專利名稱：：恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型的建立的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型的制備方法。
背景技術(shù)：
：自身免疫型糖尿病1型糖尿病的發(fā)病病因不明，至今沒(méi)有有效的預(yù)防辦法。常用的胰島素治療盡管可以在一定程度上調(diào)節(jié)血糖水平，但長(zhǎng)期使用并不能有效地控制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，而且部分患者還有可能發(fā)生低血糖休克。如何阻止自身免疫系統(tǒng)對(duì)胰島β細(xì)胞的攻擊和進(jìn)行有效的β細(xì)胞移植治療，成為糖尿病研究中的關(guān)鍵問(wèn)題。目前糖尿病研究最常用模型動(dòng)物是嚙齒類。由于嚙齒類在進(jìn)化關(guān)系上與人類相距甚遠(yuǎn)，以其為研究對(duì)象所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)臨床指導(dǎo)意義不大。恒河猴的解剖特點(diǎn)、各系統(tǒng)生理功能及對(duì)疾病和治療藥物的反應(yīng)性與人類極為相近，是進(jìn)行免疫學(xué)相關(guān)治療和干細(xì)胞移植、異種移植臨床前有效性和安全性評(píng)價(jià)的敏感動(dòng)物。利用恒河猴糖尿病模型評(píng)價(jià)新型糖尿病治療藥物，研究胰島干細(xì)胞和異種胰島移植的免疫排斥機(jī)理和移植耐受誘導(dǎo)，是國(guó)際公認(rèn)的臨床前實(shí)驗(yàn)體系，對(duì)未來(lái)這些治療方案的臨床應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)意義。因此建立非人靈長(zhǎng)類糖尿病模型成為糖尿病胰島(干)細(xì)胞移植治療研究和臨床前藥物評(píng)價(jià)的迫切需要?，F(xiàn)在常用的糖尿病動(dòng)物模型有實(shí)驗(yàn)性糖尿病動(dòng)物模型和自發(fā)性糖尿病動(dòng)物模型。自發(fā)性模型應(yīng)用價(jià)值較高，但因發(fā)病率低，價(jià)格昂貴，飼養(yǎng)、繁殖條件要求嚴(yán)格，而不能得到廣泛應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)性模型則應(yīng)用比較廣泛，常用的誘導(dǎo)方法有胰腺切除術(shù)、化學(xué)藥物誘發(fā)、病毒感染、拮抗胰島素因子、食物誘發(fā)及催肥等。其中化學(xué)藥物誘導(dǎo)方法因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單、可行性高，而得到眾多研究人員的推崇；而在這些方法中鏈脲佐菌素對(duì)機(jī)體組織毒性相對(duì)較小，動(dòng)物存活率高，是目前國(guó)內(nèi)外使用較多的制備糖尿病動(dòng)物模型的方法。鏈脲菌素(str印tozotocin，STZ)是制備糖尿病模型中比較常用的誘導(dǎo)試劑，對(duì)一定種屬動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，而使許多動(dòng)物產(chǎn)生糖尿病，最常用的是大鼠模型。一般常用的誘導(dǎo)方法如下將大鼠禁食12h，按60mg/Kg體重腹腔注射STZ，每日1次，連續(xù)2次，成功制備1型糖尿病大鼠模型，并且該模型具有高血糖、體重減輕、多飲多食多尿的特點(diǎn)，與臨床1型糖尿病吻合；但在此實(shí)驗(yàn)中，若造模組只腹腔注射STZ—次，并給予高熱量飼料飼養(yǎng)12周，則可制2型糖尿病動(dòng)物模型，且按該法制備出的模型具有超重、糖耐量減低、血脂升高、血清胰島素升高及胰島素受體結(jié)合力降低伴胰島素抵抗的特點(diǎn)，類似2型糖尿病病人的臨床特征。1型糖尿病與2型糖尿病動(dòng)物模型的制備可能與STZ注射的劑量有關(guān)系大劑量(常為120mg/Kg)注射時(shí)，由于直接引起胰島β細(xì)胞的廣泛破壞，可造成1型糖尿病模型；而注射較少量STZ時(shí)，由于只是破壞一部分胰島β細(xì)胞的功能，造成外周組織對(duì)胰島素不敏感，同時(shí)給予高熱量飼料喂養(yǎng)，兩者結(jié)合便誘導(dǎo)出病理、生理改變都接近于人類2型糖尿病的動(dòng)物模型。因此，鏈脲菌素STZ的用量的多少，直接決定了制備的糖尿病動(dòng)物模型的類型。