專利名稱：耐受hppd抑制劑型除草劑的植物的制作方法
耐受HPPD抑制劑型除草劑的植物導(dǎo)言本發(fā)明涉及編碼從屬于Kordia屬的細(xì)菌獲得的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(ECI. 13. 11. 27，本文中縮寫為HPH))的核酸 序列，以及由其編碼的蛋白質(zhì)，還涉及包含此類核酸序列的嵌合基因，還涉及此類核酸序列、蛋白質(zhì)或嵌合基因用于獲得對HPro抑制劑型除草劑耐受的植物的用途。
背景技術(shù)：
HPPD是催化酪氨酸降解產(chǎn)物對羥苯基丙酮酸(本文中縮寫為HPP)轉(zhuǎn)化為尿黑酸(本文中縮寫為HG)的反應(yīng)的酶，尿黑酸是植物中生育酚和質(zhì)體醌的前體(Crouch N. P.等人(1997)Tetrahedron, 53, 20, 6993-7010, Fritze 等人,(2004), Plant Physiology134:1388-1400)。生育酚作為膜連結(jié)的抗氧化劑發(fā)揮作用。質(zhì)體醌首先作為PSII和細(xì)胞色素b6/f復(fù)合體之間的電子載體發(fā)揮作用，其次，其是八氫番茄紅素不飽和酶(參與類胡蘿卜素的生物合成)的氧化還原輔因子。迄今為止，NCBI數(shù)據(jù)庫中存在的超過700條來自多種生物的核酸序列被注釋為編碼具有HPI3D結(jié)構(gòu)域的推定蛋白質(zhì)，包括UniPiOtKB/TrEMBL數(shù)據(jù)庫中給出的A9DQF2檢錄號下以及NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中給出的ZP02161490檢錄號下公開的序列。但對那些中的大多數(shù)(包括對應(yīng)于檢錄號A9DQF2/ZP02161490的序列)而言，尚未在體外檢驗(yàn)或植物內(nèi)手段中證明所述蛋白質(zhì)具有HPH)酶促活性，也沒有證明此類HPro蛋白在植物中表達(dá)時(shí)可賦予針對HPro抑制劑型除草劑的除草劑耐受性。在本領(lǐng)域范疇內(nèi)已經(jīng)描述了若干HPro及其一級序列，特別是細(xì)菌(例如假單胞菌屬(RUetschi等人，Eur. J. Biochem.，205，459-466，1992，WO 96/38567))、植物(例如擬南芥屬(W096/38567，Genebank AF047834)、胡蘿卜(W0 96/38567，Genebank 87257)、燕麥(Avenasativa) (TO 02/046387)、小麥(TO 02/046387)、寬葉臂形草(Brachiaria platyphylla)(W0 02/046387)、蔡藜草(Cenchrus echinatus) (W002/046387)、硬直黑麥草(Loliumrigidum) (W0 02/046387)、華葉羊茅(Festuca arundinacea) (W0 02/046387)、狗尾草(Setaria faberi) (W0 02/046387)、牛筋草(Eleusine indica) (W0 02/046387)、高粱屬(Sorghum) (W0 02/046387)、球抱子菌屬(Coccicoides) (Genebank C0ITRP)、日本黃連(Coptis japonica) (W0 06/132270)、萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii) (ES2275365))或哺乳動物(例如小鼠或豬)的HPH)。指出的參考文獻(xiàn)中公開的相應(yīng)序列通過引用并入本文。大多數(shù)植物通過arrogenate 合成酪氨酸(Abou-Zeid 等人(1995)，Applied EnvMicrob 41:1298-1302; Bonner 等人，(1995)，Plant Cells Physiol. 36, 1013-1022; Byng等人，(1981)，Phytochemistry 6:1289-1292;Connely and Conn (1986), Z. Naturforsch41c :69-78; Gaines 等人，(1982) ,Plants 156:233-240)。在這些植物中，HPP 僅源于酪氨酸的降解。另一方面，在例如釀酒酵母的酵母或大腸桿菌的細(xì)菌等的生物中，HPP是酪氨酸前體，并且通過預(yù)苯酸脫氫酶(prephenate dehydrogenase,下文中稱為PDH)的作用(將預(yù)苯酸轉(zhuǎn)化為HPP)來合成(Lingens等人，(1967)European J. Biochem1:363-374;Sampathkumar and Morrisson(1982), Bioch Biophys Acta 701:204-211)。在這些生物中，HPP的生產(chǎn)因此直接與芳香族氨基酸生物合成途徑(莽草酸途徑)相關(guān)聯(lián)，而不與酪氨酸降解途徑相關(guān)聯(lián)。對HPro的抑制導(dǎo)致光合作用的解偶聯(lián)，缺乏輔助捕光色素(accessorylight-harvesting pigments),以及最重要地，由于缺少正常情況下由類胡蘿卜素提供的光保護(hù)導(dǎo)致的UV照射和活性氧類別對葉綠體的破壞(褪色)(Norris等人(1995)，PlantCell 7:2139-2149)。光合活性組織的褪色導(dǎo)致生長抑制和植物死亡。已證明，抑制HPro并且與該酶特異性結(jié)合以抑制HPP向尿黑酸的轉(zhuǎn)化的一些分子是非常有效的選擇性除草劑。目前，大多數(shù)可商業(yè)獲得的HPro抑制劑型除草劑屬于這四個化學(xué)家族之一 I)三酮類，例如，磺草酮[即2-[2-氯-4-(甲基磺酰基)苯甲?；鵠-1，3-環(huán)己二酮]，甲基磺草酮[即2- [4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲?；鵠-1，3-環(huán)己二酮];環(huán)磺酮(忱1^0^^01^)[即2-[2-氯-4-(甲基磺?；?-3-[(2，2，2，-三-氟乙氧基)甲基]苯甲?；鵠-1，3-環(huán)-己二酮];莊無忌(tefuryltrione)[即2_[2_氯_4_(甲基磺?；?_3_[[(四氫-2-呋喃基)甲氧基]甲基]苯甲酰基]-1，3-環(huán)己二酮]];bicyclopyrone[即4-輕基_3_[ [2_[ (2-甲氧基乙氧基)甲基]-6_ (二氟甲基)-3-卩比唳基]擬基]二環(huán)[3. 2. I]辛-3-烯-2-酮];雙環(huán)磺草酮(Benzobicyclon)[即3-(2-氯-4-甲磺?；郊柞；?-2-苯基硫代二環(huán)[3. 2. I]羊-2-烯-4-酮]2) 二酮腈類，例如2-氰基-3-環(huán)丙基-1-(2-甲基磺?；?4-三氟甲基苯基)-丙-1，3- 二酮和2-氰基-I- [4-(甲基磺?；?-2-三氟甲基苯基]-3-(1-甲基環(huán)丙基)丙-1,3-二酮；3)異1 唑類，例如異1 氟草[即(5-環(huán)丙基-4-異_唑基)[2_(甲基磺酰基)-4-(三氟甲基)苯基]甲酮]。在植物中，異T惡氟草被快速代謝為DKN (展示出HPH)抑制劑性質(zhì)的二酮腈類化合物)；和4) pyrazolinate,例如苯批唑草麗(topramezone)[即[3_(4，5_ 二氫 _3_ 異$惡唑基)-2_甲基-4-(甲基磺酰基)苯基](5-羥基-I-甲基-IH-吡唑-4-基)甲酮]和pyrasulfotole [ (5_輕基-1，3_ 二甲基卩比唑-4-基(2-甲橫酸基-4-三氣甲基苯基(trifIuaromethylphenyl))甲酮]；pyrazofen[2-[4-(2, 4- 二氯苯甲酸基)-I, 3- 二甲基吡唑-5-基氧]苯乙酮]。這些抑制HPro的除草劑可在展現(xiàn)出代謝耐受性的作物植物(例如玉米(Zeamays),它們在其中被迅速降解)中使用以抵擋草(grass)和/或闊葉雜草(Schulz等人，(1993).FEBS letters,318, 162-166;Mitchell 等人，(2001)Pest ManagementScience,Vol 57, 120-128;Garcia 等人，(2000)Biochem.，39，7501-7507;Pallett 等人，(2001)Pest Management Science, Vol 57,133-142)。為拓展這些抑制 HPPD 的除草劑的范圍，進(jìn)行了若干努力，以向植物(特別是沒有代謝耐受性或代謝耐受性運(yùn)作欠佳的植物)賦予在農(nóng)藝學(xué)田間條件下可接受的耐受性水平。除了分流HPro介導(dǎo)的尿黑酸生產(chǎn)(US 6，812，010)的嘗試之外，還已過表達(dá)敏感型(sensitive)酶，以在植物中以相對除草劑來說足夠的量生產(chǎn)靶標(biāo)酶(W096/38567)。HPH)的過表達(dá)導(dǎo)致對異_氟草(IFT)的二酮腈類衍生物(DKN)的更好的出苗前(pre-emergence)耐受性，但是就針對出苗后處理的耐受性而言，耐受性是不足的(Matringe 等人，(2005) ,Pest Management Science 61:269-276)。第三種策略是突變HPro，以獲得下述靶標(biāo)酶，其保留有其催化HPP轉(zhuǎn)化為尿黑酸的性質(zhì)，同時(shí)對HPro抑制劑不如突變前的天然HPro敏感。該策略已成功應(yīng)用于生產(chǎn)對2-氰基-3-環(huán)丙基-I-(2-甲基磺酰基-4-三氟甲基苯基)-丙-1，3- 二酮和2-氰基-I- [4-(甲基磺酰基)-2-三氟甲基苯基]-3-(1-甲基環(huán)丙基)丙-I，3- 二酮(屬于二酮腈類家族的兩種抑制HPH)的除草劑(W0 99/24585))耐受的植物(EP496630)。Pro215Leu、Gly336Glu、Gly336Ile 和更特別地 Gly336Trp (突變的氨基酸的位置是參照假單胞菌屬HPH)示出的)被鑒定為負(fù)責(zé)于針對用這些二酮腈類除草劑進(jìn)行的出苗前處理的增加的耐受性的突變，并且它們不造成酶活性的變化。更近來地，將假單胞菌屬HPro基因引入煙草和大豆的質(zhì)體基因組已顯示出比核轉(zhuǎn)化更為有效，其甚至賦予了針對異5惡氟草的出苗后應(yīng)用的耐受性(Dufourmantel等 人，2007，Plant Biotechnol J. 5 (I):118-33)。在WO 04/024928中，發(fā)明人已尋求通過增加HPP前體進(jìn)入這些植物的細(xì)胞的通量來增加異戍二烯基醌(prenylquinone)在植物細(xì)胞中的生物合成(例如質(zhì)體醌、生物酹的合成)。這已經(jīng)通過PDH酶的過表達(dá)將所述前體的合成與“莽草酸”途徑關(guān)聯(lián)來進(jìn)行了。他們還提到，用編碼I3DH酶的基因轉(zhuǎn)化植物使得增加所述植物對HPH)抑制劑的耐受性成為可倉泛。在專利申請WO 2009/144079中，公開了編碼在熒光假單胞菌的HPH)蛋白的第336位突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(HPro)的核酸序列及其用于獲得對HPro抑制劑型除草劑耐受的植物的用途。在WO 2002/046387中，已經(jīng)鑒定來自植物的HPH)蛋白的若干結(jié)構(gòu)域與賦予對多種HPro抑制劑型除草劑的耐受性相關(guān)，但是既沒有顯示植物內(nèi)數(shù)據(jù)也沒有顯示生物化學(xué)數(shù)據(jù)來驗(yàn)證所描述的結(jié)構(gòu)域功能的影響。在WO 2008/150473中，示例了兩種不同的耐受性機(jī)制——經(jīng)修飾的編碼突變體HPPD酶的燕麥基因和CYP450玉蜀黍單加氧酶(nsfl基因)的組合，以獲得改進(jìn)的針對HPTO抑制劑型除草劑的耐受性，但是沒有公開證實(shí)基于兩種蛋白質(zhì)的組合的協(xié)同效果的數(shù)據(jù)。盡管開發(fā)顯示出針對上文所述的若干HPro抑制劑型除草劑耐受的植物獲得了成功，但仍需要開發(fā)和/或改進(jìn)植物對較新的或?qū)θ舾刹煌腍Pro抑制劑的耐受性，特別是對屬于三酮類(例如磺草酮、甲基磺草酮、環(huán)磺酮、雙環(huán)磺草酮和bicyclopyrone)和pyrazolinate (例如，苯卩比唑草酮和pyrasulfotole)的類別的HPF1D抑制劑的耐受性。發(fā)明描述本發(fā)明因此涉及轉(zhuǎn)基因植物的生產(chǎn)，所述轉(zhuǎn)基因植物含有編碼可從或從屬于Kordia屬的生物獲得的HPH)蛋白質(zhì)的基因及其變體或突變體，更尤其涉及來自屬于Kordia algicida種的生物的編碼展示出能催化對羥苯基丙酮酸到尿黑酸的轉(zhuǎn)化的性質(zhì)的HPPD酶的基因，其變體或突變體，并且所述植物較之不含任何此類HPH)編碼轉(zhuǎn)基因的植物而言對HPro抑制劑更不敏感。來自Kordia的編碼HPTO蛋白的基因被選為優(yōu)秀的HPTO抑制劑型耐受的候選者，這是因?yàn)樗鼈冚^之?dāng)M南芥屬HPro蛋白(被用作為對HPro抑制劑型除草劑敏感的參照分子)而言在與HPro抑制劑耐受性相關(guān)的位置上的氨基酸組成上具有高分歧性，這是在HPro蛋白中以實(shí)驗(yàn)和結(jié)構(gòu)方式測定的。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“KordiaHPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID No. 4、5、6或7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的HPH)蛋白質(zhì)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“KordiaHPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID Nos. 4、5、6或7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的HPPD蛋白質(zhì)，并且其中SEQ ID No. 4的第195位至第387位的任何氨基酸可改為任何天然存在的氨基酸，優(yōu)選地，其可以是任何保守取代。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“Kordia HPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID Nos. 4、5、6或7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的HPH)蛋白質(zhì)，并且其在括號給出的其編號(相對于SEQID No. 4的編號)所定義的位置上具有下述氨基酸中的一個或多個，即，His (193)、Ser (236)、Asn (251)、Gln (275)、His (276)、Tyr (305)、Gln (340)、Phe (353)、Glu (355)、Gly (366)和 Asn (369)。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“KordiaHPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID Nos. 4、5、6或7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的HPPD蛋白質(zhì)，并且在表(i )的第二列給出的各位置上，原來出現(xiàn)的氨基酸可被表(i )第三列中列出的氨基酸中的任何取代。表(i):SEQ ID SEQ ID
No.4中 Νο·4中取我的氨基酸的位置
VaI195 Thrf Cys, Ala, Gly
Phe, Tyr, Lai, Vali Ala, Gin, Glu, Asp，Gly9 TThr,
He219
Ser, Met, Arg, Lys
Ala, Trp, Leu, Ser, Arg, Lys, His, Asp, Glu, Pro,
He220
GIyt Asn
Phe 222 Valf He, AIa5 Leu* Trps Met5 Gin, His Leu234 Met, Val
Lys237 Ala, VaI, Leu, Met, He, Arg, Gin, Tyr
Met 239 Leuf ￥al, He Ala
Ser 240 Ala, Thr9 VaIf Arg, Lys9 Glu, Leu，He Met His A!a372 Glu, GInf Ser, Val，Pies Thr
Leu373 Arg在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“KordiaHPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID Nos. 4、5、6、7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的HPPD蛋白質(zhì)，并且在表(ii )的第二列給出的各位置上，原來出現(xiàn)的氨基酸可被表(ii )第三列中列出的氨基酸中的任何取代。表ii)
SEQ ID SEQID
_Νο·4中的、().4中的取代
氨基酸位置
Glu, Thr Tyr, Phe, His, Glnf Asnf Gly, Leu, Met,
Ser221
Val, Arg, He Vai238 Ala, Thr Pro249 Ala, Val, Thr, Asn, He,Leu299 McttIIe5Asn
Leu329 Met
Val367 Any except Pro
Cly368 Ala, Pro. \ Thr, Met在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及本文中命名為“本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)”或“KordiaHPro蛋白質(zhì)”的HPro蛋白質(zhì)，其是與SEQ ID No. 4在2至387位氨基酸上的氨基酸序列(特別是與SEQ ID Nos. 4、5、6、7中任一的氨基酸序列，優(yōu)選SEQ ID No. 6)具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%的氨基酸序列同一性的 HPPD蛋白質(zhì)，并且在表(iii )的第二列給出的各位置上，原來出現(xiàn)的氨基酸可被表(iii )第三列中列出的氨基酸中的任何取代。表(iii)
SEQ ID SEQID
