ifeci77i/5· amyloli quefaci ens ) Mg 116菌株,該菌種已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為=CGMCC No. 3967。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的解淀粉芽孢桿菌Mgl16菌株，其特征在于該菌株的16S rRNA基因序列為 CTCCATAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGAT CCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTCTGAACCATGCGGTTCAGACAACCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGA。
3.權(quán)利要求I所述的解淀粉芽孢桿菌Mgl16菌株在防治草莓炭疽病、葡萄炭疽病和西瓜炭疽病方面的應(yīng)用。
4.一種用權(quán)利要求I所述的解淀粉芽孢桿菌Mglie菌株發(fā)酵液制備而成的懸浮劑。
5.一種制備權(quán)利要求4所述的懸浮劑的方法，其特征在于包括以下步驟 (A)菌液的獲得 用無(wú)菌芽簽挑取事先在PDA固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)好的Mgll6菌株單菌落斑，接種于裝有5 mL PDA液體培養(yǎng)液的容積為20 mL的三角瓶中，于30 °C >200 rpm條件下振蕩培養(yǎng)·16 h，過(guò)夜，將上步所得培養(yǎng)液5 mL全部接種于裝有400 mL PDA培養(yǎng)液的容積為1000 mL的三角瓶中，200 rpm、30°C條件下振蕩培養(yǎng)16 h ;把所得的400mL培養(yǎng)液接種于裝有20 L培養(yǎng)液的容積為30L的發(fā)酵罐(鎮(zhèn)江東方GUS-30)，20L發(fā)酵培養(yǎng)液中固容物含量為豆柏·100 g、馬鈴薯淀粉200 g、蔗糖25 g、酵母粉25 g、碳酸鈣20 g、MnSO4 1.0 g，設(shè)置發(fā)酵條件為溶氧100%，攪拌速度為350 rpm，發(fā)酵溫度30 °C，發(fā)酵時(shí)間36 h，pH 7. 0-7. 2 ； (B)菌劑加工工藝 將發(fā)酵好的發(fā)酵液按如下方法加工成懸浮劑 (I)將發(fā)酵液離心(8000 rpm)后用20%丙三醇溶液(V/V)(溶液用無(wú)菌水配制)重新懸浮，測(cè)定懸浮液的活芽孢含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果用20%丙三醇溶液(V/V)調(diào)節(jié)懸浮液的活芽孢數(shù)，終含量調(diào)節(jié)成芽孢含量為L(zhǎng)OXIOki cfu/mL (即每毫升含100億個(gè)活芽孢);(2)在上述調(diào)節(jié)好的懸浮液中按5 g/L (W/V)的用量加入黃原膠，并攪拌均勻，得成品懸浮劑的濃度為100億活芽孢/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備懸浮劑的方法，其特征在于步驟(B)中所述的懸浮劑中的添加劑為丙三醇和和黃原膠。
全文摘要
本發(fā)明為一種解淀粉芽孢桿菌Mg116菌株(其在CGMCC的保藏編號(hào)為CGMCC No.3967)及發(fā)酵液制備成懸浮劑的方法。該制劑能有效防治由植物病原真菌圍小叢殼菌(Glomerellacingulata)侵染引發(fā)的葡萄炭疽病、西瓜炭疽病和草莓炭疽病等多種植物病害。
文檔編號(hào)A01N25/04GK102876603SQ201210354628
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月23日
發(fā)明者莊義慶, 楊敬輝, 吳琴燕, 陳宏州 申請(qǐng)人:江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所