STZ制備恒河猴糖尿病模型，也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，如匡德宣等，不同劑量鏈脲菌素對(duì)恒河猴某些常規(guī)生理指標(biāo)的影響，中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2003年3月第11卷第1期，報(bào)道了研究鏈脲菌素(STZ)對(duì)恒河猴攝食、飲水、排尿、體重、血糖及尿糖等生理指標(biāo)的影響，為建立糖尿病動(dòng)物模型積累資料。方法通過(guò)靜脈給7只恒河猴注射不同劑量的STZ。STZ的使用劑量和方法為低劑量為30mg/Kg，中間間隔15天，重復(fù)注射1-2次；中劑量為45mg/Kg，注射STZl次；高劑量為60mg/Kg，注射1次。試驗(yàn)結(jié)果使用不同劑量STZ后，7只恒河猴均在不同時(shí)間、不同程度出現(xiàn)與人糖尿病相類似的“三多一少”癥狀，同時(shí)對(duì)糖尿病猴使用不同劑量胰島素可使其癥狀減輕。尤其是中、高劑量組的動(dòng)物癥狀較為明顯，而低劑量組體重有一個(gè)短時(shí)間的增加后又迅速下降。實(shí)驗(yàn)組中血糖和尿糖均出現(xiàn)不同程度的升高，以中、高2個(gè)劑量組的動(dòng)物變化較大。因此，采用中、高劑量組(45-60mg/Kg)的STZ可誘導(dǎo)類似人類糖尿病的急性動(dòng)物模型，而使用胰島素治療或低劑量STZ可使該動(dòng)物模型疾病病程延長(zhǎng)，有禾丨J于進(jìn)行其并發(fā)癥的石幵究°Biochemicalchangesinrhesusmonkeyduringthefirstdaysafterstreptozotocinadministrationareindicativeofselectivebetacelldestruction/TakimotoG，JonesC,LandsW,BaumanA,JeffreyJ,JonassonO·//Metabolism.1988Apr；37(4):364_70·選用22只恒河猴，靜脈注射STZ(45to55mg/Kg)，約半數(shù)的恒河猴在注射后的5天內(nèi)誘生胰島素依賴性糖尿病，剩余實(shí)驗(yàn)恒河猴中的4只在給藥后6個(gè)月內(nèi)未產(chǎn)生胰島素依賴性糖尿病，被認(rèn)為誘生了非胰島素依賴型糖尿病，其余8只恒河猴未對(duì)外源性胰島素產(chǎn)生需求。自身免疫性糖尿病可以分為青少年型(Diabetesinchildrenandadolescents)和成年隱匿性(latentautoimmunediabetesinadults，LADA)，屬于1型糖尿病的亞型，其特點(diǎn)為1.青少年型起病年齡小于15歲，LADA可以在15歲以后的任何年齡段，發(fā)病半年內(nèi)不依賴胰島素，無(wú)酮癥發(fā)生；2.發(fā)病時(shí)多為非肥胖；3.體內(nèi)胰島B細(xì)胞抗體(ICA、GAD和胰島素自身抗體等)常持續(xù)陽(yáng)性；4.具有1型糖尿病的易感基因(如HLA-DR3、HLA-DR4、BW54及DQ-131-57-Non-ASp等)；5.常伴有甲狀腺和胃壁細(xì)胞等器官特異性抗體陽(yáng)性。LADA—經(jīng)診斷應(yīng)早期采用胰島素治療以保護(hù)殘存的β細(xì)胞。歐美人資料報(bào)告LADA約占2型糖尿病10%15%，在非肥胖的2型糖尿病患者中有報(bào)道高達(dá)50%；有文獻(xiàn)報(bào)告-2型糖尿病患者GAD-Ab的陽(yáng)性率達(dá)14.2%。這一類型的病因是由胰島β細(xì)胞的自身免疫性破壞而引起的胰島素缺乏。自身免疫過(guò)程的標(biāo)記物包括胰島的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和胰島細(xì)胞自身抗體、胰島細(xì)胞抗原自身抗體以及胰島素自身抗體的檢測(cè)。目前文獻(xiàn)報(bào)道的是中、高劑量組(45_60mg/Kg)STZ誘導(dǎo)胰島素依賴性糖尿病的恒河猴動(dòng)物模型，沒(méi)有將低劑量STZ(小于30mg/Kg)用于制備自身免疫性1型糖尿病靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型的相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了低劑量的鏈脲菌素在制備用于篩選治療自身免疫性1型糖尿病的動(dòng)物模型中的用途。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型的建立。