專利名稱：柏樹木層孔菌菌株及其子實體培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一個柏樹木層孔菌菌株及其子實體培養(yǎng)方法，屬于藥用真菌資源的開 發(fā)與利用技術(shù)領(lǐng)域。本菌株是一種新發(fā)現(xiàn)的藥用真菌。
背景技術(shù)：
柏樹木層孔菌(Phellinus sp.)是中國發(fā)現(xiàn)的一個真菌新記錄物種，是一種藥用 真菌，子實體和菌絲體內(nèi)含有多糖、三萜類化合物，具有抗菌和抗癌的功效。充分開發(fā)利用 我國豐富寶貴的珍稀藥用真菌資源，有利于實現(xiàn)藥用真菌的市場開發(fā)，對人類健康和社會 經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展有重要的應用前景和意義。

發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種柏樹木層孔菌藥用菌菌株及其子實體培養(yǎng) 方法，生產(chǎn)該藥用真菌子實體，為中國珍稀野生藥用菌的大規(guī)模市場開發(fā)利用服務。2.技術(shù)方案柏樹木層孔菌藥用菌菌株，拉丁學名=Phellinus sp.。該菌種已于2007年1月 29日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏編號 CGMCCN0 :1932，原始編號是200608241。在四川臥龍自然保護區(qū)采集到原始標本，寄主植 物為柏樹(樹齡800 1000年)，通過菌肉組織分離得到純菌種，在培養(yǎng)基上培養(yǎng)而獲得， 其特征是(a)形態(tài)特征柏樹木層孔菌新菌株在PDA培養(yǎng)基上生長十分緩慢，生長速度為2 3mm/d，在松 針蛋白胨葡萄糖酵母粉培養(yǎng)基上生長速度為3 4mm/d。菌落圓形，致密，黃白色，邊緣不整 齊，氣生菌絲不發(fā)達，菌絲體貼在培養(yǎng)基表面生長。子實體群生、單生、迭生于活的柏樹樹干 表面，多年生。單個菌蓋10 20X20 30X10 20cm，半圓形或橢圓形，表面黑褐色，邊 緣黃色或黃褐色、黃白色，有同心圓環(huán)帶，表面不均勻。菌肉黃褐色，木質(zhì)，3 5層，橫切面 三角形，厚度為5 10cm。菌管多層，長度10 15cm，黃褐色，下表面黃色，光滑無突起。菌 孔密生，橢圓形，2 4個/mm。孢子印黃色。孢子近圓形、方橢圓形，光滑，黃色，中有一球 狀物，6. 5 8. 5 μ mX 4. 5 5. 5 μ m。菌絲體系統(tǒng)2型，有鎖狀聯(lián)合，生殖菌絲直徑2. 5 μ m， 聯(lián)絡菌絲1.0μπι 1.5μπι。(b)生理特征柏樹木層孔菌菌絲生長的溫度范圍是3 35°C，最適溫度25 28°C ；子實體分化 的溫度范圍10 25°C，最適溫度15 25°C ；0 10°C的溫差晝夜刺激有利于子實體的分 化；孢子萌發(fā)的溫度范圍是10-30°C，最適溫度25°C;菌絲能在pH 3 10范圍內(nèi)生長，最適 pH4. 5 5. 5。(C)營養(yǎng)需求碳源、氮源的種類及碳氮比對柏樹木層孔菌菌絲生長、子實體分化與發(fā)育有顯著影響。該菌能利用纖維素、木質(zhì)素、淀粉、葡萄糖、蔗糖、果糖、玉米粉、乳糖和甘露糖作碳源， 其中葡萄糖和蔗糖為碳源生長勢強，果糖生長勢弱；蛋白胨、硫酸銨、硝酸銨、尿素、黃豆粉、 玉米粉和麥麩均可作為氮源，在麥麩上生長速度快，長勢旺盛；硫酸銨、硝酸銨和尿素雖能 作為氮源，長勢很弱；能在C/N= 10/1 45/1的范圍內(nèi)生長，C/N為25/1 30/1時生長 速度最快。