Μο·4中的Μο·4中的取代
氨基酸氨基酸 Ser 221 Glu, Tfcr* At*·，Tyr V si 238 AJta Pro249 Ala, Val, Thr
Leu 299 Met Leu329 Met
VaI367 He Ala, Val, Leu, Lys
GIy 368 Ala本發(fā)明包括具有較之SEQ ID No. 4在第2位氨基酸至第387位氨基酸的序列具有取代、缺失或添加的氨基酸的蛋白質(zhì)，例如轉(zhuǎn)運(yùn)肽融合蛋白，或者在SEQ ID No. 4的序列中具有氨基酸改變的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)保留了 HPH)蛋白的酶活性，并且當(dāng)在植物中表達(dá)時(shí)仍賦予HPro耐受性，優(yōu)選是與SEQ ID No. 4的蛋白質(zhì)所賦予的范圍相當(dāng)?shù)腍PTO耐受性。這包括源于SEQ ID No. 4的蛋白質(zhì)的變體或突變體蛋白，例如SEQ ID N0s:5、6或7的蛋白質(zhì)中的任何，特別是較之宿主植物內(nèi)源HPH)而言對異嘴唑類、二酮腈類、三酮類或pyrazolinate的類別的HPF1D抑制劑型除草劑較不敏感的突變體或變體,優(yōu)選是下述突變體或變體，當(dāng)向表達(dá)其的宿主植物應(yīng)用異T惡卩坐類、二酮腈類、三酮類和/或pyrazolinate的類別的HPF1D抑制劑型除草劑(特別是甲基磺草酮、環(huán)磺酮、異'^惡氟草或bicyclopyrone中的任何一種)時(shí)，更特別是當(dāng)出苗后應(yīng)用時(shí)，其向所述宿主植物賦予農(nóng)藝學(xué)相關(guān)的除草劑耐受性。這還包括包含SEQ ID N0:4的序列的活性部分的蛋白質(zhì)，當(dāng)在植物中表達(dá)時(shí)所述部分賦予HPH)抑制劑耐受性。這包括與SEQ ID NO:4的序列具有基本相同的氨基酸序列的蛋白質(zhì)，例如具有SEQ ID NO. 4至7中任一的氨基酸序列的蛋白質(zhì)。這包括下文定義的經(jīng)分離的蛋白質(zhì)，以及還有下述蛋白質(zhì)，例如SEQ ID N0:4的蛋白質(zhì)，其中某些氨基酸已經(jīng)被下文定義的相似氨基酸替代，優(yōu)選地，被保守氨基酸取代。本文還包括下述HPro蛋白作為本發(fā)明的HPro蛋白，所述蛋白質(zhì)包含SEQ ID No. 4的從2至387位的氨基酸序列，但是其中1-20、1-15、1-10或1、2、3、4、5、6、7、8或9個氨基酸已被缺失，或者已被其它氨基酸取代，特別是保留了 HPro酶促活性并且當(dāng)在宿主植物中表達(dá)時(shí)賦予針對HPro抑制劑型除草劑的耐受性的此類蛋白質(zhì)。本文包括與下文描述的本發(fā)明的DNA序列同源的DNA序列編碼的HPro蛋白，或與SEQ ID NO: I的DNA的至少一部分(至少20-30個核苷酸)雜交的DNA序列編碼的HPH)蛋白或能使用基于SEQ ID NO: I的引物獲得的DNA序列編碼的HPTO蛋白，或與SEQ ID No:4具有至少75%序列同一性的HPTO蛋白，所述蛋白質(zhì)由在微生物(例如真核微生物,特別是原生生物,例如Kordia屬的微生物)的基因組中發(fā)現(xiàn)的DNA序列編碼。本文包括下述KordiaHPro蛋白作為本發(fā)明的HPTO蛋白，所述蛋白質(zhì)當(dāng)在植物中表達(dá)時(shí)向此類植物賦予除草劑耐受性，其中此類耐受性是針對HPH)抑制劑(例如甲基磺草酮、環(huán)磺酮、異1lS氟草或bicyclopyrone)的，特別地,此類HPF1D蛋白是Kordia algicida HPF1D蛋白，例如包含SEQ ID N0:4的從2至387位氨基酸的序列的蛋白質(zhì)。這包括如下文詳述的突變體或變體HPH)蛋白。
本發(fā)明包括并提供了能與下述基本經(jīng)純化的蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的抗體，所述蛋白質(zhì)包含選自SEQ ID N0s:4、5、6或7構(gòu)成的組的氨基酸序列，或其根據(jù)上表(i)、(ii)或
(iii)中的一種或多種中公開的氨基酸替代衍生的序列。本發(fā)明的另一方面涉及與本發(fā)明的蛋白質(zhì)或肽分子中的一種或多種以及它們的同源物、融合體或片段特異性結(jié)合的抗體、單鏈抗原結(jié)合分子或其它蛋白質(zhì)。在一種特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體與具有SEQ ID NOs :4-7中示出的氨基酸序列的蛋白質(zhì)或其片段或其根據(jù)上表(i)、(ii)或(iii)中的一種或多種中公開的氨基酸替代衍生的序列特異性結(jié)合。在另一實(shí)施方式中，抗體與包含選自SEQ ID NOs: 4_7中示出的氨基酸序列或其片段或其根據(jù)上表(i)、( ii)或(iii)中的一種或多種中公開的氨基酸替代衍生的序列的的氨基酸序列的融合蛋白特異性結(jié)合。在另一實(shí)施方式中，抗體與包含選自SEQ ID NOs: 4_7中示出的氨基酸序列或其片段、或其根據(jù)上表(i )、( ii )或(iii )中的一種或多種中公開的氨基酸替代衍生的序列的氨基酸序列的融合蛋白特異性結(jié)合。本發(fā)明的抗體可用于定量或定性檢測本發(fā)明的蛋白質(zhì)或肽分子，或用于檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。在本文中使用時(shí)，如果抗體或肽與本發(fā)明的蛋白質(zhì)或肽分子的結(jié)合不被存在的無關(guān)分子競爭性抑制，則說該抗體或肽與本發(fā)明的蛋白質(zhì)或肽分子“特異性結(jié)合”。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及在本文中被命名為“本發(fā)明的HPro核酸/DNA”的HPPD核酸或DNA，其是編碼上文定義的本發(fā)明的HPH)的核酸或DNA。這包括下述DNA，所述DNA包含選自SEQ ID No. I從第4位核苷酸至第1161位核苷酸的序列、SEQ ID No. 2從第25位核苷酸至第1182位核苷酸的序列或SEQ ID No. 3從第4位核苷酸至第1557位核苷酸的序列構(gòu)成的組的核苷酸序列，或者所述DNA包含編碼HPF1D的DNA區(qū)域,或者這包括下述DNA,所述DNA與另一 DNA足夠互補(bǔ)，使得當(dāng)在在含有O. 1%SDS的5xSSC (IxSSC (單-強(qiáng)度檸檬酸鈉)表示=0. 15M NaCl、0. 015M檸檬酸三鈉、50mM磷酸鈉pH 7.6)中孵育之后接著在相同溫度下用含有O. 1%SDS的5xSSC洗滌時(shí)，其仍與選自由SEQ IDNos. 1、2和3構(gòu)成的組的序列雜交。當(dāng)測試序列和本發(fā)明序列是雙鏈時(shí)，構(gòu)成測試序列的核酸優(yōu)選具有相對選自由SEQ ID Nos. 1、2和3構(gòu)成的組的序列的TM而言10° C之內(nèi)的TM。當(dāng)測試序列和選自由SEQ ID Nos. 1、2和3構(gòu)成的組的序列被混合到一起并被同時(shí)變性時(shí)，序列的TM值優(yōu)選在互相的5° C之內(nèi)。更優(yōu)選地，雜交在下文定義的相對嚴(yán)格的雜交條件下進(jìn)行。
·
在一種實(shí)施方式中，變性的測試或本發(fā)明序列優(yōu)選首先與支持物結(jié)合，并在60至65° C之間的溫度下在含有O. 1%SDS的5xSSC中進(jìn)行指定時(shí)間的雜交，之后在相同的溫度下但用O. IxSSC來洗滌支持物。當(dāng)雜交涉及選自由SEQ ID Nos. 1、2和3構(gòu)成的組的序列時(shí)，雜交條件可較不嚴(yán)格，這將是技術(shù)人員顯而易見的。本文還包括編碼本發(fā)明HPro蛋白質(zhì)的下述DNA序列作為本發(fā)明的HPH) DNA,所述DNA序列已被改造以適于在微生物或植物中表達(dá)，這例如通過用宿主細(xì)胞中更優(yōu)選的密碼子替代天然密碼子來進(jìn)行，或者其中為了易于克隆已添加或除去了某些限制性位點(diǎn)，或是具有一定數(shù)量的添加、替代或缺失的核苷酸的DNA序列。這還包括經(jīng)分離的DNA序列和變體、突變體或合成DNA或核酸，如下文所進(jìn)一步描述的。在一種特殊的實(shí)施方式中，本發(fā)明的Kordia HPPD DNA在允許外源基因在植物中表達(dá)的啟動子的控制下表達(dá)于植物中。在另一特別的實(shí)施方式中，在由此表達(dá)的HPro酶的N-末端定位有信號肽，例如轉(zhuǎn)運(yùn)肽，優(yōu)選是質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)肽，例如大約120個氨基酸(大約30至大約120個氨基酸)的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽，更優(yōu)選是雙轉(zhuǎn)運(yùn)肽，例如下述經(jīng)優(yōu)化的轉(zhuǎn)運(yùn)肽，其第一個部分來自向日葵(Helianthus annuus),第二個部分來自玉米(美國專利5，188, 642中描述的)，或者植物核酮糖二羧化酶/加氧酶小亞基(RuBisCO ssu)的質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)肽,如果合適的話，包括成熟RuBisCO ssu的N-末端部分的數(shù)個氨基酸(EP 189707)。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明包括編碼本發(fā)明HPro蛋白的DNA，其源于SEQID No. I或可從SEQ ID No. I獲得，并且已針對在大腸桿菌中的表達(dá)對其進(jìn)行了優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQ ID No. 2從第25位核苷酸至第1182位核苷酸的序列的DNA (包括作為邊界的位置)。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明包括編碼本發(fā)明HPro蛋白質(zhì)的DNA，其源于SEQID No. 1，并且已針對在植物中的表達(dá)對其進(jìn)行了優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQ ID No. 3從第400位核苷酸至第1557位核苷酸的序列的DNA (包括作為邊界的位置)。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的HPH)，例如包含SEQ ID No. 4從第2位氨基酸至第387位氨基酸的氨基酸序列的HPPD，或包含SEQ ID Nos. 4至7中任一的氨基酸序列的HPH)，較之宿主植物內(nèi)源HPH)而言對異_唑類、二酮腈類、三酮類或pyrazolinate的類別的HPF1D抑制劑型除草劑或選自異5惡氟草、環(huán)磺酮、甲基磺草酮、磺草酮、pyrasulfotole、苯吡唑草酮、2-氰基-3-環(huán)丙基-I- (2-S02CH3-4-CF3苯基)丙_1，3- 二酮和2-氰基-3-環(huán)丙基-l-(2-S02CH3-4-2, 3C12苯基)丙-1，3- 二酮、bicyclopyrone、雙環(huán)磺草酮、莊無忌和節(jié)草唑(pyrazoxyfen)的HPF1D抑制劑型除草劑較不敏感。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明包括編碼本發(fā)明HPro蛋白的DNA，其衍生自SEQID No. I并且已針對在大腸桿菌中的表達(dá)被優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQID No. 2從第25位核苷酸至第1182位核苷酸的序列的DNA (包括作為邊界的位置),所述DNA編碼較之宿主植物內(nèi)源HPH)對異唑類、二酮腈類、三酮類或pyrazolinate的類別的至少一種HPF1D抑制劑型除草劑(優(yōu)選對環(huán)磺酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌、異藥氟草、二酮腈類、pyrasulfotole、苯批唑草酮、磺草酮、批唑特(pyrazolate)和批草酮(benzofenap))較不敏感的 HPH)。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明包括編碼本發(fā)明HPro蛋白的DNA，其已針對在植物中的表達(dá)被優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQ ID No. 3從第400位核苷酸至第1557位核苷酸的序列的DNA (包括作為邊界的位置)，所述DNA編碼較之宿主植物內(nèi)源HPF1D對異1^唑類、二酮腈類、三酮類或pyrazolinate的類別的至少一種HPF1D抑制劑型除草劑(優(yōu)選對環(huán)磺酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌、異$惡氟草、二酮腈類、pyrasulfotole、苯批唑草酮、磺草酮、批唑特和批草酮)較不敏感的HPH)。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及包含編碼本發(fā)明的HPro蛋白的DNA的植物，這些植物的植物部分、植物細(xì)胞和后代，所述DNA已針對在大腸桿菌中的表達(dá)被優(yōu)化或已針對在植物中的表達(dá)被優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQ ID No. 2從第25位核苷酸至第1182位核苷酸(包括作為邊界的位置)的序列或包含SEQ ID No. 3從第400位核苷酸至第1557位核苷酸(包括作為邊界的位置)的序列的DNA，所述DNA編碼較之宿主植物內(nèi)源HPH)較不敏感的HPH)。此類植物包括但不限于田間作物、水果和蔬菜，例如卡諾拉油菜(canola)、向日葵、煙草、甜菜、棉花、玉蜀黍、小麥、大麥、稻、高粱、西紅柿、芒果、桃、蘋 果、梨、草莓、香蕉、甜瓜、馬鈴薯、胡蘿卜、生菜、卷心菜、洋蔥、豆類物種(soya spp)、甘蔗、豌豆、蕓豆(field bean)、楊、葡萄、柑桔、苜蓿、黑麥、燕麥、草皮草(turf)和飼料牧草、亞麻和油菜籽油菜(oilseed rape)以及產(chǎn)生堅(jiān)果的植物。在一種更特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及包含編碼本發(fā)明的HPro蛋白的DNA的植物，這些植物的植物部分、植物細(xì)胞或后代，所述DNA已針對在大腸桿菌中的表達(dá)被優(yōu)化或已針對在植物中的表達(dá)被優(yōu)化，例如經(jīng)密碼子優(yōu)化的DNA，例如包含SEQ ID No. 2從第25位核苷酸至第1182位核苷酸(包括作為邊界的位置)或包含SEQ ID No. 3從第400位核苷酸至第1557位核苷酸(包括作為邊界的位置)的序列的DNA，所述DNA編碼較之宿主植物內(nèi)源HPPD較不敏感的HPH)，并且其中所述植物選自卡諾拉油菜、向日葵、煙草、甜菜、棉花、玉蜀黍、小麥、大麥、稻、馬鈴薯、豆類物種、甘蔗、豌豆、蕓豆、楊、葡萄、苜蓿、黑麥、燕麥、草皮草(turf)和飼料牧草、亞麻和油菜籽油菜以及產(chǎn)生堅(jiān)果的植物構(gòu)成的組,進(jìn)一步更優(yōu)選地,此類植物選自豆類物種、稻、甜菜、小麥、棉花、卡諾拉油菜、油菜籽油菜或玉蜀黍構(gòu)成的組。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的HPro蛋白包含SEQ ID No. 7的序列，并且較之植物(特別是宿主植物，其中本發(fā)明的此類HPro被表達(dá)或?qū)⒈槐磉_(dá))內(nèi)源未經(jīng)突變的HPro而言對三酮類(命名為三酮類HPF1D抑制劑,例如環(huán)磺酮、磺草酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌，特別是環(huán)磺酮)的類別、二酮腈類的類別(異5惡氟草)或pyrazolinate的類別(命名為pyrazolinate HPPD抑制劑，例如pyrasulfotole、卩比唑特、苯卩比唑草酮、卩比草酮)的HPF1D抑制劑較不敏感。HPPD蛋白的酶活性可通過下述任何方法來測量，所述方法使得能測量HPP或O2底物的量的減少，或者測量源于酶促反應(yīng)的任何產(chǎn)物(即尿黑酸或CO2)的積累。特別地，HPro活性可通過 Garcia 等人(1997), Biochem. J. 325, 761-769 或 Garcia 等人(1999), PlantPhysiol. 119，1507-1516中描述的方法來測量，所述參考文獻(xiàn)通過引用并入本文。根據(jù)本發(fā)明，三酮類的類別的HPro抑制劑(或三酮HPro抑制劑)表示具有三酮骨架的HPro抑制劑。作為此類三酮HPro抑制劑的例子，可舉出下述分子，磺草酮[即2-[2_氯-4-(甲基磺?；?苯甲酰基]-1，3-環(huán)己二酮]，甲基磺草酮[即2-[4-(甲基磺?；?-2-硝基苯甲?；鵠-1，3-環(huán)己二酮]和環(huán)磺酮[即2-[2_氯-4-(甲基磺酰基)-3_ [(2，2，2，- 二-氟乙氧基)甲基]苯甲?；鵠-1，3-環(huán)-己二酮],莊無忌[即2-{2-氯-4-甲磺?；?3-[(RS)-四氫-2-呋喃基甲氧基甲基]苯甲?；鶀環(huán)己-1，3-二酮],bicyclopyrone [即4_輕基_3-{2_[ (2_甲氧基乙氧基)甲基]_6_(三氟甲基)_3_批啶基羰基} 二環(huán)[3. 2. I]辛-3-烯-2-酮]，雙環(huán)磺草酮[即3- (2-氯-4-甲磺?；郊柞；?-2-苯基硫代二環(huán)[3. 2. I]羊-2-稀-4-麗]。根據(jù)本發(fā)明，pyrazolinate的類別的HPF1D(或pyrazolinate HPF1D抑制劑)表示具有吡唑基團(tuán)的HPH)抑制劑。作為此類pyrazolinate HPPD抑制劑的例子，可以舉出苯吡唑草酮[即[3- (4，5- 二氫-3-異5惡唑基)-2-甲基-4-(甲基磺酰基)苯基](5-羥基-I-甲基-IH-吡唑-4-基)甲酮]和pyrasulfotole [(5-羥基-1,3-二甲基吡唑-4-基(2-甲磺?；?4-三氟甲基苯基)甲酮]。