專利名稱：：常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，具體的說是在建立的灘涂貝類家系基礎(chǔ)群中篩選出2-4個(gè)生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2，按10%比例對2_4個(gè)家系上選，確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群，在家系基礎(chǔ)群中開展家系建立、回交、家系內(nèi)群體自繁，不同鹽度溫度試養(yǎng)實(shí)驗(yàn)等研究，獲得一系列具有優(yōu)良生長和抗逆性狀的近交家系、雜交家系、回交家系、耐低鹽和抗高溫家系，這些家系組成灘涂貝類的核心選擇群。
背景技術(shù)：
：近年來，水產(chǎn)動(dòng)物的遺傳改良已成為國內(nèi)外水產(chǎn)科學(xué)工作者研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，如娃魚尊魚類(Oncorhynchuskisutch)、尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)、大菱軤(Scophthalmusmaximus);中國對蟲下(Fe皿eropenaeuschinensis)、細(xì)角濱對蟲下(Xitopenaeusstylirostris)、凡纟內(nèi)濱對蟲下(Penaeusva皿amei);太平洋牡蠣(Crassoseagigas)、硬殼始(Mercenariamercenaria)、海灣扇貝(Argopectenirradians)等水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)品種已取得了顯著的成績。數(shù)量遺傳學(xué)在水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中具有重要的指導(dǎo)作用，這是一門研究數(shù)量性狀(在群體中呈連續(xù)的正態(tài)分布并由多個(gè)微效基因控制)遺傳規(guī)律的學(xué)科。貝類的繁殖力高，體外受精、發(fā)育等特點(diǎn)為其數(shù)量遺傳研究提供了便利，大大加快了優(yōu)良品種選育的進(jìn)程。隨著人民生活水平的提高，灘涂貝類在國內(nèi)外市場均供不應(yīng)求，市場潛力巨大。目前，灘涂貝類在養(yǎng)殖中出現(xiàn)種質(zhì)資源基礎(chǔ)狀況不清、品質(zhì)下降、抗逆性差、個(gè)體小型化、單位產(chǎn)量降低等不良現(xiàn)象。而且養(yǎng)殖對象均為野生型，沒有人工培育的高產(chǎn)、抗逆優(yōu)良品種。因此，對灘涂貝類進(jìn)行遺傳改良，培育出生長速度快，抗逆性強(qiáng)的新品種是解決這些問題的重要途徑。建立灘涂貝類的核心選擇群是新品種培育的首選途徑，核心選擇群囊括了生長、抗逆性狀的優(yōu)良基因，可以做為新品種培育的基礎(chǔ)親本，也可有針對性的對選育的灘涂貝類新品種某一退化性狀進(jìn)行復(fù)壯。在灘涂貝類高產(chǎn)、抗逆優(yōu)良品種培育中起核心作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種方法簡單、好操作、易控制、成本低的常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，由如下步驟組成a、建立灘涂貝類家系在灘涂貝類繁殖季節(jié)，選擇殼無損傷、殼型規(guī)整、活力強(qiáng)、無病害的二齡野生型個(gè)體作為育種的原始材料，個(gè)體數(shù)量為500-1000枚；用陰干和性誘導(dǎo)方法使所述的原始材料產(chǎn)卵排精；抓取正在排精產(chǎn)卵的個(gè)體，用淡水洗凈，放入盛有海水容器中單獨(dú)產(chǎn)卵排精，分別收集精卵；將收集的精卵取樣在顯微鏡下觀察，選擇活力強(qiáng)的精子，質(zhì)量好且未受精的卵子留用；l個(gè)父本與3-5個(gè)母本單對單交配，建立至少30個(gè)家系；對各家系苗種進(jìn)行培育及養(yǎng)成，并保持水環(huán)境和培育飼養(yǎng)密度一致；b、篩選生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2:通過上步灘涂貝類家系建立和生長發(fā)育比較及遺傳參數(shù)估計(jì)，篩選出生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系巳，進(jìn)行群體自繁獲得家系&，通過對家系F2生長發(fā)育比較及近交衰退估計(jì)，選取2-4個(gè)生