在完全黑暗的條件下不能形成子實體，需要一定強度的散射光照射才能形成子 實體，子實體生長允許陽光直射。(d)栽培條件 栽培原料可以使用柏樹木屑、闊葉樹木屑、棉籽殼、麩皮、米糠、玉米粉等，培養(yǎng)料 含水量60% 63%，pH為5 6。栽培季節(jié)為3 10月，出菇溫度不超過28°C，空氣相對 濕度為70% 90%。培養(yǎng)料必須經(jīng)過高壓(0. IMPa，1 1. 5h)或常壓滅菌(100°C，8 IOh)。栽培方式為瓶栽或袋栽。(四)說明書附1柏樹木層孔菌子實體表面和橫切面(左子實體表面，右橫切面)
具體實施例方式(a)菌絲體培養(yǎng)方法本發(fā)明采用的瓊脂培養(yǎng)基配方(1)柏樹汁葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基柏樹樹葉或樹枝50 100g，葡萄糖20g，蛋白胨 2 4g，瓊脂20g,水IOOOmL, pH自然。(2)松針汁葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基松針50 100g，葡萄糖20g，蛋白胨2 3g，瓊 月旨20g，水IOOOmL, pH自然。(3) PDA加富培養(yǎng)基馬鈴薯200g，蔗糖20g，蛋白胨3 5g，酵母粉2g，瓊脂20g， 水 lOOOmL，pH 自然。液體培養(yǎng)基上述配方中不添加瓊脂。將柏樹樹葉或樹枝、松針、馬鈴薯等植物性原料切成小段，加水1200 1300mL，煮 沸20min，過濾，去濾液1000mL。在濾液中加入瓊脂加熱，使瓊脂全部溶解，再加入其它成 分，加熱溶解，定容。分裝在試管、三角瓶中，封口滅菌，冷卻后存放24h，即可使用。試管菌種接種后培養(yǎng)在25 28°C，滿管時間一般為20 30d。液體培養(yǎng)用三角瓶或輸液瓶，分裝總體積1/3的培養(yǎng)液，滅菌后冷卻接種，接種量 為2% 5%。在25°C的震蕩搖床上，轉(zhuǎn)速為120 150r/m，培養(yǎng)7 10d，菌絲體產(chǎn)量為 0. 3 0. 8g/100mL，菌絲球直徑0. 5 1. 0cm，發(fā)酵液顏色一般為棕褐色，澄清透明。培養(yǎng) 15d后菌絲體開始自溶。(b)子實體栽培方法本發(fā)明采用的培養(yǎng)料配方(1)柏樹木屑或1 2cm的短枝條節(jié)75% 80%，麥麩或米糠25% 20%，含水 量 60% 63%。(2)棉籽殼80 %，麥麩或米糠20 %，含水量60 % 63 %。(3)闊葉樹木屑80 %，麥麩或米糠20 %，含水量60 % 63 %。將各配方中的干原料混合均勻，在加入料水比為1 1 1. 2的醋酸溶液，攪拌均勻，堆積，塑料薄膜覆蓋，處理24 48h。加入干原料總量0. 5%的石灰粉，攪拌均勻， 堆積12h。將處理好的培養(yǎng)料裝入栽培瓶或栽培袋內(nèi)，滅菌，冷卻，接種量5% 10%。在 25 28°C條件下培養(yǎng)，空氣相對濕度為60% 70%，經(jīng)過40 60d，菌絲體長滿全部培養(yǎng) 料。菌種瓶滿瓶后可以作為菌種用于生產(chǎn)出菇的菌袋，也可以直接進行出菇，菌袋滿袋后直 接進行出菇管理。在室內(nèi)或大棚中均可以出菇。氣溫為10 25°C，不超過30°C。空氣相對濕度保 持在70% 90%，不超過95%。一定的散射光照，良好的通氣，IOd后開始在瓶口或菌袋兩 端、菌袋表面等處形成子實體原基。原基長到1 2cm大后可以直接向子實體上輕輕噴水， 每天2 3次。子實體先松軟，后逐漸變硬，邊緣黃白色，中央漸漸變?yōu)樯詈稚?，并開始彈射 孢子。子實體生長時間為3 4個月。邊緣完全變成深色后進行采收。商業(yè)化生產(chǎn)只采收 一批。采收的子實體60 °C烘干24h，包裝銷售。