本發(fā)明還涉及編碼本發(fā)明的Kordia HPPD以及經(jīng)改造的序列的核酸序列，特別是經(jīng)分離的DNA，優(yōu)選是可在植物中表達(dá)的嵌合基因。 本發(fā)明還涉及編碼本發(fā)明的HPro酶的核酸序列，所述HPro酶保留了其催化對羥苯基丙酮酸到尿黑酸的轉(zhuǎn)化的性質(zhì)，并且較之內(nèi)源未經(jīng)突變的植物HPro對三酮類的類別(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)，或pyrazolinate的類別(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮、莊無忌、bicyclopyrone、雙環(huán)磺草酮)的HPF1D抑制劑較不敏感,并且其中，被編碼的氨基酸序列顯示出與SEQ ID No. 4至少75%，80%，特別是至少85%，優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%,進(jìn)一步更優(yōu)選至少98%,以及最優(yōu)選至少99%的序列同一'丨生。在一種更特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的核酸編碼較之宿主植物內(nèi)源HPro而言對三酮類的類別(例如環(huán)磺酮、磺草酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone和莊無忌)、異 唑類的類別(例如異嘴氟草)、pyrazolinate的類別(命名為pyrazolinate HPPD抑制劑，例如pyrasulfotole、卩比唑特、苯批唑草酮、卩比草酮)或二酮類的類別(例如二酮腈類)的HPF1D抑制劑較不敏感的HPH)酶。根據(jù)本發(fā)明，“核酸序列”被理解為核苷酸序列，其可以是DNA或RNA類型，優(yōu)選是DNA類型的，并且其特別是雙鏈的，無論是天然或合成來源的，特別是下述DNA序列，其中編碼根據(jù)本發(fā)明的HPH)的密碼子已經(jīng)根據(jù)其將表達(dá)于的宿主生物經(jīng)過優(yōu)化(例如，通過用較之原來的或來源生物而言、在此類宿主生物或此類宿主生物屬于的組的密碼子使用表中更優(yōu)選或最優(yōu)選的那些密碼子替代其密碼子實(shí)現(xiàn)的)?！敖?jīng)分離的核酸/DNA/蛋白質(zhì)”在本文中使用時(shí)指并非天然存在的核酸/DNA/蛋白質(zhì)(例如，具有與天然存在的DNA不同的核苷酸序列的人工或合成DNA，或經(jīng)修飾的蛋白質(zhì))或者不再存在于其原來存在的天然環(huán)境中的核酸/DNA/蛋白質(zhì)，例如，在嵌合基因中與異源調(diào)控元件連結(jié)的DNA編碼序列(例如與可在植物中表達(dá)的啟動子有效相連的細(xì)菌編碼序列)、轉(zhuǎn)入另外的宿主細(xì)胞(例如轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞)的DNA。考慮到本發(fā)明的一種特別的實(shí)施方式和受歡迎的解決方案，即，對三酮、異5惡唑或pyrazolinate HPPD抑制劑較不敏感的HPH)，使用W02009/14407中詳細(xì)描述的方法，按照下文所述，使用三酮、異1^唑或pyrazolinate HPPD抑制劑,特別是選自環(huán)磺酮、甲基磺草酮、pyrasulfotole、苯批唑草酮、磺草酮、bicyclopyrone、二酮腈、批草酮、批唑特、莊無忌(tefuryltrione)的HPF1D抑制劑,來對耐受性水平測量加以分析。
“包含”某序列“X”的術(shù)語DNA或蛋白質(zhì)在本文通篇中使用時(shí)表示至少包括或含有序列“X”的DNA或蛋白質(zhì)，這使得其它核苷酸或氨基酸序列可被包括于5’(或N-末端)和/或3’(或C-末端)端，例如，可選擇標(biāo)志物蛋白質(zhì)(的核苷酸序列)、轉(zhuǎn)運(yùn)肽(的核苷酸序列)和/或5’前導(dǎo)序列或3’尾隨序列。相似地，在本文通篇中以及本申請的權(quán)利要求中術(shù)語“包含”及其各種詞性應(yīng)當(dāng)被理解為暗示了包括所指出的整數(shù)或步驟或者整數(shù)或步驟的組，但是不排除任何其它整數(shù)或步驟或者整數(shù)或步驟的組。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，編碼HPro的編碼區(qū)域包含下述核苷酸序列，所述核苷酸序列編碼具有SEQ ID Nos 4、5、6和7示出的氨基酸序列，例如SEQ ID Nos 1、2和3的核苷酸序列。但是，應(yīng)當(dāng)清楚，還可使用這些核苷酸序列的變體，包括其插入、缺失和取代，達(dá)到相同的效果。等同地，提到的核苷酸序列的來自不同于Kordia algicida的物種的同源體也可使用。 描述的核苷酸序列的變體將與鑒定出的編碼HPro酶的核苷酸序列(例如序列表中鑒定出的那些)具有優(yōu)選至少大約70%、80%、85%或90%或至少95%的序列同一性。與本發(fā)明所述的蛋白質(zhì)具有“基本相同的氨基酸序列”的蛋白質(zhì)指與根據(jù)本發(fā)明的蛋白質(zhì)具有至少90%，特別至少95%，優(yōu)選至少97%序列同一性的蛋白質(zhì)，其中百分比序列同一性是通過使用在GCG (Madison, Wisconsin, USA)的Wisconsin軟件包版本10.0的GAP程序中blosum62計(jì)分矩陣來測定的(使用GCG默認(rèn)參數(shù))。在本申請中通篇使用時(shí)，當(dāng)“序列同一性”與蛋白質(zhì)相關(guān)時(shí)，指使用該特定的分析時(shí)相同氨基酸的百分比。在本文中使用時(shí)，當(dāng)“序列同一性”與DNA序列相關(guān)時(shí)，是通過使用GCG (Madison, Wisconsin, USA)的Wisconsin軟件包版本10. O的GAP程序中nwsgapdna計(jì)分矩陣來測定的(使用GCG默認(rèn)參數(shù))。就本發(fā)明的目的而言，表示為百分比的兩條相關(guān)核苷酸或氨基酸序列的“序列同一性”指兩條被最優(yōu)比對的序列中具有相同殘基的位置數(shù)(xlOO)除以被比較的位置數(shù)。缺口，即，比對中在一條序列中存在殘基而在另一條中不存在殘基的位置，被視為具有不相同殘基的位置。通過Needleman和Wunsch算法(Needleman and Wunsch 1970)來進(jìn)行兩條序列間的比對?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)軟件程序，例如，是Wisconsin軟件包版本10. I (GeneticsComputer Group, Madision, Wisconsin, USA)一部分的GAP,使用默認(rèn)計(jì)分矩陣，以及缺口制造罰分50和缺口延伸罰分3，來方便地進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助的上述序列比對?？赏ㄟ^對基因組序列數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)分析，來鑒定與編碼根據(jù)本發(fā)明的HPH)酶的核苷酸序列同源的核苷酸序列。還可使用鑒定出的編碼根據(jù)本發(fā)明的HPH)酶的核苷酸序列或其部分作為探針，通過在嚴(yán)格條件下雜交，來鑒定和分離同源核苷酸序列。此類部分應(yīng)當(dāng)優(yōu)選具有下述核苷酸序列，所述序列包含來自根據(jù)本發(fā)明的HPro編碼基因序列編碼區(qū)域的至少40個連續(xù)核苷酸，優(yōu)選地，來自SEQ ID No. I、SEQ ID No. 2或SEQ ID No. 3的編碼區(qū)域。但是，探針也可包含源于HPro編碼核酸的核苷酸序列的更長的區(qū)域，例如來自任何提到的HPro基因的大約50、60、75、100、200或500個連續(xù)核苷酸。優(yōu)選地，探針應(yīng)當(dāng)包含編碼高度保守區(qū)域的核苷酸序列，所述高度保守區(qū)域可通過比對不同HPro蛋白而鑒定到。在本文中使用時(shí)，“嚴(yán)格雜交條件”表示如果在探針和靶序列之間存在至少95%(以及優(yōu)選至少97%)的序列同一性，通常將發(fā)生的雜交。嚴(yán)格雜交條件的例子是在包含5xSSC(150mM NaCl、15mM 檸檬酸三鈉)、50mM 磷酸鈉(pH 7. 6)、5x Denhardt’ s 溶液、10% 硫酸葡聚糖和20 μ g/ml變性的剪切載體DNA (例如鮭魚精DNA)的溶液中孵育過夜，接著在大約65° C在O. Ix SSC中洗滌雜交支持物，優(yōu)選進(jìn)行兩次大約10分鐘。其它雜交和洗滌條件是公知的，并且不例于 Sambrook 等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual, SecondEdition, Cold Spring Harbor, NY (1989),特別是第 11 章中。還可使用特異于編碼酶的HPro基因的寡核苷酸(例如但不限于，包含選自SEQ IDNos 1、2、3的核苷酸序列或它們的互補(bǔ)序列的大約20至大約50個連續(xù)核苷酸的寡核苷酸)作為引物，通過DNA擴(kuò)增來獲得此類變體序列。本發(fā)明還包括下述變體HPro酶，它們是與SEQ ID No. 4的HPTO氨基酸序列相似的氨基酸序列，其中，一個或多個氨基酸已被插入、缺失或取代。在本發(fā)明上下文中，氨基酸序列的變體指盡管對其有任何氨基酸取代、添加或缺失，但具有與本文所述的氨基酸序列相似的催化活性的那些多肽、酶或蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，變體氨基酸序列與SEQ ID No. 4的氨基酸序列具有至少大約80%或85%或90%或95%的序列同一性。還優(yōu)選地，包含變體氨基酸序列的多肽具有HPro酶活性。用于測定HPro酶活性的方法是本領(lǐng)域公知的，其包括wo·2009/144079中或WO 2002/046387中被詳細(xì)描述的檢驗(yàn)。取代包括下述氨基酸變化，其中氨基酸被不同的天然存在的或非傳統(tǒng)的氨基酸殘基替代。此類取代可被分類為“保守的”，其中，在本發(fā)明的HPH)蛋白中含有的氨基酸殘基被具有相似特征的另一天然存在的氨基酸替代，例^Gly^Ala.yal^lle^Leu、Aspe Glu, Lvs^ Λ rg、Λ s丨丨丨η或Phe^T rp-^Tyre本發(fā)明包括的取代還可以是“非保守的”，其中在本發(fā)明的HPro蛋白中存在的氨基酸殘基被具有不同性質(zhì)的氨基酸取代，例如，來自不同組的天然存在的氨基酸(例如，用丙氨酸取代帶電荷的或疏水的氨基酸)。氨基酸取代典型地是單殘基的，但是也可以是多個殘基的，成串的或分散的。氨基酸缺失將通常是ι- ο個氨基酸殘基數(shù)量級上的，而插入可以是任何長度的。缺失和插入可以對N-末端、C-末端進(jìn)行或者是內(nèi)部缺失或插入。通常，在氨基酸序列內(nèi)的插入將比氨基或羧基末端融合小，其在I至4個氨基酸殘基的數(shù)量級上。“相似氨基酸”在本文中使用時(shí)指具有相似氨基酸側(cè)鏈的氨基酸，即具有極性、非極性或特別是中性的側(cè)鏈的氨基酸?！胺窍嗨瓢被帷痹诒疚闹惺褂脮r(shí)指具有不同氨基酸側(cè)鏈的氨基酸，例如，具有極性側(cè)鏈的氨基酸與具有非極性側(cè)鏈的氨基酸是不相似的。極性側(cè)鏈通常傾向于存在于蛋白質(zhì)的表面，它們在那里可以和細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的水性環(huán)境相互作用(“親水性”氨基酸)。另一方面，“非極性”氨基酸傾向于駐留于蛋白質(zhì)的中心內(nèi)，它們在那里可以與相似的非極性鄰居相互作用(“疏水性”氨基酸)。具有極性側(cè)鏈的氨基酸的例子是精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸和蘇氨酸(除了疏水性的半胱氨酸之外，全部都是親水性的)。具有非極性側(cè)鏈的氨基酸的例子是丙氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸和色氨酸(除了中性的甘氨酸之外，全部都是疏水性的)。本發(fā)明還包括特異性識別根據(jù)本發(fā)明的HPH)酶的抗體。本發(fā)明還涉及編碼根據(jù)本發(fā)明的HPro的核酸作為標(biāo)志物基因或作為編碼序列在轉(zhuǎn)化植物的方法中的用途，使得可向植物賦予對是HPro抑制劑的除草劑的抗性，本發(fā)明還涉及HPro抑制劑在包含編碼根據(jù)本發(fā)明的HPro的核酸序列的植物上的用途。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，在此類用途中，HPPD抑制劑是三酮類或pyrazolinate,優(yōu)選是環(huán)磺酮、甲基磺草酮或磺草酮、bicyclopyrone和莊無忌。當(dāng)然應(yīng)當(dāng)理解，該序列還可與其它基因標(biāo)志物和/或編碼具有有用的農(nóng)業(yè)性質(zhì)的一種或多種蛋白質(zhì)的序列組合使用。在作物的商業(yè)生產(chǎn)中，想要在可靠的殺蟲劑管理下從作物植物的田間除掉不想要的植物(即，“雜草”)。理想的處理將是這樣的，其可應(yīng)用至整塊田間，但是將僅除掉不想要的植物，同時(shí)使得作物植物未受影響。一種此類的處理系統(tǒng)將涉及使用對除草劑耐受的作物植物，使得當(dāng)在除草劑耐受的作物植物田間噴霧除草劑時(shí)，作物植物將繼續(xù)茂盛生長同時(shí)非除草劑耐受性的雜交被殺死或被嚴(yán)重?fù)p害。理想地，此類處理系統(tǒng)利用了變動的除草劑性質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，使得雜草控制能提供靈活度和經(jīng)濟(jì)性的可能的組合中最好的。例如，各除草劑在田間具有不同壽命，一些除草劑在應(yīng)用到田間之后能在相對長的時(shí)間內(nèi)保持下來并有效，而另一些除草劑則迅速被破壞為其它和/或非活性化合物。理想的處理系統(tǒng)將允許使用不同的除草劑，使得種植者可定制針對特定情況的除草劑選擇。雖然目前可商業(yè)獲得大量的除草劑耐受性作物植物，但針對很多商業(yè)除草劑和除草劑/作物組合已提出了下述議題各除草劑典型地具有針對常見雜草物種的不完全活 性譜。對于已使用了一段時(shí)間的大多數(shù)各個除草劑來說，除草劑抗性雜草物種和生物型的種群已更為普遍(見例如 Tranel and Wright (2002) Weed Science 50:700-712; Owen andZelaya(2005)PestManag. Sci. 61:301-311)。對超過一種除草劑有抗性的轉(zhuǎn)基因植物已被描述過(見例如W02005/012515 )。但是，在作物生產(chǎn)、雜草控制選擇、殘余雜草控制的延伸以及作物產(chǎn)量改進(jìn)的每個方面，都持續(xù)需要改進(jìn)。本發(fā)明的HPro蛋白質(zhì)或基因有利地在植物中與編碼向此類植物賦予有用的農(nóng)藝學(xué)性質(zhì)的蛋白質(zhì)或RNA的其它基因組合。在編碼在經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物上賦予有用的農(nóng)藝學(xué)性質(zhì)的蛋白質(zhì)或RNA的基因中，可提到的是編碼賦予對化學(xué)結(jié)構(gòu)不同于HPH)抑制劑型除草劑的一種或多種除草劑的耐受性的蛋白質(zhì)的DNA序列，賦予對某些昆蟲的耐受性的蛋白質(zhì)的DNA序列、賦予對某些疾病的耐受性的蛋白質(zhì)的DNA序列，編碼提供線蟲或昆蟲控制的RNA的DNA等等。此類基因被特別描述于公開的PCT專利申請WO 91/02071和W095/06128中。在編碼在經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞和植物上賦予對某些除草劑的耐受性的蛋白質(zhì)的DNA序列中，可以提到bar或PAT基因或W02009/152359中描述的天藍(lán)色鏈霉菌(Streptomycescoelicolor)基因(其賦予對草銨膦除草劑的耐受性)，編碼賦予對以EPSPS作為靶標(biāo)的除草劑(草甘膦及其鹽)的耐受性的合適的EPSPS的基因(US 4，535，060、US 4，769，061、US5, 094，945、US 4，940，835、US 5，188，642、US 4，971，908、US 5，145，783、US5, 310，667、US 5,312,910, US 5，627，061、US 5，633，435)，或編碼草甘膦氧化還原酶的基因(US5，463，175)。在編碼賦予對以EPSPS作為靶標(biāo)的除草劑的耐受性的合適的EPSPS的DNA序列中，將特別提到編碼植物EPSPS (特別是玉蜀黍EPSPS)的基因，特別是其包含兩處突變的玉米EPSPS，特別是在第102位氨基酸處和第106位氨基酸處的突變(W0 2004/074443)，其被描述于專利申請US專利6566587中，在下文中被稱為雙突變體玉蜀黍EPSPS或2mEPSPS ；或者編碼分離自農(nóng)桿菌屬的EPSPS的基因，其被美國專利5，633，435的SEQ ID No. 2和SEQID No. 3描述，也被命名為CP4。
在編碼賦予對以EPSPS作為靶標(biāo)的除草劑的耐受性的合適的EPSPS的DNA序列中，將特別提到編碼來自球形節(jié)桿菌(Arthrobacter globiformis)的EPSPS GRG23以及突變體 GRG23ACE1、GRG23ACE2 或 GRG23ACE3 (特別是 W02008/100353 中描述的 GRG23 的突變體或變體，例如 W02008/100353 中的 SEQ ID No. 29 的 GRG23 (ace3) R173K)的基因。