本發(fā)明提供了低劑量的鏈脲菌素在制備用于篩選治療自身免疫性1型糖尿病的動(dòng)物模型中的用途，其中鏈脲菌素的施用劑量為15-30mg/Kg/次。其中，鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg;末次給藥后第7和14天再次給藥。進(jìn)一步優(yōu)選地，鏈脲菌素的施用劑量為20-25mg/Kgo本發(fā)明還提供了一種制備自身免疫性I型糖尿病的動(dòng)物模型的方法，它是將鏈脲菌素施用于靈長(zhǎng)類動(dòng)物，鏈脲菌素的施用方法和劑量為靜脈給予，15-30mg/Kg/次。其中，所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為恒河猴。其中，所述的鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥。進(jìn)一步優(yōu)選地，鏈脲菌素的施用劑量為20-25mg/Kg。本發(fā)明還提供了該方法制備得到的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型。本發(fā)明還提供了該動(dòng)物模型在篩選治療自身免疫性1型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種篩選治療自身免疫性1型糖尿病的藥物的方法，包括如下步驟a、它是將鏈脲菌素施用于靈長(zhǎng)類動(dòng)物，鏈脲菌素的施用劑量為15-30mg/Kg/次；b、將候選物施用于a步驟所述的靈長(zhǎng)類動(dòng)物；C、用自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)潛在的治療自身免疫性1型糖尿病的藥物。其中，a步驟所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為恒河猴。鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥。其中，c步驟所述的評(píng)價(jià)指標(biāo)主要有動(dòng)物糖尿病的發(fā)病時(shí)間、發(fā)病率和β細(xì)胞的損傷的程度。本發(fā)明動(dòng)物模型可以用于嚙齒類動(dòng)物模型無(wú)法完成的生物技術(shù)新藥的評(píng)價(jià)和干細(xì)胞移植治療技術(shù)的評(píng)價(jià)。以下通過(guò)具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。圖1血清抗胰島細(xì)胞抗體檢測(cè)結(jié)果(其中，圖IA為抗胰島素抗體陽(yáng)性對(duì)照、圖IB為陰性對(duì)照、圖IC為本發(fā)明動(dòng)物模型(編號(hào)05539)血清抗胰島細(xì)胞抗體檢測(cè)結(jié)果；圖ID為本發(fā)明動(dòng)物模型(編號(hào)05572)血清抗胰島細(xì)胞抗體檢測(cè)結(jié)果)，標(biāo)尺為50μm。圖2猴胰腺組織切片HE染色(圖2A為正常猴胰腺(標(biāo)尺為50μm)；圖2B為本發(fā)明動(dòng)物模型組胰腺在胰島周圍觀察到淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(標(biāo)尺為50μπι))圖3本發(fā)明動(dòng)物模型胰腺組織切片的免疫組化結(jié)果(圖3Α胰島素表達(dá)細(xì)胞的分布；圖3Β胰高血糖素表達(dá)細(xì)胞的分布(標(biāo)尺均為100μm))具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明動(dòng)物模型的制備1、材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料2-3歲雌性和雄性恒河猴6只，無(wú)B皰疹病毒、猴逆轉(zhuǎn)錄病毒、猴白血病病毒和免疫缺陷病毒感染；購(gòu)自成都平安動(dòng)物繁育基地。1.2主要試劑鏈脲菌素(STZ)購(gòu)自成都宇洋高科技發(fā)展有限公司其他藥品和耗材均購(gòu)自華西醫(yī)院利康藥房1.3主要溶液的配制鏈脲菌素溶液的配制0.lmol/L枸櫞酸鈉緩沖液配制A液(0.lmol/L枸櫞酸溶液)稱取2.Ig枸櫞酸(C6H8O7·H2OFff210.14)溶于IOOml雙蒸水中。B液(0.IM枸櫞酸鈉溶液)稱取2.94g枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H20Fff294.10)溶于IOOml雙蒸水中。