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2;c、確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群測量上步2-4個(gè)家系中的灘涂貝類殼長大小，每個(gè)家系按10%比例上選，確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群；d、建立灘涂貝類的核心選擇群在上步家系基礎(chǔ)群中開展家系建立、回交、家系內(nèi)群體自繁，不同鹽度溫度試養(yǎng)，評估各家系生長和抗逆性狀的近交、雜交、回交效應(yīng)，得到具有優(yōu)良生長和抗逆性狀的近交家系、雜交家系、回交家系、耐低鹽和抗高溫家系，形成灘涂貝類的核心選擇群。本發(fā)明的常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，整個(gè)步驟簡單，操作方便，容易控制，整個(gè)過程成本低，效果好。圖1是DXG雜交組幼蟲期生長比較示意圖；圖2是DXG雜交組稚貝和養(yǎng)成期生長比較示意圖；圖3是具體實(shí)驗(yàn)框圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的方法由如下步驟組成a、建立灘涂貝類家系在灘涂貝類繁殖季節(jié)，選擇殼無損傷、殼型規(guī)整、活力強(qiáng)、無病害的二齡野生型個(gè)體作為育種的原始材料，個(gè)體數(shù)量為500-1000枚；用陰干和性誘導(dǎo)方法使所述的原始材料產(chǎn)卵排精；抓取正在排精產(chǎn)卵的個(gè)體，用淡水洗凈，放入盛有海水容器中單獨(dú)產(chǎn)卵排精，分別收集精卵；將收集的精卵取樣在顯微鏡下觀察，選擇活力強(qiáng)的精子，質(zhì)量好且未受精的卵子留用；l個(gè)父本與3-5個(gè)母本單對單交配，建立至少30個(gè)家系；對各家系苗種進(jìn)行培育及養(yǎng)成，并保持水環(huán)境和培育飼養(yǎng)密度一致；b、篩選生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2:通過上步灘涂貝類家系建立和生長發(fā)育比較及遺傳參數(shù)估計(jì)，篩選出生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系巳，進(jìn)行群體自繁獲得家系&，通過對家系F2生長發(fā)育比較及近交衰退估計(jì)，選取2-4個(gè)生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2;c、確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群測量上步2-4個(gè)家系中的灘涂貝類殼長大小，每個(gè)家系按10%比例上選，確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群；d、建立灘涂貝類的核心選擇群在上步家系基礎(chǔ)群中開展家系建立、回交、家系內(nèi)群體自繁，不同鹽度溫度試養(yǎng)，評估各家系生長和抗逆性狀的近交、雜交、回交效應(yīng)，得到具有優(yōu)良生長和抗逆性狀的近交家系、雜交家系、回交家系、耐低鹽和抗高溫家系，形成灘涂貝類的核心選擇群。下面以菲律賓蛤仔為例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。第一步、建立菲律賓蛤仔家系于2007年7月按步驟一方法建立菲律賓蛤仔11個(gè)父系半同胞，33個(gè)母系全同胞家系。在各家系苗種培育及養(yǎng)成中，保持水環(huán)境和培育飼養(yǎng)密度一致。第二步、篩選生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2代以2007年建立的33個(gè)菲律賓蛤仔家系為材料，從中選擇出具有優(yōu)良表型性狀的9個(gè)家系(A"B工……1》，采用家系內(nèi)近交和家系間混交的方式建立了9個(gè)近交家系(A2，B2……12)和l個(gè)混交系(02)。結(jié)果表明，各近交家系間D型幼蟲差異顯著(P<0.05)。EJ桴化率(91.67±1.53%)最高，與其它實(shí)驗(yàn)組(除F2外)比較差異顯著(P<0.05)。在幼蟲期，各近交家系幼蟲生長普遍小于混交系，生長性狀發(fā)生了近交衰退現(xiàn)象(近交系數(shù)，F(xiàn)=0.25)，近交衰退率為0.8116.05%。E2存活率最高，未表現(xiàn)出近交衰退；而其它近交家系幼蟲的存活率都普遍小于混交家系，出現(xiàn)了不同程度的近交衰退現(xiàn)象，近交衰退率為0.7326.09%。