在編碼EPSPS (以及更特別地，上述編碼基因)的DNA序列的情況下，編碼這些酶的序列有利地在之前存在編碼轉(zhuǎn)運(yùn)肽的序列，特別是美國專利5，510，471或5，633，448中描述的“經(jīng)優(yōu)化的轉(zhuǎn)運(yùn)肽”。在WO 2007/024782中，公開了對草甘膦和至少一種ALS (乙酰乳酸合酶)抑制劑耐受的植物。更具體地，公開了含有編碼GAT (草甘膦-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶)多肽和賦予對ALS抑制劑的抗性的多肽的基因的植物。在US 6855533中，公開了轉(zhuǎn)基因煙草植物，其含有突變的擬南芥屬ALS/AHAS基因。在US 6，153,401中，公開了含有編碼通過代謝賦予對2，4_D(2，4-二氯苯氧乙酸)的耐受性的2，4-D-單加氧酶的基因的植物。在US 2008/0119361和US 2008/0120739中，公開了含有編碼通過代謝賦予對麥草畏(3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸)的耐受性的麥草畏單加氧酶的基因的植物。上述所有除草劑耐受性均可與表現(xiàn)出是本發(fā)明主題的HPro耐受性的那些組合。在編碼關(guān)于對昆蟲的耐受性的性質(zhì)的蛋白質(zhì)的DNA序列中，將特別提到文獻(xiàn)中廣為描述并且本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的Bt蛋白。還將提到從細(xì)菌(例如發(fā)光桿菌屬)提取的蛋白質(zhì)(W0 97/17432 和 WO 98/08932)。在編碼賦予對昆蟲的耐受性的新穎性質(zhì)的目的蛋白質(zhì)的此類DNA序列中，將特別提到在文獻(xiàn)中被廣為描述并且本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的Bt Cry或VIP蛋白。它們包括CrylF蛋白或源于CrylF蛋白的雜交體(例如US 6，326，169、US 6, 281,016, US6，218，188中描述的雜交體CrylA-CrylF蛋白或其毒性片段)，CrylA型的蛋白質(zhì)或其毒性片段，優(yōu)選是CrylAc蛋白或源于CrylAc蛋白的雜交體(例如，US 5，880，275中描述的雜交體CrylAb-CrylAc蛋白)或CrylAb或Bt2蛋白或其殺昆蟲片段(如EP451878中描述的)，Cry2Ae、Cry2Af或Cry2Ag蛋白(如W002/057664中描述的)或其毒性片段，WO2007/140256中描述的CrylA. 105蛋白(SEQ ID No. 7)或其毒性片段，NCBI檢錄號ABG20428的 VIP3Aal9 蛋白，NCBI 檢錄號 ABG20429 的 VIP3Aa20 蛋白(W0 2007/142840 中的 SEQID No. 2), C0T202或C0T203棉花事件中產(chǎn)生的VIP3A蛋白(分別見WO 2005/054479和WO 2005/054480)，W001/47952 中描述的 Cry 蛋白，Estruch 等人(1996), Proc Natl AcadSci U S A. 28; 93 (II) :5389-94和US 6，291，156中描述的VIP3Aa蛋白或其毒性片段，來自致病桿菌屬(Xenorhabdus)(如W098/50427中描述的)、沙雷氏菌屬(特別是來自嗜蟲沙雷氏菌(S. entomophila))或發(fā)光桿菌屬(Photorhabdus)的物種的菌株的殺昆蟲蛋白，例如TO98/08932中所述的來自發(fā)光桿菌屬的Tc-蛋白(例如，Waterfield等人，2001, ApplEnviron Microbiol. 67(11):5017-24;Ffrench-Constant and Bowen, 2000, Cell Mol LifeSci. ;57(5) :828-33)。此外這些蛋白質(zhì)中任何一種的下述任何變體或突變體也包括在本文中在一些(1-10，優(yōu)選1-5)個氨基酸上與上述任何序列(特別是它們的毒性片段的序列)不同的變體或突變體，或者與轉(zhuǎn)運(yùn)肽(例如質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)肽)或其它蛋白質(zhì)或肽融合的變體或突變體。本發(fā)明還涉及嵌合基因(或表達(dá)盒)，其包含編碼序列以及位于5’和/或3’位置(至少位于5’位置)的異源調(diào)控元件，它們能在宿主生物(特別是植物細(xì)胞或植物)中與含有編碼前文定義的HPro的至少一種核酸序列的編碼序列一起發(fā)揮功能。在一種特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及前文描述的嵌合基因，其中宿主細(xì)胞選自細(xì)菌、酵母、畢赤酵母屬、真菌、桿狀病毒、體外細(xì)胞、原生質(zhì)體、植物細(xì)胞、植物、植物部分及其植物種子。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及前文描述的嵌合基因，其中所述嵌合基因含有位于編碼根據(jù)本發(fā)明的HPro的核酸序列的5’位置處編碼植物轉(zhuǎn)運(yùn)肽的核酸序列，該序列被安排于啟動子區(qū)域和編碼根據(jù)本發(fā)明的HPro的序列之間，以允許轉(zhuǎn)運(yùn)肽/HPro融合蛋白的表達(dá)。 在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及HPro抑制劑型除草劑在包含根據(jù)本發(fā)明的HPro耐受基因的植物、植物部分或植物種子上的用途，或者HPro抑制劑型除草劑在其中將種植或播種此類植物、植物部分或種子的土壤上的用途，所述HPro抑制劑型除草劑單獨(dú)使用或與一種或多種作用方式不同于HPro抑制劑的其它已知除草劑組合使用。在一種更特別的實(shí)施方式中，利用的HPro抑制劑型除草劑選自三酮類(被命名為三酮HPro抑制齊IJ)(例如環(huán)磺酮、磺草酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌，特別是環(huán)磺酮)、二酮類的類別(例如二酮腈)、異^唑類的類別(例如異^氟草)或pyrazolinate的類別(被命名為pyrazolinate HPF1D抑制劑)(例如pyrasulfotole、批唑特、苯批唑草酮、批草酮)構(gòu)成的組，進(jìn)一步更具體地，本發(fā)明涉及環(huán)磺酮、甲基磺草酮、二酮腈、bicyclopyrone、莊無忌、批草酮、pyrasulfotole、批唑特和磺草酮對此類HPF1D抑制劑耐受性植物、植物部分或植物種子的應(yīng)用。作為在植物細(xì)胞和植物中作為啟動子發(fā)揮功能的調(diào)控序列，可使用天然表達(dá)于植物中的基因的任何啟動子序列，特別是尤其表達(dá)于植物葉中的啟動子，例如細(xì)菌、病毒或植物來源的“組成型”啟動子，或者“光依賴性”啟動子，例如植物核酮糖-二羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亞基基因的啟動子，或者任何合適的可表達(dá)可使用的已知啟動子。在植物來源的啟動子中，將提到EP 0507698A1中描述的組蛋白啟動子、稻肌動蛋白啟動子(US5，641，876)或植物泛素啟動子(US 5,510,474).在植物病毒基因的啟動子中，將提到花椰菜花葉病毒(CaMV 19S或35S，Sanders等人(1987)，NucleicAcids Res. 15(4) :1543-58.)、圓環(huán)病毒(AU 689311)或木薯葉脈花葉病毒(CsVMV，US7,053, 205)的啟動子。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，可使用特異于植物的特別的區(qū)域或組織的啟動子，以表達(dá)本發(fā)明的HPPD,例如特異于種子的啟動子(Datla, R.等人，1997，BiotechnologyAnn. Rev. 3，269-296)，尤其是油菜籽油菜蛋白啟動子(EP 255378A1 )、菜豆蛋白啟動子、麥谷蛋白啟動子、向日葵蛋白啟動子(W0 92/17580)、白蛋白啟動子(W0 98/45460)、油質(zhì)蛋白啟動子(W0 98/45461)、SATl 啟動子或 SAT3 啟動子(PCT/US98/06978)。還可使用可誘導(dǎo)啟動子，其有利地選自苯丙氨酸氨裂解酶(PAL)、HMG-CoA還原酶(HMG)、幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶、蛋白酶抑制劑(PI)、PRl家族基因、胭脂氨酸合成酶(nos)和vspB啟動子(US 5670349，表3)、HMG2啟動子(US 5670349)、蘋果β -半乳糖苷酶(ABG1)啟動子和蘋果氨基環(huán)丙烷羧酸合酶(ACC合酶)啟動子(WO 98/45445)。根據(jù)本發(fā)明，還可與啟動子組合使用其它調(diào)控序列，所述序列定位于啟動子和編碼序列之間，例如轉(zhuǎn)錄活化因子(“增強(qiáng)子”)，例如申請W087/07644中描述的煙草花葉病毒(TMV)的或 Carrington&Freed 1990, J. Virol. 64:1590-1597 描述的煙草蝕刻病毒(TEV)的轉(zhuǎn)錄活化因子，例如，或內(nèi)含子，例如玉蜀黍的adhl內(nèi)含子或稻肌動蛋白的內(nèi)含子I。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的基因以多個(優(yōu)選兩個)拷貝存在于植物中，它們每個被不同的可在植物中表達(dá)的啟動子控制。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的嵌合基因可與編碼HPro蛋白的任何其它嵌合基因組合，優(yōu)選地，這些不同基因被在植物中具有活性的不同調(diào)控元件控制。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的嵌合基因可與處于相同或不同可在植物中表達(dá)的啟動子控制下的CYP450玉蜀黍單加氧酶(nsfl基因)基因組合。 作為調(diào)控終止子或聚腺苷化序列，可使用細(xì)菌來源(例如根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)的nos終止子)、病毒來源(例如CaMV 35S終止子)或植物來源(例如，公開的專利申請EP 0633317A1中描述的組蛋白終止子)的任何相應(yīng)序列。術(shù)語“基因”在本文中使用時(shí)指側(cè)翼有5’和/或3’調(diào)控序列的允許RNA被轉(zhuǎn)錄的DNA編碼區(qū)域，所述RNA可被翻譯為蛋白質(zhì)，典型地，至少包含啟動子區(qū)域。當(dāng)提到本發(fā)明的編碼HPH)的DNA時(shí)，“嵌合基因”指下述HPH)編碼DNA序列，其具有不同于驅(qū)動HPTO蛋白在其天然宿主細(xì)胞中表達(dá)的天然存在的細(xì)菌5’和/或3’調(diào)控序列的5’和/或3’調(diào)控序列(也被稱為“異源啟動子”或“異源調(diào)控序列”)。術(shù)語“包含序列X的DNA/蛋白質(zhì)”和“具有包含序列X的序列的DNA/蛋白質(zhì)”在本文中使用時(shí)指下述DNA或蛋白質(zhì)，它們在其核苷酸或氨基酸序列中至少包括或含有序列X，這使得在5’(或N-末端)和/或3’(或C-末端)末端可包括其它核苷酸或氨基酸序列，例如，N-末端轉(zhuǎn)運(yùn)或信號肽。術(shù)語“包含”在本文中使用時(shí)是表示“包括”的開放式語言，其表示除了具體列舉的那些之外還可存在其它元件。術(shù)語“由……構(gòu)成”在本文中使用時(shí)是封閉式語言，即，僅存在具體列舉的這些元件。術(shù)語“編碼包含序列X的蛋白質(zhì)的DNA”在本文中使用時(shí)指包含下述編碼序列的DNA，所述編碼序列在轉(zhuǎn)錄和翻譯后產(chǎn)生至少含有氨基酸序列X的蛋白質(zhì)。編碼蛋白質(zhì)的DNA無須是天然存在的DNA，其可以是半合成的、完全合成的或人工DNA，并且可包括內(nèi)含子和5’和/或3’側(cè)翼區(qū)域。術(shù)語“核苷酸序列”在本文中使用時(shí)指DNA或RNA分子的序列，其可以是單鏈或雙鏈形式的。根據(jù)本發(fā)明的HPro蛋白可根據(jù)本領(lǐng)域已知的流程被裝備有信號肽，見例如公開的PCT專利申請WO 96/10083，或者它們可被另外的肽，例如導(dǎo)致蛋白質(zhì)被運(yùn)送至葉綠體的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽(例如，Van Den Broeck 等人，1985，Nature 313，358 或 US 專利 5，510，471 的經(jīng)修飾的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽)替代，或被將蛋白質(zhì)靶向至其它質(zhì)體、線粒體、ER或另外的細(xì)胞器的肽或分泌性信號肽替代，或者其可被甲硫氨酸氨基酸或被甲硫氨酸-丙氨酸二肽替代。在天然被靶向或分泌的蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了用于靶向至細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器或用于分泌出植物細(xì)胞或分泌至細(xì)胞壁的信號序列，優(yōu)選地，KJO屯en等人(1989，Mol. Gen. Genet. 217，155-161)、KIosgCll and Weil (1991, Mol. Gen. Genet. 225, 297-304)、Neuhaus&Rogers (1998, PlantMol. Biol. 38，127-144)、Bih 等人(1999，J. Biol. Chem. 274，22884-22894)、Morris等人(1999，Biochem. Biophys. Res. Commun. 255, 328-333)、Hesse 等人(1989，EMBOJ. 82453-2461)、Tavladoraki 等人(1998，F(xiàn)EBS Lett. 426，62-66)、Terashima 等人(1999，Appl. Microbiol. Biotechnol. 52，516-523)、Park 等人(1997，J. Biol.Chem. 272，6876-6881)、Shcherban 等人(1995，Proc. Natl. Acad. Sci USA 92，9245-9249)描述的那些，所有這些都通過引用并入本文，特別是來自玉米、棉花、大豆或稻的被靶向或分泌的蛋白質(zhì)的信號肽序列。編碼此類植物信號肽的DNA序列可被插入編碼用于在植物中表達(dá)HPH)蛋白的嵌合基因中。除非實(shí)施例中另有指明，用于制造和操縱重組DNA的所有流程都通過Sambrook等人,Molecular Cloning-A Laboratory Manual, Second Ed. , Cold Spring HarborLaboratory Press, NY (1989)和 Ausubel 等人(1994) Current Protocols in MolecularBiology, Current Protocols, USA的第I卷和第2卷中描述的標(biāo)準(zhǔn)流程來進(jìn)行。用于植物分子生物學(xué)工作的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法被描述于R. R. D. Croy的Plant Molecular BiologyLabfax(1993)(由 BIOS Scientific Publications Ltd(UK)和 Blackwell ScientificPublications (UK)聯(lián)合出版)中。用于PCR技術(shù)的流程可被發(fā)現(xiàn)于M. A. Innis, D.H. Gelfand, J. J. Sninsky 和 T. J. White 編輯的 “PCR protocols: a guide to methods and applications，，(Academic Press, Inc. , 1990)中。術(shù)語“耐受性”、“耐受”或“較不敏感”可互換使用，它們表示根據(jù)用包含編碼各HPPD蛋白的基因的核酸轉(zhuǎn)化的菌株或植物的可視指標(biāo)表型在不同濃度的多種HPro抑制劑存在時(shí)篩選的HPro內(nèi)在耐受性的相對水平。與這些指標(biāo)表型(棕色的形成、生長抑制、褪色、除草劑效果等等)相關(guān)的劑量應(yīng)答和劑量應(yīng)答的相對改變被方便地以例如在除草劑的不同濃度范圍內(nèi)基于植物損害、分生組織褪色癥狀等等以正常方式的GR50 (生長降低50%的濃度)值或MIC (最小抑制濃度)值來表示，其中值的增加對應(yīng)于表達(dá)的HPro的內(nèi)在耐受性增加。這些數(shù)據(jù)可以以例如源于劑量/應(yīng)答曲線的GR50值來表示，所述曲線具有繪制于X軸上的“劑量”和繪制于y軸上的“百分比殺死(percentage kill)”、“除草劑效果”、“出苗綠色植物的數(shù)目”等等，其中增加的GR50值對應(yīng)于表達(dá)的HPH)的內(nèi)在耐受性水平增加。除草劑可合適地在出苗前或出苗后應(yīng)用。類似地，編碼根據(jù)本發(fā)明的HPro蛋白的核酸或基因或本發(fā)明的HPro蛋白的耐受性水平是通過對測試植物(例如煙草，或作物植物，例如大豆或棉花)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因、再生、育種和噴霧測試來篩選的，根據(jù)這些結(jié)果，這些植物較之不含任何外源編碼HPro蛋白的基因的植物或較之含有包含處于與本發(fā)明HPro DNA相同啟動子控制下的擬南芥HPro編碼DNA的基因的植物時(shí)，對HPro抑制劑(例如環(huán)磺酮、甲基磺草酮、二酮腈類和/或bicyclopyrone)至少更耐受2-4倍?！八拗魃铩被颉八拗鳌北焕斫鉃槠渲袨榱水a(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的HPro的目的可引入根據(jù)本發(fā)明的核酸或嵌合基因的任何單細(xì)胞或多細(xì)胞異源生物。這些生物特別是細(xì)菌，例如大腸桿菌，酵母，特別是釀酒酵母屬或克魯維酵母屬的，畢赤酵母，真菌，特別是曲霉屬，桿狀病毒，或者優(yōu)選地，植物細(xì)胞和植物。根據(jù)本發(fā)明，“植物細(xì)胞”被理解為源于植物或在植物中發(fā)現(xiàn)的任何細(xì)胞，其能形成未分化組織(例如愈傷組織)、分化組織(例如胚胎)、植物的部分、植物或種子，或是它們的一部分。這包括原生質(zhì)體和花粉、培養(yǎng)的植物細(xì)胞或體外生長的原生質(zhì)體以及能再生為完整植物的植物細(xì)胞。