工作液用時(shí)取28mlA液加22mlB液(按照1.321的比例)，雙蒸水稀釋到100ml，調(diào)pH=4.5。鏈脲菌素溶液按動(dòng)物重量比稱取STZ，用上述A、B混合工作液以的濃度溶解STZ，隨用隨配，該液要求4°C配置、保存，盡量在30分鐘內(nèi)注射完畢。1.4主要儀器1)麻醉機(jī)=Excel210SE,Datex-Ohmeda2)呼吸機(jī)配心電監(jiān)護(hù)儀M/206B，Philips公司3)高頻電刀(H.F.ELECTR0T0ME)⑶_350_P型，上海滬通電子有限公司4)血糖檢測(cè)儀羅康全活力型血糖檢測(cè)儀，羅康全活力型血糖試紙5)全波長(zhǎng)分光光度計(jì)1.5實(shí)驗(yàn)方法1.5.1恒河猴靜脈葡萄糖耐受實(shí)驗(yàn)通過(guò)靜脈葡萄糖耐受實(shí)驗(yàn)(Theintravenousglucosetolerancetest,IVGTT)測(cè)試動(dòng)物胰腺功能，了解血糖波動(dòng)范圍，排除動(dòng)物患有自發(fā)性糖尿病的可能。1)動(dòng)物禁食10_12h，不禁水；2)根據(jù)動(dòng)物購(gòu)買時(shí)體重，按15mg/Kg肌肉注射氯氨酮(50mg/ml)；3)待動(dòng)物麻醉后，準(zhǔn)確稱量體重，并記錄；4)將恒河猴上下肢固定于手術(shù)臺(tái)上，下肢小腿后側(cè)備皮暴露大隱靜脈，碘氟消毒；5)20G留滯針穿刺大隱靜脈，5ml注射器抽血6ml(分別做生化、血常規(guī)、血糖和空腹胰島素，并標(biāo)記為0分鐘數(shù)值)；6)立即用5ml注射器靜脈推注50%葡萄糖高滲溶液0.5g/Kg(在30sec內(nèi)推完)，并開(kāi)始記時(shí)，再注射生理鹽水5ml，向留滯針內(nèi)推肝素(250U/ml)Iml；7)分別于記時(shí)后的第l，3，5，10，30min時(shí)采血1.5ml，放入紅頭采血管，測(cè)定胰島素水平;同時(shí)分別于第0，1，3，5，10，30，60，120111士11時(shí)測(cè)定血糖；8)檢測(cè)結(jié)束，將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠中，觀察動(dòng)物狀況至蘇醒。1.5.2小劑量STZ誘導(dǎo)造糖尿病模型連續(xù)5天靜脈給予小劑量STZ每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥；每周觀察空腹血糖一次，以連續(xù)2天空腹血糖高于11.lmmol/L,C-肽水平低于0.5nmol/L，抗胰島細(xì)胞抗體和抗胰島素抗體陽(yáng)性為建模成功。以下為兩組實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物給藥方案<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>6只恒河猴按本發(fā)明方法造模，有4只造模成功。1.5.3恒河猴血清胰島素測(cè)定(放射免疫分析法)使用北京北方生物技術(shù)研究所胰島素檢測(cè)試劑盒，按照操作說(shuō)明書(shū)要求程序，分析動(dòng)物血清中胰島素含量。1.5.4恒河猴血清胰島細(xì)胞抗體檢測(cè)(免疫組織化學(xué)法)使用正常猴胰腺組織切片，分別與試驗(yàn)組猴血清、正常猴血清(陰性對(duì)照)和抗胰島素抗體(陽(yáng)性對(duì)照)反應(yīng)后，再與HRP酶標(biāo)二抗結(jié)合，加入底物顯色后，顯微鏡下觀察胰島細(xì)胞著色情況，判斷血清中有無(wú)抗胰島細(xì)胞抗體存在。1.5.5恒河猴血清胰島素抗體檢測(cè)(酶聯(lián)免疫分析法)使用北京北方生物技術(shù)研究所胰島素抗體檢測(cè)試劑盒，按照操作說(shuō)明書(shū)要求程序，分析動(dòng)物血清中有無(wú)胰島素抗體。1.5.6胰腺、肝、腎活檢手術(shù)1)動(dòng)物麻醉15mg/Kg氯氨酮(50mg/ml)基礎(chǔ)麻醉，麻醉后稱動(dòng)物體重；2)動(dòng)物固定于手術(shù)臺(tái)上，仰臥位，雙下肢備皮，建立靜脈通道；3)手術(shù)區(qū)域皮膚準(zhǔn)備，備皮區(qū)域?yàn)殡p側(cè)乳頭連線以下、腹股溝以上、腋前線以前。4)通過(guò)靜脈通道，進(jìn)行靜脈全麻，氣管插管，使用呼吸機(jī)、麻醉機(jī)。貼電極片，進(jìn)行心電監(jiān)護(hù)。