在稚貝期，C2、E2生長性狀出現(xiàn)了近交衰退，近交衰退率分別為1.66%，6.47%，E2存活率最高，未出現(xiàn)近交衰退，其它近交家系存活性狀都出現(xiàn)不同程度的近交衰退現(xiàn)象，近交衰退率為1.72%26.88%。在養(yǎng)成期，12殼長(4.87士1.59mm)最大，^殼長(2.57±1.18mm)最小，且分別與其它實(shí)驗(yàn)組存在顯著差異(P<0.05)。C2，E2，F(xiàn)2生生長性狀發(fā)生了近交衰退現(xiàn)象，近交衰退率分別為12.79%，26.46%，23.20%;E2的存活率最高，與其它實(shí)驗(yàn)組均存在顯著差異(P<0.05);A2，D2，G2存活性狀近交衰退，分別為0.70%，1.40%，16.20%。綜合9個(gè)近交家系的表型特征，12^2分別繼承了親本(IpE》生長快、抗逆性強(qiáng)的優(yōu)良性狀。第三步、確定菲律賓蛤仔優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群測量步驟二中2個(gè)家系的殼長大小，按10%比例上選，確定菲律賓蛤仔優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群。第四步、建立灘涂貝類的核心選擇群在家系基礎(chǔ)群中開展、回交、雜交家系建立，家系內(nèi)群體自繁，不同鹽度溫度試養(yǎng)實(shí)驗(yàn)等研究，評估各家系生長和抗逆性狀的近交、雜交、回交效應(yīng)，從而獲得一系列具有優(yōu)良生長和抗逆性狀的近交家系、雜交家系、回交家系、耐低鹽和抗高溫家系，這些家系組成灘涂貝類的核心選擇群。如圖3所示具體實(shí)驗(yàn)如下1、家系E2個(gè)體選擇研究按10%的選擇壓力對存活率高的家系E2子三代進(jìn)行上選。結(jié)果表明在浮游階段，上選組的選擇反應(yīng)(SR)和現(xiàn)實(shí)遺傳力(h2K)分別為0.32±0.08、0.18±0.05;室內(nèi)培育階段，上選組的選擇反應(yīng)(SR)和現(xiàn)實(shí)遺傳力(h2K)分別為0.13±0.02、0.07±0.01;上選效果顯著，獲得遺傳改進(jìn)量為22.90%。2、家系E2回交研究家系E2的巳代和F2代為材料，采用2X2雙列雜交，對家系E2生長特性，遺傳特征進(jìn)行研究。結(jié)果表明在浮游階段，回交組早$&具有明顯的生長優(yōu)勢他，2=5.39±2.76，生長速度較自交組早F:X$&提高了8.03%，而回交組早F2X$F:未表現(xiàn)出生長優(yōu)勢；在室內(nèi)養(yǎng)成階段，回交組早巳X$&生長優(yōu)勢得到了進(jìn)一步的提高他，2=15.58±5.50，生長速度較自交組早F:X$F:提高22.4%，而回交組早F2X$F:表現(xiàn)為生長劣勢；回交組早巳X$&也表現(xiàn)出了明顯的存活優(yōu)勢，浮游階段和室內(nèi)培育階段的存活優(yōu)勢率分別為9.26±2.17、7.78±1.57。53、家系￡2雜交研究以白蛤(W)、家系EJ0)、斑塊花紋蛤仔(N)為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行3X3雙列雜交，實(shí)驗(yàn)由3個(gè)自交組WXW、0X0、NXN和3個(gè)雜交組WX0、0XN、WXN。結(jié)果表明浮游期間，三個(gè)雜交組合均表現(xiàn)出明顯的雜種優(yōu)勢，總的雜種優(yōu)勢為Hg=4.61±0.62，WX0、0XN、WXN三個(gè)雜交組的生長優(yōu)勢分別為HgwX0=3.51±1.51、Hg。XN=4.69±1.89，HgwXN=4.60±2.67，六個(gè)正反交組中除WN沒有生長優(yōu)勢外，其它五組均表現(xiàn)出明顯的生長優(yōu)勢，其中麗組生長優(yōu)勢最大HgNW=9.69±1.89;室內(nèi)培育階段，WXO雜交組合依舊表現(xiàn)出明顯的生長優(yōu)勢，Hgwx。=5.63士3.03，其它雜交組合未表現(xiàn)出明顯的雜種優(yōu)勢，在六個(gè)正反交組中只有W0表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢，為Hg^z=17.22±5.50。4、不同鹽度溫度試養(yǎng)以家系E2的F2代一齡蛤仔為材料，在10、15、20、25、30鹽度的水環(huán)境中試養(yǎng)，在鹽度10的情況下，5天內(nèi)全部死亡，在15、20、25、30鹽度的水環(huán)境試養(yǎng)2個(gè)月后，其存活率分別為45.26%、53.47%、56.87%、34.62%，生長速度無顯著差異。橙色家系F3在水溫20-25。C，鹽度10、15、20、25、30的水中試養(yǎng)，結(jié)果見表1:表1.