根據(jù)本發(fā)明，“植物”被理解為能光合作用的任何分化的多細(xì)胞生生物，特別是單子葉或雙子葉生物，更尤其是意欲或不意欲用于動物或人類營養(yǎng)的栽培的植物，例如玉蜀黍或玉米，小麥、蕓苔屬物種的植物，例如油菜(Brassica napus)或芥菜(Brassicajuncea )，豆類物種，稻，甘蔗，甜菜，煙草，棉花、蔬菜植物，例如黃瓜、韭、胡蘿卜、西紅柿、生菜、胡椒、甜瓜、西瓜等等。轉(zhuǎn)基因植物在本文中使用時(shí)指包含穩(wěn)定插入進(jìn)其基因組的外來或異源基因的植物。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及對植物的轉(zhuǎn)化。在植物中天然表達(dá)的基因的任何啟動子序列，或天然表達(dá)于植物中的基因的啟動子元件的任何雜交體或組合，包括農(nóng)桿菌屬或植物病毒啟動子，或適于控制除草劑耐受性基因在植物中的轉(zhuǎn)錄的任何啟動子，可在本發(fā)明的植物中用作為啟動子序列(本文中命名為“可在植物中表達(dá)的啟動子”)。此類合適的可在植物中表達(dá)的啟動子的例子如上文所述。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，此類可在植物中表達(dá)的啟動子與編碼本發(fā)明的HPro蛋白的編碼序列有效地相連，形成本發(fā)明的嵌合HPPD基因。根據(jù)本發(fā)明，還可與啟動子調(diào)控序列組合使用位于啟動子和編碼序列之間的其它調(diào)控序列，例如內(nèi)含子序列或轉(zhuǎn)錄活化因子(增強(qiáng)子)。此類合適的調(diào)控序列的例子如上文所述?！ぜ?xì)菌或病毒來源(例如來自根癌農(nóng)桿菌的nos終止子)或植物來源(例如申請EP0633317A1中描述的組蛋白終止子)的任何相應(yīng)的序列，可用作為轉(zhuǎn)錄終止(和聚腺苷化)調(diào)控序列。在本發(fā)明的一種特別的實(shí)施方式中，在根據(jù)本發(fā)明的外源HPro的編碼核酸序列的5’(上游)利用編碼轉(zhuǎn)運(yùn)肽的核酸序列，該轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列被安排于啟動子區(qū)域和編碼外源HPro的序列之間，以允許轉(zhuǎn)運(yùn)肽-HPro融合蛋白(例如SEQ ID No. 6或SEQ ID No. 7的蛋白質(zhì))的表達(dá)。轉(zhuǎn)運(yùn)肽使得可以指導(dǎo)HPro進(jìn)入質(zhì)體，更尤其是進(jìn)入葉綠體，當(dāng)本發(fā)明的HPro蛋白進(jìn)入質(zhì)體時(shí)融合蛋白在轉(zhuǎn)運(yùn)肽和本發(fā)明的HPro蛋白之間被切割。轉(zhuǎn)運(yùn)肽可以是單條肽，例如EPSPS轉(zhuǎn)運(yùn)肽(美國專利5，188，642中描述的)或植物核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶小亞基(RuBisCO ssu)的轉(zhuǎn)運(yùn)肽,如果合適的話,包括成熟RuBisCO ssu的N-末端部分的數(shù)個氨基酸(EP 189707A1)，或者可以是若干轉(zhuǎn)運(yùn)肽的融合體，例如下述轉(zhuǎn)運(yùn)肽，其包含與具有質(zhì)體定位的成熟蛋白的N-末端序列的部分融合的第一植物轉(zhuǎn)運(yùn)肽，所述部分又進(jìn)而融合至如專利EP 508909A1中描述的第二植物轉(zhuǎn)運(yùn)肽，并且，更尤其是下述經(jīng)優(yōu)化的轉(zhuǎn)運(yùn)肽，其包含向日葵RuBisCO ssu的轉(zhuǎn)運(yùn)肽,該轉(zhuǎn)運(yùn)肽融合至玉蜀黍RuBisCO ssu的N-末端的22個氨基酸，這22個氨基酸進(jìn)而融合至玉蜀黍RuBisCO ssu的轉(zhuǎn)運(yùn)肽，與其編碼序列一起描述于EP 508909A1中。本發(fā)明還涉及轉(zhuǎn)運(yùn)肽-HPro融合蛋白和編碼此類融合蛋白的核酸或可在植物中表達(dá)的嵌合基因，其中該融合蛋白的兩種元件如上文定義。本發(fā)明還涉及克隆、轉(zhuǎn)化和/表達(dá)載體，所述載體含有如上文定義的至少一種嵌合基因。除了上述嵌合基因之外，該載體可含有復(fù)制起點(diǎn)。該載體可以是質(zhì)粒或質(zhì)粒的部分、粘?；蚴删w或病毒(已通過引入根據(jù)本發(fā)明的嵌合基因而經(jīng)過了轉(zhuǎn)化)。轉(zhuǎn)化載體可以是技術(shù)人員公知的，并且被廣為描述于文獻(xiàn)中。可以使用的轉(zhuǎn)化載體(特別是用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或植物的)可以是可用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或植物并且額外含有其自身復(fù)制和表達(dá)元件的病毒。根據(jù)本發(fā)明，用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或植物的載體優(yōu)選是質(zhì)粒，例如卸甲農(nóng)桿菌屬Ti質(zhì)粒。本發(fā)明還涉及下述宿主生物，特別是植物細(xì)胞、種子或植物，其包含含有編碼本發(fā)明HPro蛋白(例如如上文定義的包含SEQ ID Nos 4、5、6或7的氨基酸序列的蛋白)的序列的嵌合基因，以及涉及本發(fā)明的植物或種子在田間的用途，以培養(yǎng)作物和收獲植物產(chǎn)品，例如豆類物種、稻、小麥、大麥或玉米?；蛎尢?，其中在一種實(shí)施方式中，所述用途涉及將HPH)抑制劑型除草劑應(yīng)用于這些植物以控制雜草。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，在此類用途中，HPro抑制劑是三酮類或pyrazolinate，優(yōu)選為環(huán)磺酮、甲基磺草酮、苯吡唑草酮或磺草酮、bicyclopyrone、pyrasulfotole、卩比唑特、卩比草酮和莊無忌，特別是環(huán)橫酮(tembotrione)。因此，本發(fā)明涉及下述宿主生物，特別是植物細(xì)胞、種子或植物，其特征在于其含 有上文所述的至少一種HPro嵌合基因，或者至少含有如前文所述的HPro核酸序列。在一種特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及植物細(xì)胞或植物，其特征在于其至少含有下述核酸序列，所述核酸序列編碼本發(fā)明的HPro蛋白，所述蛋白質(zhì)保留有其催化對羥苯基丙酮酸到尿黑酸的轉(zhuǎn)化的性質(zhì)，并且使得該植物較之相同物種但是不包含本發(fā)明的此類HPH)蛋白的植物而言更為耐受，特別是對三酮類或pyrazolinate優(yōu)選為環(huán)磺酮、甲基磺草酮、苯批唑草酮或磺草酮、bicyclopyrone、pyrasulfotole、批唑特、批草酮和莊無忌，特別是環(huán)磺酮)耐受，并且含有本發(fā)明的HPH)的此類植物對HPH)抑制劑型除草劑(特別是對三酮類或pyrazolinate,優(yōu)選為環(huán)磺酮、甲基磺草酮、苯卩比唑草酮或磺草酮、bicyclopyrone、pyrasulfotole、吡唑特、吡草酮和莊無忌，特別是環(huán)磺酮)具有農(nóng)藝學(xué)可接受的耐受性。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及下述植物細(xì)胞或植物，其特征在于，其至少含有編碼本發(fā)明的HPro的核酸序列，所述HPro保留有其催化對羥苯基丙酮酸到尿黑酸的轉(zhuǎn)化的性質(zhì)并且較之宿主植物內(nèi)源HPro (例如來自擬南芥的HPH)，特別是包含SEQ IDNo. 11的氨基酸序列(從第126位氨基酸至第568位氨基酸)或包含SEQ ID No. 11或SEQID No. 12的氨基酸序列(從第134位氨基酸至第575位氨基酸)的HPH))對HPTO抑制劑較不敏感。在一種特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及下述宿主植物細(xì)胞、種子或宿主植物，其特征在于其至少含有編碼如本文定義的本發(fā)明的HPro的核酸序列，其中本發(fā)明的HPro較之宿主植物內(nèi)源HPH)對異5惡唑類、二酮腈類、三酮類或pyrazolinate的類別的HPTO抑制劑型除草劑(更尤其地，來自異5惡氟草、環(huán)磺酮、甲基磺草酮、磺草酮、pyrasulfotole、bicyclopyrone、莊無忌、苯批唑草酮、2_氰基_3_環(huán)丙基-I-(2-S02CH3-4_CF3苯基)丙_1，3_ 二麗和2_氛基_3_環(huán)丙基-I-(2-S02CH3-4_2，3C12苯基)丙-1，3- 二麗，甚至更特別地，環(huán)磺酮、甲基磺草酮、二酮腈類(diketonitrile)、bicyclopyrone、苯卩比唑草酮、卩比唑特、卩比草酮、磺草酮、莊無忌和pyrasulfotole,最特別地,環(huán)磺酮、甲基磺草酮和bicyclopyrone)更不敏感。在另一特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及下述植物細(xì)胞或植物，其特征在于其至少含有編碼前文所述的本發(fā)明的HPH)的核酸序列，以及還含有包含上文所述的可在植物中表達(dá)的啟動子的嵌合基因，所述啟動子與編碼PHD (預(yù)苯酸脫氫酶)酶的核酸序列有效連接(US 2005/0257283)。本發(fā)明還涉及含有經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的植物，特別是從經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞再生的植物，及其后代植物或種子，它們包含本發(fā)明的嵌合HPro基因。再生可通過任何合適的方法來獲得，所述方法取決于物種的性質(zhì)，如例如在上述參考文獻(xiàn)中描述的。可引用下述專利和專利申請，特別是在轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞和再生植物的方法方面=US 4，459，355、US 4，536，475、US5，464，763、US 5，177，010、US 5，187，073、EP 267，159A1、EP 604662A1、EP 672752A1、US
4,945, 050,US 5, 036, 006,US 5，100, 792,US 5, 371, 014,US 5, 478, 744,US 5, 179, 022,US5，565，346、US 5，484，956、US 5，508，468、US 5，538，877、US 5，554，798、US 5，489，520、US 5, 510, 318,US 5, 204, 253,US 5, 405, 765,EP 442174AUEP 486233AUEP 486234AUEP539563AUEP 674725AUWO 91/02071 和 WO 95/06128。本發(fā)明還涉及通過栽培和/或雜交上述轉(zhuǎn)基因植物獲得的轉(zhuǎn)基因植物或其部分，還涉及轉(zhuǎn)基因植物的種子(包含本發(fā)明的HPro嵌合基因)。本發(fā)明還涉及最終產(chǎn)物，例如從本發(fā)明的植物、其部分或種子獲得的膳食或油。
可根據(jù)本發(fā)明獲得的經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物可以是單子葉類型的，例如小麥、大麥、甘蔗、稻、洋蔥和玉米或玉蜀黍，或者可以是雙子葉類型的，例如煙草、豆類物種、苜蓿、蕓苔屬物種的植物(例如油菜籽油菜)、棉花、甜菜、三葉草、蔬菜等等。本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)化宿主生物(特別是植物細(xì)胞或植物)的方法，這通過在此類生物中整合上文定義的至少一種核酸序列或一種嵌合基因來進(jìn)行，其中可通過任何合適的已知方式獲得轉(zhuǎn)化，所述方式被詳細(xì)描述于專門的文獻(xiàn)以及特別地，本申請?zhí)岬降膮⒖嘉墨I(xiàn)中，例如通過使用根據(jù)本發(fā)明的載體來進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的一種轉(zhuǎn)化方法包括用其上聯(lián)結(jié)有DNA或含有DNA的固體或液體顆粒轟擊細(xì)胞、原生質(zhì)體或組織。另一轉(zhuǎn)化方法包括使用嵌合基因作為轉(zhuǎn)入植物的手段，所述嵌合基因被插入進(jìn)根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒或發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)Ri質(zhì)粒。還可使用其它方法，例如顯微注射或電穿孔或使用PEG的直接基因轉(zhuǎn)移。技術(shù)人員可選擇用于轉(zhuǎn)化選擇的宿主生物(特別是植物細(xì)胞或植物)的任何合適的方法。作為例子，用于大豆轉(zhuǎn)化的技術(shù)已被廣泛描述于EP 1186666A1 (通過引用并入本文)中公開的實(shí)施例I至3中。對于稻，可進(jìn)行農(nóng)桿菌屬介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(Hiei等人，1994Plant J 6:271-282和Hiei 等人，1997Plant Mol Biol. 35:205-21，通過引用并入本文)、電穿孔(US 5, 641, 664和US 5, 679, 558,通過引用并入本文)或轟擊(Christou等人,1991, Biotechnology9:957，通過引用并入本文)。用于轉(zhuǎn)化單子葉植物(特別是稻)的一種合適技術(shù)被描述于WO 92/09696 (通過引用并入本文)中。對于棉花，已經(jīng)描述了農(nóng)桿菌屬介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(GouldJ. H.和 Magallanes-Cedeno M. , 1998Plant Molecular Biology reporter, 16:1-10 和Zapata C. , 1999, Theoretical Applied Genetics, 98 (2) : 1432-2242,通過引用并入本文)、聚凝胺和 / 或處理介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(Sawahel ff. A. , 2001, -Plant Molecular Biologyreporter, 19:377a_377f,通過引用并入本文)。在本發(fā)明的一種特別的實(shí)施方式中，本發(fā)明的HPro被靶向進(jìn)葉綠體。這可通過下述方式來進(jìn)行將編碼轉(zhuǎn)運(yùn)肽的核酸序列融合至編碼本發(fā)明的HPro蛋白的核酸序列，以獲得編碼上文所述的融合蛋白的核酸?；蛘撸墒褂脤|(zhì)體(例如葉綠體基因組)的轉(zhuǎn)化，將本發(fā)明的HPro直接表達(dá)于質(zhì)體(例如葉綠體)中。合適的方法包括通過用涂覆有DNA的固體顆粒或包含DNA的液體顆粒轟擊植物細(xì)胞或組織，以及通過同源重組整合引入的編碼本發(fā)明蛋白的基因。合適的載體和選擇系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的?？捎糜谙驘煵葜参锏娜~綠體基因組的此類整合的方式和方法的例子被給于WO 06/108830中，其內(nèi)容通過引用并入本文。本發(fā)明還涉及用于獲得針對HPro抑制劑的植物的方法，其特征在于用如前文所述的本發(fā)明的嵌合HPro基因轉(zhuǎn)化植物。因此，本發(fā)明還涉及獲得對HPro抑制劑耐受的植物的方法，其特征在于，所述植物含有本發(fā)明的嵌合HPro基因，所述基因包含編碼序列以及位于5’以及任選在3’位置的能在宿主生物中發(fā)揮功能的異源調(diào)控元件，其特征在于，所述編碼序列至少包含定義編碼如前文所述的本發(fā)明的HPro的基因的核酸序列。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，上述方法中的HPF1D抑制劑是三酮或pyrazolinate除草劑，優(yōu)選為環(huán)磺酮、甲基磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌、pyrasulfotole、卩比唑特、二酮腈(diketonitrile)、卩比草酮或磺草酮,特別是環(huán)磺酮。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了用于獲得如上文所述的對HPro抑制劑耐受的植物的方法，其特征在于獲得下述植物，所述植物包含是本發(fā)明的嵌合HPro基因的第一轉(zhuǎn)基因，以及是包含與編碼TOH(預(yù)苯酸脫氫酶)酶的核酸有效連接的可在植物中表達(dá)的啟動子的嵌合基因的第二轉(zhuǎn)基因。包含此類兩種轉(zhuǎn)基因的植物可這樣獲得通過用一種轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)化植物，然后再用第二轉(zhuǎn)基因重轉(zhuǎn)化該轉(zhuǎn)基因植物，或者通過兩種轉(zhuǎn)基因(在相同或兩個不同的轉(zhuǎn)化DNA或載體中)同時(shí)轉(zhuǎn)化植物，或者通過將包含第一轉(zhuǎn)基因的植物與包含第二轉(zhuǎn)基因的植物雜交，這是本領(lǐng)域公知的。本發(fā)明還涉及在將栽種植物或?qū)⒉シN種子的田間、或在植物作物中選擇性除去雜草或預(yù)防雜草發(fā)芽的方法，這通過向此類田間或植物作物應(yīng)用HPro抑制劑，特別是如上文定義的HPro抑制劑型除草劑來實(shí)現(xiàn)，所述方法特征在于，將該HPro抑制劑型除草劑應(yīng)用至已經(jīng)根據(jù)本發(fā)明轉(zhuǎn)化過的植物，這在播種作物之前(下文中命名為栽種前應(yīng)用)、作物出苗之前(下文中命名為出苗前應(yīng)用)或作物出苗之后(下文中命名為出苗后應(yīng)用)進(jìn)行。本發(fā)明還涉及在含有如本發(fā)明前文所述經(jīng)轉(zhuǎn)化的種子的區(qū)域或田間進(jìn)行控制的方法，所述方法包括向所述田間的區(qū)域應(yīng)用對于所述雜草來說是毒性的劑量的HPro抑制劑型除草劑，但是對如本發(fā)明前文所述含有本發(fā)明的HPro核酸或嵌合HPro基因的種子或植物沒有顯著影響。