監(jiān)測(cè)氧飽和度、呼吸及體溫；建立股動(dòng)脈通道，測(cè)動(dòng)脈血壓；5)手術(shù)人員洗手消毒，手術(shù)區(qū)域消毒艾力克紗布對(duì)以手術(shù)切口(上腹正中切口)為中心向周圍至少15cm皮膚無(wú)遺漏地涂擦。待艾力克涂液自然干燥后，再用70%酒精棉球?qū)瞬寥ィ?)鋪無(wú)菌巾單和無(wú)菌大單和大洞單，無(wú)菌大單上端應(yīng)蓋過(guò)麻醉架，下端蓋過(guò)動(dòng)物足部。大洞單洞口要對(duì)準(zhǔn)手術(shù)野皮膚；7)上腹正中切口，切口前用70%酒精再次消毒切口皮膚，依次切開(kāi)皮膚、皮下脂肪、肌層、腹膜進(jìn)入腹腔；8)胰腺探查，切開(kāi)胃結(jié)腸韌帶，進(jìn)入小網(wǎng)膜腔；9)胰腺活檢組織獲取從胰體與十二指腸部分鈍性剝離1cm，1號(hào)絲線結(jié)扎血管后切取胰腺組織(約0.5g)；10)肝臟活檢組織獲取1號(hào)絲線結(jié)扎肝葉邊緣，做楔形切割獲取組織約Ig；11)腎臟活檢組織獲取1號(hào)絲線結(jié)扎腎邊緣，做楔形切割獲取組織約0.3g；12)清洗腹腔，按層縫合腹壁切口；13)手術(shù)蘇醒及術(shù)后護(hù)理動(dòng)物術(shù)后禁食1天。手術(shù)蘇醒后24h內(nèi)肌肉注射曲馬多鎮(zhèn)痛治療，頭孢噻肟鈉抗感染治療5天；14)術(shù)后檢測(cè)動(dòng)物血糖，7天后拆線，生化血常規(guī)檢查；2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果恒河猴靜脈注射STZ后空腹血糖在3.2-17.6mmol/L之間波動(dòng)，動(dòng)物的空腹血糖持續(xù)高于11.lmmol/L，血清C-肽檢測(cè)低于0.5nmol/L，血清抗胰島細(xì)胞抗體(見(jiàn)圖1C，1D)和抗胰島素抗體檢測(cè)陽(yáng)性；動(dòng)物胰腺組織病理活檢顯示胰島周圍有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2B)，胰島組織中僅有極少量胰島素表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞殘存(圖3A)，90%以上為胰高血糖素表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞(圖3B)，判斷為自身免疫性1型糖尿病模型建模成功。實(shí)施例2本發(fā)明動(dòng)物模型的藥物干預(yù)試驗(yàn)一、受試藥物環(huán)孢霉素(免疫抑制藥物，可降低小鼠自身免疫性糖尿病的發(fā)生率)；二、試驗(yàn)方法環(huán)孢霉素對(duì)自身免疫性糖尿病發(fā)病過(guò)程的干預(yù)作用實(shí)驗(yàn)分為生理鹽水空白對(duì)照組和環(huán)孢霉素干預(yù)組在STZ誘導(dǎo)自身免疫性糖尿病的過(guò)程中，干預(yù)組同時(shí)每天給予環(huán)孢霉素(2.5mg/Kg)，比較空白對(duì)照組和干預(yù)組動(dòng)物糖尿病的發(fā)病時(shí)間、發(fā)病率和β細(xì)胞的損傷的程度。通過(guò)免疫抑制藥物干預(yù)自身免疫性糖尿病的發(fā)病過(guò)程，觀察到動(dòng)物模型中β細(xì)胞的損傷程度降低，進(jìn)一步證明本發(fā)明動(dòng)物模型為自身免疫性1型糖尿病模型，且采用本發(fā)明的造模方式可成功造模。實(shí)施例3用治療自身免疫性1型糖尿病的藥物驗(yàn)證自身免疫性1型糖尿病恒河猴動(dòng)物模型并初步建立相關(guān)藥物篩選平臺(tái)目前自身免疫性1型糖尿病的治療方法主要以注射胰島素治療，本實(shí)驗(yàn)將胰島素用于恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型，具體方式為1、根據(jù)恒河猴每天進(jìn)食兩餐的習(xí)慣，應(yīng)用一天兩次(9:30am&16:30pm)注射不同劑量不同種類胰島素的方法，施用于實(shí)施例1制備的本發(fā)明自身免疫性1型糖尿病模型①長(zhǎng)效胰島素萬(wàn)邦(徐州)產(chǎn)豬胰島素(精蛋白鋅胰島素)和②短效胰島素萬(wàn)邦(徐州)產(chǎn)豬普通胰島素的聯(lián)合治療；2、為了防止低血糖發(fā)生，從小劑量(0.4U/Kg)開(kāi)始皮下注射胰島素；3、監(jiān)測(cè)空腹和餐后血糖水平，根據(jù)血糖水平調(diào)整給藥劑量，最終可將動(dòng)物的空腹和餐后血糖控制在低于10mmol/L水平，糖化血紅蛋白低于6.5%。