專利名稱：圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于圓齒野鴉椿胚的栽培技術(shù)，更具體涉及一種圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再 生方法。
背景技術(shù)：
圓齒野鴉椿(Eascaphis konlshli Hayata )為省沽油科野鴉椿屬，別名花溴木、秤 桿木、淡椿子、開口椒，是我國特有的鄉(xiāng)土觀賞樹種。夏季開花，冬季結(jié)果，果期長，紅色 的果成熟時沿腹縫線開裂，與其黑色的種子一起，猶如一只美麗栩栩如生的紅蝴蝶，極具觀 賞價值，可作園景樹或行道樹。掛果時間很長，從外果皮變紅到果皮脫落，時間長達(dá)半年。 因此，可供觀賞時間長，是優(yōu)良的觀果樹種。其種子含脂肪油25%-30%，可制皂，也可作 其它工業(yè)用油；樹皮可以提烤漆及器具用材。此外，它的根或根皮、花及干果都可供藥用， 性辛、甘、平，根祛風(fēng)除濕，健脾，治痢疾、泄瀉、疝痛、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷；花鎮(zhèn)痛， 治頭痛眩暈；干果有溫重理氣、消腫止痛的功效，主治胃痛、寒疝、瀉疾、脫肛，對漆過敏 療效甚佳，是一種良好的中草藥材。但由于圓齒野鴉椿的種子有外殼堅硬、深休眠的特點， 致使育苗時間長、出苗率低，因此很難獲得理想的發(fā)芽率和較多的健壯苗。贛州市林木種苗 站等單位開展了播種育苗方法研究，對種子進(jìn)行濕沙貯藏催芽，使種子的發(fā)芽率提高到51% -65%，但仍無法滿足實際生產(chǎn)需要和大面積推廣要求，特別是對其進(jìn)行藥用價值開發(fā)時， 更不能提供大量的優(yōu)良純化的組培苗，因此急需完善的組織培養(yǎng)技術(shù)體系，但在專利公開以 前沒有一個有關(guān)圓齒野鴉椿胚的離體培養(yǎng)及植株再生的組織培養(yǎng)方法，更沒有成功的實例。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種圓齒野鴉椿胚的離體培養(yǎng)及植株再生的組織培養(yǎng)方法，解決現(xiàn) 有技術(shù)中圓齒野鴉椿胚種子發(fā)芽率低，不能大量的提供優(yōu)良純化的組培苗的問題，該方法培 養(yǎng)的芽健康、茁壯、增殖時間短、成苗移植后的成活率高。本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容為圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法所述方法的具體步驟包括1) 取材方法選取當(dāng)年籽粒飽滿的種子，采摘后用濕布包好；2) 培養(yǎng)基配制在基本培養(yǎng)基為MS中分別添加生長激素BA、 NAA、 IAA、或IBA中的幾 種，分別配置成芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，所述這些培養(yǎng)基中還加入Su為 20g/L， Ag+為7.5g/L， PH值為5.8，附加物為活性炭Ac;所述這些培養(yǎng)基的厚度為l. 4 1. 6cm;3) 材料消毒處理將選取的種子用機(jī)械力去除堅硬的種子外殼，用洗滌劑漂洗干 凈，流水沖3小時后瀝干，在超凈工作臺內(nèi)以重量濃度75%的酒精消毒，搖蕩，3 5秒鐘后倒 出酒精，加入O. P/。升汞HgCl2處理8 12分鐘，所述O. 1%升汞配制為1克升汞加1000毫升蒸餾 水；將汞液倒入廢汞瓶，用無菌水沖3 4遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；4) 誘導(dǎo)培養(yǎng)用眼科鑷和手術(shù)刀在無菌的條件下取生長飽滿的胚，直接接種于所 述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；100 150g的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基接種3個胚；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng) 室溫度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx;誘導(dǎo)培養(yǎng)的時間15 20天；5) 增殖培養(yǎng)將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)的生長健壯的圓齒野鴉椿幼苗切成帶腋芽的莖段， 接種在所述芽增殖培養(yǎng)基中；100 150g的增殖培養(yǎng)基接種3個胚；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件 :培養(yǎng)室溫度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx，增殖培養(yǎng)的時間20 30天；6) 誘導(dǎo)生根培養(yǎng)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)培養(yǎng)出來的幼苗單株切下，帶有2 3片葉子， 株高l 2cm，轉(zhuǎn)移到所述生根培養(yǎng)基中；100 150g的生根培養(yǎng)基接種3個胚；所述生根培養(yǎng) 的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx，生根培養(yǎng) 的時間20 25天；7) 試管苗完成當(dāng)試管苗長至3 4cm高，有3 5條根，5 7片葉片，長度2 3cm，完 成圓齒野鴉椿的離體胚培養(yǎng)及植株再生試管苗培養(yǎng)。8) 試管苗移栽將所述步驟7)的完成試管苗的圓齒野鴉椿進(jìn)行移栽，將試管苗放在自 然光下煉苗3 5天后再打開瓶蓋先進(jìn)行煉苗2 4天，以增強(qiáng)試管苗對室外環(huán)境的適應(yīng)能力； 然后從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部培養(yǎng)基，移入椰糠和腐殖土的(質(zhì)量比)l:2混合的基質(zhì)中 ，保濕遮陰培養(yǎng)，所述移植的圓齒野鴉椿試管苗成活率達(dá)95%以上。本發(fā)明的顯著優(yōu)點是采用本發(fā)明方法進(jìn)行，胚經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)，15 20天即可萌發(fā)出生 長健壯的新芽；再經(jīng)過20 30天的增殖，20 25天誘導(dǎo)生根后即可成苗、移栽，成活率高達(dá) 95%以上；擴(kuò)繁系數(shù)在17倍以上，苗木成活后生長健壯，長勢良好，基本上解決了現(xiàn)有技術(shù) 中圓齒野鴉椿胚種子發(fā)芽率低，不能大量的提供優(yōu)良純化的組培苗的問題，具有顯著的經(jīng)濟(jì) 效益。


圖l是本發(fā)明的圓齒野鴉椿種子及去除堅硬外殼后的胚狀體。 圖2是本發(fā)明的圓齒野鴉椿胚狀體形成的芽苗。圖3是本發(fā)明的增殖繁殖的胚芽組織。 圖4是圓齒野鴉椿胚芽形成的叢芽。 圖5是圓齒野鴉椿形成根系的芽苗。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。 實施例取材方法選取當(dāng)年籽粒飽滿的種子，采摘后用濕布包好； 培養(yǎng)基MS基本培養(yǎng)基采用1986，北京高等教育出版社出版，陳正華主編的《木本植物組織培養(yǎng) 及其應(yīng)用》中的配方進(jìn)行配制的。培養(yǎng)基的配制基本培養(yǎng)基為MS，加入生長激素為BA、 NAA、 IAA、 IBA，培養(yǎng)基中 還加入Su (蔗糖)為20g/L， Ag+為7.5g/L， PH值為5. 8，附加物為活性炭Ac;培養(yǎng)基厚度一 般為l. 4 1. 6cm;芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基—MS+BA(1. Omg/L)+NAA (0. 5 mg/L) +IAA (1. Omg/L) +Ag+(7.5g/L) +Su (20g/L)+Ac (2 2.5 g/L)芽增殖培養(yǎng)基一MS+BA (2.0mg/L) +NAA (0. 3mg/L) +IAA (1. Omg/L) + Ag+(7.5g/L) +Su (20g/L) +Ac (2 2. 5 g/L)生根培養(yǎng)基一1/2 MS + NAA (0. lmg/L) + IBA (0. 5mg/L) + Ag+ (7. 5g/L) +Su (20g/L) +Ac (2 2. 5 g/L) 培養(yǎng)基中Ag+來源于AgN03。 1/2 MS: MS中大量元素減半，其余不變。材料消毒處理將選取的種子用機(jī)械力去除堅硬的種子外殼，用洗滌劑漂洗干凈， 流水沖3小時后瀝干，在超凈工作臺內(nèi)以重量濃度75%的酒精消毒，搖蕩，3 5秒鐘后倒出酒 精，加入O. P/。