本發(fā)明還涉及栽培已經(jīng)經(jīng)根據(jù)本發(fā)明的嵌合基因轉(zhuǎn)化過的植物的方法，所述方法包括在適于栽種所述植物的田間區(qū)域栽種包含本發(fā)明的嵌合基因的種子，以及如果存在雜草的話，向所述田間的所述區(qū)域應(yīng)用對雜草有毒的劑量的靶標(biāo)為上文定義的HPro的除草齊U，而不顯著影響所述經(jīng)轉(zhuǎn)化的種子或所述經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物，以及然后當(dāng)栽培的植物或植物部分達(dá)到想要的成熟階段時(shí)收獲它們，并且如果合適的話，從收獲的植物分離種子。在上述方法中，其靶標(biāo)是HPro酶的除草劑可以根據(jù)本發(fā)明，在播種作物之前、作物出苗之后或作物出苗之后應(yīng)用。本發(fā)明還涉及獲得油(特別是豆類物種、玉米或棉花油或膳食)的工藝，所述工藝包括種植表達(dá)本發(fā)明的HPro蛋白的作物，特別是豆類物種作物，任選地用HPro抑制劑型除草劑處理此類作物，收獲種粒(grain)并碾磨種粒以制造膳食和提取油。此外，包含本發(fā)明的嵌合基因的種子或種粒(整個的、破裂的或壓碎的)也是本發(fā)明的一部分。因此，本發(fā)明涉及獲得油或膳食的方法，所述方法包括種植如上文所述的經(jīng)轉(zhuǎn)化的植物，任選地，用HPro抑制劑型除草劑處理此類植物，收獲種粒，并碾磨種粒，以制造膳食和提取油。本發(fā)明中還提供了涉及下述HPro抑制劑型除草劑的上述方法，所述除草劑選自異1lS氟草、環(huán)磺酮、甲基磺草酮、pyrasulfotole、磺草酮、bicyclopyrone、莊無忌、苯卩比唑草酮、2-氰基-3-環(huán)丙基-I- (2-甲基磺?；?4-三氟甲基苯基)-丙-1，3- 二酮和2-氰基-1-[4-(甲基磺?；?-2-三氟甲基苯基]-3-(I-甲基環(huán)丙基)丙-1，3-二酮。本文還提供了涉及下述HPH)抑制劑型除草劑的上述方法，所述除草劑是三酮類的類別的，例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮，或pyrazolinate的類別的，例如pyrasulfotole和苯批唑草酮，特別地選自環(huán)橫酮、橫草酮、苯批唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮。在本發(fā)明的含義內(nèi)，“除草劑”被理解為是自身具有除草劑活性的物質(zhì)，或者與改變其效力的添加劑(例如，增加其活性的物質(zhì)(協(xié)同性物質(zhì))或限制其活性的物質(zhì)(安全劑))組合的物質(zhì)。當(dāng)然應(yīng)當(dāng)理解，就它們在實(shí)踐中的應(yīng)用而言，以本身已知的方式將上述除草劑 與慣常用于農(nóng)業(yè)化學(xué)中的配方佐劑組合。HPro抑制劑型除草劑(例如三酮類的類別的那些，例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮,或pyrazolinate的類別的那些,例如pyrasulfotole和苯批唑草酮,特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯批唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮,更特別地,環(huán)磺酮)具有杰出的、針對廣譜的經(jīng)濟(jì)上重要的單子葉和雙子葉一年生有害植物的除草劑活性?；钚晕镔|(zhì)還可高效作用于難以控制的從根莖、木料(wood stocks)或其它多年生器官產(chǎn)生枝條的多年生有害植物。本發(fā)明因此還涉及在包含根據(jù)本發(fā)明的HPro的植物作物中控制不想要的植物或用于調(diào)控植物生長的方法，其中向植物(例如，有害植物，例如單子葉或雙子葉雜草或不想要的作物植物)、向種子(例如種粒、種子或營養(yǎng)繁殖體，例如塊莖或具有蓓蕾的枝條部分)或向種植植物的區(qū)域(例如栽培下的區(qū)域)應(yīng)用三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯卩比唑草酮)的一種或多種HPPD抑制劑型除草劑,特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯批唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮。在該上下文中，三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯卩比唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑，特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮，可例如栽種前(如果合適的話，還通過摻入土壤中來應(yīng)用)、出苗前或出苗后應(yīng)用?？捎萌惖念悇e的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑(特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮)控制的單子葉和雙子葉雜草的各代表由此被提及，但這種提及并不表示僅限某些物種下述屬的單子葉有害植物山羊草屬(Aegilops)、冰草屬(Agropyron)、剪股穎屬(Agrostis)、看麥娘屬(Alopecurus)、Apera、燕麥屬(Avena)、臂形草屬(Brachiaria)、雀麥屬(Bromus)、蔡藜草屬(Cenchrus)、鴨妬草屬(Commelina)、狗牙根屬(Cynodon)、莎草屬(Cyperus)、龍爪茅屬(Dactyloctenium)、馬唐屬(Digitaria)、稗屬(Echinochloa)、荸莽屬(Eleocharis)、幡蜂草屬(Eleusine)、畫眉草屬(Eragrostis)、野粟屬(Eriochloa)、羊茅屬(Festuca)、飄拂草屬(Fimbristylis)、異蕊花屬(Heteranthera)、白茅屬(Imperata)、鴨嘴草屬(Ischaemum)> 千金子屬(Leptochloa)、黑麥草屬(Lolium)、雨久花屬(Monochoria)、粟(Panicum)、雀稗屬(Paspalum)、薦草屬(Phalaris)、牧梯草屬(Phleum)、早熟禾屬(Poa)、筒軸茅屬(Rottboellia)、慈姑屬(Sagittaria)、薦草屬(Scirpus)、狗尾草屬(Setaria)、高粱屬(Sorghum)。下述屬的雙子葉雜草白麻屬(Abutilon)、覓屬(Amaranthus )、豚草屬(Ambrosia)、Anoda、春黃菊屬(Anthemis)、Aphanes、蒿屬(Artemisia)、濱黎屬(Atriplex)、雛菊屬(Beilis)、鬼針草屬(Bidens)、莽屬(Capsella)、飛廉屬(Carduus)、決明屬(Cassia)、矢車菊屬(Centaurea)、藜屬(Chenopodium)、薊屬(Cirsium)、旋花屬(Convolvulus)、曼陀羅屬(Datura)、山螞幢屬(Desmodium)、Emex、糖芥屬(Erysimum)、大戟屬(Euphorbia)、 自瓣花屬(Galeopsis)、牛膝菊屬(Galinsoga)、拉拉藤屬(Galium)、木槿屬(Hibiscus)、蕃薯屬(Ipomoea)、地膚屬(Kochia)、寶蓋草M (Lamium)>獨(dú)行菜屬(Lepidium)、母草屬(Lindernia)、母菊屬(Matricaria)、薄荷屬(Mentha)、山靛屬(Mercurialis)、粟米草屬(Mullugo)、勿忘我屬(Myosotis)、S 粟屬(Papaver)> 牽牛屬(Pharbitis)、車前屬(Plantago)、寥屬(Polygonum)、馬齒覓屬(Portulaca)、毛莨屬(Ranunculus)、蘿卜屬(Raphanus)、揮菜屬(Rorippa)、節(jié)節(jié)菜屬(Rotala)、酸模屬·(Rumex)、豬毛菜屬(Salsola)、千里光屬(Senecio)、田菁屬(Sesbania)、黃花穩(wěn)屬(Sida)、白芥屬(Sinapis)、爺屬(Solanum)、苦苣菜屬(Sonchus)、尖瓣花屬(Sphenoclea)、繁縷屬(Stellaria)、蒲公英屬(Taraxacum)、遏藍(lán)菜屬(Thlaspi)、三葉草屬(Trifolium)、蕁麻屬(Urtica)、婆婆納屬(Veronica)、堇菜屬(Viola)、蒼耳屬(Xanthium)。在包含本發(fā)明的HPPD蛋白、DNA或嵌合基因并且還可顯示出針對不同于HPH)抑制劑型除草劑的除草劑的一種其它除草劑抗性的根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因作物中，在有用的植物和觀賞植物的經(jīng)濟(jì)上重要的轉(zhuǎn)基因作物(例如谷物，例如小麥、大麥、黑麥、燕麥、高粱和粟、稻和玉蜀黍或者甜菜、棉花、豆類物種、油菜籽油菜、馬鈴薯、西紅柿、豌豆的作物和其它蔬菜)中使用三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑,特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯卩比唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮,更特別地,環(huán)磺酮,是優(yōu)選的。因?yàn)槠渖婕芭c本發(fā)明所述的對HPro抑制劑型除草劑的耐受性不同的植物性質(zhì)，產(chǎn)生較之現(xiàn)有植物具有經(jīng)修飾的性質(zhì)的新穎的植物的傳統(tǒng)途徑例如是傳統(tǒng)育種方法和產(chǎn)生突變體。或者，具有經(jīng)修飾的性質(zhì)的新穎的植物可在重組方法協(xié)助下產(chǎn)生(見例如EP-A-0221044A1、EP-A-0131624A1)。例如，下述已被描述于若干情況中-針對修飾在植物中合成的淀粉的目的，對作物植物進(jìn)行重組修飾(例如WO92/11376, WO 92/14827, WO 91/19806)-對某些草銨膦類型(參見例如EP-A-0242236，EP-A-242246)或草甘膦類型(TO92/00377)或磺酰脲類型(EP-A-0257993，US-A-5013659)的除草劑具有抗性的轉(zhuǎn)基因作物植物，-轉(zhuǎn)基因作物植物，例如玉米、棉花或豆類物種，其能產(chǎn)生蘇云金芽孢桿菌毒素(Bt毒素)，或其雜交體或突變體，這使得植物對某些害蟲具有抗性(EP-A-0193259 )，-轉(zhuǎn)基因作物植物，其具有經(jīng)修飾的脂肪酸組成(W091/13972)，
-經(jīng)遺傳修飾的作物植物，其具有新穎的組成成分或次級代謝物，例如新穎的植物抗毒素(phytoalexins)，這帶來了增加的疾病抗性(EPA309862，EPA0464461)，-經(jīng)遺傳修飾的植物，其具有降低的光呼吸，其特點(diǎn)為更高的產(chǎn)量和更高的脅迫耐受性(EPA 0305398)，-產(chǎn)生藥學(xué)上重要或診斷上重要的蛋白的轉(zhuǎn)基因作物植物(“分子制藥”)，-因更高的產(chǎn)量和更高的品質(zhì)而與眾不同的轉(zhuǎn)基因作物植物，-因新穎的性質(zhì)的組合(例如上述新穎的性質(zhì)的組合)(“基因堆疊”)而與眾不同的轉(zhuǎn)基因作物植物?？捎脕懋a(chǎn)生具有經(jīng)修飾的性質(zhì)的新穎的轉(zhuǎn)基因植物的大量分子生物學(xué)技術(shù)原則上是已知的，例如 I. Potrykus 和 G. Spangenberg(編著)Gene Transfer toPlants, Springer Lab Manual(1995), Springer Verlag Berlin,Heidelberg, 或 Christou, "Trends in Plant Science"l (1996)423-431)。為進(jìn)行此類重組操作，可將核酸分子引入質(zhì)粒，這允許通過對DNA序列加以重組來進(jìn)行誘變或序列修飾。例如，可在標(biāo)準(zhǔn)方法的協(xié)助下，進(jìn)行堿基取代，除去部分-序列，或添加天然或合成的序列。為將DNA片段互相連接起來，可向片段添加連接物或接頭；見，例如 Sambrook 等人，1989，Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2. ed. , Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY;或Winnacker〃Gene und Klone〃，VCHWeinheim 2. ed. , 1996。可例如通過下述方式來產(chǎn)生具有針對基因產(chǎn)物的降低的活性的植物細(xì)胞通過表達(dá)至少一種相應(yīng)的反義RNA、用于獲得共遏制效果的正義RNA或者形成雙鏈沉默RNA分子(RNAi)的反義和正義RNA 二者的組合，或者通過表達(dá)至少一種相應(yīng)構(gòu)建的核酶(其特異性切割上述基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄本)來實(shí)現(xiàn)。為實(shí)現(xiàn)此，可首先使用包含基因產(chǎn)物的全部編碼序列(包括可能存在的任何側(cè)翼序列)的DNA分子，或者僅包含編碼序列中的部分的DNA分子，其中這些部分必須要足夠長到能在細(xì)胞中帶來反義效果。還可使用具有與基因產(chǎn)物的編碼序列具有高同源性程度但是并非完全相同的DNA序列。當(dāng)在植物中表達(dá)核酸分子時(shí)，獲得的蛋白可被定位于植物細(xì)胞的任何區(qū)室。但是，為了實(shí)現(xiàn)在特別的區(qū)室中的定位，可例如將編碼區(qū)域與確保在特定區(qū)室中定位的DNA序列連接起來。此類序列是技術(shù)人員已知的(見例如Braun等人，EMBO J. 11 (1992)，3219-3227;Wolter 等人，Proc.Natl. Acad. Sci. USA
85(1988) ,846-850; Sonnewald 等人，Plant J. I (1991)，95-106)。但是，核酸分子還可表達(dá)于植物細(xì)胞的細(xì)胞器中。可通過已知的技術(shù)來再生轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，以產(chǎn)生完整植物。原則上，轉(zhuǎn)基因植物可以是任何植物物種的植物，包括單子葉或雙子葉植物。因此，可獲得下述轉(zhuǎn)基因植物，除了具有本發(fā)明的嵌合HPro基因之外，所述植物還具有同源(=天然)基因或基因序列的過表達(dá)、遏制或抑制或異源(=外來)基因或基因序列的表達(dá)導(dǎo)致的經(jīng)修飾的性質(zhì)。在本發(fā)明的植物、植物細(xì)胞或種子上，優(yōu)選在還對生長調(diào)控因子(例如2，4-D或麥草畏)或?qū)σ种票匾闹参锩?例如乙酰乳酸合酶(ALS)、EPSP合酶或谷氨酰胺合酶(GS))的除草劑或?qū)碜曰酋ｋ?、草甘膦或草銨膦和類似活性物質(zhì)的組的除草劑有抗性的轉(zhuǎn)基因作物中使用三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑,特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯批唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮,更特別地,環(huán)磺酮。本發(fā)明因此還涉及應(yīng)用到根據(jù)本發(fā)明的HPro耐受性植物上的除草劑的用途，用于控制有害植物(即雜草)，其還延伸至除了包含對三酮類的類別(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)、異唑類的類別(例如異5惡氟草)或pyrazoI inate的類別(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑(特別地，選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯批唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮)的抗性之外還包含第二或更多種除草劑抗性的轉(zhuǎn)基因作物植物。三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯批唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑,特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮，可用于可潤濕粉末、可乳化濃縮物、可噴霧溶液、粉劑(dusts)或顆粒劑形式的慣常制劑。 取決于主要生物和/或物理化學(xué)參數(shù)，可以以多種途徑來配制三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯吡唑草酮)的HPH)抑制劑型除草劑，特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮?？赡艿闹苿┑睦邮强蓾裥苑?WP)、水溶性粉(SP)、水溶性濃縮物、可乳化濃縮物(EC)、乳劑(EW)(例如水包油或油包水的乳劑)、可噴霧溶液、懸浮濃縮物(SC)、基于油或水的分散液、混合油劑溶液、膠囊懸浮液(CS)、粉劑(DP)、拌種(seed dressing)產(chǎn)品、通過播種和在土壤上使用的顆粒劑、微顆粒形式的顆粒劑(GR)、噴霧顆粒體、包被的顆粒劑和吸附顆粒劑、水分散顆粒劑(WG)、水溶性顆粒劑(SG)、ULV制劑、微膠囊和蠟。上述各個制劑類型原則上是已知的，并在例如Winnacker-Kiichler, "ChemischeTechnologie"[Chemical technology],第 7 卷,C. Hanser Verlag Munich,第 4版.1986;Wade van Valkenburg, "Pesticide Formulations",Marcel Dekker, N.Y. , 1973; K. Martens, "Spray Drying"Handbook,第 3 版· 1979, G. Goodwin Ltd. London 中描述。需要的制劑輔助劑，例如惰性材料、表面活性劑、溶劑和其他添加劑也是已知的并在例如 Watkins, "Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers'第 2 版,Darland Books, CaldwelI N. J.,H.v.Olphen, ^Introduction to ClayColloid Chemistry";第 2 版,J. ffiley&Sons, N. Y. ;C. Marsden, "Solvents Guide";第 2 版，Interscience,Ν·Υ·1963;McCutcheon’s〃Detergents and EmulsifiersAnnual MC Publ. Corp. , Ridgewood N. J. ;Sisley 和 Wood, "Encyclopediaof Surface Active Agents", Chem. Publ. Co. Inc.，N. Y. 1964 ; Schoilieli.lt,