權(quán)利要求
一種柏樹木層孔菌藥用菌(Phellinus sp.)菌株及其子實體培養(yǎng)方法，其特征在于寄生在柏樹樹干上，用柏樹木屑進行栽培，菌絲體和子實體具有藥用用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株，所述的菌株形態(tài)特征是，在PDA培 養(yǎng)基上可以緩慢生長，生長速度為2 3mm/d，在松針蛋白胨葡萄糖酵母粉培養(yǎng)基上生長速 度為3 4mm/d。菌落圓形、致密、黃白色、邊緣不整齊，氣生菌絲不發(fā)達，菌絲體貼在培養(yǎng)基 表面生長。子實體群生、單生、迭生于活的柏樹樹干表面，多年生。單個菌蓋10 20X20 30X10 20cm，半圓形或橢圓形，表面黑褐色，邊緣黃色或黃褐色、黃白色，有同心圓環(huán)帶， 表面不均勻。菌肉黃褐色，木質(zhì)，3 5層，橫切面三角形，厚度為5 10cm。菌管多層，長 度10 15cm，黃褐色，下表面黃色，光滑無突起。菌孔密生，橢圓形，2 4個/mm。孢子印 黃色。孢子近圓形、方橢圓形，光滑，黃色，中有一球狀物，6. 5 8. 5 μ mX4. 5 5. 5 μ m。菌 絲體系統(tǒng)2型，有鎖狀聯(lián)合，生殖菌絲直徑2. 5 μ m，聯(lián)絡菌絲1. 0 μ m 1. 5 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株，所述的菌株的生理特征是木層 孔菌菌絲生長的溫度范圍是3 35°C，最適溫度25 28V ；子實體分化的溫度范圍10 25°C，最適溫度15 25°C ；0 10°C的溫差晝夜刺激有利于子實體的分化；孢子萌發(fā)的溫 度范圍是10-30°C，最適溫度25°C ；菌絲能在pH 3 10范圍內(nèi)生長，最適pH4. 5 5. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株，所述的菌株的營養(yǎng)需求特征是 該菌能利用纖維素、木質(zhì)素、淀粉、葡萄糖、蔗糖、果糖、玉米粉、乳糖和甘露糖作碳源，其中 葡萄糖和蔗糖為碳源生長勢強，果糖、木質(zhì)素上生長勢弱；蛋白胨、硫酸銨、硝酸銨、尿素、黃 豆粉、玉米粉和麥麩均可作為氮源，在麥麩、蛋白胨上生長速度快，長勢旺盛；硫酸銨、硝酸 銨和尿素雖能作為氮源，但長勢很弱；能在C/N = 10/1 45/1的范圍內(nèi)生長，C/N為30/1 時生長速度最快。在完全黑暗的條件下不能形成子實體，需要一定強度的散射光照射才能 形成子實體，子實體生長允許陽光直射。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株，所述的菌株的栽培條件特征是 栽培原料可以使用柏樹木屑、闊葉樹木屑、棉籽殼、麩皮、米糠、玉米粉等，培養(yǎng)料含水量 60% 63%，pH為5 6。栽培季節(jié)為3 10月，出菇溫度不超過28°C，空氣相對濕度為 70% 90%。培養(yǎng)料必須經(jīng)過高壓(0. IMPa, 1 1. 5h)或常壓滅菌(100°C，8 IOh)。栽 培方式為瓶栽或袋栽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株子實體培養(yǎng)方法，所述的菌株的 菌絲體培養(yǎng)方法是瓊脂培養(yǎng)基配方(1)柏樹汁葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基柏樹樹葉或樹枝 50 100g，葡萄糖20g，蛋白胨2 4g，瓊脂20g，水lOOOmL，pH自然。