升汞HgCl2處理8 12分鐘，所述O. 1%升汞配制為1克升汞加1000毫升蒸餾水； 將汞液倒入廢汞瓶，用無菌水沖3 4遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；誘導(dǎo)培養(yǎng)用眼科鑷和手術(shù)刀在無菌的條件下取生長飽滿的胚，直接接種于所述芽 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；100 150g的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基接種3個胚；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫 度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx;誘導(dǎo)培養(yǎng)的時間15 20天；增殖培養(yǎng)將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)的生長健壯的圓齒野鴉椿幼苗切成帶腋芽的莖段，接 種在所述芽增殖培養(yǎng)基中；100 150g的增殖培養(yǎng)基接種3個胚；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx，增殖培養(yǎng)的時間20 30 天；
誘導(dǎo)生根培養(yǎng)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)培養(yǎng)出來的幼苗單株切下，帶有2 3片葉子，株高 1 2cm，轉(zhuǎn)移到所述生根培養(yǎng)基中；100 150g的生根培養(yǎng)基接種3個胚；所述生根培養(yǎng)的培 養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25士2。C，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200 2000 Lx，生根培養(yǎng)的時 間20 25天；
試管苗完成當(dāng)試管苗長至3 4cm高，有3 5條根，5 7片葉片，長度2 3cm，完成 圓齒野鴉椿的離體胚培養(yǎng)及植株再生。
試管苗移栽完成試管苗的圓齒野鴉椿進(jìn)行移栽，將試管苗放在自然光下煉苗3 5天后 再打開瓶蓋先進(jìn)行煉苗2 4天，以增強(qiáng)試管苗對室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培養(yǎng)瓶中取出 ，洗去根部培養(yǎng)基，移入椰糠和腐殖土的(質(zhì)量比)1 :2混合的基質(zhì)中，保濕遮陰培養(yǎng)，所 述移植的圓齒野鴉椿試管苗成活率達(dá)95%以上。
按照以上方法進(jìn)行，胚經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)，15 20天即可萌發(fā)出生長健壯的新芽；再經(jīng)過 20 30天的增殖，20 25天誘導(dǎo)生根后即可成苗、移栽，成活率高達(dá)95%以上；擴(kuò)繁系數(shù)在 17倍以上，苗木成活后生長健壯，長勢良好。
權(quán)利要求
1.一種圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其特征在于所述方法的具體步驟包括1)取材方法選取當(dāng)年籽粒飽滿的種子，采摘后用濕布包好；2)培養(yǎng)基配制在基本培養(yǎng)基為MS中分別添加生長激素BA、NAA、IAA、或IBA中的幾種，分別配置成芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，所述這些培養(yǎng)基中還加入Su為20g/L，Ag+為7.5g/L，PH值為5.8，附加物為活性炭Ac；所述這些培養(yǎng)基的厚度為1.4～1.6cm；3)材料消毒處理將選取的種子用機(jī)械力去除堅硬的種子外殼，用洗滌劑漂洗干凈，流水沖3小時后瀝干，在超凈工作臺內(nèi)以重量濃度75％的酒精消毒，搖蕩，3～5秒鐘后倒出酒精，加入0.1％升汞HgCl2處理8～12分鐘；將汞液倒入廢汞瓶，用無菌水沖3～4遍后，用消毒濾紙吸干表面水分；4)誘導(dǎo)培養(yǎng)用眼科鑷和手術(shù)刀在無菌的條件下取生長飽滿的胚，直接接種于所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；100～150g的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基接種3個胚；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200～2000Lx；誘導(dǎo)培養(yǎng)的時間15～20天；5)增殖培養(yǎng)將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)的生長健壯的圓齒野鴉椿幼苗切成帶腋芽的莖段，接種在所述芽增殖培養(yǎng)基中；100～150g的增殖培養(yǎng)基接種3個胚；所述增