ffGrenzfliclieiiaktlveAtIiyIeiOlidad(IUkte'f [Interface-active ethylene oxideadducts]，Wiss. VerlagsgeselI.，Stuttgart 1976;Winnacker-Kiichlerj^ChemischeTechnologie^ [Chemical technology],第 7 卷，C. Hanser Verlag Munich,第 4 片反 1986 中描述?；谶@些制劑，可與其他殺蟲活性物質(zhì)比如，例如殺蟲劑、殺螨劑、除草劑、殺真菌劑以及與安全劑、肥料和/或生長調(diào)控因子組合制備，例如以預(yù)混(ready mix)或罐混(tank mix)的形式?？蓾裥苑凼窃诳稍谒芯鶆蚍稚⒌闹苿⑶移涑嘶钚晕镔|(zhì)，也包含離子和/或非離子表面活性劑(濕潤劑、分散劑)，例如除了稀釋劑或惰性物質(zhì)，包含聚氧乙烯化的烷基酚、聚氧乙烯化的脂肪醇、聚氧乙烯化的脂肪胺、脂肪醇聚乙二醇醚硫酸鹽、烷烴磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、木質(zhì)素磺酸鈉、2，2’- 二萘基甲烷-6，6’- 二磺酸鈉、二丁基萘磺酸鈉或油?；谆；撬徕c。為了制備可潤性粉，除草活性物質(zhì)被精細(xì)碾磨，例如在慣常儀器如錘式粉碎機(jī)、鼓風(fēng)粉碎機(jī)和噴射粉碎機(jī)中，并與制劑輔助劑同時(shí)或隨后混合?？扇榛瘽饪s物是通過將活性物質(zhì)溶解在有機(jī)溶劑(例如丁醇、環(huán)己烷、二甲基甲酰胺、二甲苯或其他高沸點(diǎn)芳香族或烴，或者有機(jī)溶劑的混合物)中然后添加一種或多種離子和/或非離子表面活性劑(乳化劑)來制備的。可使用的乳化劑的實(shí)例是烷基芳基磺酸鈣例如十二烷基苯磺酸鈣，或非離子乳化劑例如脂肪酸聚乙二醇酯、烷基芳基聚乙二醇醚、月旨肪醇聚乙二醇醚、環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷縮合物、烷基聚醚、山梨聚糖酯比如，例如山梨聚糖脂肪酸酯或聚氧乙烯山梨聚糖酯比如，例如聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯。 粉劑是通過用精細(xì)分割的固體材料(比如，例如滑石、天然粘土例如高嶺土、皂土和葉蠟石或硅藻土)碾磨活性物質(zhì)獲得的。懸浮濃縮物可以是基于水或基于油的。它們可以通過例如市售球磨機(jī)的方法濕磨制備，如果適當(dāng)，添加例如上文已經(jīng)在其他制劑類型中列出的表面活性劑。乳劑，例如水包油的乳劑(EW)可以通過例如攪拌器、膠體磨和/或靜態(tài)混合器的方法用水性有機(jī)溶劑制備，如果適當(dāng)，添加例如上文已經(jīng)在其他制劑類型中列出的表面活性劑?？梢酝ㄟ^將活性物質(zhì)噴霧到吸附性的、顆粒化的惰性材料上，或者在粘合劑(例如聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉或礦物油)的幫助下將活性物質(zhì)濃縮物施用于載劑(例如沙、高嶺土或顆?；亩栊圆牧?表面來制備顆粒劑。適當(dāng)?shù)幕钚晕镔|(zhì)也能夠以慣常用于生產(chǎn)肥料顆粒的方法顆?；绻枰?，作為與肥料的混合物。水分散顆粒劑通常是通過慣常方法(例如噴霧干燥、流化床造粒、圓盤造粒、用高速攪拌器混合以及在沒有固體惰性材料下擠壓)制備的。為制備圓盤顆粒、流化床顆粒、擠壓顆粒和噴霧顆粒，參見例如"Spray-DryingHandbook"第 3 版 1979,G. Goodwin Ltd.，London;J. E. Browning, "Agglomeration", Chemical and Engineering 1967,第 147 頁及以下等· ； 〃Perry’s Chemical Engineer’sHandbook",第 5 版，McGraw-Hill, New York 1973,第 8-57 頁中的方法。關(guān)于作物保護(hù)產(chǎn)品制劑的進(jìn)一步詳情，參見例如G. C. Klingman, "WeedControl as a Science", John Wiley and Sons, Inc. , New York,1961,第 81-96 頁和J.D. Freyer, S. A. Evans, ^ffeed Control Handbook",第 5 版,Blackwell ScientificPublications, Oxford, 1968,第 101-103 頁。通常，農(nóng)業(yè)化學(xué)制劑包含按重量計(jì)從O. 1%至99%，特別是按重量計(jì)從O. 1%至95%的根據(jù)本發(fā)明的化合物。在可濕性粉中，活性物質(zhì)濃度是，例如按重量計(jì)約10至90%，按重量計(jì)、到100%的其余部分由慣常制劑組分組成。在可乳化濃縮物的情況下，活性物質(zhì)濃度按重量計(jì)可總計(jì)約I至90，優(yōu)選地5至80%。粉劑形式的制劑包含按重量計(jì)從I至30%的活性物質(zhì)，優(yōu)選地在大多數(shù)情況下為按重量計(jì)從5至20%的活性物質(zhì)，可噴霧溶液包含按重量計(jì)約從O. 05至80，優(yōu)選地從2至50%的活性物質(zhì)。在水分散顆粒劑的情況下，活性物質(zhì)含量部分取決于活性化合物是液體或是固體形式，以及使用的造粒輔助劑、填充劑等。例如在水分散顆粒劑的情況下，活性物質(zhì)含量在按重量計(jì)I至95%之間，優(yōu)選地按重量計(jì)10至80%之間。此外，如果適當(dāng)，所述活性物質(zhì)制劑包含每種情況下常規(guī)的輔助劑，例如粘合劑、濕潤劑、分散劑、乳化劑、滲透劑、防腐劑、防凍劑、溶劑、填充劑、載劑、著色劑、消泡劑、蒸發(fā)抑制劑以及PH和粘度調(diào)節(jié)劑。基于這些制劑，還可制備三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinates的類別的(例如pyrasulfotole和苯卩比唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑(特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮)與其它殺蟲活性物質(zhì)(例如殺昆蟲劑、殺螨劑、除草劑、殺真菌劑)以及與安全劑、肥料和/或生長調(diào)控因子的組合，例如以將應(yīng)用到根據(jù)本發(fā)明的HPH)耐受性植物上的預(yù)混劑或 罐混劑的形式。在混合的制劑或者在罐混劑中，可與三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinate的類別的(例如pyrasulfotole和苯卩比唑草酮)的HPF1D抑制劑型除草劑(特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地，環(huán)磺酮)組合應(yīng)用至根據(jù)本發(fā)明的HPH)耐受性植物的活性物質(zhì)是，例如，基于對乙酰乳酸核酶、乙酰-Cok羧化酶、纖維素合酶、烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶(enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase)、谷氨酰胺合成酶、對輕苯基丙酮酸雙加氧酶、八氫番茄紅素去飽和酶、光合體系I、光合體系II、原卟啉原氧化酶的抑制的已知活性物質(zhì)，如例如 Weed Research 26 (1986) 441-445 或"The Pesticide Manual", 14 版，The BritishCropProtection Council and the Royal Soc. of Chemistry, 2003和其中引用的文獻(xiàn)中所述?？膳c根據(jù)本發(fā)明的化合物組合的已知除草劑或植物生長調(diào)控因子是，例如，下述活性物質(zhì)(根據(jù) International Organization for Standardization (ISO)通過通用名命名的或通過化學(xué)名命名的化合物，如果合適的話，與編號一起)，并且總是包含所有使用形式，例如酸、鹽、酯和異構(gòu)體，例如立體異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體。在本文上下文中，通過舉例的方式提到了一種以及在某些情況下若干種使用形式乙草胺(acetochlor)、阿拉酸式苯(acibenzolar)、阿拉酸式苯-S-甲基、三氟羧草醚(acif luorfen)、三氟羧草醚鈉(acif luorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、甲草胺(alachlor)、二丙烯草胺(allidochlor)、禾草滅(alloxydim)、禾草滅鈉(alloxydim-sodium)、莠滅凈(ametryne)、氨唑草酮(amicarbazone)、先甲草胺(amidochlor)、 t^i |||^(amidosulfuron)、aminocycIopyrachlor> aminopyralid、殺草強(qiáng)(amitrole)、氨基橫酸銨(ammonium sulfamate)、環(huán)丙卩密卩定醇(ancymidol)、莎稗憐(已11；[10；1^08)、黃草靈(381113111)、阿特拉津(31:以2；[116)、唑唳塊草(azaf enidin)、四唑卩密橫隆(azimsulfuron)> 疊氮津(aziprotryne)、BAH-043、BAS-140H、BAS-693H、BAS-714H、BAS-762H、BAS-776H、BAS-800H、氟丁酸草胺(bef lubutamid)、草除靈(benazolin)、乙基草除靈(benazoIin-ethyl )、bencarbazone、氟草胺(benfluralin)、呋草黃(benfuresate)、地散憐(bensulide)、甲基節(jié)卩密黃隆(bensulfuron-methyl )、苯達(dá)松(bentazone)、雙苯喃草酮(benzfendizone)、雙環(huán)橫草酮(benzobicyclon)、卩比草酮(benzofenap)、氟橫胺草(benzofluor)、benzoyIprop、甲羧除草醚(bifenox)、雙丙氨酰膦(bilanafos)、雙丙氨酰膦鈉鹽(bilanafos-sodium)、雙啼苯甲酸(bispyribac)、雙啼苯甲酸鈉鹽(bispyribac-sodium)、除草定(bromacil)、溴丁酸草胺(bromobutide)、溴酌·月虧(bromofenoxim)、溴苯臆(bromoxynil)、bromuron、buminafos、輕草酮(busoxinone)、丁草胺(butachlor)、氟丙啼草酯(butafenacil)、抑草磷(butamifos)、丁烯草胺(butenachlor)、仲丁靈(butralin)、丁氧環(huán)酮(butroxydim)、丁草敵(butylate)、唑草胺(cafenstrole)、雙酸草胺(carbetamide)、唑草酮(carfentrazone)、唑酮草乙酯(carfentrazone-ethyl)λ 甲氧除草醚(chlomethoxyfen)、草滅平(chloramben)、chlorazifop、chlorazifop-butyK 氯溴隆(chlorbromuron)、氯草靈(chlorbufam)、伐草克(chlorfenac)、伐草克鈉(chlorfenac-sodium)、燕麥酯(chlorfenprop)、整形醇(chlorfIurenol)、甲基整形醇(chlorfIurenoΙ-methyl)、氯草敏(chloridazon)、氯啼橫隆(chlorimuron)、氯啼磺隆乙酯(chlorimuron-ethyl)、矮壯素 (chlormequat-chloride)、草枯醚(chlornitrofen)、chlorophthalim,舌夂草索二甲酉旨(chlorthal-dimethyl )、綠麥隆(chlorotoluron)、氯石黃隆(chlorsulfuron)、c ini don、口引哚酮草酯(cinidon-ethyl)、環(huán)庚草醚(cinmethylin)、醚橫隆(cinosulfuron)、烯草酮(clethodim)、塊草酸(clodinafop)、塊草酯(clodinafop-propargyl)、苯嗪(clofencet)、廣滅靈(clomazone)、氯甲酸草胺(clomeprop)、調(diào)果酸(cloprop)、克草立特(clopyralid)、cloransulam、cloransulam-methyl、節(jié)草隆(cumyluron)、氨基氰(cyanamide)、氰草津(cyanazine)、環(huán)丙酸酸胺(eye Iani Iide )、草滅特(eye Ioate )、環(huán)橫隆(cyclosulfamuron)、噻草酮(eyeIoxydim)、環(huán)莠隆(eyeIuron)、cyhalofop、氰氟草酯(cyhalofop-butyl)、牧草快(cyperquat)、環(huán)丙津(cyprazine)、三環(huán)塞草胺(cyprazole)、2，4_D、2，4-DBλ 殺草隆(daimuron/dymron)、茅草枯(dalapon)、丁酸餅(daminozide)、棉隆(dazomet)、正癸醇(n-decanol)、甜菜安(desmedipham)、敵草凈(desmetryn)、detosyl-pyrazolate (DTP)、燕麥敵(di-allate)、麥草畏(dicamba)、敵草臆(dichlobenil)、滴丙酸(dichlorprop)、2、4_ 滴丙酸(dichlorprop-P)、二氯苯氧基丙酸((!![(^ ^^口乂禾草靈^化“化口巧^也乂丨乂二氯苯氧基丙酸-P-甲基(diclofop-P-methyl)、雙氯磺草安(diclosulam)、 diethatyl、乙酰甲草胺(diethatyl-ethyl)、枯莠隆(difenoxuron)、野燕枯(difenzoquat)、卩比氟草胺(diflufenican)、二氟卩比隆(diflufenzopyr)、二氟卩比隆鈉(diflufenzopyr-sodium)、惡唑隆(dimefuron)、敵草克(dikegulac-sodium)、惡唑隆、哌草丹(dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、異戊乙凈(dimethametryn)、二甲噻草胺(dimethenamid)、二甲噻草胺-P (dimethenamid-P)、噻節(jié)因(dimethipin)、醚黃隆(dimetrasulfuron)、氨氟靈(dinitramine)、達(dá)諾殺(dinoseb)、特樂酷(dinoterb)、草乃敵(diphenamid)、異丙凈(dipropetryn)、敵草快(diquat)、敵草快二 溴化物(diquat-dibromide)、氟硫草定(dithiopyr)、敵草隆(diuron)、二硝酷(DNOC)λ eglinazine-ethyI、茵多酸(endothal)、茵草敵(EPTC)、禾草畏(esprocarb)、乙丁烯氟靈(ethalf luralin)、甲基胺苯橫隆(ethametsulfuron-methyl )、乙烯利(ethephon)、磺噻隆(ethidimuron)、乙嗪草酮(ethiozin)、乙氧呋草黃(ethofumesate)、氯氟草醚(θ ΗοχυΓθπ)λΜΜ￥ (ethoxyfen-ethyl )λ 乙氧啼石黃隆(ethoxysulfuron)、etobenzanid、F-5331 即 N- [2-氯-4-氟-5- [4- (3-氟-丙基)-4，5- 二氫-5-氧-IH-四唑-I-基]-苯基]乙基磺酰胺、涕丙酸(fenoprop)、惡唑禾草靈(fenoxaprop)、惡唑禾草靈-P、惡唑禾草靈乙酯(fenoxaprop-ethyl)、精惡唑禾草靈乙酯(fenoxaprop-P-ethyl)、四唑酰草胺(fentrazamide)、非草隆(fenuron)、麥草伏(flamprop)、高效麥草伏異丙酯(flamprop-M-isopropyl)λ 高效麥草伏甲酯(flamprop-M-methyl)、卩定啼橫隆(flazasulfuron)、雙氟磺草胺(florasulam)、卩比氟樂草靈(f Iuaz if op)、卩比氟樂草靈-P(fluazifop-P)、卩比氟禾草靈([1皿21[>0^-131^71)、精卩比氟禾草靈([1皿21[>0^- -131^71)、異丙批;草酯(f luazolate)、氟唑橫隆(f Iucarbazone)、氟唑橫隆鈉(flucarbazone-sodium)、氟卩比磺隆(flucetosulfuron)、氯乙氟靈(fluchloralin)、氟噻草胺(flufenacet (thiafIuamide))、氟 PJi嗪(fIufenpyr)、氟 PJi嗪乙酯(flufenpyr-ethyl)、氟節(jié)胺(flumetralin)、唑啼石黃草胺(flumetsulam)、flumiclorac、flumiclorac-pentyl、丙炔氟草胺(flumioxazin)、flumipropyn、伏草隆(fluometuron)、三氟硝草醚(fluorodifen)、氟草醚(fluoroglycofen)、乙羧氟草醚(fluoroglycofen-ethyl)、氟胺草 