家系E2的F3代存活、變態(tài)及生長情況<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>家系E2的&代在水溫30-33。C，鹽度10、15、20、25、30的水中試養(yǎng)，結(jié)果見表2。家系E2表現(xiàn)出良好的耐低鹽和抗高溫性能。表2.家系E2的F3代存活、變態(tài)及生長情況1015202530孵化率浮游期存活率變態(tài)率稚貝期存活率浮游期生長速度稚貝期生長速度6.28%5.62%40.63%7.43土3.36in7.26%22.94%28.44%53.28%12.84±5.24ui58.36%肌43%90.41%86.43%13.36±6.24Hi63.71%84.58%96.22%82.33%12.88±3.44ui70.23%33.27%62.52%50.8%10.41±2.42ui27.16±9.37ym32.61±10.61um51.94±16.38um54.72±28.62um46.57±13.33um5、家系間雜交實(shí)驗(yàn)生長速度快的兩個(gè)家系為親本，以蛤仔的殼色和殼面花紋作為遺傳標(biāo)記，以確保所選親本來自同一個(gè)家系。進(jìn)行家系間雜交。結(jié)果表明在DXG雜交組合的生長比較發(fā)現(xiàn)(如圖1、2)，$DX早G的生長優(yōu)勢明顯，$DX早G的殼長生長除9日齡外，在各日齡一直最快，雜種優(yōu)勢在3、6、9、30、60、100日齡分別為13.28、7.71、-21.51、33.56、42.93、11.41。、通過不同階段的雜交家系的生長比較，雜種優(yōu)勢、配合力的計(jì)算，得到$DX早G雜交組的雜交效果最好。權(quán)利要求一種常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，其特征在于由如下步驟組成a、建立灘涂貝類家系在灘涂貝類繁殖季節(jié)，選擇殼無損傷、殼型規(guī)整、活力強(qiáng)、無病害的二齡野生型個(gè)體作為育種的原始材料，個(gè)體數(shù)量為500-1000枚；用陰干和性誘導(dǎo)方法使所述的原始材料產(chǎn)卵排精；抓取正在排精產(chǎn)卵的個(gè)體，用淡水洗凈，放入盛有海水容器中單獨(dú)產(chǎn)卵排精，分別收集精卵；將收集的精卵取樣在顯微鏡下觀察，選擇活力強(qiáng)的精子，質(zhì)量好且未受精的卵子留用；1個(gè)父本與3-5個(gè)母本單對單交配，建立至少30個(gè)家系；對各家系苗種進(jìn)行培育及養(yǎng)成，并保持水環(huán)境和培育飼養(yǎng)密度一致；b、篩選生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2通過上步灘涂貝類家系建立和生長發(fā)育比較及遺傳參數(shù)估計(jì)，篩選出生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F1，進(jìn)行群體自繁獲得家系F2，通過對家系F2生長發(fā)育比較及近交衰退估計(jì)，選取2-4個(gè)生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2；c、確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群測量上步2-4個(gè)家系中的灘涂貝類殼長大小，每個(gè)家系按10％比例上選，確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群；d、建立灘涂貝類的核心選擇群在上步家系基礎(chǔ)群中開展家系建立、回交、家系內(nèi)群體自繁，不同鹽度溫度試養(yǎng)，評估各家系生長和抗逆性狀的近交、雜交、回交效應(yīng)，得到具有優(yōu)良生長和抗逆性狀的近交家系、雜交家系、回交家系、耐低鹽和抗高溫家系，形成灘涂貝類的核心選擇群。全文摘要本發(fā)明公開了一種常見灘涂貝類核心選擇群的建立方法，由如下步驟組成a、建立灘涂貝類家系b、篩選生長、抗逆性狀優(yōu)良的家系F2c、確定灘涂貝類優(yōu)良性狀家系基礎(chǔ)群d、建立灘涂貝類的核心選擇群整個(gè)步驟簡單，操作方便，容易控制，整個(gè)過程成本低，效果好。文檔編號A01K61/00GK101766137SQ20091024904公開日2010年7月7日申請日期2009年12月30日優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日發(fā)明者孫煥強(qiáng),張國范,張躍環(huán),楊鳳,趙力強(qiáng),閆喜武,霍忠明申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院