(2)松針汁葡萄糖 蛋白胨培養(yǎng)基松針50 100g，葡萄糖20g，蛋白胨2 3g，瓊脂20g，水lOOOmL，pH自然。 (3) PDA加富培養(yǎng)基馬鈴薯200g，蔗糖20g，蛋白胨3 5g，酵母粉2g，瓊脂20g，水lOOOmL， PH自然。液體培養(yǎng)基上述配方中不添加瓊脂。試管菌種接種后培養(yǎng)在25 28°C，滿管時間一般為20 30d。液體培養(yǎng)用三角瓶或 輸液瓶，分裝總體積1/3的培養(yǎng)液，滅菌后冷卻接種，接種量為2% 5%。在25°C的震蕩搖 床上，轉(zhuǎn)速為120 150r/m，培養(yǎng)7 10d。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的柏樹木層孔菌藥用菌菌株子實體培養(yǎng)方法，所述菌株的子實 體培養(yǎng)方法是培養(yǎng)料配方(1)柏樹木屑或1 2cm長的短枝條節(jié)75% 80%，麥麩或米糠25% 20%，含水量60% 63%。(2)棉籽殼80%，麥麩或米糠20%，含水量60% 63%。(3)闊葉樹木屑80%，麥麩或米糠20%，含水量60% 63%。各配方中的干原料混合均勻，加入料水比為1 1 1.2的醋酸水溶液，攪拌均勻， 堆積，塑料薄膜覆蓋，處理24 48h。加入干原料總量0. 5%的石灰粉，攪拌均勻，堆積12h。 處理好的培養(yǎng)料裝入瓶或袋內(nèi)，滅菌，冷卻，接種量5% 10%。在25 28°C條件下培 養(yǎng)，空氣相對濕度為60% 70%，經(jīng)過40 60d，菌絲體長滿全部培養(yǎng)料。菌種瓶滿瓶后可 以作為菌種用于生產(chǎn)出菇的菌袋，可以直接進行出菇，菌絲滿袋后直接進行出菇管理。在室內(nèi)或大棚中均可以出菇。氣溫為10 25°C，不超過30°C?？諝庀鄬穸缺３衷?70 % 90 %，不超過95 %。一定的散射光照，良好的通氣，IOd后開始在瓶口或菌袋兩端、 菌袋表面等處形成子實體原基。原基長到1 2cm大后可以直接向子實體上輕輕噴水，每 天2 3次。子實體先松軟，后逐漸變硬，邊緣黃白色，中央漸漸變?yōu)樯詈稚?，并開始彈射孢 子。子實體生長時間為3 4個月。邊緣完全變成深色后進行采收。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥用菌菌株及其子實體培養(yǎng)方法，屬藥用真菌資源的開發(fā)與利用技術(shù)領(lǐng)域。柏樹木層孔菌(Phellinus sp.)是在中國發(fā)現(xiàn)的一個真菌新記錄物種，在CGMCC的編號是No.1932。寄主是柏樹，菌種的特征在于菌絲體在松針培養(yǎng)基上生長較快。菌落圓形、致密、黃白色，氣生菌絲不發(fā)達。菌蓋半圓形或橢圓形，表面黑褐色，邊緣黃白色。菌肉木質(zhì)，黃褐色。菌絲具鎖狀聯(lián)合。菌絲生長溫度25～28℃；子實體生長溫度15～25℃；菌絲生長pH4.5～5.5。該菌能在葡萄糖、蔗糖、麥麩、蛋白胨上快速生長。栽培原料用柏樹木屑、麩皮等。栽培季節(jié)3～10月。培養(yǎng)料用1％醋酸處理24～48h，加0.5％的石灰粉，滅菌。菌絲生長時間為40～60d，出菇時間3～4個月。本菌株是一種新發(fā)現(xiàn)的藥用真菌，在藥用真菌領(lǐng)域有應用價值。
文檔編號C05G3/00GK101836595SQ20091005862
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月18日
發(fā)明者侯大斌, 張婷婷, 林琦, 蘇玨, 賀新生 申請人:西南科技大學