唑(flupoxam)、fIupropaciI、四氟丙酸(fIupropanate)、氟卩定啼橫隆(fIupyrsulfuron)、氟卩定啼磺隆-甲基-鈉、抑草丁(flurenol)、丁基抑草丁(flurenol-butyl)、氟卩定草酮(fluridone)、氟草卩比酮(flurochloridone)、氟草煙(fluroxypyr)、氯氟卩比氧乙酸(fluroxypyr-meptyl)、呋啼醇(flurprimidol)、呋草酮(fIurtamone)、嗪草酸(fIuthiacet)、嗪草酸甲酯(fluthiacet-methyl)、氟唑草胺(fIuthiamide)、氟磺胺草醚(fomesafen)、甲酸胺橫隆(foramsulfuron)、調(diào)卩比服(forchlorfenuron)、殺木勝(fosamine)、呋氧草醚(furyloxyfen)、赤霉烯酸(gibberellic acid)、草銨勝(gluf os inate)、L-草銨勝(L-gluf os inate)、L-固殺草(L-glufosinate-ammonium)、固殺草(glufosinate-ammonium)、草甘膦(glyphosate)、草甘膦異丙基銨(glyphosate—isopropy lammonium)、H_920 l、halosaf en、PltM 胃 1 (halosulfuron)、PltM 胃隆-甲基(halosulfuron-methyl)、卩比氟氯禾靈(haloxyfop)、卩比氟氯禾靈-P(haloxyfop-P)、卩比氟氯禾靈-乙氧乙基(haloxyfop-ethoxyethyl)、卩比氟氯禾靈-P-乙氧乙基(haloxyfop-P-ethoxyethyl)、卩比氟氯禾靈-甲基(haloxyfop-methyl)、卩比氟氯禾靈-P-甲基(haloxyfop-P-methyl)、環(huán)嗪酮(hexazinone)、HNPC-9908、H0K-201、麗_02、咪草酸(imazamethabenz)、咪草甲酯(imazamethabenz-methyl)、甲氧咪(imazamox)、甲咪唑煙酸(imazapic)、滅草煙(imazapyr)、滅草喹(imazaquin)、咪草煙(imazethapyr)、唑卩比啼磺隆(imazosulfuron)、抗倒胺(inabenfide)、節(jié)草酮(indanofan)、口引哚基醋酸(indoleacetic acid) (IAA)、4_ 口引哚 _3_ 基丁酸(IBA)、碘橫隆(iodosulfuron)、甲基碘石黃隆鈉(iodosulfuron-methyl-sodium)、碘苯臆(ioxynil )、草特靈(isocarbamid)、異丙樂靈(isopropalin)、異丙隆(isoproturon)、異惡隆(isouron)、異惡酰草胺(isoxaben)、異惡氯草酮(isoxachlortole)、異氟草、惡草醚(isoxapyrifop)、KUH-043、KUH-071、隆草特(karbutilate)、ketospiradox、乳氟樂草靈(lactofen)、環(huán)草定(lenacil)、利谷隆(linuron)、馬來酰肼(maleic hydrazide)、MCPA、MCPB、MCPB-甲基、MCPB-乙基和MCPB-鈉、mecoprop、mecoprop-sodium、mecoprop-butotyl、mecoprop-P-butotyl、mecoprop-P- 二甲基銨、mecoprop-P-2-乙基己基、mecoprop-P-鉀、苯噻草胺(mefenacet)、氟磺酰草胺(mef luidide)、縮節(jié)胺(mepiquat-chloride)、磺胺磺隆(mesosulfuron)、甲磺胺磺隆(mesosulfuron-methyl )λ 甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、威百畝(metam)、惡唑酸草胺(metamifop)、苯嗪草酮(metamitron)、卩比唑草胺(metazachlor)、滅草定(methazole)、去草酮(methoxyphenone)、甲基殺草隆(methyldymron)、I-甲基-環(huán)丙烯、甲基異硫氰酸鹽(methyl isothiocyanate)、卩比喃隆(metobenzuron)、卩比喃隆、溴谷隆(metobromuron)、異丙甲草胺(metolachlor)、S-異丙甲草胺(S-metolachlor)、橫草唑胺(metosulam)、甲氧隆(metoxuron)、嗪草酮(11^1'；!_13112；!_11)、石黃隆(11^8111[\11'011)、甲石黃隆(metsulfuron-methyl)、草達(dá)滅(molinate)、庚酸草胺(monalide)、monocarbamide、monocarbamide 二氫硫酸鹽、綠谷隆(monolinuron)、單啼橫隆(monosulfuron)、滅草隆(monuron)、MT 128、MT-5950 即N-[3-氯-4-(1-甲基乙基)-苯基]-2-甲基戊酰胺、NGGC-011、萘丙胺(naproanilide)、敵草胺(napropamide)、萘草胺(naptalam)、NC_310 即 4_(2，4_二氯苯甲?；?_1_ 甲基-5-節(jié)基氧卩比唑、草不隆(neburon)、煙啼磺隆(nicosulfuron)、氟氯草胺(nipyraclofen)、 甲磺樂靈(nitralin)、除草醚(nitrofen)、硝酷鈉(nitrophenolat-sodium)(異構(gòu)混合體)、三氟甲草醚(nitrofluorfen)、正壬酸(nonanoic acid)、氟草敏(norflurazon)、攔草凈(orbencarb)、啼苯胺橫隆(orthosulfamuron)、氨橫樂靈(oryzalin)、農(nóng)思它(oxadiargyl)、惡草靈(oxadiazon)、環(huán)氧啼橫隆(oxasulfuron)、惡嗪草酮(oxazicIomefone)λ 乙氧氟草醚(oxyfluorfen)、paclobutrazole、百草枯(paraquat)、百草枯二氯化物(paraquat dichloride)、正壬酸(pelargonic acid(nonanoic acid))、二甲戊樂靈(pendimethalin)、pendralin、五氟磺草胺(penoxsulam)、甲氯酰草胺(pentanochlor)、環(huán)戊惡草酮(pentoxazone)、黃草伏(perfluidone)、烯草胺(pethoxamid)、棉胺寧(phenisopham)、苯敵草(phenmedipham)、苯敵草-乙酉旨(phenmedipham-ethyl)、毒莠定(picloram)、氟卩比酉先草胺(picolinafen)、唑啉草酯(pinoxaden)、哌草 憐(piperophos)、pirifenop、pirifenop- 丁基、丙草胺(pretiIachlor)、氟啼橫隆(primisulfuron)、甲基氟啼橫隆(primisulfuron-methyl )、噻菌靈(probenazole)、氟唑草胺(profIuazol)、環(huán)丙腈津(procyazine)、氨氟樂靈(prodiamine)、prif luraline、環(huán)笨草酮(profoxydim)、調(diào)環(huán)酸(prohexadione)、調(diào)環(huán)酸隹丐(prohexadione—calcium)、prohydrojasmone、撲滅通(prometon)、撲草凈(prometryn)、毒草胺(propachlor)、敵稗(propanil)、惡草酸(propaquizafop)、撲滅津(propazine)、苯胺靈(propham)、異丙草胺(propisochlor)、丙苯磺隆(propoxycarbazone)、丙苯磺隆鈉(propoxycarbazone-sodium)、塊苯酉先草胺(propyzamide)、甲硫石黃樂靈(prosulfalin)、節(jié)草丹(prosulfocarb)、氟磺隆(prosulfuron)、丙炔草胺(prynachlor)、雙唑草腈(pyraclonil)、批草醚(pyraflufen)、P比草醚-乙基(pyraflufen-ethyl)、批唑特(pyrazolynate, pyrazolate)、P比啼黃隆(pyrazosulfuron-ethyl)、節(jié)草唑、pyribambenz、pyribambenz-異丙基、啼卩定月虧草醚(pyribenzoxim)、稗草丹(pyributicarb)、pyridafol、PJi草特(pyridate)、環(huán)酯草醚(pyriftalid)、啼草醚(pyriminobac)、甲基啼草醚(pyriminobac-methyl)λ pyrimisulfan、啼草硫醚(pyrithiobac)、啼草硫醚鈉(pyrithiobac-sodium)、pyroxasulfone、甲氧橫草胺(pyroxsulam)、二氯喹啉酸(quinclorac)、氯甲喹啉酸(quinmerac)、滅藻醌(quinoclamine)、精喹禾靈(quizalofop)、精喹禾靈-乙基(quizalofop-ethyl)、精喹禾靈-P (quizalofop-P)、精喹禾靈-P-乙基(quizalofop-P-ethyl)、喹禾糖酯(quizalofop-P-tefuryl)、諷啼磺隆(rimsulfuron)、苯啼橫草胺(saf Iufenacil )、密草通(secbumeton)、稀禾定(sethoxydim)、環(huán)草隆(siduron)、西瑪津(simazine)、西草凈(simetryn)、SN-106279、sulf-allate (CDEC)、甲橫草胺(sulfentrazone)、啼橫隆(sulfometuron)、甲啼橫隆(sulfometuron-methyl)λ 草硫勝(sulfosate)(草甘勝-trimesium)、橫酸橫隆(sulfosulfuron)、SYN-523、SYP-249、SYP-298、SYP-300、牧草胺(tebutam)、丁噻隆(tebuthiuron)、四氯硝基苯(tecnazene)、卩比喃草酮(tepraloxydim)、特草定(terbacil )、特草靈(terbucarb)、特丁草胺(terbuchlor)、特丁 通(terbumeton)、特丁津(terbuthyIazine)λ 特丁 凈(terbutryne)、ΤΗ-547、甲氧噻草胺(thenylchlor)、thiaf luamide、噻氟隆(thiazaf Iuron)、噻草唳(thiazopyr)、噻二唑草胺(thidiazimin)、噻苯隆(thidiazuron)、酮服橫草吩(thiencarbazone)、酮服橫草吩甲酯(thiencarbazone-methyl)λ 噻橫隆(thifensulfuron)、噻吩橫隆-甲基(thifensulfuron-methyl)λ 禾草丹(thiobencarb)、仲草丹(tiocarbazil)、甲黃隆對(tralkoxydim)、野麥畏(tri-allate)、醚苯磺隆(triasulfuron)、三嗪氟草胺(triaziflam)、triazofenamide、苯石黃隆(tribenuron)、苯石黃隆-甲基(tribenuron-methyl)、三氯乙酸(trichloroacetic acid) (TCA)、綠草定(trielopyr)、滅草環(huán)(tridiphane)、草達(dá)津(trietazine)、三氟卩定磺隆(trifloxysulfuron)、三氟卩定磺隆鈉(trif loxysulfuron-sodium)、氟樂靈(trif 1υΓΒ ιη)Λ Γ Γ_ 甲基(triflusulfuron-methyl)、 三甲 隆(trimeturon)、 trinexapac、 抗倒 酉旨·(trinexapac-ethyl)、三氟甲石黃隆(tritosulfuron)、tsitodef、烯效唑(uniconazole)、烯效唑-P (uniconazole-P)、滅草敵(vernolate)、ZJ-0166、ZJ-0270、ZJ-0543、ZJ-0862 和下
述化合物
O。廣O O
“人 N 、
OF
V OfH/ OH ^0/S%
EtO2CCH2O3°
O H3O H3C CH
湖
/ OI ο
3SO2-^X
CHS將要被應(yīng)用到種植了根據(jù)本發(fā)明的HPro耐受性植物的區(qū)域的、三酮類的類別的(例如環(huán)磺酮、磺草酮和甲基磺草酮)或pyrazolinates的類別的(例如pyrasulfotole和苯吡唑草酮)的HPro抑制劑型除草劑(特別地選自環(huán)磺酮、磺草酮、苯吡唑草酮、bicyclopyrone、莊無忌和甲基磺草酮，更特別地,環(huán)磺酮)所需的應(yīng)用速率作為外部條件(例如溫度、濕度、使用的除草劑的性質(zhì)等等)的函數(shù)變動。其可在寬的限度內(nèi)變動，例如O. 001至I. Okg/公頃及更多的活性物質(zhì)，但是其優(yōu)選在O. 005至750g/公頃之間。在HPro抑制劑型除草劑與不同于HPro抑制劑型除草劑的除草劑組合應(yīng)用到根據(jù)本發(fā)明的HPro耐受性植物的情況下，這些化合物可導(dǎo)致作物損傷(基于非HPro抑制劑型除草劑的存在)。為降低/除掉此類作物損傷，可添加合適的安全劑。這些以解毒(antidotically)活性量使用的安全劑降低了例如，在經(jīng)濟(jì)上重要的作物中所用的除草劑/殺蟲劑的植物毒性副作用，，所述作物為例如谷物(小麥、大麥、黑麥、玉米玉米、水稻、粟)、苜蓿、甜菜、甘蔗、油菜籽、棉花和豆類物種中，優(yōu)選地，在玉米、棉花、甜菜或豆類物種中。安全劑優(yōu)選選自下述物質(zhì)構(gòu)成的組
A)式(S-I)的化合物
權(quán)利要求
1.包含與可在植物中表達(dá)的啟動子有效連接的編碼序列的嵌合基因，其特征在于所述編碼序列包含編碼Kordia羥苯基丙酮酸二加氧酶(HPro)蛋白或與Kordia HPPD蛋白具有至少75%序列同一性的蛋白的核酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的嵌合基因，其特征在于HPH)蛋白是Kordiaalgicida HPTO蛋白或與Kordia algicida HPF1D蛋白具有至少75%序列同一性的蛋白。
3.權(quán)利要求I或2的嵌合基因，其中編碼所述蛋白的DNA可通過使用至少20個核苷酸的引物或探針從Kordia DNA獲得，所述引物或探針與SEQ ID No. I的DNA雜交。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任意一項(xiàng)所述的嵌合基因，其特征在于所述嵌合基因編碼包含SEQ ID No. 4的從第2位氨基酸至第387位氨基酸的氨基酸序列的HPTO蛋白，或者與SEQ ID No. 4的從第2位氨基酸至第387位氨基酸的氨基酸序列具有至少75%序列同一性的蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任意一項(xiàng)所述的嵌合基因，其特征在于所述嵌合基因編碼HPro蛋白序列，并且包含SEQ ID No. 3的從第400位核苷酸至第1557位核苷酸的核苷酸序列，或者包含在嚴(yán)格雜交條件下與此類序列雜交的DNA。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任意一項(xiàng)所述的嵌合基因，其特征在于，所述嵌合基因包含HPPD編碼序列下游的、編碼在植物中具有活性的轉(zhuǎn)運(yùn)肽的核酸序列，使得轉(zhuǎn)運(yùn)肽/HPH)融合蛋白由所述嵌合基因編碼。
7.包含至少一個根據(jù)權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)所述的嵌合基因的載體。
8.植物細(xì)胞、植物部分、植物或種子，其特征在于其包含根據(jù)權(quán)利要求I至7中任意一項(xiàng)所述的嵌合基因。
9.權(quán)利要求8的植物細(xì)胞、植物部分、植物或種子，其還包含編碼PDH酶的嵌合基因。
10.權(quán)利要求8或9的植物細(xì)胞、植物部分、植物或種子，還包含賦予對生長調(diào)控因子，優(yōu)選對2，4-D或麥草畏，和/或?qū)σ种埔宜崛樗岷厦?ALS)、EPSP合酶(EPSPS)和/或谷氨酰胺合酶(GS)的除草劑的耐受性的一種或多種嵌合基因。
11.獲得對HPH)抑制劑型除草劑耐受的植物的方法，其特征在于，將根據(jù)權(quán)利要求I至6之一的嵌合基因引入所述植物。
12.用于在區(qū)域或田間控制雜草的方法，所述區(qū)域或田間含有或者待種植根據(jù)權(quán)利要求8、9或10的植物或種子，所述方法包括向所述區(qū)域或田間應(yīng)用對所述雜草有毒性的劑量的HPH)抑制劑型除草劑，并且不顯著影響根據(jù)權(quán)利要求8、9或10的種子或植物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用于控制雜草的方法，其特征在于所述HPH)抑制劑選自異13惡氟草、環(huán)磺酮、甲基磺草酮、磺草酮、pyrasulfotole、苯吡唑草酮、2-氰基-3-環(huán)丙基 _1_ (2_S02CH3_4_CF3 苯基)丙 _1，3_ _■麗和 2_ 氛基 _3_ 環(huán)丙基-I- (2_S02CH3_4_2, 3 Cl2苯基)丙-1，3- 二酮、bicyclopyrone、苯并雙環(huán)酮、莊無忌、二酮腈和節(jié)草唑的組。
14.用于獲得油或膳食的方法，所述方法包括種植根據(jù)權(quán)利要求8、9或10的植物，任選地，用HPH)抑制劑型除草劑處理此類植物，收獲谷粒，以及碾磨谷粒，以制造膳食，以及任選地提取油。
15.Kordia HPPD或者與Kordia HPPD具有至少75%序列同一性的HPTO用于使得植物對HPH)抑制劑型除草劑耐受的用途。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述HPH)抑制劑型除草劑選自異$惡氟草、環(huán)磺酮、甲基橫草麗、橫草麗、pyrasulfotole、苯卩比唑草麗、2_氛基-3-環(huán)丙基-I-(2-S02CH3-4_CF3苯 基)丙-1，3- 二麗和 2_ 氛基-3-環(huán)丙基-I-(2-S02CH3-4_2，3 Cl2 苯基)丙-1，3- 二麗、bicyclopyrone、苯并雙環(huán)酮、莊無忌、二酮腈和節(jié)草唑構(gòu)成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及編碼從屬于Kordia屬的細(xì)菌獲得的羥苯基丙酮酸二加氧酶(EC 1.13.11.27，本文中縮寫為HPPD)的核酸序列以及由其編碼的蛋白，還涉及包含此類核酸序列的嵌合基因，還涉及此類核酸序列、蛋白或嵌合基因用于獲得對HPPD抑制劑型除草劑耐受的植物的用途。
文檔編號A01H5/10GK102762725SQ201080064544
公開日2012年10月31日 申請日期2010年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者A·舒爾茨, B·拉博爾, F·波雷, G·郎格, N·克尼特爾-奧特勒本, R·海因 申請人:拜爾知識產(chǎn)權(quán)有限公司