試驗(yàn)結(jié)果胰島素對(duì)自身免疫性1型糖尿病具有較佳的治療效果。該實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明動(dòng)物模型適用于身免疫性1型糖尿病的治療研究和糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和治療研究，可用于篩選治療自身免疫性1型糖尿病的藥物及治療方法。綜上所述，本發(fā)明制備的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型建模成功，可以用于嚙齒類動(dòng)物模型無(wú)法完成的生物技術(shù)新藥的評(píng)價(jià)和干細(xì)胞移植治療技術(shù)的評(píng)價(jià)。權(quán)利要求低劑量的鏈脲菌素在制備用于篩選治療自身免疫性1型糖尿病藥物的動(dòng)物模型中的用途，其中鏈脲菌素的施用劑量為15-30mg/Kg/次。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥。3.一種制備權(quán)利要求1或2所述的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型的方法，其特征在于它是將鏈脲菌素施用于靈長(zhǎng)類動(dòng)物，鏈脲菌素的施用劑量為15-30mg/Kg/次。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型的制備方法，其特征在于所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為恒河猴。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型的制備方法，其特征在于所述的鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥。6.權(quán)利要求3-5任一一項(xiàng)所述的方法制備得到的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型。7.權(quán)利要求6所述的動(dòng)物模型在篩選治療自身免疫性1型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。8.一種篩選治療自身免疫性1型糖尿病的藥物的方法，包括如下步驟a、它是將鏈脲菌素施用于靈長(zhǎng)類動(dòng)物，鏈脲菌素的施用劑量為15-30mg/Kg/次；b、將候選物施用于a步驟所述的靈長(zhǎng)類動(dòng)物；c、用自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型評(píng)價(jià)潛在的治療自身免疫性1型糖尿病的藥物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的篩選藥物的方法，其特征在于a步驟所述靈長(zhǎng)類動(dòng)物為恒河猴。10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的篩選藥物的方法，其特征在于a步驟所述的鏈脲菌素的施用方法和劑量為連續(xù)5天靜脈給予小劑量鏈脲菌素每次15-30mg/Kg；末次給藥后第7和14天再次給藥。全文摘要本發(fā)明提供了低劑量的鏈脲菌素在制備用于篩選治療自身免疫性1型糖尿病藥物的動(dòng)物模型中的用途，其中鏈脲菌素的施用方法和劑量為靜脈給予，15-30mg/Kg/次。本發(fā)明還提供了一種制備恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型的方法，及該方法制備的自身免疫性1型糖尿病動(dòng)物模型。本發(fā)明動(dòng)物模型可以用于嚙齒類動(dòng)物模型無(wú)法完成的生物技術(shù)新藥的評(píng)價(jià)和干細(xì)胞移植治療技術(shù)的評(píng)價(jià)。文檔編號(hào)A01K67/027GK101804211SQ200910058330公開(kāi)日2010年8月18日申請(qǐng)日期2009年2月13日優(yōu)先權(quán)日2009年2月13日發(fā)明者喬超鋒,任艷,何斯榮,張文勝,曾力,李宏霞,王莉,田伯樂(lè),程驚秋,鄧紹平,金熙,陸燕蓉,陳又南,魏玲玲,麥剛申請(qǐng)人:四川大學(xué)華西醫(yī)院;成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司