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200～2000Lx，增殖培養(yǎng)的時間20～30天；6)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)將經(jīng)過增殖培養(yǎng)培養(yǎng)出來的幼苗單株切下，帶有2～3片葉子，株高1～2cm，轉(zhuǎn)移到所述生根培養(yǎng)基中；100～150g的生根培養(yǎng)基接種3個胚；所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照時間12h/d，光照強(qiáng)度1200～2000Lx，生根培養(yǎng)的時間20～25天；7)試管苗完成當(dāng)試管苗長至3～4cm高，有3～5條根，5～7片葉片，長度2～3cm，完成圓齒野鴉椿的離體胚培養(yǎng)及植株再生試管苗培養(yǎng)。
2 根據(jù)權(quán)利要求l所述的圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其 特征在于將所述步驟7)的完成試管苗的圓齒野鴉椿進(jìn)行移栽，將試管苗放在自然光下煉 苗3 5天后再打開瓶蓋先進(jìn)行煉苗2 4天，以增強(qiáng)試管苗對室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培 養(yǎng)瓶中取出，洗去根部培養(yǎng)基，移入椰糠和腐殖土的質(zhì)量比=1 : 2混合的基質(zhì)中，保濕遮陰 培養(yǎng)，所述移植的圓齒野鴉椿試管苗成活率達(dá)95%以上。
3 根據(jù)權(quán)利要求l所述的圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其 特征在于所述步驟2)培養(yǎng)基配制中所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基MS中再加入BA 1.0mg/L; NAA 0.5 mg/L; IAA l.Omg/L; Ag+ 7.5g/L ; Su 20g/L和活性炭Ac 2 2. 5 g/L;所述芽增殖培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基MS再加入；BA 2.0mg/L; NAA 0. 3mg/L; IAA l.Omg/L; Ag+ 7.5g/L ; Su 20g/L和活性炭Ac 2 2. 5 g/L;所述生根培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基1/2 MS再加入NAA 0. lmg/L; IBA 0. 5mg/L; Ag+ 7. 5g/L; Su 20g/L和活性炭Ac 2 2. 5 g/L。
4 根據(jù)權(quán)利要求3所述的圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其特征在于所述培養(yǎng)基中Ag+來源于Agw"。
5 根據(jù)權(quán)利要求3所述的圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其 特征在于所述基本培養(yǎng)基1/2 MS是指MS中大量元素減半，其余不變。
6 根據(jù)權(quán)利要求l所述的圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，其 特征在于所述步驟3)用的O. 1%升汞配制為1克升汞加1000毫升蒸餾水。
全文摘要
本發(fā)明提供一種圓齒野鴉椿離體胚培養(yǎng)及植株再生方法，屬于圓齒野鴉椿胚的栽培技術(shù)。解決現(xiàn)有技術(shù)中圓齒野鴉椿胚種子發(fā)芽率低，不能大量的提供優(yōu)良純化的組培苗的問題，本發(fā)明選取當(dāng)年籽粒飽滿的種子為材料，胚經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)，15～20天即可萌發(fā)出生長健壯的新芽；再經(jīng)過20～30天的增殖，20～25天誘導(dǎo)生根后即可成苗、移栽，成活率高達(dá)95％以上；擴(kuò)繁系數(shù)較高，苗術(shù)成活后健壯挺拔，長勢良好。
文檔編號A01H4/00GK101595845SQ20091030460
公開日2009年12月9日 申請日期2009年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月21日
發(fā)明者何碧珠, 李玉平, 鄒雙全 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)